单向交变拉伸应变及压应力对大鼠成骨细胞FOS蛋白表达及细胞定位的影响

分别对体外培养的大鼠成骨细胞施加单向交变拉伸应变和2atm的压力。利用免疫细胞化学技术，检测成骨细胞c—fos基因的表达。结果表明：施加两种不同的载荷后，成骨细胞c—fos基因表达FOS蛋白显著增加，FOS蛋白多集中在细胞核中，提示应力、应变在提高成骨细胞的增殖能力方面起着十分重要的作用。     

成人骨髓间质干细胞定向诱导为神经元样细胞的研究

目的：体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法：采用Ficoll-Paque液（1.077×10³ g/L）离心分离成人MSC,体外扩增,分别采用含巯基乙醇和硫代甘油等试剂的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果：成人骨髓间质干细胞在体外扩增5代可获5×10⁷个细胞。加入巯基乙醇等或硫代甘油等诱导剂诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF表达阳性,GFAP阴性。结论：成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为神经元样细胞。     

RPMI-1640和DMEM培养基中肝癌细胞系BEL-7402与HepG-2的生长状态比较

背景：DMEM和RPMI-1640是两种最常用的商品化培养基,二者对肝癌细胞生长的影响尚未见直接的对比研究。 目的：比较两种常用培养基对人肝癌BEL-7402与HepG-2细胞系体外生长和增殖效果的影响,从中选择更适合的培养基。 方法：分别应用高糖DMEM与RPMI-1640完全培养液培养BEL-7402和HepG-2细胞,于培养的0,24,48,72,96,  120 h用酸性磷酸酶检测法测定细胞生长和增殖速率,并于倒置显微镜下观察细胞的形态。 结果与结论：结果发现BEL-7402和HepG-2细胞在RPMI-1640培养基中的生长增殖速率均明显高于DMEM培养基 (P < 0.01)。镜下观察证实细胞在RPMI-1640培养基中的黏附和伸展状态更好。因此,建议首选RPMI-1640培养基进行肿瘤细胞体外培养。     

丹参酮ⅡA定向诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:丹参酮ⅡA体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法:采用Ficoll-Paque液离心和贴壁法分离成人MSC,体外扩增,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达,FGF-2对MSC增殖和分化的影响。采用含丹参酮ⅡA的无血清达乐伯克改良必需基本培养基(DMEM)诱导MSC分化为神经元样细胞,免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(nestin)的表达。结果:成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×10⁶,15代可获得(2-3)×10¹²个细胞,流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。FGF-2促进hMSC生长,并且对MSC的分化能力基本没有影响。丹参酮ⅡA诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M、nestin表达阳性,GFAP阴性。结论:丹参酮ⅡA可以在体外诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。     

阿托伐他汀抑制THP-1经PMA诱导后变成巨噬细胞ATP结合盒转运子A1 mRNA和蛋白的表达

目的探讨阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)mRNA和蛋白及LXRαmRNA表达的影响。方法体外培养的人THP-1单核细胞,经氟波酯(PMA)诱导48 h,使形成巨噬细胞,将分化良好的巨噬细胞分别加入含不同浓度或不含阿托伐他汀的无血清RPMI 1640培养基,培养24 h或48 h,收集细胞。用多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法检测THP-1巨噬细胞ABCA1 mRNA和蛋白及LXRαmRNA的表达。结果含阿托伐他汀(10μmol/L)的培养基体外培养人THP-1巨噬细胞24 h,ABCA1(相对表达量IA值1.21,对照组1.48)和LXRαmRNA(A值0.87,对照组1.12)表达比对照组明显减少(P<0.05),延长培养时间,ABCA1和LXRαmRNA表达有进一步减少趋势。结论阿托伐他汀抑制体外培养的人THP-1巨噬细胞ABCA1 mRNA和蛋白及LXRαmRNA的表达。     

CD2相关蛋白在肾脏细胞中的分布及其在足细胞中的作用

目的 观察CD2相关蛋白(cD2AP)在肾脏不同细胞系中的表达分布,及其与足细胞裂孔隔膜分子nephrin和细胞骨架蛋白F-actin之间的联系.方法 以DMEM培养基培养人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞系(HK-2),RPMI 1640培养基培养条件永生化小鼠足细胞系.以RT-PCR及Western blotting方法检测足细胞内CD2AP和nephrin的表达.间接免疫荧光结合激光共焦方法观察CD2AP在HMC、HK-2、未分化及已分化足细胞中的表达情况,及CD2AP与nephtin在足细胞中的共存.直接免疫荧光结合激光共焦方法观察F-actin在足细胞的表达及其与CD2AP的共存.结果 CD2AP均匀分布于HK-2及未分化足细胞的核周及胞浆,而不表达于HMC细胞.在足细胞分化过程中,CD2AP的分布发生了变化,出现向周边聚集的现象.CD2AP与足细胞裂孔隔膜分子nephrin及细胞骨架蛋白F-actin在足细胞中存在共定位关系.结论 CD2AP表达于上皮来源的肾脏固有细胞.CD2AP在足细胞中的分布特点,提示CD2AP可能参与足细胞的分化过程,并与裂孔隔膜分子功能及细胞骨架凋节有关.     

