甲醛固定对阿片受体结合能力的影响

应用放射受体分析和体外受体放射自显影技术,研究了甲醛固定对阿片受体结合能力的影响。结果表明,1％多聚甲醛溶液中孵育30分钟或12小时,对大鼠脑膜阿片受体结合能力均无显著影响; 2％或4％多聚甲醛溶液中孵育30分钟,对阿片受体结合能力也无显著影响。经甲醛固定的脑切片上的阿片受体,与[~3H]-埃托啡结合的饱和曲线与新鲜脑切片的相似。用1％多聚甲醛固定的组织切片进行体外受体放射自显影,较好地显示了阿片受体的分布。这些结果提示,甲醛固定的组织可用于进行体外受体放射自显影研究。     

近端小管表面细胞膜再循环的直接证据

利用大鼠活体肾小管显微穿刺技术，将一种新研制的膜蛋白标记试剂直接注入近端小管腔，内，用电镜放射自显影方法处理组织切片，追踪被内陷的膜蛋白，最后体视学定量分析。结果表明：在近端小管表面细胞膜和内吞泡之间存在着有效的持续不断的片段的细胞膜循环。     

大白鼠脚内核至外侧缰核投射的突触特点——WGA-HRP顺行标记法电镜研究

选大白鼠六只,戊巴比妥钠麻醉后,于定向仪上,通过微玻管将2～5％WGA-HRP的Tris溶液(pH8.2)微电泳入脚内核。电流强度为3μA,持续通电6～10min。术后存活两天,用含1％多聚甲醛和1.25％戊二醛的磷酸缓冲液灌注取材。取脑后于2％戊二醛磷酸缓冲液中后固定4h(4℃),置5％蔗糖磷酸缓冲液中,冰箱(4℃)内过夜。震动切片机切片(厚100μm),TMB成色反应。在电泳同侧的外侧缰核内,可见密集的、肉眼可见的灰蓝色标记区,光镜下证明是标记终末。于解剖镜下取下顺行标记密集区,经锇酸后固定1h后,脱水包埋,LKB—Ⅰ型超薄切片机切片,用国产DXA 4—10     

免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的几点体会

金标法是利用胶体金在碱性环境中带负电的性质 ,使其与抗体相吸引 ,从而将抗体标记。我们在使用免疫胶体金标记超薄切片抗原的实验中深深地体会到 ,要提高标记阳性的成功率 ,某些因素将在实验中起到很重要的作用。1、材料和方法1 .1材料　 2 0例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为 Ig A肾病的肾活检组织的环氧树脂包埋块。1 .2方法　取肾活检组织 ,经 0 .0 5 %戊二醛 ,1 %多聚甲醛 (二甲砷酸钠缓冲液配制 )固定 3- 4 h,1 % Os O4后固定 2 h,梯度丙酮脱水 ,Epon81 2包埋 ,6 0℃聚合 1 2 h,制备超薄切片 ( 5 0 - 70 nm) ,粘贴于带有 formar膜的…     

小鼠肾脏发育中凋亡细胞的超微结构变化

1　材料和方法1 1　动物取昆明小鼠 ,雌雄比例 3∶1同窝饲养 ,以雌鼠阴道精栓出现为第 1日计算胎鼠胚龄。部分孕鼠分笼饲养 2 0日后 ,每天早八时观察分娩情况 ,新生仔鼠按生后计算日龄。选取 1 4、1 8日胎鼠各 4只 ,生后 1、7、1 4日龄仔鼠各 4只为观察对象。1 2　光镜和电镜标本制作　在冷操作条件下切开胎鼠和仔鼠腹部 ,取左肾于 2 5 %戊二醛内固定。胎鼠做全肾树脂包埋 ,仔鼠肾脏经肾门做矢状面切开 ,皮质和髓质分别进行树脂包埋。ＬＫＢ Ｖ型超薄切片机半薄连续切片 ,甲苯胺蓝染色 ,按Ｋｏｓｅｋｉ判断光镜下凋亡细胞后制超薄切片 ,…     

