血管内皮生长因子预防血管成形术后再狭窄的机制研究

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)预防血管成形术后再狭窄的机制.方法:用高脂饲养建立实验性动脉粥样硬化家兔模型,将VEGF作用于正常健康兔和动脉粥样硬化家兔主动脉血管内皮细胞(VEC).采用亚硝酸还原法测一氧化氮(NO),放免法测内皮素(ET)、6-酮-前列腺素1α( 6-keto-PGF1α),采用发色底物显色法测定血浆纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)活性.并用WST-1比色法观察VEGF对上述VEC增殖的影响.结果:与空白对照组(VEGF 0 μg/L)比较, 10 μg/L、20 μg/L VEGF处理组NO、6-keto-PGF1α、PAI均明显增加,而ET、t-PA、t-PA/PAI均明显降低,并呈剂量依赖性.与正常健康兔VEC(正常VEC)比较,动脉粥样硬化家兔VEC(异常VEC)分泌ET、PAI、t-PA均明显增加,而NO、6-keto-PGF1α、t-PA/PAI均明显降低.结论:动脉粥样硬化家兔伴有内皮功能异常,而VEGF能促进正常和异常VEC的增殖并分泌NO、PGI2、PAI,而抑制ET、t-PA的分泌,使t-PA/PAI降低.     

沙立度胺抑制缺氧所致胃肠道血管发育不良的机制初探

目的 探讨沙立度胺抗血管生成的作用机制.方法 收集胃肠道血管发育不良患者手术切除的肠段标本,免疫组化检测病变肠段的血管内皮生长因子(VEGF)表达.体外缺氧条件下培养人脐静脉内皮细胞至对数生长期,随机分为6组,同步化后用不同浓度沙立度胺(40、60、80、100μ/ml)刺激72 h.ELISA和实时定量PCR法测定VEGF的表达,Western blot法测定低氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达.结果 免疫组化结果显示,病变肠段血管扩张、扭曲,VEGF的表达明显增强.ELISA检测表明,缺氧培养条件下细胞上清中VEGF蛋白表达水平明显高于常氧状态[(1199.3±61.4)ng/L比(864.7±41.2)ng/L,P<0.05];沙立度胺可有效抑制缺氧条件下人脐静脉内皮细胞的VEGF蛋白表达.实时定量PCR结果亦提示沙立度胺能明显抑制缺氧状态下VEGF mRNA的表达(P<0.05).Western blot结果表明,沙立度胺可抑制缺氧状态下VEGF的上游调节因子HIF-1α的表达,且这一抑制作用呈剂量相关性.结论 初步体外研究表明,沙立度胺通过抑制缺氧条件下人脐静脉内皮细胞HIF-1α及VEGF的表达,从而抑制血管生成,是其有效治疗血管发育不良所致消化道出血的可能机制之一.     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达的影响

目的研究糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉山皮细胞血管内皮生长凼子（VEGF）mRNA及蛋白表达的影响，探讨AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株ECV304用BSA及小同浓度的AGEs孵育24h及400mg／L的AGEs孵育0、12、24及36h，采用原位杂交及Westem blot方法检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果人脐静脉内皮细胞在100、200及400mg／LAGEs孵育24h后，VEGFmRNA及蛋白表达均显著高于BSA对照组（P〈0．05），在用400mg／LAGEs分别孵育12．24及36h后，各组内皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达量也明显高于0h对照组（P〈O．05）。结论AGEs可增加人脐静脉内皮细胞VEGF mRNA及蛋白的表达，且与浓度和时间呈正相关。     

银杏内酯B减轻血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的作用

目的:探讨银杏内酯B(GB)减轻缺氧/复氧(H/R)所致血管内皮细胞损伤的作用和机制。方法: 将体外培养的人脐静脉内皮细胞分为5个组,即空白对照组（不加任何处理）、GB组（100 μmol/L）、H/R组（缺氧2 h/复氧24 h）、GB+H/R组及GB+H/R+ N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME,NOS抑制剂）组。用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）比色法测定内皮细胞的存活率(%)。用乳酸脱氢酶（LDH）测试盒和一氧化氮（NO）测试盒分别检测细胞培养上清液中LDH和NO的含量。用Western blot法检测培养的人脐静脉内皮细胞中内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）表达的水平。结果: MTT比色法的结果显示,H/R可显著降低内皮细胞的存活率(%),增加LDH的含量,降低NO的生成量（与空白对照组比较,P<0.01）;而GB则可逆转上述效应,但GB的作用又可被L-NAME所抑制（与GB+H/R组比较,P<0.01）。GB可以显著提高H/R作用后血管内皮细胞中eNOS表达的水平（与H/R组比较,P<0.01）,但是该效应不被L-NAME阻断。结论: GB可显著减轻H/R对内皮细胞的损伤,其作用是通过eNOS-NO途径实现的。     