梗死心肌组织裂解液对鼠骨髓间充质干细胞诱导分化作用的体外研究

 目的 探讨梗死心肌组织裂解液对骨髓间充质干细胞（MSC）向心肌细胞分化的诱导作用。 方法 取 SD 大鼠梗死区心肌组织及其周围区域正常心肌组织分别制备梗死心肌组织裂解液和正常心肌组织裂解液；用 Balb/c 小鼠骨髓细胞进行 MSC 培养，取生长较好的第 2 代 MSC 制备 MSC 贴片，分别用 DMEM 培养基（空白对照组）、加入正常心肌组织裂解液的 DMEM 培养基（正常心肌组织裂解液组）和加入梗死心肌组织裂解液的 DMEM 培养基（梗死心肌组织裂解液组）培养。取各组培养 14 d 的 MSC，透射电镜下观察细胞超微结构；并进行免疫细胞化学染色，观察 α-肌动蛋白（actin）、心肌特异性转录因子 4（GATA-4）、心肌特异性肌球蛋白重链（MHC）、心肌特异性肌钙蛋白 T（cTnT）、心肌特异性肌钙蛋白 I（cTnI）、心肌增强因子 2（MEF-2）、连接蛋白（Cx）43 和 Cx45 的表达情况。 结果 超微结构观察显示空白对照组细胞器结构正常；正常心肌组织裂解液组细胞内未见明显的肌丝样结构；而梗死心肌组织裂解液组部分细胞内可见细小的肌丝样结构。免疫细胞化学染色分析显示，空白对照组 MSC 不表达心肌细胞特异性蛋白；正常心肌组织裂解液组 MSC 仅表达 α-actin；而梗死心肌组织裂解液组 MSC 表达 α-actin、GATA-4、MHC、cTnT、cTnI 和 MEF-2 等心肌特异性标志蛋白，但不表达 Cx43 和 Cx45。 结论 梗死心肌组织裂解液可以诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化。     

外周血单个核细胞与HepG2.215细胞共培养体系的研究

目的建立外周血单个核细胞与HepG2.215细胞共培养体系,探讨不同培养基及效靶比对共培养体系的影响。方法分离正常人外周血单个核细胞,加入植物血凝素（PHA）,置于不同的培养基（DMEM、RPMI1640）中进行培养,采用不同效靶比（5∶1、10∶1、20∶1、40∶1）构建PBMCs与HepG2.215细胞共培养体系。用倒置显微镜观察细胞的形态及生长情况,台盼蓝拒染法检测PBMCs与HepG2.215细胞的细胞活力,cck-8法检测HepG2.215细胞的增殖活性。结果 DMEM培养基培养的HepG2.215细胞的细胞活力比RPMI1640培养基培养的细胞高;而两种培养基培养的PBMCs的细胞活力无明显变化。共培养条件下,PBMCs对HepG2.215细胞增殖活性的抑制作用随效靶比的不同而有所差别,效靶比为20∶1时抑制作用最强。结论在PBMCs与HepG2.215细胞共培养体系中,细胞培养基和效靶比对HepG2.215细胞的生长有影响。     

同种异体血清体外培养兔膝关节软骨细胞的增殖*◆

背景：兔关节软骨细胞体外单层培养采用胎牛血清培养基易去分化,有必要寻找合适培养基来提高兔关节软骨细胞培养质量。 目的：观察同种异体兔血清对体外培养的兔膝关节软骨细胞增殖能力的影响。 方法：以0.4%链霉蛋白酶和0.025%Ⅱ型胶原酶分离成年兔膝关节软骨细胞,将获得的软骨细胞随机分为实验组和对照组。实验组以体积分数10%异体兔血清+DMEM/F12培养;对照组以体积分数10%胎牛血清+DMEM/F12培养,传代培养至4代。 结果与结论：实验组前4代软骨细胞增殖较对照组慢,但软骨细胞形态未发生明显改变而对照组软骨细胞出现去分化现象。提示体积分数10%异体兔血清培养利于维持软骨细胞增殖和形态的稳定,是较好的获取大量优良软骨细胞的体外培养方式。      

