GnRH类似物对大鼠回肠组织胰高血糖素释放的影响

目的 :研究促性腺激素释放激素 (GnRH)类似物 (阿拉瑞林 )对大鼠回肠L细胞释放胰高血糖素的影响。方法 :应用放射免疫分析法对体内和体外大鼠回肠进行观察。结果 :大鼠回肠灌注GnRH类似物后 ,血中及肠液中胰高血糖素的含量较对照组明显升高 ;体外孵育大鼠回肠组织后 ,在一定浓度范围内 ,孵育液中胰高血糖素含量随GnRH类似物浓度升高而升高 ;当浓度高于一定范围时 ,则随浓度升高而降低。GnRH类似物浓度为 1 .0× 1 0 - 4mol/L时孵育液中胰高血糖素含量是升高的。结论 :GnRH可能对大鼠回肠L细胞分泌胰高血糖素呈现双向调节作用。但是GnRH类似物为 1 .0× 1 0 - 4mol/L ,不论是体内还是体外 ,都可能对肠道分泌胰高血糖素表现促进作用     

大鼠胃壁细胞GnRH受体的定位及GnRH类似物对壁细胞内钙的影响

目的　观察促性腺激素释放激素 (gonadotropin releasinghormone,GnRH)受体在培养的大鼠胃粘膜壁细胞中的定位 ,并探讨GnRH类似物阿拉瑞林 (alarelin)对壁细胞内游离钙动员的机制。　方法　采用免疫组织化学和原位杂交技术 ;应用Ca2 + 指示剂Fluo 3 AM作为细胞内钙离子的荧光探针 ,对负载培养的胃壁细胞 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测单个细胞内钙荧光强度的变化。　结果　大鼠胃壁细胞呈GnRH受体免疫反应阳性 ,阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;同样壁细胞内可检测到GnRH受体mRNA杂交信号 ,阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;胞内Ca2 + 浓度变化为 :1 在Hank液中 ,GnRH类似物浓度为 10 - 8、10 - 7、10 - 6 mol L时 ,胃壁细胞内Ca2 + 浓度逐渐升高 ,其峰高 (峰值减去静息值 )分别为 7 1± 1 4、12 1± 1 7、16 8± 2 2。其达峰时间也逐渐增快 ,分别为 34 2± 6 4s、18 9± 1 2s、10 4± 2 3s。相邻两组间其峰高及达峰时间均存在显著性差异 (P <0 0 5 ) ,且呈明显剂量依赖性。 2 在D Hank液 (去除外钙 )中 ,阿拉瑞林可轻度短暂升高胞内Ca2 + ;用内罗啶孵育后再加入阿拉瑞林也可轻度短暂升高胞内Ca2 + ,二者无显著性差异。 3 当用拉西地平孵育后再加入阿拉瑞林 ,可明显抑制胞内Ca2 + 的增加     

结肠癌中HRH3表达对细胞增殖的影响

目的探讨组胺受体3(histamine receptor 3, HRH3)对结肠癌细胞恶性增殖的影响及其相关信号通路。方法以结肠癌Ls174T细胞和SW480为研究对象,研究HRH3对其生长增殖的影响。通过转染siRNA片段沉默HRH3基因表达。CCK-8检测细胞生长,EdU检测细胞增殖活性,实时荧光定量PCR和Western blot检测相关信号通路分子改变。结果转染siRNA片段可有效沉默HRH3表达。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,转染si-HRH3后,HRH3 mRNA和蛋白表达均显著降低(P均0.05)。CCK-8实验结果显示,沉默HRH3后,细胞生长明显减慢(P均0.05)。EdU实验结果显示,沉默HRH3后,细胞增殖活性显著降低(P均0.05)。机制研究表明,沉默HRH3后,c-Myc表达显著降低、CDKN1A表达显著升高(P均0.05)。结论 HRH3可能通过调控c-Myc和CDKN1A转录表达促进结肠癌细胞的恶性增殖。     

