应用荧光PCR技术检测6500例患者血清HBV DNA的实验研究

目的　揭示血清乙肝病毒标志物 (HBVM)与血清HBVDNA含量相关性。方法　采用ELISA法对血清、HB VM进行检测 ;对HBVM阳性 6 5 0 0例患者血清采用荧光PCR法定量检测HBVDNA。结果　在HBVM阳性的 6 5 0 0例血清中 ,有 3982例占 6 1 3% ,HBVM标志物阳性者血清均有HBVDNA阳性。血清HBsAg、HBeAg、抗 HBc阳性者HBVDNA阳性率占 96 9% ,大于 10 6copies/ml者占 72 1% ,HBsAg、抗 HBe、抗 HBc阳性者HBVDNA阳性率占 2 1 9% ,HBVDNA定量大于 10 3 copies/ml,且小于等于 10 4copies/ml者占 78 1%。结论　血清HBVM阳性患者中约 6 0 %的血清HBVDNA阳性 ,且HBeAg阳性中HBVDNA阳性率及血清HBVDNA均明显高于抗 HBe阳性者。在抗 HBs、抗 HBc阳性者血清内也有HBVDNA阳性者 ,采用荧光PCR定量检测HBVDNA技术先进结果准确。     

荧光定量PCR法与ELISA法检测乙肝病毒感染相关性的研究

目的　采用荧光定量PCR法与ELISA法检测乙肝病毒标志物 ,探讨两种检测方法的相关性。方法　对 95 2份深圳服务行业从业人员体检乙肝表面抗原阳性的血清 ,应用HBV荧光定量PCR法和ELISA法检测并对结果进行分析。结果　荧光定量PCR检测不同乙肝标志物分组阳性率存在一定的差异 ;E抗原阳性的HBVDNA阳性对数均值为 6 . 4 9± 1 .2 9,表面抗原阳性而E抗原阴性的HBVDNA阳性对数均值为 4. 4 6± 1. 2 9,两者间差异具有显著性 (P <0 . 0 1) ,而不同性别和籍贯间无明显差异。结论　两种方法检测乙肝标志物有密切的相关性 ;对从业人员用ELISA法检测乙肝表面抗原阳性者应进一步进行荧光定量PCR检测。     

二种分子杂交技术定量检测临床标本中HBV DNA的比较

目的　第 2代核酸杂交捕获系统 (HCⅡ )与分枝链DNA信号放大系统 (bDNA)定量检测HBVDNA的临床应用比较。方法　 4 0例乙型肝炎病毒表面抗原阳性的慢性乙型肝炎患者临床血清标本共 79份 ,采用 2种杂交方法定量检测HBVDNA。结果　HCⅡ与bDNA定量检测HBVDNA的阴阳性符合率为 85 .9% ,相关系数r =0 .96 ,P <0 .0 0 1;经敏感性比较 ,HCⅡ灵敏度较bDNA提高 10 1拷贝 /ml～ 10 2 拷贝 /ml。HCⅡ与bDNA定量检测HBVDNA结果的换算方程为 :HCⅡ (HBVDNA拷贝 /ml) =1.0 14×〔bDNA (HBVDNAEq/ml)〕0 .963 2 ;或bDNA (HBVDNAEq/ml) =4 .0 34×〔HCⅡ (HBVDNA拷贝 /ml)〕0 .9574。在操作上HCⅡ比bDNA更为简便、快速。结论　HCⅡ与bDNA法检测HBVDNA具有较好的相关性 ,可用于临床HBVDNA水平的定量检测、监控及抗病毒药物的筛选、考核。     

