2006—2012年深圳市南山区食物中毒病例分离副溶血性弧菌O3∶K6的病原学特征研究

目的对2006—2012年深圳市南山区从食物中毒病例分离的副溶血性弧菌O3∶K6血清型进行病原学特征分析。方法收集深圳市南山区2006—2012年食物中毒腹泻病例分离的副溶血性弧菌O3∶K6血清型,采用多重PCR方法检测其毒力基因tdh和trh,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子分型,并采用K-B法进行药敏试验。结果共收集到2006—2012年食物中毒腹泻病例分离的44株副溶血性弧菌O3∶K6,全部携带tdh基因,不携带trh基因。PFGE显示,44株菌可分为2个克隆群,克隆群1（C1）有19株菌,每株菌有17～20个条带,克隆群2（C2）有25株菌,每株菌有17～18个条带,C1和C2在200、190和100 Kb 3个条带处有差异,其他条带基本相同。药敏结果显示,44株副溶血性弧菌O3∶K6对头孢他啶、头孢吡肟、庆大霉素、左氧氟沙星、四环素、氯霉素和复方新诺明100.00%敏感,对氨苄青霉素、卡那霉素、链霉素的耐药率分别为72.73%（32/44）、18.18%（8/44）、18.18%（8/44）,中度敏感率分别为9.09%（4/44）、65.91%（29/44）、65.91%（29/44）。结论该地区从食物中毒腹泻病例分离的副溶血性弧菌O3∶K6主要的克隆群为C1和C2,携带tdh基因,不携带trh基因。     

食物中毒中不同血清型副溶血性弧菌基因特征分析

目的对2起食物中毒中不同血清型的副溶血性弧菌进行基因特征分析。方法第1起食物中毒发生在2010年5月17日深圳市某食堂,感染人数20人左右,采集到病人肛拭子9份,可疑食品3份,每份样本挑取20个可疑菌落;第2起食物中毒发生在2010年7月1日深圳市某配餐中心,感染人数10人左右,采集到病人肛拭子7份,可疑食品2份,涂抹样3份,每份样本挑取10个可疑菌落。对可疑菌落分别进行盐耐受试验、生化试验和血清学鉴定。从2起食物中毒的每份样本中挑取不同血清型进行tdh、trh、GS—PCR、orf8基因检测和脉冲场凝胶电泳分析（PFGE）。结果第1起食物中毒分离到副溶血性弧菌180株,其中03：K6107株,02：K2870株,04：K34、03：K25、04：K12各1株;第2起食物中毒分离到副溶血性弧菌80株,其中03：K644株,04：K8、011：K36、011：K19各10株,01：K566株。03：K6、01：K56、04：K8、011：K36携带tdh基因,不携带砒基因,其他血清型（02：K28,04：K12,03：K25,04：K34,011：K19）均不携带tdh和f砘基因。03：K6和011：K362种血清型的GS-PCR和orf8基因阳性,其他血清型阴性。PFGE结果显示第1起食物中毒中食品和病人肛拭分离的02：K28（分别3、2株）的PFGE带型基本一致,属高度相关菌株。第2起食物中毒中病人肛拭分离的4株03：K6与卤鸡蛋盘涂抹样分离的1株03：K6PFGE带型一致。2起食物中毒的03：K6带型基本一致。来自相同样本不同血清型的副溶血性弧菌的PFGE带型不一致。结论第1起食物中毒与食用污染了副溶血性弧菌的食品有关,第2起食物中毒与污染了副溶血性弧茵的卤鸡蛋盘有关。通过血清分型和分子生物学分析,可认为相同样本中分离的不同血清型副溶血性弧菌未发现遗传学证据,为遗传不相关菌株。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学特征分析

目的 分析2018年中山市某公司发生的1起副溶血性弧菌食物中毒分离株的血清型别、耐药表型和分子特征。方法 对该起食物中毒事件中分离的29株副溶血性弧菌进行病原学检测,采用玻片凝集法进行血清学分型,采用荧光PCR法检测tdh、tlh、trh毒力基因,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子分型。结果 29株副溶血性弧菌分离株血清型均为O3∶K6型;毒力基因检测结果显示,所有菌株均携带tdh、tlh基因;药敏试验结果显示,分离株对头孢唑林、氨苄西林的耐药率分别为100.00%、57.17%。28株病例分离株和1株食物分离株经NotⅠ酶切后PFGE指纹图谱高度相似,仅1株病例分离株与其他28株分离株存在2个条带的差异。结论 该起食物中毒事件的病原体为O3∶K6型副溶血性弧菌, 携带tdh、tlh毒力基因, 具有共同的耐药表型和遗传特征。     

