金属硫蛋白抑制阿霉素引起的心肌细胞凋亡作用研究

目的 研究锌诱导的金属硫蛋白(MT)对阿霉素(DOX)所致心肌细胞凋亡的的抑制作用并探讨其作用机制.方法 雄性C57BL小鼠随机分成4组(每组7只),即对照组、锌处理组、给药组和锌预处理给药组.各组小鼠连续2 d皮下给予ZnSO4 300 μmol/kg(锌处理组和锌预处理给药组)或等量生理盐水(对照组和给药组),第3 d单次腹腔注射DOX 15 mg/kg(给药组和锌预处理给药组)或等量生理盐水(对照组和锌处理组).DOX给药后第4 d处死小鼠,采用血红素镉饱和法测定心脏组织MT含量,ELISA法测定心肌凋亡指数,蛋白印迹分析(Western blot)测定心肌组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平.结果 与对照组相比,DOX引起小鼠心脏质量下降10%,且显著引起小鼠心肌细胞凋亡;经锌诱导后,心脏组织MT水平提高约25倍,且MT高表达能抑制DOX引起的凋亡细胞增加;进一步的研究发现,Bax蛋白表达水平在DOX给药后明显升高,而MT高表达抑制了Bax的表达升高;Bcl-2蛋白表达水平各组间的差异无统计学意义.结论 锌诱导的MT高表达能抑制DOX引起的心肌细胞凋亡,其作用机制主要与抑制DOX引起的Bax蛋白表达升高以及Bax/Bcl-2比值增加有关.     

金属硫蛋白对秋水仙碱致肝毒性的保护作用

秋水仙碱在临床上用于治疗急性痛风性关节炎和某些肿瘤,但是,其半数致死量较低,过量的秋水仙碱可导致消化道反应,肾、骨髓和肝的损害等[1,2].误食含有秋水仙碱的鲜黄花菜也会引起食物中毒[3].金属硫蛋白(metallothionein, MT)是生物体内的一种富含半胱氨酸巯基(-SH)的金属结合蛋白质,具有拮抗有害重金属毒性、抗电离辐射、捕获自由基、抗过氧化应激等功能[4].肝是MT含量比较丰富的器官.本研究利用MT基因敲除小鼠观察秋水仙碱对小鼠肝的毒性,为防治秋水仙碱中毒提供实验依据.     

阿霉素对大鼠心肌细胞膜磷脂损伤及CoQ10的保护作用

用电镜方法观察阿霉素（ＡＤＲ）对心肌细胞膜磷脂损伤及ＣｏＱ１０的保护作用。结果显示：ＡＤＲ大鼠心脏心肌细胞依ＡＤＲ累积量均呈现线粒体明显增生，线粒体膜磷脂不同程度脱失；血浆及心肌丙二醛（ＭＤＡ），血浆乳酸脱氢酸脱氢酶（ＬＤＨ）和肌酸磷酸激（ＣＰＫ）升高，且与心功能及心脏大小相关。培养心肌细胞结构、培养液中的ＭＤＡ、ＬＤＨ及ＣＰＫ含量与ＡＤＲ心脏改变一致。ＣｏＱ１０干预后，心肌细胞线粒体增生程度减轻     

金属硫蛋白对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察大鼠硫酸锌腹腔注射对心脏金属硫蛋白含量增加的诱导作用,并探讨这一方式对心肌缺血再灌注损伤的影响。方法 在大鼠离体心脏模型上用KH液平衡灌注15min后,随机分为3组,每组6例。对照组：用KH液持续灌流75min;I/R组：心脏停灌旷置（保湿保温）45min,复灌30min;MT＋I/R组：动物在试验前24h预先腹腔注射3.6%ZnSO4 1ml/kg,其余实验操作同I/R组.观察冠脉流量、冠脉流出液LDH活性、心肌MDA和ATP含量、以及不同时间点左心室内压力的变化。结果 缺血再灌注使大鼠心脏冠脉流量降低、LDH漏出和心肌MDA含量增多、ATP耗竭,心肌收缩功能降低。硫酸锌注射诱导大鼠心脏MT含量升高2倍,并且具有显著的抗心肌缺血再灌注损伤作用。结论 硫酸锌注射作为一个简便的提高心肌MT含量的方法,可为临床心肌保护治疗提供一新的途径。     

