硝普钠和L-硝基-精氨酸甲酯对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的　观察硝普钠 (SNP)和L 硝基 精氨酸甲酯 (L NAME)对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。　方法雄性SD大鼠分为 4组 :分别于腹腔内注射SNP、L NAME、SNP +L NAME与生理盐水 ,每天 1次 ,共 12d。颈动脉放血处死动物。流式细胞术 (FCM)结合TUNEL法检测睾丸生精细胞的凋亡。　结果　FCM结合TUNEL法检测发现SNP组亚单倍体峰 (AP峰 )及凋亡指数 (AI)较生理盐水组明显增高 ,L NAME组AP峰及AI显著低于生理盐水组 (P<0 0 1)。SNP和L NAME混合注射时 ,AP峰及AI与生理盐水组无显著性差异 (P >0 0 5 )。　结论　SNP促进生精细胞的凋亡 ,L NAME抑制生精细胞的凋亡 ,其对生精细胞凋亡的调节可能是由一氧化氮 (NO)介导的。     

DahlS高血压大鼠生精细胞凋亡及Bcl-2蛋白的表达

目的　为阐明高血压导致生精障碍的确切机制。方法　应用原位末端标记法 (TUNEL)、免疫组织化学、流式细胞检测及电镜等方法 ,对DahlS高血压大鼠生精细胞凋亡的定性、定位、定量及其相关蛋白Bcl 2的表达进行了研究。结果　实验组随高血压病程延长 ,血压升高 ,生精细胞凋亡率增高 ,15、17周龄明显高于对照组 (P <0 0 5 )。Bcl 2蛋白表达降低 ,15、17周龄与对照组相比差异显著 (P <0 0 5 )。随糖尿病病变加重 ,Bcl 2表达减少 ,而且 ,糖尿病组比对照组Bcl 2表达率低。随糖尿病病程进展和年龄增加 ,表达均呈增加趋势 ,而且 ,糖尿病组比对照组Bax表达率高。结论　高血压可导致凋亡抑制基因Bcl 2表达降低 ,从而使生精细胞凋亡增加 ,这可能是高血压导致生精障碍的机制之一     

一氧化氮途径对大鼠精子发生的影响

为阐明一氧化氮途径对精子发生的影响 ,探讨一氧化氮对精子发生的调节作用 ,将雄性SD大鼠分为 4组 ,分别于腹腔内注射左旋精氨酸 (L arginine ,L ARG)、N 硝基左旋精氨酸甲酯 (N nitro L arginine mythel ester,L NAME)、L ARG +L NAME与生理盐水 ,每天一次 ,共 1 2d。于最后一次注射后 2h采血并处死动物。放免法测定血清内睾酮含量 ;GREISS法测定血清NO-x (硝酸盐 亚硝酸盐 )含量 ;常规组织学切片观察生精上皮形态 ,并对Ⅶ -Ⅷ期生精上皮横断面的各级生精细胞进行定量分析 ;扫描电镜观察生精小管内精子密度。结果表明 :L ARG组血清内NO-x 含量高于对照组 (P <0 0 1 ) ,睾酮含量低于对照组 (P <0 0 1 ) ,精子生成减少 (P <0 0 1 ) ;L NAME组血清内NO-x 含量低于对照组 (P <0 0 1 ) ,睾酮含量高于对照组 (P <0 0 1 ) ,精子生成增加 (P <0 0 1 )。L ARG +L NAME组NO-x 与睾酮含量及精子的生成无显著性变化。因此 ,加强NO途径抑制精子发生 ,抑制NO途径促进精子形成     