实时定量检测乙肝患者HBV DNA及其与抗原抗体模式的关系

目的　探讨乙肝患者血清HBVDNA定量检测的临床意义及与乙肝抗原抗体模式的关系。方法　用Light CyclerTM对 315例乙肝初诊患者进行HBVDNA定量检测 ,同时定量测定乙肝表面抗原、表面抗体 ,e抗原、e抗体和核心抗体等指标 ,观察患者血清中乙肝病毒基因组含量与抗原抗体表型组合的关系。结果　在 16 9例患者血清中检测出HBVDNA ,病毒基因组拷贝值范围为 3 77× 10 2 ～ 3 12× 10 8copies ml,平均拷贝值为 3 6 7× 10 6 copies ml,阳性检出率为 5 3 6 % ;在大多数e抗原阳性的患者血清中均能检测到较高拷贝水平的病毒基因组含量 ;而在e抗原阴性患者中仍有 35 4 %可检测出HBVDNA。结论　LightCyclerTM是测定乙肝病人血清中HBVDNA含量较精确的方法之一 ,能够正确反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度 ;乙肝特异性血清学检测结合HBVDNA定量检测分别从蛋白水平和DNA水平反映患者体内病毒的存在状态及机体的反应性 ,对临床诊断、估计病情及用药方案的选择有重要的指导意义。     

聚合酶链反应荧光偏振技术在乙型肝炎病毒DNA检测中的应用及价值

目的　探讨聚合酶链反应荧光偏振技术 (PCR FP)检测乙型肝炎病毒 (HBV)DNA的临床应用价值。方法　将PCR扩增得到的HBVDNA特定片段 ,与荧光素标记探针和PCR产物中的一条DNA链杂交 ,形成特异杂交体 ,用荧光偏振光检测仪检测特异杂交体 ,最终判断HBVDNA是否存在。并对对 10 2份乙型肝炎患者和 30份非乙型肝炎患者血清进行检测结果比较。结果　PCR FP检测HBVDNA的最低检测限为 1× 10 1拷贝 ,在 4 0份乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)、乙型肝炎e抗体 (HBeAg)和抗乙型肝炎核心抗原 (抗HBc)均阳性患者血清标本中检出HBVDNA阳性率为 10 0 % ;33份HBsAg、抗乙型肝炎e抗体 (抗Hbe)和抗HBc均阳性患者血清HBVDNA阳性率为 81 8% ;2 9份HBsAg和抗HBc阳性患者血清HBVDNA阳性率为 72 4 % ;14份乙型肝炎患者和 30份非乙型肝炎患者血清均为阴性。方法的灵敏性和特异性分别为 86 %和 10 0 %。结论　PCR FP操作简单、灵敏、特异 ,适用于临床HBV基因检测。     

实时荧光定量PCR快速检测脑膜炎奈瑟菌的临床价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)快速检测流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)病原菌脑膜炎奈瑟菌(Nm)的临床价值。方法收集70例疑似流脑病例的双份脑脊液标本,1份采用细菌培养法进行检测,另1份采用实时荧光定量PCR进行检测,比较2种方法的检出阳性率以及敏感性和特异性。结果采用细菌培养法检出Nm阳性49例,阳性率为70.00%;实时荧光定量PCR检出Nm阳性67例,阳性率为95.71%,二者阳性率比较差异有统计学意义(P0.05)。实时荧光定量PCR检测结果与细菌培养法阳性符合率为70.00%,其中有18例细菌培养法为阴性而实时荧光定量PCR为阳性。实时荧光定量PCR检测Nm的特异性为100%,无假阴性结果,阳性预测值为73.13%,阴性预测值为0.00%,检测下限为103拷贝/m L,线性范围为2×103~2×107拷贝/m L。结论实时荧光定量PCR检测Nm敏感性高、特异性强,且快速简便,为流脑流行病学调查提供了一种快速、简便的病原学诊断手段。     

微板杂交乙肝DNA定量及其临床意义探讨

目的应用微板杂交定量检测乙肝DNA及其临床意义。方法应用微板杂交-核酸定量检测技术和血清ELISA法同时检测218例乙肝和32例对照组血清,以探讨乙肝血清标志物与乙肝DNA含量的关系。结果采用PCR技术对47例乙肝“大三阳”的血清检出结果发现,HBVDNA的检出率最高,阳性率95.5%,定量检测结果均值达61.5±21.2fg/ml,80例乙肝小三阳患者血清中的47例检出HB-VDNA,检出率达58.8%,定量检测结果均值18.1±12.8fg/ml;结论微板杂交-核酸定量检测技术可以直接检测到fg水平的HBVDNA可为临床提供HBV感染、复制及传染性判断实验室数据并指导治疗。     