副溶血性弧菌引起食物中毒的病原学检测

目的对从食物中毒患者粪便标本以及可疑食物中分离到的病原菌,进行表型和毒力基因的鉴定以及同源性分析。方法参照食品卫生微生物学检验中副溶血性弧菌检验方法（GB／T4789．7—2008）,分离鉴定副溶血性弧菌。对检出的副溶血性弧菌做血清分型、耐药性、毒力基因（toxR、trh、tdh、tlh）的测定,并用脉冲场凝胶电泳（PulsedFieldGelElectrophoresis,PFGE）测定菌株的同源性。结果从3份食物标本和5份患者粪便标本中检出副溶血性弧菌8株,8株菌分属于不同的血清型。8株菌的生物学性状和药物敏感性试验一致。8株菌的toxR和tlh均阳性,trh均阴性,tdh为粪便标本均阳性,食物标本均阴性。8株菌共产生6种PFGE带型。结论此次食物中毒由副溶血性弧菌引起,但分离于粪便标本和分离于可疑食物标本的菌株之间,其PFGE带型比较分散,可能是由副溶血性弧菌多种O抗原群混合污染引起。     

广州地区70株副溶血性弧菌病原学特征分析

目的 了解广州地区人源性和食源性副溶血性弧菌优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况。方法 收集2014 - 2016年广州地区腹泻患者和食源性监测中分离到的副溶血性弧菌进行血清分型、毒力基因鉴定和脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）。结果 70株副溶血性弧菌,临床分离株48株,血清型分别为O3∶K6、O4∶K8、O1∶K1、O4∶K9、O1∶K36,其中O3∶K6为主要型别（70.8%）,其次为O4∶K8（20.8%）。食品分离株22株,血清型分散无明显优势。毒力基因检测,临床分离株46株tdh、toxRS/new、orf8全部阳性。食品分离株6株tdh阳性,toxRS/new、orf8全部阴性。所有菌株均未检出trh基因。PFGE分析70株副溶血性弧菌可分为45种带型,2种聚类,菌株间的相似值为45.6 %～100 %。结论 副溶血性弧菌临床分离株与食品分离株在血清型和毒力基因分布上具有分离现象。引起广州地区食源性疾病的副溶血性弧菌株,是主要以携带tdh、toxRS/new、orf8基因的O3:K6型菌株。PFGE图谱显示,本区域70株副溶血弧菌呈现基因多样性。     

泰州市不同来源副溶血性弧菌分离株毒力基因型和耐药性的比较研究

分析上海市奉贤区不同来源副溶血性弧菌耐药性、主要毒力基因携带及分子分型情况。

对2018—2020年上海市奉贤区分离到的210株副溶血性弧菌进行17种抗生素药物敏感试验,耐热直接溶血毒素基因（thermostable direct hemolysin,tdh）、耐热相关溶血毒素基因（thermostable direct hemolysin⁃related hemolysin,trh）和不耐热溶血素基因（thermolabile hemolysin,tlh）检测以及脉冲场凝胶电泳分型分析。

药敏结果显示,共检出耐药株147株,耐药率为70.00%。其中,126株对1种抗生素耐药,以耐头孢唑啉（CFZ）为主;15株对2种抗生素耐药,以耐CFZ和氨苄西林（AMP）为主;多重耐药菌（MDR）6株,以耐AMP、复方新诺明（SXT）、CFZ、头孢噻肟（CTX）、头孢他啶（CAZ）和头孢吡肟（FEP）为主。食源性菌株AMP耐药水平高于人源性菌株（P<0.05）。210株副溶血性弧菌均携带毒力基因tlh。84株人源副溶血性弧菌菌株tdh和trh基因携带率分别为89.29%和7.14%;126株食品源副溶血性弧菌菌株trh基因携带率为1.59%,未检出tdh基因。脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析得到173种带型,菌株之间的相似度为48.80%~100.00%,存在主要流行克隆系。

上海市奉贤区副溶血性弧菌存在多重耐药现象,对β⁃内酰胺类抗生素耐药情况较为严重,人源性菌株毒力基因携带率较高。PFGE带型总体上较为分散,但人源菌株中存在主要流行克隆系。奉贤区引起食源性疾病的风险性较高,应加强防控。

     

副溶血性弧菌食物中毒的病原学检测

2004年6月15日，沈阳市某酒店有35人共同进餐，8h后出现首例病人，症状为水样便、呕吐、腹泻、发热。至翌日共发病23人，罹患率66％，主要临床症状与首例相同，严重者呈霍乱样症状，但病程较短。经抗生素治疗，全部病例48h内康复，无死亡病例。本文采集相关样品进行了病原学分析。结果报告如下。     