GnRH类似物对培养的大鼠胃平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察促性腺激素释放激素 (gonadotropin releasinghormone,GnRH)类似物阿拉瑞林 (alarelin)对培养的大鼠胃平滑肌细胞增殖的影响。　方法　应用离体培养的SD大鼠胃平滑肌细胞 (gastricsmoothmusclecell,GSMC) ,采用四唑盐 (MTT)比色法实验 ,3H 胸腺嘧啶核苷酸 (3H TdR)参入、免疫荧光化学检测增殖细胞核抗原 (pro liferatingcellnuclearantigen ,PCNA)表达的平均荧光值和流式细胞仪技术 ,观察阿拉瑞林对GSMC的增殖、DNA合成和细胞周期的影响。　结果　当加入终浓度为 10 - 9、10 - 7、10 - 5mol L的阿拉瑞林 2 4h后 ,与未用药的对照组相比 ,发现其MTT吸光度 (A值 )逐渐降低 (P <0 0 5 ) ;PCNA表达的平均荧光值逐渐减弱 (P <0 0 5 ) ;GSMC的3H TdR参入量依次减少 (P <0 0 5 ) ,且药物浓度越大 ,此三者下降越明显。在细胞周期中 ,与对照组相比 ,G1 期细胞所占比例明显增加 (P <0 0 5 ) ;S期细胞所占比例明显减少 ,且随药物浓度的增加而逐渐减少 (P <0 0 5 )。　结论　GnRH类似物可明显抑制大鼠GSMC的增殖作用 ,其作用途径可能是通过平滑肌细胞自身GnRH受体的直接介导而实现的     

促性腺激素释放激素类似物对人乳腺癌细胞的影响

目的:探讨促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)类似物曲普瑞林(triptorelin)对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231细胞生长及细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)和磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路中重要信号分子ERK1/2和Akt活化的影响。方法:使用不同浓度、不同时间的曲普瑞林刺激人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞株,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blotting检测Akt和ERK1/2的磷酸化程度。结果:曲普瑞林(10-5mol/L)作用人乳腺癌MCF-7细胞192 h、曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MCF-7细胞168 h、192 h或曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MDA-MB-231细胞192 h可明显抑制细胞生长(P0.05);曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞192 h,ERK1/2的磷酸化程度均较正常对照组低,Akt的磷酸化程度较正常对照组高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:GnRH类似物曲普瑞林对人乳腺癌细胞的抑制作用,不仅仅是通过对垂体激素的降调节机制,还可能产生直接抑制作用。但该抑制作用未涉及ERK/MAPK和PI3K/Akt信号通路。     

GnRH-I类似物对离体大鼠胃壁细胞三磷酸肌醇含量的影响

目的：探讨促性腺激素释放激素（GnRH）-I类似物阿拉瑞林对离体大鼠胃壁细胞内三磷酸肌醇（IP3）含量的影响。方法：体外分离大鼠胃壁细胞并给予不同浓度的阿拉瑞林孵育,利用标记的[3H]-IP3采用放射免疫分析法检测了壁细胞内IP3的含量。结果：当加入终浓度分别为0．001、0．01、0．1、1μmol／L的阿拉瑞林时,大鼠胃壁细胞内IR的含量逐渐增加,呈剂量依赖性,当阿拉瑞林为1μmol／L时,IB的含量达到高峰;同时随着药物作用时间的延长,IR的含量也会增加,当阿拉瑞林作用5min时,IR的含量达到峰值,随后开始下降;磷酸二脂酶（PLC）抑制剂Compound48／80温育细胞后,再加入阿拉瑞林孵育,可使IB的含量轻度增加,但与PLC抑制剂组相比,无统计学意义（P〉0．05）;IP3受体阻滞剂heparin温育细胞后,再加入阿拉瑞林孵育,壁细胞内IB含量略有上升,与只加入Heparin组相比无统计学意义。结论：在体外GnRH—I类似物可使大鼠胃壁细胞内IR的含量明显增加,说明IR参与了GnRH—I类似物对大鼠胃壁细胞功能调控的信号转导过程。     