金属硫蛋白对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究进展

金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类低分子量富含半胱氨酸的内源性小分子蛋白质，广泛存在于自然界中，具有贮存转运重金属离子、清除氧自由基、抗细胞凋亡及抑制细胞内钙超载等生物学效应，并可在线粒体、溶酶体、脱氧核糖核酸水平上起一定的细胞保护作用。Kang利用转基因技术在心肌缺血再灌注、限制饮食铜摄入量、注射阿霉     

熊果酸对过氧化氢诱导大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的观察熊果酸(ursolic acid,UA)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠心肌细胞氧化应激损伤模型的保护作用,并探讨其作用机制。方法冷消化法原代培养SD大鼠心肌细胞,3 d后将细胞随机分为5组:正常对照组、H2O2模型组、UA低(2.5μM)、中(5μM)、高(10μM)浓度组。UA预处理心肌细胞后,加入H2O2作用,分别检测心肌细胞存活率、LDH、CAT、SOD的变化,ROS的水平。结果 UA低、中、高浓度组对比模型组OD值明显降低,LDH含量明显下降,CAT、SOD活性升高,ROS水平下降,且P0.05。结论 UA对大鼠心肌细胞氧化损伤具有保护作用,可减轻氧自由基对心肌细胞的氧化损伤。     

金属硫蛋白对大鼠肝脏线粒体氧自由基损伤的保护作用

研究金属硫蛋白对氧自由基损伤线粒体的保护作用以探讨其细胞保护机制。     

蜂胶对乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨蜂胶(propolis)对乳鼠心肌细胞氧化损伤的作用及其可能机制。方法:建立乳鼠心肌细胞过氧化氢(H2O2)损伤模型,通过观察细胞形态及细胞存活率,检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量,观察不同浓度蜂胶(50、100、200 mg/L)对乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响。结果:不同浓度的H2O2(50、100、200、400、800μmol/L)孵育乳鼠心肌细胞4 h后,心肌细胞存活率随H2O2浓度增加而降低,呈剂量依赖性;细胞形态出现明显损伤改变,心肌细胞伪足回缩、体积变小、自律搏动减弱。与模型组比较,经蜂胶预处理心肌细胞培养上清液中LDH释放量、MDA生成量降低,SOD活性提高;细胞存活率显著改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:蜂胶对H2O2所致的乳鼠心肌细胞氧化损伤有明显的保护作用,其机制可能是通过抑制脂质过氧化,增强心肌细胞膜抗氧化能力所致,至于其确切机制有待进一步探讨。     

金属硫蛋白及其对脑缺血再灌注损伤的保护作用

金属硫蛋白(metallothionein,MT)是近年来备受关注的一种蛋白质,它是一种富含金属和巯基的非酶蛋白.     