低剂量棉酚与甾体激素联合用药对大鼠生精细胞凋亡的影响

采用检测细胞凋亡的微核 (MN)、原位末端标记检测 (ISEL)及单细胞凝胶电泳 (SCGE)等方法 ,研究低剂量棉酚与激素组合用药对大鼠生精细胞凋亡的影响 ,分析不同剂量棉酚 (高剂量 10 0mg/(kg·d)、中剂量 6 0mg/(kg·d)及低剂量 12mg/(kg·d) )及维持量棉酚对生精细胞凋亡及DNA的作用。结果表明不同剂量的棉酚G与单剂量激素H(甲基睾丸素 2 0mg/(kg·d)、炔雌醇 10 0 (g/(kg·d) )合并用药 6周后 ,生精细胞的凋亡系数和微核率随棉酚剂量的增大而增加。高和中剂量棉酚组的凋亡系数分别为 3 5 2 0± 0 4 6 5和 2 0 2 0± 0 0 17,显著高于对照组 (0 2 33± 0 0 88)(P <0 0 5 )。微核率在高剂量组为 2 7 6 33± 3 75 5 ,显著高于对照组 (5 6 0 0± 1 137) (P <0 0 5 ) ;而低剂量组 (3 5 6 7±0 86 9)反而显著低于对照组。服低剂量棉酚G +H 6周后继续服单独低剂量棉酚 (12mg/(kg·d) ) 12周 ,单细胞凝胶电泳未见生精细胞出现DNA单链断裂的彗星状细胞核 ,与高、中剂量组较多的出现率形成明显对照。结果提示低剂量棉酚与甾体激素组合用药在睾丸生精过程中互为调节 ,棉酚引起的生精细胞凋亡效应可在甾体激素的调节下降低而起保护作用     

环磷酰胺对大鼠睾丸和附睾的影响

目的探讨抗肿瘤药物所致大鼠睾丸和附睾损害,为寻找男性不育症中药治疗的研究提供理论依据。方法选用16只15周龄SD大鼠随机分为对照组和实验组,每组8只;实验组腹腔注射环磷酰胺20mg·kg-1·d-1,连续5d,用药2个月后,应用HE染色法研究大鼠睾丸、附睾远期组织学变化,用原位缺口末端标记法(TUNEL方法)检测生精细胞凋亡。结果实验组大鼠体重、睾丸和附睾重量均显著减轻(P<0.01),睾丸生精小管直径缩小、间距增宽、生精上皮变薄、生精细胞层次和数量减少、生精小管腔多未见精子形成,实验组睾丸生精小管直径、面积、生精上皮细胞数、均显著低于对照组(P<0.01);实验组生精细胞凋亡增多,与对照组比较,生精细胞显著凋亡(P<0.01);附睾管管腔内腔内精子稀少,含有大量脱落细胞,管壁变薄。结论环磷酰胺对大鼠睾丸、附睾远期损害明显,促进生精细胞凋亡。     

地塞米松对哮喘大鼠Th1/Th2失衡及嗜酸性粒细胞凋亡的作用

目的　观察地塞米松对哮喘大鼠Th1/Th2 (T辅助细胞 1/T辅助细胞 2 )平衡、嗜酸性粒细胞 (EOS)凋亡率的影响作用 ,探讨糖皮质激素治疗哮喘的机制。方法　清洁级雄性SD大鼠 30只 ,随机分为 3组 :正常对照组 (C)、哮喘组 (A)、地塞米松治疗组 (T)。卵清白蛋白复制大鼠哮喘模型 ,检测大鼠血、支气管肺泡灌洗液 (BALF)中IL 4、IFN γ水平及气道壁EOS凋亡率。结果　A组大鼠BALF中IFN γ水平明显低于C组 (P <0 0 1) ,血中及BALF中的IL 4水平则明显高于C组 (均为P<0 0 1) ,表现出明显的Th1/Th2失衡。T组大鼠IL 4的表达明显低于A组而IFN γ的表达则明显高于A组 (均为P <0 0 1)。在A组 ,大鼠气道壁EOS的浸润明显增多 ,但凋亡细胞却很少看到 ,EOS凋亡率明显低于C组 (P <0 0 1) ,T组EOS凋亡率则明显高于A组 (P <0 0 1)。结论　纠正哮喘Th1/Th2失衡和促进气道壁EOS凋亡可能是糖皮质激素减轻哮喘气道炎症的重要机制之一。     

