p16INK4a在睾酮干预心肌细胞衰老中的作用及其机制

目的：探讨不同剂量睾酮对小鼠心肌细胞衰老的干预作用及可能机制。方法：用1μM、 100nM、10nM三种剂量睾酮干预自然衰老的小鼠心肌细胞,检测各组衰老相关β-半乳糖甘酶染色阳性细胞率,细胞周期分布,p16INK4a和雄激素受体(AR)mRNA及蛋白表达。结果：与衰老心肌细胞相比,1μM、100nM、10nM睾酮可剂量依赖性的降低衰老相关β-半乳糖甘酶染色阳性细胞率及细胞G0/G1期比例(P<0.05)。睾酮干预亦可剂量依赖性的下调p16INK4a mRNA及蛋白表达,这一作用可被雄激素受体阻断剂所阻断(P<0.05)。AR mRNA及蛋白表达与睾酮剂量呈负相关(P<0.05)。结论：1μM、100nM、10nM睾酮可剂量依赖性的抑制小鼠心肌细胞衰老,这一作用部分是由睾酮通过AR降低p16INK4a表达来实现的。     

p16~(INK4A)在宫颈非典型鳞状细胞中的诊断作用

目的探讨p16INK4A免疫细胞化学检测在筛查宫颈非典型鳞状细胞(ASCUS)中的作用。方法对148例宫颈细胞学检查结果为ASCUS的患者进行p16INK4A免疫细胞化学检测,随访组织活检结果,以病理学结果作为金标准。结果 148例ASCUS中,p16INK4A在经病理学确诊的慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和浸润癌的阳性表达率分别为0.9%、77.3%、91.7%、100%、100%。p16INK4A的表达在宫颈炎与CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级之间,宫颈炎与宫颈鳞癌之间阳性率均有显著性差异(P<0.05)。结论 p16INK4A在宫颈CIN及以上病变中高表达,对ASCUS可有效地进行分流监测。     

p16INK4A表达水平差异与子宫内膜病变发生及发展的关系

目的研究抑癌基因p16INK4A在不同程度子宫内膜病变中的表达水平变化,分析这种差异表达与甲基化及病变程度的关系。方法逆转录-聚合酶链法(RT-PCR)检测正常子宫内膜组织、子宫内膜复杂性增生、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌中p16INK4A基因的表达水平,每组均检测30例标本。蛋白免疫印迹法分析各组p16INK4A蛋白水平的表达。甲基化特异性的PCR技术(MSP)对p16INK4ADNA进行甲基化分析。结果随着子宫内膜病变程度的加重,p16INK4A的表达量逐渐降低,子宫内膜癌与其他病变比较,差异有统计学意义(P<0.05);不典型增生与其他病变比较差异均有统计学意义(P<0.05);子宫内膜复杂性增生与正常子宫内膜比较差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白的表达检测也得到相同的结果。MSP进一步分析各组织中p16INK4A的甲基化状态,发现在子宫内膜癌组织中有19例存在不同程度的p16INK4A的甲基化,子宫内膜不典型增生组织中有11例甲基化,子宫内膜复杂性增生组织中有1例甲基化,这些甲基化的组织同时伴有p16INK4A蛋白的表达异常。甲基化与子宫内膜癌手术-病理分期有关(P<0.05)。正常子宫内膜组织中未发现p16INK4A甲基化。结论 p16INK4A作为一种抑癌基因,它的表达缺失或下降在子宫内膜病变的发生及发展过程中起重要作用,表达越低,内膜的病变程度越重,基因甲基化可能是导致这种异常表达的主要原因。     

103例非小细胞肺癌p16INK4a蛋白表达及其临床意义

目的研究p16INK4a蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义.方法应用免疫组织化学S-P方法检测103例NSCLC癌组织标本中p16INK4a蛋白表达,同时以20例肺部炎症病变组织做对照.结果 103例标本中,p16INK4a阳性表达58例,阴性表达45例,表达阴性率为43.69%,其中鳞癌、腺癌、肺泡癌中p16INK4a表达阴性率分别为58.82% (20/34)、39.39% (13/33)、33.33% (12/36),且鳞癌与肺泡癌之间p16INK4a表达阴性率差异有显著意义(P<0.01).临床Ⅲ Ⅳ期病例p16INK4a蛋白表达阴性率为60.71%,明显高于临床Ⅰ Ⅱ期病例(35.14%),差异有显著性意义(P<0.05).结论 p16INK4a蛋白表达异常在肺鳞癌中常见,提示p16INK4a蛋白表达异常在肺鳞癌的发生、发展中起重要作用,它有可能成为预测肺癌患者病程进展的指标之一.     