曲美他嗪对吡喃阿霉素致心肌自由基损伤的保护作用

目的:探讨曲美他嗪（TMZ）对吡喃阿霉素（THP）致心肌自由基损伤的影响,阐明其对吡喃阿霉素致心肌损伤的保护作用及机制。方法：将36只Wistar大鼠随机分为吡喃阿霉素组13只、曲美他嗪干预组（THP+TMZ组)13只和正常对照组10只。吡喃阿霉素组和曲美他嗪干预组每周尾静脉注射吡喃阿霉素2.5 mg/kg,连续6周。曲美他嗪干预组于制备模型前1 d开始每日灌胃曲美他嗪5.4 mg/kg/d,喂养8周。实验结束时留取心肌组织行丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和非蛋白巯基(NPSH)的测定,电镜观察心肌组织学变化。结果：与正常对照组比较,吡喃阿霉素组大鼠心肌组织中MDA及NO水平均升高（P<0.05）,NPSH水平和SOD活性均降低（P<0.05）。与吡喃阿霉素组比较,曲美他嗪干预组大鼠心肌组织中MDA及NO水平均降低（P<0.05）,NPSH水平和SOD活性均升高（P<0.05）。电镜下吡喃阿霉素组大鼠心肌细胞核呈不规则形,核基质呈空化状,周围胞质内肌丝束明显减少,肌节结构不清,闰盘结构隐约可见,线粒体明显肿胀;曲美他嗪干预组大鼠心肌细胞细胞核呈圆形,核基质略改变,肌丝束略减少,排列较整齐,闰盘结构仅局部不清,线粒体轻度肿胀。结论:曲美他嗪对吡喃阿霉素导致的心肌自由基损伤具有保护作用,可能与减少自由基产生,减轻细胞核、线粒体、闰盘等细胞结构的破坏有关。     

低氧预适应对阿霉素致心肌细胞损伤的保护作用

目的观察低氧预适应(HPC)对阿霉素致心肌细胞损伤的保护作用。方法将培养的心肌细胞随机分为3组:对照组、阿霉素组、HPC+阿霉素组。MTT法测定心肌细胞存活率;试剂盒检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)半定量检测核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达量的改变。结果与对照组相比,阿霉素组心肌细胞存活率显著下降(P0.01),细胞LDH漏出量显著增加(P0.01),NF-κB蛋白表达水平增高显著(P0.01);与单纯阿霉素组相比,低氧预适应组心肌细胞存活率显著升高(P0.01),细胞LDH漏出量显著降低(P0.01),NF-κB蛋白表达水平明显降低(P0.01)。结论阿霉素导致心肌细胞氧化损伤,低氧预适应可能通过抑制NF-κB蛋白表达水平对其起保护作用。     

牛磺酸对阿霉素中毒心肌细胞的保护作用

目的 应用阿霉素（ADR）建立心肌细胞中毒模型,观察牛磺酸（Tau）对中毒心肌细胞的保护作用并探讨其机制。方法 将培养72h后的新生大鼠心肌细胞分为对照组、ADR组和ADR Tau组,继续培养24h后,MTT法测定心肌细胞存活力,并测定细胞内丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及细胞内游离钙离子浓度([Ca^2 ]i)。结果 Tau能够增强ADR中毒心肌细胞存活力,降低心肌细胞MDA含量及[Ca^2 ]i,同时升高细胞内SOD活性。结论 Tau能够对抗氧自由基引起的脂质过氧化和逆转细胞内钙超载,从而保护ADR中毒心肌细胞。     

硒剂对阿霉素所致肾病的防护作用

目的　探讨阿霉素所致肾病的防护方法。方法　采用全自动生化分析仪检测阿霉素所致肾病大鼠尿蛋白含量、血清白蛋白 (ALB)、丙氨酸转氨酶 (ALT)、门冬氨酸转氨酶 (AST)、肌酐 (Cr)、胆固醇(CHOL)含量的变化 ;采用紫外分光光度法检测过氧化氢酶 (CAT)、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)的活性及过氧化脂质 (LPO)含量变化。结果　在应用阿霉素的同时或预先应用硒剂 ,可明显减轻大鼠肝脏、肾脏受损伤程度 ;显著提高血中CAT、SOD、GSH -Px的活性 ,使LPO生成明显下降 ,有效减轻阿霉素的毒性作用 ;一旦大鼠阿霉素肾病形成再行补硒 ,则短期内不可逆转。结论　硒对阿霉素所致肾病具有防护作用。     