过量饮酒对凋亡相关基因bcl-2、bax在生精细胞表达的影响

目的　研究长期过量饮酒对凋亡相关基因bcl - 2、bax在睾丸及生精细胞中表达的影响。方法　利用人类饮用白酒制备大鼠的酒精毒性模型 ,采用免疫组织化学技术 ,检测酒精对Bcl- 2、Bax蛋白在睾丸及生精细胞表达的影响。结果　高剂量的酒精作用于大鼠 2个生精周期 ,每个生精小管中Bcl- 2蛋白表达的阳性细胞数目在高剂量组为 96± 33.74 ,低剂量组为 15 6 .6± 2 8.5 2 ,均显著低于正常对照组 (2 2 2 .6± 5 6 .86 ) (P <0 .0 1)。每个细胞中Bcl- 2蛋白表达强度 (OD值 )在高剂量组 (0 .14 2± 0 .0 35 )、低剂量组 (0 .15 1± 0 .0 2 6 ) ,都明显低于对照组 (0 .196± 0 .0 32 ) (P <0 .0 1) ;Bax蛋白表达的阳性细胞数在高剂量组为 (4 12 .4± 96 .75 ) ,低剂量组为 (337.5± 94 .39) ,均明显高于对照组 (2 14± 82 .5 7) (P <0 .0 1) ,Bax蛋白的表达强度 (OD值 )在高剂量组 (0 .113± 0 .0 36 )和低剂量组 (0 .0 82± 0 .0 17) ,均明显高于对照组 (0 .0 5± 0 .0 2 4 ) (P <0 .0 1)。结论　长期过量饮酒使睾丸及生精细胞中bcl- 2的表达降低 ,bax的表达增强。     

褪黑激素对小鼠睾丸生精细胞凋亡和睾丸间质细胞nNOS表达的影响

目的：观察外源性褪黑激素(MT)对睾丸生精细胞凋亡和nNOS表达的影响，探讨MT诱导生精细胞凋亡的可能机制。方法：20d和30d小鼠，应用化学发光法检测血清睾酮浓度，TUNEL测定生精细胞凋亡，免疫组化，SABC法观察nNOS在睾丸中的表达。结果：20d和30d实验组血清中睾酮水平明显下降，TUNEL阳性生精细胞数显著增多，TUNEL阳性生精细胞数与睾酮浓度呈负相关；20d实验小鼠中睾丸间质nNOS阳性细胞数与对照组相比明显减少，且与睾酮浓度呈正相关，而与TUNEL阳性生精细胞数呈负相关。结论：MT具有促进生精细胞凋亡的作用，与睾酮分泌受抑制有关；青春期前MT引起生精细胞凋亡可能还与nNOS表达有关。     

整合素α_5、β_1抗体对睾丸生精细胞凋亡的影响

目的观察整合素α_5、β_1抗体体内干预试验对Wistar大鼠睾丸生精细胞凋亡的作用。方法腹腔内注射α_5、β_1抗体,采用原位末端脱氧核糖核酸转移酶标记技术,分析Wistar大鼠生精细胞凋亡情况。结果α_5、β_1试验组大鼠睾丸生精细胞明显减少(P0.001)。结论α_5、β_1抗体具有阻止Wistar大鼠生精细胞凋亡的作用。     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠实验性隐睾生精细胞凋亡及Bax表达的影响

目的研究N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠实验性隐睾生精细胞凋亡及凋亡相关基因Bax表达的影响。方法手术建立大鼠单侧隐睾模型,实验分为隐睾组、隐睾 L-NAME组[术后腹腔注射溶于生理盐水的L-NAME 50 mg/(kg.d)]、隐睾 生理盐水组、假手术组,7 d后采用化学比色法检测睾丸组织NOS活性,流式细胞术(FCM)和原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生精细胞凋亡,RT-PCR和免疫组织化学法检测Bax基因表达变化。结果隐睾组和隐睾 生理盐水组之间检测指标无明显差异;隐睾 L-NAME组隐睾凋亡细胞百分比和生精细胞凋亡指数均低于隐睾组及隐睾 生理盐水组,高于假手术组(P<0.05);Bax mRNA和蛋白表达水平隐睾组及隐睾 生理盐水组最高,假手术组次之,隐睾 L-NAME组最低。结论隐睾生精细胞Bax表达增加,L-NAME可通过下调Bax的表达抑制隐睾生精细胞凋亡。     

龙牙楤木多糖诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡机制研究

目的:探讨龙牙楤木多糖(AEPS)对体外培养人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术(FCM)检测SMMC-7721细胞的凋亡率;Western blot检测不同浓度AEPS作用36小时凋亡蛋白survivin、caspase-3及bcl-2的表达情况。结果:与对照组比较,AEPS不同浓度剂量组Hoechst33258/PI荧光染色出现典型的凋亡形态学改变;FCM检测表明SMMC-7721细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P0.01),且呈时间剂量依赖性;Western blot显示与对照组相比,各实验组AEPS可显著下调SMMC-7721细胞survivin和bcl-2的表达(P0.01),而caspase-3的表达显著增加(P0.01)。结论:AEPS能明显诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡,其机制可能与改变凋亡相关基因survivin、caspase-3及bcl-2的表达有关。     