一起副溶血性弧菌引起食物中毒的病原学分析

2004年7月6日晚,市疾控中心接市内两家医院报告,当日下午陆续有几十名类似急性胃肠炎症状的患者相继入院治疗.患者均是当天中午在市内某大型酒楼同时进餐者.经过流行病学调查和实验室检验,结合病人临床症状确认该起事故为副溶血性弧菌引起的食物中毒.现将病原学分析报告如下:……     

副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的用脉冲场凝胶电泳方法绘制副溶血性弧菌食物中毒分离株的DNA指纹图谱,分析各菌株间的同源性关系。方法 55株食物中毒来源的副溶血性弧菌基因组DNA经限制性内切酶NotI酶切,用脉冲场凝胶电泳方法获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果实验得到55株副溶血性弧菌的DNA指纹图谱,可大致分为30种PFGE图谱。聚类分析显示,在大约90%的相似性水平上,有38株菌的PFGE图谱属于同一个克隆群,为2007-2008年引起闵行区食物中毒的优势流行菌型。结论闵行地区存在遗传谱系密切相关的副溶血性弧菌流行克隆。脉冲场凝胶电泳方法是分析副溶血性弧菌同源性的有效方法 ,有助于追溯传染源。     

一起副溶血性弧菌引起食物中毒病原学检测

2003年5月26日温州市区江滨西路某建筑工地发生一起民工食物中毒.首发病人出现在当天下午2时,潜伏期最长为26小时,先后有15名民工出现腹痛,腹泻等消化道症状.经实验室检查,确认本次中毒事件是由副溶血性弧菌引起的.现报告如下.     

马鞍山市不同来源副溶血弧菌生物学特征及分子流行病学研究

目的了解马鞍山市不同来源副溶血弧菌分离株的病原学及分子生物学特征。方法从市场流通食物、食物中毒事件标本及临床腹泻病例标本中分离培养、鉴定副溶血弧菌;并进行尿素酶、神奈川试验、药敏试验;PCR方法检测tlh、tdh和trh基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果 40株不同来源的副溶血弧菌尿素酶阳性17株,神奈川试验阳性20株;头孢唑啉的耐药达到95.00%,氨苄西林的耐药达到69.00%,对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、头孢噻肟、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、派拉西林/三唑巴坦、美洛培南均100.00%敏感;毒力基因检测tlh阳性36株,阳性率为90.00%,tdh 29株阳性,阳性率为72.50%,40株菌trh全部阴性;PFGE将40株副溶血弧菌分成19种型别,部分菌株相似性100.00%,整体菌株带型相对分散。结论马鞍山市副溶血性弧菌对大多数抗生素均具有较高敏感性,3种毒力基因携带率低,PFGE提示有部分菌株有流行趋势,但整体没有发现明显优势菌群,提示本地食品中副溶血性弧菌未出现大流行迹象。     

深圳市2007--2008年腹泻病副溶血弧菌监测及分子特性分析

目的 了解深圳地区2007年和2008年腹泻病副溶血弧菌感染状况和临床分离株的分子生物学特征.方法 4个哨点监测医院每月至少对80份腹泻病例的粪便样本进行致病菌分离培养.对所分离的361株副溶血弧菌进行血清型分型和两个主要毒力基因tdh和trh的检测.对2007年8月和2008年9月6个疑似腹泻暴发地点的60株O3:K6型副溶血弧菌分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型.结果 4个哨点临测医院共检测4384份标本,分离出361株副溶血弧菌,361株副溶血弧菌分属于28种不同的血清型,其中O3:K6型占67.90%,其次是O4:K8和O1:KUT血清型,所占比例分别为7.50%和6.10%.深圳地区腹泻病副溶血弧菌临床分离株主要是tdh+trh-菌株,361株菌株中有337株是tdh+trh-菌株,11株为tdh-trh-菌株,13株为tdh+trh+菌株.60株副溶血弧菌分型得到20种图谱类型,分别属于3个克隆群.分离自同一个地点的副溶血弧菌菌株具有相同的PFGE图谱,来自不同年份的菌株仅有部分菌株有相同的PFGE图谱.结论 深圳地区腹泻患者的副溶血弧菌分离菌株主要以O3:K6型为主,大部分菌株携带tdh基因,少数携带trh基因.来自6个地点的副溶血弧菌都具有相同的PFGE图谱,说明该地区存在副溶血弧菌腹泻病的暴发.但2007年和2008年菌株的PFGE图谱又不相同,说明副溶血弧菌的来源存在多样性.     