p27kip1和 p16INK4A 基因在鼻咽癌组织中的甲基化表达及意义

目的探讨 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化在鼻咽癌早期诊断和治疗中的作用.方法采用甲基化特异性PCR 方法对54例鼻咽癌组织(观察组)和20例正常鼻咽上皮组织(对照组)的 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化状态进行检测及对比分析.结果观察组患者 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化检出率分别为62.96%(34/54)和46.30%(25/54),两者同时甲基化19例,总检出率为74.1%(40/54);对照组均未检测到 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化;两组间差异有统计学意义(P<0.01).p27kip1和 p16INK4A 基因启动子甲基化与鼻咽癌患者年龄、性别、T 分期、N 分期、TNM 分期、病理类型等临床特征均无相关性(P >0.05).鼻咽癌患者 p27kip1基因甲基化与 p16INK4A 基因甲基化无明显相关关系(r=0.2507,P >0.05).结论鼻咽癌中 p27kip1基因甲基化可能是其基因表达调节的一种重要方式,p27kip1和 p16INK4A 基因甲基化具有肿瘤特异性,为鼻咽癌早期事件,有望成为早期分子生物学诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点.     

胃癌中p16^INK4α和RB基因甲基化状况及其表达

目的：研究胃癌组织中p16^INK4α和视网膜母细胞瘤易感基因(RB)启动子区域的甲基化状况，并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系。方法：采用甲基化特异性PCR方法对81例胃癌和10例正常胃黏膜中p16^INK4α和RB启动子区域甲基化状况进行检测，并采用免疫组织化学方法对p16^INK4α和视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)表达情况进行相应检测。结果：胃癌中p16^INK4α和RB基因的甲基化率分别为37％(30／81)和42％(34／81)；胃癌p16^INK4α和pRb表达阳性率分别为54％(44／81)和90％(73／81)。10例正常胃黏膜中均未检测到p16^INK4α和RB异常甲基化，而且其相应蛋白表达均为阳性。p16^INK4α甲基化状况与其蛋白表达有相关性，但p16^INK4α甲基化状态与肿瘤分化程度、淋巴结转移、性别及年龄均不相关。RB甲基化状态与pRb表达、肿瘤分化程度、性别及年龄无相关性，但与淋巴结转移相关。结论：p16^INK4α和RB异常甲基化是胃癌细胞常见的分子事件，可能参与了胃癌的发生发展过程。RB异常甲基化与胃癌淋巴结转移相关，提示RB甲基化检测对于分析胃癌淋巴结转移情况可能有一定参考价值。p16^INK4α基因启动子区域高甲基化是其蛋白表达抑制的重要机制。     

P16INK4A基因与宫颈癌

随着分子生物学的发展,人们发现在宫颈癌的发生、发展过程中,有多种癌基因、抑癌基因及相关因子参与。P16INK4A是人们发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因。它的过表达发生在宫颈癌和癌前病变阶段,可作为一种肿瘤标志物用于宫颈癌的临床筛查及诊断中。     

血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化用于非小细胞肺癌早期诊断的研究

目的 探讨血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化用于肺癌早期诊断的临床应用价值.方法 选择32例健康查体者,32例肺部良性疾病患者和32例Ⅰ期(T1N0M0或T2NoM0)非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血清游离DNA做为研究对象,应用甲基化特异PCR(methylation specific PCR,MSP)对上述标本进行p16INK4A基因启动子DNA甲基化检测,判断各组标本启动子的甲基化水平.评价血清游离DNA启动子异常甲基化对于NSCLC早期诊断的价值.结果 健康对照组血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化均呈阴性;肺部良性病变组甲基化阳性率为25.0％ (8/32);NSCLC患者组甲基化阳性率为62.5％ (20/32).3组标本血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化阳性率差别有统计学意义(x2=16.54,P=0.033).以血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化为肺癌诊断标准,其诊断NSCLC的敏感度和特异性分别为59.4％,87.5％.诊断的ROC(receiver operating characteristic)曲线下面积(AUC)为0.86,95％ CI(0.74～0.95).结论 与健康体检者和肺部良性病变患者相比,NSCLC患者血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化水平显著增高,检测血清p16INK4A基因启动子甲基化水平可能为肺癌早期诊断提供一种无创的方法.     