电镜半薄切片应用于光镜研究的探讨

电镜半薄切片通常用于电镜超薄切片前的定位观察 ,我们在定位观察时发现 ,由于切片薄 ,结构显示清晰 ,可用于光镜研究 ,其观察结果优于石蜡切片。多年来 ,我们已将电镜半薄切片应用于实验研究和研究生课题实验。方法 :取材后将组织修为 1立方毫米左右 ,常规电镜样品处理 ,环氧树脂 6 18包埋 ,修块 ,L KBV型超薄切片机切片 ,切片厚度 1微米 ,脱树脂后 ,苏木精染色 ,H· E或甲苯胺兰染色 ,37℃温箱烤干 ,封片 ,观察。结果 :苏木精染色显示 ,细胞核呈紫兰色 ,胞浆淡兰色 ;H·E染色显示 ,细胞核为紫兰色 ,细胞质淡粉红色 ,但伊红染色较石蜡…     

正常人粒细胞内铁蛋白的定位观察

本文采用正常人外周血2～4m1,1000～1500r/min离心10分钟,4%戊二醛固定后按常规电镜标本制作。半薄切片定位白细胞,制超薄切片收集于无膜镍网上。超薄切片先经H_2O_2蚀刻,继之用1%卵蛋白处理15分钟,然后切片依次孵育于抗人铁蛋白抗体(一种为兔抗人铁蛋白多克隆抗体,另一种为鼠抗人铁蛋白单克隆抗体)、10nm葡萄球菌A蛋白-胶体金探针(PAG)中,最后经醋酸铀和柠檬酸铅复染,JEM-1200EX透射电镜观察。结果如下:各种血细胞的超微结构均清晰可见,两种抗体在白细胞内的反应显著不同。经心脏铁蛋白单克隆抗体染色后,发现阳性胶体金颗粒只存在于嗜酸性粒细胞内的颗粒上,细     

微波修复在冰冻切片免疫组化中的应用

微波修复法多用于石蜡切片 ,我们在长期的研究生免疫组化教学过程中 ,实行改良 ,将微波抗原修复法用于冰冻切片 ,取得了满意的效果 ,方法如 :1.常规固定取脑组织冰冻切片。 2 .漂洗后 3%H2 O2 封闭 10分钟 ,蒸馏水洗 2分钟 3次。3.微波抗原修复 :入柠檬酸盐缓冲液 (PH6 .0 ) ,用微波或电炉加热 ,循环 3次后入 1% BSA孵育 15分钟。 4.入一抗 30分钟 ,转入二抗2 0分钟 ,三抗 2 0分钟 ,显色。结果讨论 :1.与对照切片成比 ,阳性细胞染色增强 ,背景变浅 ,阳性检出率提高。由于常规的冰冻切片免疫组化方法所用的固定剂多含甲醛 ,醛基与蛋白质中…     

锇酸显示肾球旁细胞法

作者试用电镜的半薄切片,经锇酸浸镀后再复染,这样就能清楚显示肾球旁细胞。本方法,操作简单,染色过程短,方法易掌握。同时在100x的光镜下能分辨肾球旁细胞内的颗粒,以及肾小球基底膜,肾小管等的微细组织结构,基本可达到科研和教学的要求。现将方法介绍如下:一、半薄切片的制备按常规的电镜样品制作过程进行,用环氧树酯(Epoxy resin)包埋剂(Epon812)包埋。二、用超薄切片机(玻璃刀装水槽)连续切片厚1微米,裱在载玻片上,放入45℃温箱内烤干,4-24小时。三、将切片脱去环氧树酯,浸入氢氧化钾无水酒精饱和液(氢氧化钾在     

几种国产感光材料在氚标记冰冻小鼠整体切片放射自显影术中的应用

本文试将几种国产感光材料应用于氚标记冰冻小鼠整体切片放射自显影术。给每只小鼠注射氚水1毫居里,得到的冰冻整体切片与天津工业用高速 X 线片接触曝光22天可得到令人满意的放射自显影谱;使用上海医用 X 线片时,曝光30天的结果不理想;使用自制核_4—乳胶干板时,曝光124天也不能得到完整的放射自显影谱。     