GSH对砷氧化损伤保护作用的研究

[目的]研究细胞内谷胱甘肽（GSH）对砷致人角质形成细胞系（HacaT）氧化损伤的保护作用。[方法]用流式细胞仪检测细胞内二氯荧光素（DCF）的荧光强度;用改良硫代巴比妥酸荧光法测定细胞内丙二醛（MDA）含量。[结果]单独用NaAsO2作用后,DCF荧光强度和MDA含量与对照组比较差异有显著性意义（P〈0．05）,用N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理后,细胞内DCF荧光强度和MDA含量与砷作用组相比差异有显著性意义（P〈0．05）,其中MDA达到对照组水平。用丁硫氨酸亚矾胺（BSO）预处理细胞后,DCF荧光强度和MDA含量与NaAsO2单独作用组相比明显增高（P〈0．05）。[结论]NAC可减轻砷对细胞的氧化损伤,而BSO则可加重其氧化损伤,说明细胞内的GSH可对砷引起的氧化损伤起一定的保护作用。     

rhEPO对氧化应激时心肌细胞及心肌梗死后心脏的保护作用

目的 初步探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对氧化应激时乳鼠心肌细胞及心肌梗死后小鼠心脏的保护作用。方法 建立乳鼠心肌细胞的氧化应激损伤模型后,加入rhEPO进行干预。以噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(FCM)检测rhEPO对心肌细胞凋亡的影响。同时应用Western blotting检测凋亡效应酶胱天蛋白酶-3(caspase 3)、Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。将小鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MI组)和rhEPO组,通过结扎左冠状动脉前降支建立小鼠心梗模型,14d后取心脏组织,HE染色观察rhEPO对心肌梗死面积的影响。结果 在氧化应激损伤过程中,rhEPO可以明显降低心肌细胞的凋亡率,下调caspase-3和Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达。HE染色结果显示,rhEPO可以明显缩小小鼠心肌梗死面积。结论 在氧化应激时,rhEPO可对抗过氧化氢引起的心肌细胞损伤;rhEPO还可缩小小鼠心肌梗死面积。     

银杏内酯B对阿霉素致心肌细胞凋亡的保护作用

目的:探讨银杏内酯B对阿霉素损伤心肌细胞的保护作用及相关机制研究。方法:通过体外H9C2大鼠心肌细胞加入阿霉素5μmol/L构建损伤模型,将银杏内酯B 50μmol/L加入细胞中,共同培养,分为银杏内酯B组、银杏内酯B+阿霉素组、阿霉素组及空白对照组。通过FCM检测各组大鼠心肌细胞的凋亡率,通过Realtime PCR与Western blot技术检测蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、Caspase-3、Caspase-12 mRNA及蛋白表达水平。结果:阿霉素组H9C2细胞凋亡率为(46.23±4.98)%,银杏内酯B+阿霉素组凋亡率为(24.87±9.05)%,空白对照组凋亡率为(2.43±0.35)%,阿霉素组凋亡率较空白对照组显著升高,银杏内酯B+阿霉素组细胞凋亡率较阿霉素组显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。Real-time PCR与Western blot检测结果显示,阿霉素能够上调H9C2细胞AKT、JNK、Caspase-3、Caspase-12的mRNA水平及蛋白水平表达(P0.05),银杏内酯B+阿霉素组与阿霉素组相比,能够显著下调阿霉素损伤后H9C2细胞的AKT、JNK、Caspase-3、Caspase-12的mRNA水平及蛋白水平表达,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:银杏内酯B可能通过抑制细胞凋亡的途径减轻阿霉素对心肌细胞的损伤,起保护心肌细胞的作用。     

牛磺酸对铅所致心肌损害的保护作用

目的：牛磺酸对铅所致心肌损害的保护作用。方法：采用体外心肌细胞培养技术,研究牛磺酸对铅致心肌细胞膜的损害及影响。结果：铅可使心肌细胞膜的总巯基、非PSH和PSH降低,而牛磺酸可明显减轻铅降低心肌细胞膜总巯基（TSH）、非蛋白巯基（NPSH）和蛋白巯基（PSH）量的作用。结论：牛磺酸在一定程度上可拮抗铅的心肌毒性。     