抗苗勒氏管激素对人黄素化颗粒细胞激素分泌的影响

目的：探讨抗苗勒氏管激素（AMH）对人颗粒细胞激素产生分时段的影响。方法：采用人黄素化颗粒细胞原代培养，分组加入不同浓度的AMH，分时段测定细胞培养液中的雌二醇（E2）和孕酮（P）浓度。结果：细胞培养液中E2、P浓度均随培养时间延长而升高，升高幅度渐下降。随着AMH浓度的增加，颗粒细胞的E2和P分泌明显降低， AMH 5μg/L组到20 μg/L组间有剂量依赖性，AMH 50 μg/L组与20 μg/L组比较无显著差别。结论：AMH可以降低体外培养人黄素化颗粒细胞的雌、孕激素分泌，并有一定的剂量依赖性，提示AMH可以影响颗粒细胞的激素合成过程。     

人嗜铬细胞瘤细胞的原代培养及鉴定

本研究拟建立人嗜铬细胞瘤细胞的原代培养方法。采用连续分次胶原酶消化法分离培养人嗜铬细胞瘤细胞，采用细胞培养液中儿茶酚胺水平检测、多聚甲醛诱发荧光及细胞嗜铬粒蛋白A(CgA)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的免疫组化染色等方法进行细胞性质和功能鉴定，并用噻唑兰(MTT)法观察原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞的生长状况。结果表明，人嗜铬细胞瘤细胞在培养3～7天时生长较快，7天后细胞开始分化。经检测细胞培养液中的儿茶酚胺浓度、多聚甲醛诱发荧光等，证明该细胞有合成和分泌儿茶酚胺的功能。并且培养的细胞CgA和NSE免疫组化染色阳性。因此，本研究成功建立了人嗜铬细胞瘤细胞的原代培养方法，并鉴定其具有嗜铬细胞瘤的分泌和表达功能，国内尚未见报告。     

氨对人表皮角质细胞生长和代谢的影响

 目的 了解人表皮角质细胞培养过程中，氨对细胞生长和代谢的影响。方法 收集3～6岁健康幼儿包皮，以Dispase Ⅱ分离、收集原代细胞，角质化细胞专用无血清培养基（Keratinocyte- SFM）培养。待细胞培养至第4代，更换含不同氨浓度的培养基，考察细胞生长和代谢的变化。结果 氨抑制了细胞的生长，当氨的浓度为9.23 mmol/L时，脉冲培养结束时的活细胞密度（0.84×105个/ml）进一步下降，细胞存活率下降至54.5%；氨对细胞生长的抑制作用遵循二级抑制模型, 其模型常数Ka为4.46（mmol/L）2，即当氨的浓度为2.11 mmol/L时，细胞的比生长速率下降到最大比生长速率的50%。当氨浓度从1.23 mmol/L增加到1.73 mmol/L，细胞对葡萄糖的得率系数下降了48.0%，葡萄糖的比消耗速率上升了14.8%；与氨浓度为1.23 mmol/L相比，9.23 mmol/L的氨使乳酸对葡萄糖的得率系数增加了12.0%，乳酸的比生成速率增加了53.3%。氨浓度的增加明显改变了细胞的代谢，促进了细胞对葡萄糖的利用，消耗的葡萄糖更倾向于乳酸的生成。当氨浓度为9.23 mmol/L，谷氨酰胺的比消耗速率和氨的比生成速率分别是氨浓度为1.23 mmol/L的20.2%和6.2%。氨抑制了谷氨酰胺的消耗，谷氨酰胺在生成谷氨酸后经过脱氢途径的流量减少，更多地向转氨途径，即低效率的产能途径偏移。结论 在人表皮角质细胞的培养过程中，应尽量减少氨的积累。     

大蒜素联合阿霉素诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡

目的： 观察大蒜素与阿霉素联合应用对人肝癌细胞QGY-7701的作用效果,并探讨其机制。方法: 不同浓度大蒜素与阿霉素单独及联合作用于人肝癌QGY-7701细胞后,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,计算合用指数(CI),流式细胞仪(FCM)检测QGY-7701细胞凋亡率,吖啶橙(AO)荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。结果: 单独应用时大蒜素与阿霉素的中效浓度分别是56.0 mg/L和4.9 mg/L,联合用药时下降为23和2.3 mg/L,CI=0.887,为协同效应。大蒜素与阿霉素单独及联合应用均可导致QGY-7701细胞出现凋亡的形态学变化。2种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。结论: 大蒜素与阿霉素联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡,协同抑制人肝癌细胞生长。     