镍钛形态记忆合金与骨组织相容性的形态学

目的：观察镍钛形态记忆合金植入动物骨组织后局部组织的反应、骨缺损的修复情况,研究镍钛合金与骨的组织相容性,为镍钛合金作为生物医学材料在临床上广泛应用提供理论依据。方法：纯系日本白性兔,实验组在股骨下1／3处植入镍钛合金。于术后4、8、16w,在植入区上下0．5cm处横断取材。将骨块置于4％多聚甲醛-2．5％戊二醛混合液内固定。制作半薄切片,经1％甲苯胺蓝染色,光镜观察;制作超薄切片,透射电镜观察。结果：实验组表现出与对照组相似的骨缺损修复过程。结论：此镍钛形态记忆合金与骨组织具有良好的相容性。     

心肌活检组织β受体放射自显影定量分析及其初步应用

心肌组织于-20℃恒冷切片机中连续切片,贴于载玻片上。~(125)I-心得静(30～300pM,本室标记)滴加于玻片组织上,在37℃、pH7.4缓冲液下孵育,含或不含L-心得舒10~(-4)M,4℃缓冲液震荡洗脱2次。平行做二组,一组刮下直接测定cpm数;一组留做自显影分析。浸膜法将核4乳胶涂布于载玻片上,避光晾干。与组织片按绞链法密贴,曝光、显影、定影。用Ommicon 3600(USA)计算机图像信息分析仪进行银粒计数。蛋白     

改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法

为研究周围神经髓鞘被覆状态 ,我们经常要进行髓鞘染色 ,在实践中 ,我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法 ,介绍如下。一、材料和方法1.取材、固定、切片 :取大鼠正常坐骨神经组织 ,4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片 6～ 10 μｍ厚 ,6 0℃左右烘箱烘 3～4ｄ。2 .试剂配制 :(1)依来铬氰Ｒ液 :依来铬氰Ｒ 0 .2ｇ ,蒸馏水 96ｍｌ,10 %铁明矾液 4ｍｌ,浓硫酸 0 .5ｍｌ。 (2 )苦味酸丽春红Ｓ液 :1%丽春红Ｓ水溶液 10ｍｌ,苦味酸饱和水溶液 86ｍｌ,1%醋酸水 4ｍｌ。3.染色程序 :(1)石蜡切片 ,常规脱蜡水洗 ,吸干或烘干切片。 (2 )依来铬氰Ｒ液染…     

抗原免疫对外周淋巴器官中细胞凋亡的影响

日的 :观察抗原免疫刺激后外周淋巴器官中细胞凋亡的情况。方法 :用完全佛氏佐剂免疫 B1 0 .A小鼠 ,2 1天后解剖 ,取出腹部淋巴结 ,制成冰冻切片。采用 TUNEL原位染色法 ,步骤如下 :1 .制备冰切片 ,过夜 ;2 .用 4%多聚甲醛 ( PBS,p H7.4)固定1 0分钟 ,然后 PBS洗 30分钟 ;3.用 3% H2 O2 (甲醇稀释 )封闭 ,室温下1 0分钟 ,然后 PBS洗 30遍 ;4.用 0 .1 % Triton X- 1 0 0 ( 0 .1 %柠檬酸钠 )在冰上 ( 4℃ )作用 2分钟 ,然后 PBS洗2遍 ;5 .擦干切片 ,每张加 5 0μl TUNEL反应混合液 ,置于湿盒中放于 37℃反应 30分钟 ,然后 PBS洗 …     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶 (ATPase)和 Ach E是研究中常用的两种酶 ,将两种酶同时显示在一张切片上 ,收到良好效果 ,特介绍如下。材料和方法 :取新鲜的动物肌组织 ,平铺于滤纸上 ,在冰冻切片机上 ,进行纵行切片 ,厚度 10～ 30μm。也可用 4%中性甲醛固定保存在 0～ 4℃的冰箱内 ,时间不宜过长 ,2 4～48小时内 ,仍可收到良好效果。 ATPace显色 :将切片放在下列的孵育液内。孵育液为 :0 .1巴比妥钠 2 0 m l,0 .18M氯化钙 10 m l,双蒸馏水 30 ml,ATP钠盐 15 2 mg,用 0 .1M Na OH调至 9.4,再加蒸馏水至 10 0 m l,每配一次可使用 1周左右。在孵育液内 …     