硝普钠和Nω-单硝基-L-精氨酸甲酯对去垂体大鼠生精能力的影响

目的：阐明NO对大鼠生精能力的影响及其作用机制。方法：大鼠去垂体,观察硝普钠(SNP)与N^ω-单硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠生精功能的直接作用。用放射免疫法测定血清内卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及睾酮含量;Greiss法测定血清NOx^-含量;流式细胞术测定各生精细胞DNA含量,计算1c、2c及4c期细胞的百分比。结果：各组血清LH、FSH和睾酮浓度显著下降或逐渐下降。SNP组血清内NOx^-含量显著升高,L—NAME组血清内NOx^-含量显著降低;对照组、L-NAME组和SNP L—NAME混合注射组的细胞分布均以1c为主;而SNP组的细胞以2c为主。结论：体内高浓度的糖皮质激素可屏蔽LH和FSH的分泌,进一步抑制睾酮的分泌;SNP与L-NAME可通过NO直接影响生精细胞的凋亡。     

中药赞育延生饮对生精障碍大鼠的治疗作用

目的　观察中药赞育延生饮对生精障碍大鼠的治疗作用。　方法　选用SD大鼠 ,灌胃腺嘌呤造成肾阳虚生精障碍模型。造模后 ,中药组大鼠每日给予中药赞育延生饮 (zanyuyanshengyin ,ZYYSY) 5 4g kg体重 ,西药组给克罗米芬 13 5mg kg体重 ,模型组不予任何治疗 ,连续 1个月。用酶联免疫法测血清睾酮值 ,用TUNEL法测生精细胞凋亡率 ,用免疫组织化学法研究生精细胞的增殖率和Bcl 2、Bax表达率。　结果　中药治疗组大鼠血睾酮水平明显升高 ,精子数量增多 ,生精细胞增殖率上升 ,凋亡率下降 ,与模型组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。　结论　中药赞育延生饮治疗大鼠生精功能障碍有效。     

哮喘大鼠T辅助细胞功能异常与嗜酸细胞凋亡

为观察哮喘大鼠T辅助细胞 (helperTlymphocyte ,TH) TH1/TH2平衡及嗜酸细胞 (eosinophil,EOS)凋亡率的变化并探讨两者之间的关系。 2 0只清洁级雄性SD大鼠随机分为正常对照组 (C) ,哮喘组 (A) ,每组 10只。卵清白蛋白复制大鼠哮喘模型 ,ELISA法检测血及支气管肺泡灌洗液 (BALF)中IL 4、IFN γ水平 ;TUNEL法检测大鼠气道壁EOS凋亡率。结果显示A组大鼠BALF中IFN γ水平较C组明显降低 (P <0 0 0 1) ;而A组血及BALF中的IL 4水平则均高于C组 (均P <0 0 0 1) ,表现出明显的Th1/Th2失衡。A组大鼠气道壁的EOS浸润明显增多 ,但凋亡细胞却很少看到 ,EOS凋亡率为 (5 2 8± 2 2 1) %明显低于C组 (15 88± 2 39) % (P <0 0 0 1)。以上研究表明哮喘大鼠在气道壁EOS凋亡减少的同时表现为明显的Th1/Th2失衡。     

甲基强的松龙诱导淋巴细胞凋亡特点的探讨

为探讨甲基强的松龙 (MP)抗排斥作用机制 ,使用MP诱导人外周血淋巴细胞凋亡 ,经电镜、DNA电泳证实细胞发生典型凋亡。流式细胞仪TUNEL凋亡定量检测证实MP处理组凋亡发生率 5 8 2 % ,显著高于对照组 10 2 % (P <0 0 1)。流式细胞双标记检测发现CD3+ 细胞凋亡率 87 6 %、CD3 细胞凋亡率 2 3 0 % ,均显著高于对照组 (P <0 0 1)。CD3+ 细胞及CD4+ /CD8+ 比值亦显著减少。淋巴细胞CD95表达无显著变化。表明非CD95途径诱导淋巴细胞凋亡 ,特别是CD3+ CD4+ 细胞凋亡 ,是MP抗排斥作用机制之一。     