聚乙二醇/(NH_4)_2SO_4双水相体系分离纯化α-磷酸甘油氧化酶

铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)在诱导剂甘油存在的条件下,经发酵培养可合成和分泌α-磷酸甘油氧化酶。该菌的无细胞抽提液可通过聚乙二醇(PEG)/(NH4)2SO4双水相萃取法有效进行α-磷酸甘油氧化酶的分离和纯化。研究结果表明,PEG分子大小、PEG浓度、pH、(NH4)2SO4浓度和无机盐及粗酶液的加入量是影响该萃取系统的主要因素,最终确定的最适双水相系统为16.5%(m/m)PEG2000、13.2%(m/m)(NH4)2SO4、pH7.5和30%(m/m)的粗酶加入量。无机盐NaCl的加入对萃取α-磷酸甘油氧化酶会产生负面影响,导致低的纯化倍数和活性回收率。此双水相萃取体系用于放大提取α-磷酸甘油氧化酶,其酶活性回收率可达89%、分配率为1.2、纯化倍数为7.0。     

黄体生成素类似物对离体大鼠颌下腺细胞分泌神经生长因子的影响

目的:探讨黄体生成素(LH)类似物对离体大鼠颌下腺细胞分泌神经生长因子(NGF)的影响.方法:体外孵育大鼠颌下腺细胞并给予不同浓度的LH类似物,采用酶联免疫分析(ELISA)方法检测上清液中神经生长因子的含量.结果:当加入终浓度为10-6、10-4、10-2U/L的LH类似物孵育颌下腺细胞时,NGF的分泌量随着浓度的升高而逐渐增高;当LH类似物浓度为10-2、100、102 U/L时,NGF的分泌量随LH类似物浓度的递减而降低;同时随着时间的增加,NGF的分泌量也会增加,孵育8 h时达高峰,随后开始下降.结论:在体外LH类似物可双项调节大鼠颌下腺细胞分泌NGF的功能.     

GnRH-Ⅰ类似物对离体大鼠胃壁细胞三磷酸肌醇含量的影响

目的:探讨促性腺激素释放激素(GnRH)-Ⅰ类似物阿拉瑞林对离体大鼠胃壁细胞内三磷酸肌醇(IP3)含量的影响.方法:体外分离大鼠胃壁细胞并给予不同浓度的阿拉瑞林孵育,利用标记的[3H]-IP3,采用放射免疫分析法检测了壁细胞内IP3的含量.结果:当加入终浓度分别为0.001、0.01、0.1、1 μmol/L的阿拉瑞林时,大鼠胃壁细胞内IP3的含量逐渐增加,呈剂量依赖性,当阿拉瑞林为1 μmol/L时,IP3的含量达到高峰;同时随着药物作用时间的延长,IP3的含鼍也会增加,当阿拉瑞林作用5 min时,IP3的含量达到峰值,随后开始下降;磷酸二脂酶(PLC)抑制剂Compound 48/80温育细胞后,再加入阿拉瑞林孵育,可使IP3的含量轻度增加,但与PLC抑制剂组相比,无统计学意义(P0.05);IP3受体阻滞剂heparin温育细胞后,再加入阿拉瑞林孵育,壁细胞内IP3含量略有上升,与只加入Heparln组相比无统计学意义.结论:在体外GnRH-Ⅰ类似物可使大鼠胃壁细胞内IP3的含量明显增加,说明IP3参与了GnRH-Ⅰ类似物对大鼠胃壁细胞功能调控的信号转导过程.     