不同剂量睾酮干预心肌细胞衰老中p16~(INK4a)的表达

目的探讨不同剂量睾酮干预小鼠心肌细胞衰老中p16^INK4a的表达。方法用1μmol／L,100nmol／L,10nmol／L3种剂量睾酮干预自然衰老的小鼠心肌细胞,检测各组衰老相关β-半乳糖甘酶染色阳性细胞率,细胞周期分布,p16^INK4a mRNA及蛋白表达。结果与衰老心肌细胞相比,1μmol．／L,100nmol／L,10nmol／L睾酮可剂量依赖性的降低衰老相关β-半乳糖甘酶染色阳性细胞率及细胞G0／G1期比例（P〈0．05）。睾酮干预亦可剂量依赖性地下调p16^INK4a mRNA及蛋白表达。结论1μmol／L,100nmol／L,10nmoL／L睾酮可通过剂量依赖性地减少p16^INK4a的表达,抑制小鼠心肌细胞衰老。     

p16INK4A、NF-κB p65在宫颈鳞癌组织中的表达及临床病理学意义

目的：探讨宫颈鳞癌组织中p16INK4A,NF-κB p65的表达及临床病理学意义。方法：采用免疫组化PV-9000法检测p16INK4A,NF-κB p65在30例宫颈鳞状细胞癌（SCC）、30例宫颈上皮内瘤病变（CIN）和30例慢性宫颈炎（对照组）中的表达。结果：在慢性宫颈炎组织、CIN和宫颈鳞癌中p16INK4A的阳性率分别为26．66％、50．00％及93．33％,其表达差异有统计学意义（P〈0．01）。NF-κB p65的阳性率分别为23．33％、56．66％及86．66％,其表达差异有统计学意义（P〈0．01）。p16INK4A、NF-κB p65在不同临床分期,病理分级及淋巴结是否转移中的阳性表达率差异均无统计学意义（P〉0．05）。p16INK4A表达与是否绝经有关,在绝经组中表达高于未绝经组（P〈0．01）。结论：p16INK4A、NF-κB p65的表达在宫颈癌的发生、发展中起重要作用,p16INK4A和NF-κB p65有可能成为预测宫颈鳞癌发生的生物学检测指标。     

人宫颈癌发生中p16INK4A表达缺陷与其外显子甲基化的关系

目的 研究抑癌基因p16INK4A在宫颈癌发生中的表达变化，分析这种差异表达与甲基化的关系。方法 逆转录聚合酶链技术（RT．P（1R）检测30例宫颈癌组织标本、48例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织（CIN Ⅰ12例、CINⅡ16例、CINⅢ20例）中p16INK4A基因的表达。Western Blot分析P16INK4A蛋白水平的表达。甲基化特异性的PCR技术（MSP）对p16INK4A DNA进行甲基化分析。以每例标本相应正常宫颈组织作为对照。结果 70％（21／30）宫颈癌组织中p16INK4A表达下降或缺失，与正常宫颈组织、CIN Ⅰ和CINⅡ中的p16INK4A表达相比，差异具有统计学意义（P〈0．05），与CIN Ⅲ相比差异无统计学意义（P〉0．05）。蛋白的表达检测也得到相似的结果。MsP检测发现宫颈癌组织中有9例p16INK4A外显子甲基化，甲基化率为30％，其中8例年龄小于40岁，提示甲基化易于出现在年轻患者。而CIN组织中仅CIN Ⅲ发现1例甲基化，说明甲基化随着宫颈病变的发展而增多。分析甲基化与p16INK4A表达的关系，发现42．86％（9／21）的宫颈癌组织中p16INK4A表达下降与甲基化有关，甲基化的宫颈癌组织中p16INK4A表达均下降。结论 p16INK4A作为一种抑癌基因，它的表达缺失或下降在宫颈癌的发生中起重要作用，外显子甲基化是导致其表达缺陷的部分原因。     

宫颈癌中p16^INK4A蛋白表达的意义

目的探讨p16INK4A蛋白与宫颈癌发生发展以及临床病理指标的关系。方法采用免疫组化法检测宫颈鳞癌组织40例,宫颈上皮内瘤变（CIN）30例,宫颈癌旁正常宫颈组织25例中的p16INK4A表达。结果 p16INK4A在宫颈上皮内瘤变中阳性率为86.6%,宫颈鳞癌组织中阳性率均呈100%表达,正常宫颈组织中为阴性。结论 p16基因在宫颈癌组织中缺失和突变导致其表达降低,使p16抑癌功能丧失,造成宫颈上皮细胞异常增殖和分化失控,导致p16INK4A在子宫颈癌上皮组织全层表达。所以,p16INK4A作为一种免疫组织化学标志物应用于宫颈癌及其上皮内瘤变（CIN）的诊断有广阔的应用前景。     