人胚胎肝细胞的体外培养及表型观察

目的观察体外培养的人胚胎肝细胞的特性。方法采用胰酶分步消化法体外分离人胚胎肝细胞,在培养的不同代数,收集培养上清液测定甲胎蛋白、白蛋白及5种特异性酶(ALT、AST、GGT、ALP、LDH)的分泌量,用免疫组化法测定细胞内细胞色素C的表达情况。观察诱导分化剂丁酸钠对该细胞的作用效果。结果体外分离培养的肝细胞在DMEM培养基中呈单层多边形上皮样生长,常规传代可维持约5个半月(30代),在传代过程中具有分泌白蛋白及5种特异性酶的生理功能。结论建立的人胚胎肝细胞系,保持了肝细胞的表型及分泌多种特异性酶。     

不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养效果的影响

目的研究不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养生长的影响,探讨内皮细胞的最佳体外扩增培养条件。方法取健康产妇分娩后脐带,用胶原酶Ⅰ消化后得脐静脉内皮细胞,进行原代培养,并用免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定,传代培养时则分别采用RPMI-1640培养基和EGM-2培养基,倒置显微镜观察两种培养条件下细胞的生长状态,同时利用流式细胞仪检测其生长周期,对比培养效果。结果 EGM-2组内皮细胞生长良好,2d后贴壁生长的细胞可达90%。EGM-2组S期细胞比例为（29.07±1.48）%,RPMI-1640培养基组S期细胞为（17.58±3.49）%,二者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 EGM-2培养基更适合人脐静脉内皮细胞的体外传代扩增培养。     

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法的实验研究

目的：建立一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs)的方法，为MSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。方法：用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs，筛选合适培养基及适应血清含量，传代扩增，测定生长曲线和贴壁率，形态学观察，免疫细胞化学法鉴定细胞膜抗原和细胞基质蛋白属性。结果：MSCs属骨髓中的单个核细胞，密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs,MSCs在含10％小牛血清L-DMEM培养液中生长性状相对稳定，1、3、5代细胞生长曲线、贴壁率基本相同，增殖速度快，群体倍增时间约为34小时，贴壁存活率高，适应性强，传代后12小时贴壁率达89％。细胞呈均一的成纤维细胞样，表达CD44、CD54、纤维粘连蛋白（Fibronectin,FN)、I型胶原（Collagen I)。结论：密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs，在含10％小牛血清的L－DMEM培养液中，细胞稳定扩增。     

从G-CSF动员的外周血细胞悬液培养的成纤维细胞样细胞的特性分析

目的： 研究从G-CSF动员的外周血细胞（PBC）悬液培养的成纤维细胞样（F-L）细胞的特性。 方法： 取PBC中贴壁细胞分4组培养：①RPMI-1640组；②L-DMEM组；③粒细胞集落刺激因子（G-CSF）组；④白细胞介素-3（IL-3）组。流式细胞仪分析各组培养的F-L细胞特性。 结果： 培养2-3周后，4组均能收获到F-L细胞，细胞贴壁生长，但不融合，不能连续传代培养，③④组细胞数量明显多于①②组，4组F-L细胞表型相似：CD33+、CD11c+、CD64+、CD14+、CD45+、HLA-DR+、CD86+、CD34-、CD38-、CD3-、CD19-、CD56-、CD29-、CD44-、CD105-；与单核细胞（PB-M）表型差异仅CD38表达不同而与间质干细胞（MSC）或树突状细胞（DC）表型明显不同。 结论： 从PBC培养的F-L细胞为巨噬细胞，不是MSC或DC；G-CSF、IL-3能提高F-L细胞培养数量，不改变PB-M向巨噬细胞分化的分化方向。     

无/低血清条件下杂交瘤细胞系生长和McAb产生的研究

将3G1/3F8细胞培养于血清浓度为20％、10％、17.5％、5％、2％、1％、0％的RPMI-1640中测定细胞生长曲线和McAb产生曲线。观察血清浓度对细胞生长和McAb产生的影响。用6种无血清培养基对3G1/3F8细胞做适应性培养,活细胞数为对照组的9.5％～55％;McAb产量为81.8％～106.8％。经驯化培养3G1/3F8细胞能够在血清含量1％、5％的培养液生长传代,冻存复苏,活细胞数达到对照组的71.2％～98.2％;McAb产量为104％和108％。对不同血清浓度下接种密度对细胞生长和McAb产量的作用做了实验观察。     

培养于TECA型生物人工肝的猪肝细胞生物转化功能的测定

了解培养于TECA型生物人工肝(BALSS)中猪肝细胞活性和生物转化功能的变化.将新鲜分离的特种猪肝细胞培养于TECA-BALSS的生物反应器中,通过BALSS中空纤维管膜与含盐酸利多卡因的RPMI-1640培养液进行6h交叉灌流.对照组BALSS内无猪肝细胞.采用胎盘蓝染色法测定肝细胞活率.用高压液相法测定利多卡因浓度.结果显示:猪肝细胞在TECA-BALSS中培养6h时,其细胞活率达89.7%;随着交叉灌流时间的增加,其体液环路中的盐酸利多卡因浓度逐步下降,6h时的转化率达80%,显著高于无肝细胞对照组的转化率2.5%(P＜0.01).这表明采用TECA-BALSS可大量的培养猪肝细胞,不仅肝细胞能维持较高的存活率,并能发挥肝细胞的生物转化功能.     