铜绿假单胞菌密度感应信号分子OdDHL对γδT细胞合成胰岛素样生长因子1的影响

目的探讨密度感应(QS)信号分子OdDHL在铜绿假单胞菌(PA)抑制外周血γδT细胞合成胰岛素样生长因子1(IGF-1)过程中所起的作用及其机制。方法 (1)分离纯化健康成人外周血γδT细胞,细胞同步后配成浓度为5×106个/m L的细胞悬液放入6孔培养板,每孔2 m L,按随机数字表法将培养板孔分为6组,每组设3个复孔,分别加入0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μmol/L浓度OdDHL各20μL,在37℃,5%CO2培养箱中培养24 h。用WST-l细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测γδT细胞的活性,用Annexin V/PI双染检测试剂盒检测γδT细胞的凋亡。(2)分离纯化健康成人外周血γδT细胞,细胞同步后配成浓度为5×106个/m L的细胞悬液放入6孔培养板,每孔2 m L,按随机数字表法将培养板孔分为4组,阳性对照组和阴性对照组每组设3个复孔,剩余2组分为2个OdDHL浓度水平处理组,每组设5个复孔,阳性对照组加入终浓度为10 mg/L的Con A,阴性对照组加入相应体积的PBS。2个OdDHL处理组在加入终浓度为10 mg/L的Con A后分别加入25、50μmol/L的OdDHL 20μL。在37℃,5%CO2培养箱中培养48 h。用ELISA法测定培养上清中IGF-1浓度,用实时荧光定量PCR测定γδT细胞TLR4 mRNA,用Western blot法测定γδT细胞TLR4蛋白,用流式细胞仪检测γδT细胞CD80、CD86的表达。对数据行F检验和q检验。结果 (1)OdDHL浓度达到100μmol/L可明显抑制γδT细胞活性,提高细胞的凋亡,而低于50μmol/L的OdDHL却对γδT细胞活性无明显影响。(2)培养上清中IGF-1在阴性对照组为(14.32±2.34)μg/m L,在阳性对照组为(139.58±11.73)μg/m L,在25μmol/L的OdDHL处理组为(85.64±7.52)μg/m L,在50μmol/L的OdDHL处理组为(56.49±4.93)μg/m L,统计学分析显示差异有统计学意义(F=296.69,P0.05)。(3)γδT细胞TLR4 mRNA表达值在阴性对照组是0.91±0.13;在阳性对照组是5.07±0.72,在25μmol/L的OdDHL处理组是3.36±0.45,在50μmol/L的OdDHL处理组是1.56±0.21,统计学分析显示差异有统计学意义(F=107.98,P0.05)。γδT细胞TLR4蛋白表达值在阴性对照组是0.52±0.09;在阳性对照组是2.27±0.51,在25μmol/L的OdDHL处理组是1.14±0.17,在50μmol/L的OdDHL处理组是0.78±0.15,统计学分析显示差异有统计学意义(F=41.86,P0.05)。γδT细胞表面CD80表达率在阴性对照组是(3.92±0.49)%;在阳性对照组是(52.65±4.26)%,在25μmol/L的OdDHL处理组是(23.04±2.53)%,在50μmol/L的OdDHL处理组是(12.88±1.65)%,统计学分析显示差异有统计学意义(F=586.901,P0.05)。γδT细胞表面CD86表达率在阴性对照组是(1.61±0.15)%;在阳性对照组是(22.03±3.17)%,在25μmol/L的OdDHL处理组是(9.59±1.06)%,在50μmol/L的OdDHL处理组是(5.76±0.95)%,统计学分析显示差异有统计学意义(F=231.126,P0.05)。结论PA分泌的QS信号分子OdDHL可通过促进细胞凋亡或抑制细胞激活来减少γδT细胞IGF-1的合成,影响全身烧伤创面的愈合。     