脑源性神经营养因子经NO/PKG/Sestrin2通路提高内皮细胞血管生成能力

目的研究脑源性神经营养因子(BDNF)对内皮细胞Sestrin2表达的影响及机制,并探讨其在血管新生中的作用。方法用100μg/L的BDNF分别处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)1 h、2 h、4 h、6 h、8 h,实时荧光定量PCR检测Sestrin2 mRNA水平,免疫荧光和Western blot检测Sestrin2蛋白表达。将HUVEC分为6组:对照组(Control组)、BDNF组(加BDNF 100μg/L)、BDNF+TrkB-Fc(1 mg/L)组、BDNF+KT-5823(500 nmol/L)组、BDNF+L-NAME(10~(-4) mol/L)组、BDNF+DMSO组,共干预4 h, Western blot检测Sestrin2蛋白表达。将HUVEC分为4组:对照组(Control组)、BDNF组(加BDNF 100μg/L)、BDNF+Sestrin2 siRNA组和BDNF+Control siRNA组,共干预6 h,细胞迁移实验和小管成形实验分别检测HUVEC迁移能力和血管生成能力。结果与0 h和1 h组比较,100μg/L BDNF分别干预HUVEC 2、4及6 h时段,Sestrin2 mRNA水平显著增高(P0.001),在2、4及8 h时段Sestrin2蛋白表达显著增高(P0.05);阻断NO/PKG通路可抑制BDNF诱导的Sestrin2表达上调(P0.001);抑制Sestrin2表达后,HUVEC迁移及小管形成能力较BDNF干预组显著降低(P0.01)。结论 BDNF通过NO/PKG通路促进内皮细胞表达Sestrin2,从而提高内皮细胞血管生成能力。     

蜈蚣对动脉粥样硬化家兔血管内皮细胞生长因子的影响

目的：从内皮细胞功能角度探讨中药蜈蚣对动脉粥样硬化（AS）家兔一氧化氮（NO）、内皮素（ET）以及血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法：采用高脂饲喂家兔，建立动脉粥样硬化模型。随机分为4组，每组8只，造模过程中预防性给予蜈蚣治疗。（1）对照组：基础饲料＋5mg/kg蒸馏水灌胃；（2）模型组：高脂饲料＋5mg/kg蒸馏水灌胃；（3）蜈蚣小剂量组：高脂饲料＋蜈蚣水提物2．5g/kg灌胃；（4）蜈蚣大剂量组：高脂饲料＋蜈蚣水提物5g/kg灌胃。4组均饲喂12周。观察血清NO、ET的变化，采用流式细胞术及免疫荧光技术检测VEGF的表达量，并观察其主动脉血管病理。结果：模型组VEGF的表达量升高，经5g/kg蜈蚣治疗后，VEGF的表达量明显下调，NO释放增加，ET分泌减少，与模型组比较有统计学意义（P＜0．01）。而2．5g/kg蜈蚣对VEGF的影响无明显变化，表明蜈蚣对AS血管内皮细胞生长因子的影响存在一定的量效关系。结论：蜈蚣可通过调节NO／ET的平衡，从而抑制VEGF的表达，提示蜈蚣具有保护血管内皮细胞，防治内皮细胞增生的作用，揭示了中医血瘀证存在的微观物质基础，为中药蜈蚣抗动脉粥样硬化的临床应用提供了理论依据。     