P16INK4a蛋白在宫颈脱落细胞的表达及意义

目的探讨p16INK4A蛋白在宫颈脱落细胞即液基细胞学薄片(liquid-based cytology test,LCT)的表达及其用于宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinomas,SCC)筛查的意义。方法225例宫颈病变患者,其中宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinomas,SCC)56例,高度鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)41例,低度鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)76例,不典型鳞状细胞(atypical squa-mous cell lesions,ASC)32例,正常范围(within normal limits,WNL)20例。采用免疫组化方法,检测p16INK4A的表达。比较P16INK4a联合LCT及单纯LCT的病理诊断符和率。结果单纯LCT的病理诊断符合率为LSIL52.08%,HSIL77.14%,SCC 98.21%;P16INK4a联合LCT的病理诊断符合率为LSIL 68.75%(33/48),HSIL 91.43%(32/35),SCC100%(56/56);差异有显著性(P<0.05)。32例ASC的P16INK4a联合LCT阳性病理诊断符合率为71.43%,与单纯LCT相比,差异有显著性(P<0.05)。结论P16INK4a联合LCT可用于宫颈癌的筛查,尤其对于ASC的确诊,较单纯LCT有更高的病理诊断符合率,可以提高宫颈癌的诊断准确性。     

p16INK4a在子宫颈细胞学分级的临床意义

目的:研究在意义不明的不典型鳞状细胞(Atypical squamous cells of undetermined significance,ASC-US),不能排除高度上皮内瘤变的不典型鳞状细胞(Atypical squamous cells,cannot exclude high-grade squamous intraepithelial lesion,ASC-H),低度鳞状上皮内病变(Low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL),高度鳞状上皮内病变(High-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)中p16INK4a蛋白和HPV16/18的表达水平及意义.方法:应用免疫组织化学技术和原位分子杂交技术,对89例子宫颈细胞涂片样本中p16INK4a蛋白及HPV16/18型DNA进行检测.结果:p16INK4a蛋白阳性率随着子宫颈病变程度的加重而升高,LSIL、HSIL及ASC-H的p16INK4a蛋白阳性率均高于ASC-US(P<0.05);ASC-US和LSIL的p16INK4a阳性表达与HPV16/18阳性表达无差异性;LSIL和ASC-US的HPV16/18阳性表达无差异性.结论:子宫颈细胞涂片样本中p16INK4a蛋白检测能协助子宫颈细胞学诊断分级,尤其对于ASC-US的病例.需同时做p16INK4a免疫组织化学检查,以帮助临床医生选择恰当的处理方式.     

p16~(INK4a)/p14~(ARF)基因在细胞衰老和肿瘤抑制中的作用研究进展

细胞衰老发生后细胞在形态和生化成分都发生改变,进而发生生理性功能障碍,最终进入凋亡和死亡程序。细胞衰老是生命体在细胞水平防止永生化和恶变、预防肿瘤发生的一种机制。细胞衰老由多种原因引起,近年来的研究发现,p16INK4a-pRb(视网膜母细胞瘤抗癌蛋白)和p14ARF-p53这2条途径的活化与细胞衰老的启动和调节过程密切相关,对细胞衰老的信号传导通路及其调节因子等方面的深入研究,可以进一步认识细胞增生、衰老进程,以及防治肿瘤的规律,并为衰老相关疾病的治疗提示研究方向。     

p16~(INK4A)、p14~(ARF)和Ki-67在宫颈癌中的表达特点

目的:研究p16INK4A、p14ARF蛋白和Ki-67在宫颈癌患者中的表达水平,探讨它们之间的相互关系及临床意义。方法:采用免疫组化法对55例宫颈癌标本,40例宫颈上皮内瘤变(CIN)标本和45例正常宫颈标本进行p16INK4A、p14ARF和Ki-67检测。根据细胞核中出现棕褐色染色为阳性细胞的比例分为(-)、(+)、(++)、(+++)。对比各组的阳性表达。结果:随着CIN分期的增高和宫颈癌的发生,p16INK4A、Ki-67的表达有逐渐增高的趋势,宫颈癌患者(-)、(+)、(++)、(+++)的比例与正常宫颈标本比较,差异有统计学意义(P<0.01),CINⅢ期和宫颈癌患者(++)、(+++)的比例与CINⅠ期比较,差异有统计学意义(P<0.01);宫颈癌发生p14ARF的表达有逐渐增高的趋势,但在CIN期(+++)的表达增高不明显,宫颈癌患者p14ARF的表达于正常宫颈标本比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:p16INK4A、p14ARF和Ki-67与宫颈癌的形成及进展密切相关。     

p16^INK4a基因与子宫颈癌及其癌前病变关系的研究进展

随着分子生物学技术的飞速发展,人们越来越认识到抑癌基因在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。p16^INK4a是人们发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因。它在宫颈癌和癌前病变阶段表现为过表达,可作为一种肿瘤标志物用于宫颈癌及癌前病变的临床筛查及诊断中。