云芝多糖增强人NK细胞杀伤功能的体外研究

目的探讨云芝多糖(PSK)对体外培养的人自然杀伤(NK)细胞杀伤功能的影响。方法采集健康成年人外周血,分离单个核细胞(PBMC),加入含白细胞介素(IL)-2的NK细胞培养液。培养第10天时加入不同质量浓度(100、75、50、25、10、5μg/m L)的PSK诱导NK细胞48 h,收集细胞检测。用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测诱导前后NK细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a及NKG2D受体表达(PSK诱导为实验组,同时设不加药物及无细胞的空白对照孔为对照组)。通过CCK-8法检测对红白血病细胞株K562细胞的杀伤活性:取质量浓度25μg/m L PSK诱导48 h后NK细胞,调整细胞浓度至1×10~9/L作为效应细胞;调整红白血病肿瘤细胞株K562细胞浓度至5×10~7/L,按效靶比为5∶1、10∶1、20∶1、40∶1、80∶1的比例混合培养于96孔板内,同时设单独效应细胞孔、单独靶细胞孔(实验组)和空白孔(对照组)。结果培养10 d后NK细胞纯度达到78.70%左右。经PSK诱导48 h后,NK细胞的增殖及功能具有一定浓度依赖性,PSK质量浓度在25μg/m L对NK细胞的增殖率(51.62%±3.20%)最为明显(P0.01),之后逐渐下降。在质量浓度0~100μg/m L可以促进NK细胞的生长和增加NK细胞表面穿孔素、颗粒酶B、CD107a和NKG2D受体表达,以及增强对红白血病细胞株K562细胞的杀伤活性;尤其是当PSK质量浓度为25μg/m L时,颗粒酶B、穿孔素、NKG2D和CD107a表达为55.42%±2.34%、70.49%±1.87%、83.45%±1.77%和85.00%±2.02%,显著高于对照组(25.83%±1.31%、40.79%±1.59%、70.66%±2.39%和72.79%±2.31%)(P0.01)。在效靶比80∶1时,实验组杀伤活性为57.63%±3.42%,高于对照组(24.78%±2.47%)(P0.01)。结论 PSK在一定质量浓度下能促进NK细胞的生长,且增强NK细胞的杀伤功能。     

雌二醇对人树突状细胞成熟和功能的影响

目的：研究雌二醇(17β-estradiol, E2)对人外周血来源树突状细胞(DCs)成熟和免疫学功能的影响。 方法： 在人外周血来源DC体外培养时加入两种浓度的E2 (10-7 mol/L和10-6 mol/L)处理，光镜和电镜下观察DCs的生成情况及形态变化，以流式细胞仪分析各组细胞的免疫表型，用ELISA方法测定其分泌的IL-12水平，［3H］-TdR掺入法检测体外混合淋巴细胞反应中DCs刺激同种反应性T细胞的增殖能力。 结果： 加入E2培养后, DCs树突状和膜面状伪足减少，表达低水平MHC-II分子和共刺激分子CD40、CD80和CD86，其分泌的IL-12水平明显下降，DCs刺激同种反应性T细胞的功能显著下降。 结论： E2抑制人外周血来源DC的成熟，对其免疫学功能具有负性调节作用。     

三氧化二砷对肝癌细胞生长抑制作用差异性探讨

目的:观察三氧化二砷对肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞生长抑制作用差异性并且探讨其可能的作用机理。方法: 应用细胞培养和台盼蓝拒染法观察不同时间和不同浓度的三氧化二砷对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402细胞生长的抑制作用,比较生长抑制率的差异并用谷胱甘肽检测试剂盒测定两种肝癌细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果: 三氧化二砷浓度为0.50 μmol/L、作用时间为24 h可显著抑制肝癌细胞系BEL-7402的生长,抑制作用呈时间、剂量依赖性;对SMMC-7721细胞,三氧化二砷浓度为2.00 μmol/L、作用时间为24 h才出现抑制细胞生长作用,二者的生长抑制率存在显著差异,0.25-2.00 μmol/L As₂O₃作用72 h后,BEL-7402细胞的生长抑制率均高于SMMC-7721细胞(P＜0.05)。检测SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH含量分别为(50.8±5.2)μmol/g protein和(18.7±1.4)μmol/g protein,存在明显差异。 结论:三氧化二砷抑制肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402的生长存在显著的差异;BEL-7402细胞对三氧化二砷非常敏感性,可能与其细胞内谷胱甘肽含量较低,细胞的氧化还原解毒系统不足有关。     