Human lymphocyte transformation induced by mitogens and antigens in a serum-free tissue culture system

The use of serum to supplement lymphocyte tissue culture media introduces uncontrolled variables; different serum sources, lots and concentrations can produce variability in experimental results, serum can stimulate or inhibit lymphocytes, and components of serum can react with substances whose effects on lymphocytes are being studied. To avoid these problems, we studied the ability of human peripheral mononuclear cells to survive and to respond to stimulation in an entirely synthetic medium, RPMI-1640 supplemented with L-glutamine, gentamicin, HEPES buffer and magnesium. Optical cell concentration in this serum-free RPMI-1640 was 2.5 × 10⁶ cells/ml, whereas optimal cell concentration in serum containing RPMI-1640 was 1 × 10⁶ cells/ml. In this serum-free RPMI-1640, 50% of the cellular input was recovered as viable cells after 7 days of culture, which was similar to results in serum containing RPMI-1640. Mononuclear cell transformation was induced by phytohemagglutinin, concanavalin A, pokeweed mitogen, streptolysin O and candida. Optimal doses of stimulants and the kinetics of the responses were similar in serum-free and serum containing RPMI-1640. This system can be used to avoid the problems inherent in systems which supplement tissue culture media with serum.     

恒河猴骨髓间充质干细胞的体外培养及其端粒酶活性

目的：建立骨髓间充质干细胞(MSCs)的培养方法，并检测其细胞周期及端粒酶活性。方法：无菌抽取恒河猴胫骨骨髓，采用贴壁筛选法分离、培养骨髓MSCs；原位杂交方法检测其端粒酶活性；流式细胞仪检测细胞周期。结果：培养的骨髓MSCs呈梭形，平行排列或成集落；细胞端粒酶活性呈阳性反应；细胞周期中G1、S、G2期的细胞所占百分比分别为89．5％、7．8％、7．7％。结论：培养的骨髓间MSCs处于未分化阶段，具有较强的增殖能力。     

Chromosomal abnormalities in amniotic fluid cell cultures: a comparison of apparent pseudomosaicism in Chang and RPMI-1640 media

The finding of chromosome mosaicism is one of the most difficult problems in fetal chromosome analysis. Whether the finding indicates true mosaicism or pseudomosaicism must be investigated. Studies detailing the incidence of true mosaicism and pseudomosaicism have been reported (Hsu & Perlis 1984, Bui et al. 1984, Worton & Stern 1984) but do not correlate pseudomosaicism with any particular type of culture media. Benn & Hsu (1985) compared cell growth and chromosome abnormalities in amniotic fluid cell cultures grown in Chang medium and RPMI-1640 medium and found no statistically significant difference in the rate of abnormalities in the two media. We have previously shown that Chang medium exhibited more abnormalities which were not verified in second and third cultures (Masia et al. 1986). In the current study we examined 212 cases grown in both Chang and RPMI-1640 media, and compared apparent single and multiple cell pseudomosaic abnormalities to medium type. The number of observed abnormalities was 22, occurring in 19 of the cases studied. Apparent pseudomosaic chromosome anomalies were observed in 18 Chang cultures and in 4 RPMI-1640 cultures. Statistical analysis found significant correlation between medium type and the degree of observed pseudomosaic cells. We conclude that the rate at which pseudomosaic cells are observed is partly a function of medium type, and in our laboratory Chang medium caused apparent pseudomosaicism at a greater level than RPMI-1640 medium.     

猪蛔虫幼虫体外培养的初步研究

目的研究适合猪蛔虫幼虫体外培养的最佳条件。方法将猪蛔虫幼虫在不同培养液（KW-2、RPMI-1640、DMEM（含酚红）、DMEM（不含酚红））中进行培养,并观察其存活、生长以及发育情况。结果幼虫在KW-2培养液中生长情况最好,虫体活力很强,3d后成活率最高达87.67%,其次是在RPMI-1640培养液中。在培养液DMEM（含酚红）、DMEM（不含酚红）中生长情况较差,存活不超过7d。其中KW-2培养液中在4～5d出现虫体头端有松动的鞘出现,在RPMI-1640培养液中7～8d出现鞘松动,DMEM（含酚红）、DMEM（不含酚红）中未发现有脱鞘现象出现。结论猪蛔虫的体外培养的最佳条件还需要进一步探索,从而为研究寄生线虫的发育生物学以及特异性发育的功能基因组学奠定基础。