胰岛素对牛胸主动脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响及其与一氧化氮合酶的关系

目的:评价胰岛素对内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及其与一氧化氮合酶(NOS)的关系。方法:取新生的小牛胸主动脉,作血管内皮细胞原代及传代培养,取4~6代培养细胞用于实验;应用不同浓度的胰岛素(30、300、3000mU/L)和NOS抑制剂——L-NAME干预培养过程,48h后取内皮细胞应用免疫组化法测定VEGF和一氧化氮合酶3(NOS3)的表达水平。结果:低浓度胰岛素(30、300mU/L)组内皮细胞VEGF和NOS3表达明显高于高浓度(3000mU/L)组(均P<0.01);胰岛素加L-NAME组VEGF和NOS3表达明显低于单纯胰岛素组(均P<0.05)。结论:低浓度胰岛素促进内皮细胞VEGF表达,高浓度胰岛素可抑制内皮细胞VEGF表达,其机制可能是不同浓度胰岛素促进或抑制NOS3的活性。     

血管内皮生长因子和内皮素在低氧性肺血管重建中的作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和内皮素(ET)-1在低氧性肺动脉高压(HPH)及其肺血管重建中的作用,并观察钾通道开放剂(pinacidil)对HPH的防治作用及对VEGF和ET-1的影响.方法Wister大鼠46只,随机分为3组,对照组15只,低氧组16只,治疗组15只.缺氧组和治疗组大鼠缺氧[氧浓度为(10.0±0.5)%]4周,每天缺氧8h,其中治疗组大鼠于每天缺氧前腹腔注射pinacidil3mg/kg.缺氧4周后测定各组大鼠血清VEGF和血浆ET-1水平、平均肺动脉压(mPAP)、右心室(RV)/[左心室(LV)+室间隔(S)]比值及肺小动脉病理及其形态计量学.结果(1)缺氧组大鼠血清VEGF[(118.73±55.40)ng/L]和血浆ET-1[(221.2±56.2)ng/L]水平明显高于对照组(P＜0.01);缺氧组较对照组mPAP升高,RV/(LV+S)比值增高,肺小动脉血管壁显著增厚,管腔明显狭窄.(2)治疗组大鼠血清VEGF[(78.20±16.45)ng/L]和血浆ET-1[(181.6±30.5)ng/L]水平明显低于缺氧组(P＜0.01);治疗组较缺氧组mPAP下降(P＜0.01),肺小动脉血管壁增厚、管腔狭窄等明显减轻,但治疗组上述各指标仍未完全恢复到对照组水平.结论VEGF和ET-1在HPH及其肺血管重建中发挥重要作用,钾通道开放剂对HPH及其肺血管重建具有一定的逆转作用.     

沙格列汀改善过氧化氢诱导损伤的血管内皮细胞一氧化氮和内皮素-1分泌异常的观察

目的 观察二肽基肽酶-4 （DPP-4）抑制剂沙格列汀对过氧化氢（H2O2）诱导损伤的血管内皮细胞分泌一氧化氮（NO）及内皮素1（ET-1）的影响. 方法 以培养人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入100 μmol/L H2O2制备细胞损伤模型,以不同浓度沙格列汀（5、10、20、40 μmol/L）进行干预,观察不同培养时间（0、12、24、36 h）各浓度组的差异.分别采用硝酸还原酶法和放射免疫法检测细胞上清液中NO及ET 1含量. 结果 H2O2作用HUVEC后,细胞上清NO含量降低,而ET-1含量升高（P＜0.05）.各浓度沙格列汀组NO含量均高于模型组（100 μmol/L H2O2）,而ET-1含量降低,这种作用在一定剂量范围内随药物剂量增加而增强,在一定时间范围内随时间增加而增强（P＜0.05）. 结论 沙格列汀可改善H2O2引起血管内皮细胞NO、ET-1分泌异常.     

沙利度胺对人脐静脉内皮细胞增殖和血管生成的影响

目的 探讨沙利度胺治疗血管发育不良所致消化道出血的机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞至对数生长期,分为空白对照组、溶剂对照组(二甲基亚砜)和不同浓度(10、20、40、60、80、100μg/ml)沙利度胺组,根据加或不加成纤维细胞生长因子(bFGF,10 ng/ml),共分为16组.刺激72 h后,MTT法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附法和实时定量PCR法测定血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达.结果 加或不加bFGF刺激,中、高浓度(≥40/μg/ml)沙利度胺均能抑制人脐静脉内皮细胞增殖.未加bFGF刺激时.20μg/ml沙利度胺能明显抑制VEGF表达.加bFGF刺激时,10 μg/ml沙利度胺即能明显抑制VEGF表达.未检出TNF-α表达.结论 体外实验中,沙利度胺能抑制人脐静脉内皮细胞增殖和VEGF表达,从而抑制血管生成,达到治疗血管发育不良所致消化道出血的目的 .     