抗人NRP-1单克隆抗体对肝癌HepG2细胞株的生长抑制作用及机制初探

目的研究抗人神经纤毛蛋白-1(Neuropilin1,NRP-1)单克隆抗体对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用及其机制。方法小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 m Ab)并用r Protein A亲和柱纯化抗体,间接ELISA检测抗体的滴度水平。Western blot检测NRP-1 m Ab对Hep G2细胞的特异性,细胞免疫荧光和流式细胞术检测NRP-1蛋白在肝癌细胞株Hep G2上的表达,MTT法检测NRP-1 m Ab对Hep G2的生长抑制作用,Western blot检测ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白的表达水平。结果 SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 m Ab纯度为95%以上,效价为1×10~(-6);Western blot检测结果显示NRP-1 m Ab可与Hep G2细胞膜上的NRP-1蛋白特异性结合。细胞免疫荧光染色结果显示NRP-1定位于Hep G2细胞膜,流式细胞术结果显示NRP-1蛋白在Hep G2细胞上表达水平较高;MTT法检测结果显示NRP-1 m Ab对Hep G2细胞有生长抑制作用。Western blot检测到在不同浓度NRP-1 m Ab作用下,Hep G2细胞裂解液P-ERK1/2、P-Akt蛋白的条带信号逐渐减弱。结论纯化的NRP-1m Ab能抑制Hep G2细胞的生长,其抑制作用是通过EGF和HGF信号通路实现的。     

胸腺抚育细胞具有神经内分泌功能

胸腺是T细胞分化的主要埸所,T细胞分化过程除需要细胞与细胞之间通过受体介导的直接作用外,尚需要胸腺上皮细胞分泌的胸腺激素的作用。人们已从人胸腺提取物中检测到了脑垂体神经部多肤如催产素(OT)和精氨     

汉黄芩素提高人CD3AK细胞杀伤肝癌细胞的实验研究和机理探讨

目的:观察汉黄芩素对人CD3AK细胞增殖及对肝癌细胞SMMC-7721杀伤活性的影响,并探讨其发生的机制。方法:分离健康者外周血PBMC;在体外用多种细胞因子联合诱导培养CD3AK细胞。收集培养第7天的CD3AK细胞给予不同浓度汉黄芩素诱导48 h:CCK-8法检测人CD3AK细胞增殖率;MTT法检测汉黄芩素对SMMC-7721细胞生长的影响;流式细胞术(FCM)检测汉黄芩素作用前后CD3AK细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(Gr B)、CD107a的表达;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定汉黄芩素对CD3AK细胞杀伤肝癌细胞SMMC-7721活性;Western blot检测药物诱导前后CD3AK细胞胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白表达。用transwell chambers小室进行药物诱导前后肝癌细胞SMMC-7721迁移率检测。划痕愈合实验观察药物诱导后肝癌细胞SMMC-7721生长融合情况。结果:汉黄芩素能明显促进CD3AK细胞增殖,汉黄芩素浓度为3.2 mg/L时,细胞增殖率比对照组(0 mg/L)高23%,两者比较有统计学差异(P0.05)。在汉黄芩素为3.2 mg/L时诱导的CD3AK细胞对靶细胞SMMC-7721杀伤活性最高(60.4%),与对照组(42.7%)比较差异有统计学意义(P0.05)。经汉黄芩素诱导后的CD3AK细胞PFP、Gr B、CD107a表达显著高于对照组(P0.05)。汉黄芩素作用48h后的CD3AK细胞其ERK1/2蛋白表达较对照组均有所上调,浓度在12.5~0.8 mg/L时,ERK1/2蛋白表达高于对照组(P0.05)。经浓度为50、12.5、3.2、0.8、0.2mg/L汉黄芩诱导48 h后,肝癌细胞SMMC-7721通过transwell小孔细胞数以汉黄芩浓度为12.5 mg/L时最低、肝癌细胞SMMC-7721的融合率以3.2 mg/L时最低,与对照组比较有统计学意义(P0.05)。结论:汉黄芩素在一定浓度范围内能够促进CD3AK细胞增殖,增强其对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤活性,抑制SMMC-7721细胞生长、迁移和细胞的融合。汉黄芩素促进CD3AK细胞增殖和功能改变可能与活化细胞ERK1/2蛋白,上调CD3AK细胞表面PFP、Gr B、CD107a的表达有关。