绞股蓝皂甙抗谷氨酸诱导的氧化性神经毒性

目的：探讨绞股蓝皂甙(gypenoside，GP)对谷氨酸(glutamate，Glu)介导的氧化性神经毒性的拮抗作用。方法：体外培养胎鼠大脑皮层神经细胞，建立Glu氧化性损伤模型，用MTT法测定细胞活力，透射电镜观察Glu所致的神经细胞死亡方式，流式细胞术分析细胞凋亡率。结果：GP以时间依赖性方式明显拮抗谷氨酸介导的氧化性神经毒性，于Glu损伤前达到最佳保护效果，Glu氧化性毒性导致神经细胞发生凋亡兼具坏死特征的死亡，Glu损伤组细胞凋亡率(21．63％)明显高于正常对照组(0．09％)及GP保护组(8．94％)。结论：GP可明显拮抗Glu介导的氧化性神经毒性。     

红景天苷对疲劳小鼠氧化损伤的保护作用

目的：探讨红景天苷对疲劳小鼠氧化损伤保护作用的机制。方法：32只昆明种雄性小鼠按体质量随机分为正常对照组、红景天苷组、运动组及红景天苷＋运动组。红景天苷组及红景天苷牟运动组小鼠予红景天苷180mg／（kg·d）灌胃给药,正常对照组及运动组予相同体积[0．02mL／（g·d）]蒸馏水灌胃,连续灌胃15d。末次给药后30min,运动组及红景天苷＋运动组小鼠无负重游泳120min。游泳后立即取材,全自动生化仪检测血浆乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶（creatine kinase,CK）及肌酸激酶同工酶MB（creatine kinase—myocardial band isoenzyme,CK—MB）活性;采用试剂盒检测肝组织匀浆中过氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH—Px）活性和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;电子显微镜观察心肌和骨骼肌超微结构变化。结果：与不运动比较,长时间运动可明显提高小鼠血浆LDH、CK、CK—MB活性（P〈0．01,P〈0．05）,而红景天苷可降低小鼠血浆CK及CK—MB活性（P〈0．05,P〈0．01）;红景天苷与长时间运动有交互作用,红景天苷可拮抗长时间运动导致的血浆LDH、CK及CK—MB活性升高（P〈0．05）。与不运动比较,长时间运动可显著降低小鼠血浆SOD及GSH—Px活性（P〈0．01）,升高小鼠血浆MDA含量（P〈0．01）;红景天苷可明显升高小鼠血浆SOD及GSH—Px活性（P〈0．01,P〈0．05）,显著降低小鼠血浆MDA含量（P〈0．01）;红景天苷可拮抗长时间运动导致的小鼠血浆SOD活性降低（P〈0．05）。电子显微镜结果表明长时间耐力运动后骨骼肌和心肌出现明显的损伤,运动组小鼠骨骼肌及心肌超微结构损伤较红景天苷＋运动组明显。结论：红景天苷对运动所导致的氧化损伤具有一定的保护作用。     

羟基红花黄色素Ａ抗谷氨酸氧化性神经损伤的保护作用

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对谷氨酸(Glu)诱导的氧化性神经损伤的保护作用。方法以体外原代培养Wistar胎鼠大脑皮层神经元为实验材料，进行形态学观察，采用噻唑蓝（MTT）比色法、Hoechst33342/PI双荧光探针染色、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）含量检测、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及免疫细胞化学法检测细胞色素C（CytC）荧光强度，综合评价HSYA对Glu氧化性神经损伤的保护作用。结果与Glu损伤组相比，HSYA能显著提高细胞相对存活率，维持细胞内较高SOD和GSH水平，降低Glu引起的细胞凋亡率及线粒体内CytC向胞质的释放，以160μg/mL浓度的 HSYA保护效果最为显著。结论HSYA对Glu氧化性神经损伤有显著的保护作用，其机制与抗氧化、抑制细胞凋亡有关。