Effects of Estrogen Level on the Function of Vascular Endothelial Cells and Expression of Vascular Cell Adhesion Molecule-1(?)

Objectives To ob-serve the effect of different estrogen levels on the secretory function of vascular endothelial cells of female rats, and study the effect of modulation of estrogen level on the expression of vascular cell adhesion molecule - 1 and the concentration of estrogen receptor in vascular endothelial cells. Methods Radioim-munology was used to measure the serum concentration of endothelin and PGI2, and copper - cadmium reduction was employed to measure the serum content of nitrogen monoxide. Radioligand binding and flowcy-tometry were used to measure the expression of estrogen receptor and vascular cell adhesion molecule (VCAM - 1) of vascular endothelial cells respectively. Results 1. The serum concentration of nitric oxide and PGI2 decreased when the ovaries of female rats were removed. In ovariectomized rats, given estrogen, the concentration rose ( P < 0. 05), but the plasma concentration of endothelin was adverse to it. 2. The concentration of estrogen receptor of vascular endothelial cel     

颌面部血管瘤VEGF及其受体的表达及意义

为探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR／KDR）在颌面部血管瘤发生、发展中的作用，采用二步En Vision免疫组织化学方法，分别检测11例血管瘤（HA）和8例血管畸形（VM）组织中VEGF和VEGFR／KDR的表达；同时采用原位杂交Gene Point法检测VEGF mRNA的表达。结果显示，VEGF和VEGFR／KDR在HA中高表达，而在VM中低表达，两者差异有显著性（P＜0.01）；VEGF和VEGF mRNA在血管瘤细胞及周围间质细胞明显表达，VEGF／KDR主要表达于HA中内皮细胞膜上。提示VEGF可通过自分泌和旁分泌的形式影响HA内皮细胞的增殖，可能与HA发生、发展和退化密切相关。     

VEGF-A及其受体在多种恶性血液病中的研究进展

血管内皮生长因子A(VEGF-A)是一种具有血管通透性的糖蛋白,属血管内皮生长因子家族中的一员,通过与靶器官相应的受体结合发生二聚体化和自身磷酸化发挥作用。VEGF-A可协同其它细胞因子促使内皮细胞的生长、增殖、迁移,导致大量新生血管的形成,为白血病细胞对淋巴网状组织的侵袭提供了充足的养分,不仅起到抑制树突细胞成熟的作用,还可以触发破骨溶骨活动及诱发破骨细胞的趋化现象,使内皮细胞和残留的基质细胞产生趋化作用。因此,在各种恶性血液病中,VEGF-A及其受体表达的高低与疾病的发生、发展、预后有着密切的联系。本文就VEGF-A及其受体与各种血液系统恶性肿瘤的相关研究进展作一综述。     

高频超声检测脑梗死与短暂性脑缺血发作患者血管内皮功能的探讨

目的:研究脑梗死、短暂性脑缺血发作(TIA)患者颈动脉内-中膜厚度、血管弹性与肱动脉血管内皮功能.方法:研究对象分为3组:脑梗死患者、TIA患者、正常同龄人,每组各30例.用高频超声测量颈动脉内-中膜厚度、收缩期颈动脉内径(DS)、舒张期颈动脉内径(DD),计算颈总动脉壁弹性的相关参数:可扩张度(DC)、顺应性(CC)...     