微板杂交乙肝DNA定量及其临床意义探讨

目的应用微板杂交定量检测乙肝DNA及其临床意义.方法应用微板杂交-核酸定量检测技术和血清ELISA法同时检测218例乙肝和32例对照组血清,以探讨乙肝血清标志物与乙肝DNA含量的关系.结果采用PCR技术对47例乙肝"大三阳"的血清检出结果发现,HBVDNA的检出率最高,阳性率95.5%,定量检测结果均值达61.5±21.2fg/ml,80例乙肝小三阳患者血清中的47例检出HB-VDNA,检出率达58.8%,定量检测结果均值18.1±12.8fg/ml;结论微板杂交-核酸定量检测技术可以直接检测到fg水平的HBVDNA可为临床提供HBV感染、复制及传染性判断实验室数据并指导治疗.     

荧光定量PCR法检测HBV DNA同血清标志物关系的探讨

目的　探讨荧光定量PCR法 (FQ PCR)检测HBVDNA同血清标志物的关系。方法　将FQ PCR法检测HBVDNA的标本用ELISA法重新测定HBV血清标志物前S1抗原 (PreS1 )及乙型肝炎病毒标志物。结果 1 86份HBVDNA阳性标本中 ,HBsAg阳性率 98.92 % ,抗 HBc阳性率 94 .0 9 % ,有 2例HBsAg阴性 ,其中 1例为抗 HBc单独阳性。PreS1阳性率为 6 1 .83% ,HBeAg阳性率为6 6 .6 7% ,后二者同时检出率 4 2 .4 7% ,联合检出率 86 .0 2 % ,PreS1和HBeAg阳性率无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;HBVDNA阴性而HBsAg阳性标本 1 1 4例 ,抗 HBc阳性率为 96 .4 9% ,PreS1阳性率为 2 2 .81 % ,HBeAg阳性率为 5 .2 6 % ,后二者同时检出率 3.5 1 % ,PreS1和HBeAg阳性率差异非常显著 (P<0 .0 0 1 ) ;HBV低水平和高水平复制标本PreS1和HBeAg检出率无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;HBVDNA阳性标本中 ,对于PreS1和HBeAg而言 ,PreS1单独阳性者HBVDNA对数值为 6 .6 5 4± 2 .2 0 3(x±s) ,HBeAg单独阳性者为 6 .892± 1 .5 79,同时阳性者 6 .70 6± 1 .6 4 3,均阴者为6 .32 1± 1 .76 3,四组间无显著性差异。结论　血清PreS1和HBeAg与HBVDNA关系密切 ,可作为HBV复制的标志物 ,尤其二者联合检测效果更好 ,但以HBeAg特异性较高。二者存在状态与HBV复制程度关系不     

乙肝五项指标与荧光定量PCR检测血清HBV-DNA含量联合运用

目的 用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术定量检测血清中乙型肝炎病毒含量,并探讨其与乙肝五项(乙型肝炎病毒标志物)之间的关系.方法 现有450例血清标本,采用FQ-PCR检测(HBV-DNA)含量,再用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其乙肝五项,进行相关性分析.结果 450例血清标本中,156例HBsAg (+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)的标本,HBV-DNA的阳性为148例,阳性率为94.9％(148/156),平均病毒量为4.51×107拷贝/ml,75例HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)的标本,48例HBV-DNA阳性,阳性率为64％(48/75),平均病毒量为2.42×105拷贝/ml.12例HBsAg(+)/HBcAb(+)的标本,HBV-DNA阳性为7例,阳性率为58.0％(7/12),平均病毒量为4.26× 104拷贝/ml;20例HBsAb(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)的标本,HBV-DNA阳性为1例,阳性率为5％(1/20),平均病毒量为6.34× 103拷贝/ml;98例HBcAb(+)的标本,HBV-DNA阳性为1例,阳性率为5％(1/20),阳性率为1.2％(1/98),病毒含量为1.35×103拷贝/ml,89例乙肝五项全阴的标本,HBV-DNA阳性为1例,阳性率为1.1％(1/89),病毒含量为8.37×103拷贝/ml,测定结果表明,HBV-DNA的阳性率及平均病毒量在乙肝五项不同组合有明显差异.结论 应用FQ-PCR定量检测HBV-DNA能准确地反映体内的HBV真实感染和复制情况.