隐性甲状腺乳头状癌bcl-2和nm23表达的意义

一、材料和方法1 材料 :5 0例标本均来自衢州市人民医院 1983年 8月～ 2 0 0 0年 12月 ,在无临床提示情况下 ,详细检查 395 4例临床检查未发现甲状腺肿块 ,而是因甲状腺其他疾病如甲状腺肿、甲状腺炎等而行甲状腺腺叶切除的标本。患者女性38例 ,男性 12例 ,年龄最小 17岁 ,最大 5 8岁 ,平均 37 5岁。左侧 2 1侧 ,右侧 2 9例。标本经 4 %甲醛固定 ,每份大体标本以 0 2～ 0 3cm间距书页状切开观察 ,共发现直径在 1 0cm以下者隐性 (又称微小型 )甲状腺乳头状癌 5 0例 ,常规切片 ,HE染色 ,VanGieson和Masson染色 ,光镜下观察 ,根据光镜下纤…     

侧脑室内囊肿临床与病理分析

侧脑室内囊肿不仅罕见 ,而且对其的组织发生、诊断和处理方法争论较大。我们自 1984～ 2 0 0 0年共收治侧脑室内囊肿 5例 ,现报道如下。1　材料与方法1.1　一般材料　本组 5例 ,男女比例为 4∶1。年龄 9～ 5 4岁。均行ＣＴ、ＭＲ检查、手术治疗病理和免疫组化。1.2　方法　 5例标本均经 10 %中性福尔马林液固定、脱水、石蜡包埋 ,切片厚 4 μｍ ,ＨＥ染色及ＧＦＡＰ、ＣＫ免疫组化染色 ,光镜观察。2　结果2 .1　病理检查　囊壁由厚薄不一的疏松纤维结缔组织构成 ,囊壁可见纤维组织透明变性 ,内衬立方状或扁平上皮细胞 ,局部上皮呈巢状。囊壁…     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶(ATPase)和AchE是在科学研究中常用的两种酶,在科学研究中为了同时观察肌肉和神经中两种酶的分布和酶的活性,经实验研究,将两种酶是时显示在一张切片上,收到良好效果,特介绍如下。1　材料和方法1.1　组织的制备,取新鲜的动物肌组织,平铺于滤纸上,用冰冻切片机上,行纵行切片,厚度可切10～30μm,用4%中性甲醛固定保存在0～4℃的冰箱内,时间不宜过长,如固定24～48小时内,仍可收到良好效果。1.2　结合染色程序(1)ATPase显色,将切片放在下列的孵育液内。孵育液为:0.1巴比妥纳20ml,0.1gM氯化钙10ml,双蒸溜水30ml,ATP钠盐152mg。…     

大鼠海马神经细胞花生凝集素和ConA受体细胞化学技术

本实验应用 PNAg和 ConAg细胞化学技术 ,对大鼠海马神经细胞膜上的相应受体进行凝集素细胞化学反应。材料与方法 :雄性 SD大鼠 4只 ,体重2 5 0～ 30 0 g。动物经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后 ,进行心脏灌注固定 (固定液为 4%多聚甲醛 0 .1 M PB( p H7.3)。动物静置于 4℃ ,3hr后取出大脑 ,用上述固定液后固定 3hr。取具有海马的脑组织 ,用梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋、切片。PNAg和 Con Ag的制备 :1 )枸橼酸还原法配制 7nm胶体金 ;2 )胶体金分别与 PNA和 Con A稀释液按一定比例结合 ;3)超速离心 ,4℃ ,36 0 0 0 /rpm45分钟 ;4)收…     

γ-GT酶组织化学染色中低熔点石蜡切片代替冰冻切片的方法

酶组织化学染色的效果取决于标本组织中酶的含量和活性 ,标本组织的处理及制片过程对于酶的保存十分重要。常规石蜡切片因组织浸蜡温度高 ,易使酶变性 ,因此酶组织化学染色通常选用冰冻切片。寻找一种较理想的切片方法 ,是研究人员的迫切愿望和要求 ,我们在谷氨酰转肽酶 (γ -ＧＴ)染色中 ,摸索采用低熔点石蜡切片代替冰冻切片 ,取得了良好的效果 ,现介绍如下 :1　材料与方法正常兔肾新鲜标本 ,①冰冻切片 :取 1ｃｍ× 0 5ｃｍ×0 2ｃｍ组织 ,立即放入 - 2 0℃恒冷冰冻切片机 ,冷冻 10ｍｉｎ ,切片厚 8μｍ ,放 4℃冰箱备用 ;②低熔点石蜡…