Elevation of vascular endothelial growth factor production and its effect on revascularization and function of graft islets in diabetic rats

AIM: To determine whether the elevated vascular endothelial growth factor (VEGF) expression produced by the transfected vascular endothelial cells (VECs) could stimulate angiogenesis of the graft islets and exert its effect on the graft function. METHODS: Thirty diabetic recipient rats were divided into three groups (n=10 per group). In the control group, 300 IEQ islets were transplanted in each rat under the capsule of the right kidney, which were considered as marginal grafts. In the VEC group, VEC together with the islets were transplanted in each rat. In the VEGF group, VEC transfected by pIRES2-EGFP/VEGF165 plasmid and the islets were transplanted in each rat. Blood glucose and insulin levels were evaluated every other day after operation. Intravenous glucose tolerance test (IVGTT) was performed 10 d after the transplantation. Hematoxylin and eosin (HE) staining was used to evaluate the histological features of the graft islets. Immunohistochemical staining was used to detect insulin-6, VEGF and CD34 (MVD) expression in the graft islets. RESULTS: Blood glucose and insulin levels in the VEGF group restored to normal 3 d after transplantation. In contrast, diabetic rats receiving the same islets with or without normal VECs displayed moderate hyperglycemia and insulin, without a significant difference between these two groups. IVGTT showed that both the amplitude of blood glucose induction and the kinetics of blood glucose in the VEGF group restored to normal after transplantation. H&E and immunohistochemical staining showed the presence of a large amount of graft islets under the capsule of the kidney, which were positively stained with insulin-6 and VEGF antibodies in the VEGF group. In the cell masses, CD34-stained VECs were observed. The similar masses were also seen in the other two groups, but with a fewer positive cells stained with insulin-6 and CD34 antibodies. No VEGF-positive cells appeared in these groups. Microvessel density (MVD) was significantly higher in the VEGF group compared to the other two groups. CONCLUSION: Elevated VEGF production by transfected vascular endothelial cells in the site of islet transplantation stimulates angiogenesis of the islet grafts. The accelerated islet revascularization in early stage could improve the outcome of islet transplantation, and enhance the graft survival.     

Overexpression of vascular endothelial growth factor in restenoticabdominal aorta of rabbits

INTRODUCTIONVascularendothelialgrowthfactor（VEGF），alsoknownasvascularpermeabilityfactor（VPF）orvasculotropin（VAS），isa３４to４６kDahep－arin－bindingsecretedgrowthfactorthatisangiogenicinvitroandinvivo，andhasauniquetargetcellspecificityforvasculare     

VEGF/VEGFR2信号转导通路在抗肿瘤血管生成中的作用

以肿瘤血管内皮细胞为靶点抑制肿瘤血管生成从而阻断肿瘤血液供应已成为当前抗肿瘤生长和转移的研究热点.其中,VEGF/VEGFR2信号转导通路在肿瘤周围血管生成起主要作用.阻断该信号通路,能够抑制实体瘤的生长和转移.本文就VEGF/VEGFR2信号通路在抗肿瘤生长和转移中的研究进展作一概述.     

血管内皮生长因子抑制同型半胱氨酸所致血管内皮细胞生长停滞的研究

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)对同型半胱氨酸所致血管内皮细胞生长停滞的作用及其分子机制。方法:用[3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法测定细胞DNA合成率,基因表达测定采用RT-PCR。结果:①同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞生长停滞、CHOP基因表达升高。VEGF能显著地抑制同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞生长停滞,但不影响CHOP表达;②VEGF诱导核糖体蛋白RPS3a表达升高;③瞬时转染RPS3a基因抑制诱导血管内皮细胞生长停滞;④PI3K抑制剂wortmannin显著拮抗VEGF的作用,MEK抑制剂PD98059没有影响。结论:VEGF可通过PI3K信号途径上调RPS3a表达,抑制同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞生长停滞,提示VEGF是一个潜在的抑制同型半胱氨酸所致动脉粥样硬化的药物。     

人脑胶质瘤中血管内皮细胞生长因子表达及其与细胞增殖的关系

为探讨人脑胶质瘤组织中血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达及其与细胞增殖的关系 ,应用链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化物酶连接法 (SABC)免疫组织化学技术检测了 6 7例人脑胶质瘤、8例正常脑组织中 VEGF表达及增殖细胞核抗原 (PCNA)标记指数 (PCNA L I)。结果 VEGF在人脑胶质瘤组织中的阳性表达率为 83.6 %,正常脑组织中无表达 (P<0 .0 0 5 ) ;肿瘤组织中 VEGF表达与 PCNA L I呈显著正相关 (P<0 .0 0 5 )。认为胶质瘤细胞能分泌 VEGF,VEGF表达在肿瘤细胞增殖中起重要作用。