rhBMP-2m对化疗损伤小鼠的修复治疗作用

目的 :探讨重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP 2m)对环磷酰胺 (CTX)致骨髓损伤小鼠的治疗作用。方法 :18只小鼠随机分为 3组 :即CTX注射组、BMP治疗组和PBS对照组 ,每组 6只小鼠。CTX组和BMP治疗组小鼠 ,一次性腹腔注射 2 0 0mg/kgCTX建立骨髓损伤的模型。注射CTX第 2天 ,BMP治疗组每只小鼠腹腔注射 0 .5mg的rhBMP 2m开始治疗。观察 3组小鼠外周血白细胞数的变化。分别在第 5天和第 8天 ,用流式细胞仪 (FCM )检测骨髓有核细胞中DNA的含量及细胞周期的变化 ,同时进行粒单细胞集落形成 (CFU GM)细胞培养。结果 :注射CTX后第 4天 ,BMP治疗组和CTX注射组的外周血白细胞数均降至最低点 ,然后逐渐回升 ,两组相比较无显著差异 (P >0 .0 5 )。注射CTX后第 5天 ,BMP治疗组骨髓有核细胞中 ,G0 /G1期细胞的比例较CTX组明显提高 ,细胞的坏死及凋亡率明显下降 (P <0 .0 1)。第 8天 ,BMP治疗组的骨髓有核细胞数较CTX组增加明显 (P <0 .0 1)。结论 :BMP对CTX所致小鼠骨髓的损伤具有修复治疗作用     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠隐睾生精细胞凋亡的影响

目的：研究N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对实验性大鼠隐睾生精细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：手术建立大鼠单侧隐睾模型，术后分别注射L-NAME及生理盐水，7d后采用流式细胞术检测2组大鼠隐睾生精细胞凋亡，免疫组化法检测隐睾内Bcl-2和Bax基因表达变化。结果：实验组隐睾重量较对侧正常睾丸重量减轻的程度低于对照组，生精细胞凋亡百分比及Bax表达较对照组低，而Bcl-2表达较对照组高。结论：L-NAME可通过调控Bcl-2和Bax的表达抑制隐睾导致的生精细胞凋亡。     

SB203580对大鼠隐睾生精细胞凋亡的影响

目的:探讨SB203580对大鼠隐睾所致生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为隐睾组、隐睾 SB203580(p38MAPK抑制剂)组、隐睾 溶媒组、假手术组。复制单侧隐睾模型,术后分别腹腔内注射溶媒或SB203580。7 d后快速断颈椎处死,TUNEL原位末端标记法结合流式细胞术(FCM)检测各组右侧睾丸生精细胞凋亡,免疫组化观察各组右侧睾丸磷酸化p38MAPK蛋白表达的变化。结果:FCM及TUNEL法均显示隐睾 SB203580组生精细胞凋亡指数低于隐睾组和隐睾 溶媒组,同时磷酸化p38MAPK蛋白表达减少。结论:SB203580能降低p-p38MAPK蛋白表达并抑制热压诱导的生精细胞凋亡。     

锰诱导大鼠生精细胞凋亡过程中生殖激素和乳酸脱氢酶及PARP的作用

目的研究锰对大鼠体内生殖激素和乳酸脱氢酶(LDH)和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达的影响,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法雄性SD大鼠48只,随机分为空白对照组,低剂量组和高剂量组,腹腔注射Mn Cl24周和6周,TUNEL法检测生精细胞凋亡,放射免疫测定血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)含量,化学比色测定血清和睾丸LDH含量。免疫组织化学法检测生精细胞PARP表达。结果各染锰组生精细胞凋亡指数、血清FSH、LH及LDH含量升高,血清T、睾丸LDH含量及PARP表达降低。结论锰可使大鼠T和睾丸LDH降低,FSH、LH和血清LDH活性升高,抑制大鼠生精细胞PARP表达,导致生精细胞凋亡。     

手机电磁辐射对小鼠自由基影响的研究

目的 :研究经手机电磁辐射后的小鼠血清中SOD、MDA含量的变化 ,推断手机电磁辐射可能对人体造成的早期损害。方法 :应用分光光度比色法检测手机辐射后血清SOD、MDA含量 ,并与对照组进行统计学比较 ,同时电镜下观察大脑皮层、海马、小脑超微结构的变化。结果 :实验组小鼠血清SOD低于对照组 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,而实验组MDA含量明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;电镜下 ,实验组大脑皮层、海马、小脑超微结构与对照组相比较没有明显改变。结论 :手机辐射使小鼠体内自由基生成增多 ,对机体细胞造成早期损伤。