PFGE技术对一起副溶血性弧菌引起食物中毒的同源性研究

目的:了解一起食物中毒事件中副溶血性弧菌(VP)分离株的同源性。方法:按国标方法进行VP的分离与鉴定;对分离出的VP做血清分型及tdh、trh毒力基因检测;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行基因分型。结果:从10例患者肛拭子和1份砧板涂抹物中分离到的11株VP,血清型均为O3:K6,tdh毒力基因均为阳性,PFGE分型图谱也完全相同。结论:这是一起因VP污染了食品加工环节而导致的食物中毒事件。     

应用脉冲场凝胶电泳分型技术溯源副溶血弧菌食物中毒

目的应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对副溶血弧菌食物中毒进行分析。方法采用限制性内切酶NotⅠ,对一起广州市某餐厅副溶血弧菌食物中毒中30株副溶血弧菌进行PFGE分子分型,用BioNumerics Version4．0软件（复选Dice相关系数和UPGMA方法）进行聚类分析。结果分离的30株副溶血弧菌特异性toxR基因均为阳性,毒力基因tdh阳性,而trh阴性。30株副溶血弧菌PFGE型别相同。结论PFGE分型可揭示人、食品和公用具分离的副溶血弧菌菌株之间的流行病学联系,为疫情溯源提供分子流行病学证据和支持。     

2018—2019年包头市市售水产品中副溶血性弧菌监测结果及病原学特征分析

目的 了解包头市市售水产品中副溶血性弧菌（vibrio parahaemolyticus,VP）的带菌率,并对其毒力基因、耐药性、分子分型等病原学特征进行分析。 方法 2018—2019年共采集市售水产品160份,分离培养获得VP,荧光定量PCR测定毒力基因、微量肉汤稀释法测定抗生素敏感性、脉冲场凝胶电泳进行分子分型。 结果 160份市售水产品中共检出VP 43株,海水、淡水、地产淡水产品检出率分别为20.62%、36.51%、33.33%,本地产水产品与外地产水产品检出率无统计学差异（χ2 = 0.069,P＞0.05）;43株VP thl基因的携带率为100%,1株携带tdh基因;仅有12株VP对全部22种抗生素敏感,主要耐药性表现在头孢噻肟（51.16%）、氨苄西林（46.51%）,1株细菌最高耐受11种抗生素并发现2株碳青霉烯类药物耐药菌;43株VP分为39个PFGE型别,相似度1.9%～100%,无明显优势型别条带。 结论 包头市市售水产品中存在VP污染,本地产与其他地区来源的水产品污染程度相当;VP对β内酰胺类抗生素耐药程度高,PFGE型别呈多态性。后续应持续对水产中VP污染的监测,重视多耐药的发生及耐药谱的改变,加强爆发菌株及相关患者的溯源工作。     

北京市副溶血弧菌病原学和分子流行病学特征分析

目的 了解北京市副溶血弧菌腹泻病例分离株的病原学和分子流行病学特征.方法 2010年4-12月从临床收集散发腹泻病例2118份粪便标本,进行副溶血弧菌的分离培养、生化鉴定.阳性菌株进行血清分型;采用药敏纸片法对12种抗生素进行敏感性检测;用实时荧光定量PCR方法检测毒力基因tlh、tdh和trh;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型.结果 2118份粪便标本分离出副溶血弧菌114株,阳性分离率为5.38％.114株副溶血弧菌分属于23种血清型,其中O3:K6为优势血清型,占63.16％.临床分离株对氨苄西林和庆大霉素产生耐药;对阿莫西林、头孢曲松、氯霉素、亚胺培南、萘啶酸和四环素等均具有较高敏感性.全部菌株tlh基因阳性;tdh存在于大部分菌株中,所占比例为93.86％;只有1株菌trh阳性.O3:K6型菌株tdh基因阳性率(98.61％)明显高于非O3:K6型菌株(85.71％)(P=0.0098).114株副溶血弧菌分成54种PFGE型别,72株O3:K6型菌株分成34种PFGE型别,带型分散,无明显聚集性.结论 北京地区感染性腹泻病例副溶血弧菌分离株以O3:K6型为主.毒力基因tlh和tdh携带率高,且O3:K6型临床分离株毒力更强.副溶血弧菌对多数抗生素均具有较高敏感性.PFGE结果提示北京地区流行的副溶血弧菌存在多克隆来源.     

温州市食品污染物中副溶血弧菌污染调查报告分析

目的:了解温州市食品污染物中副溶血性弧菌的污染状况,初步确定可能污染副溶血性弧菌的高危食品,为食物中毒监测提供科学依据和为食品安全的危险性评估提供依据。方法:参照GB/T4789.7-2003对样品进行副溶血性弧菌分离、生化鉴定[1]。结果:检测生肉(牛、羊、鸡、猪)、熟肉制品、水产品(包括海水鱼、淡水鱼)、冷菜共4类样品494件,检出副溶血性弧菌75株,检出率15.2%;4类食品中副溶血性弧菌阳性率最高的为水产品(20%)。水产品中不同样品检出率:虾31.11%,贝21.88%,蟹16.67%,鱼12.20%,各类食品中9月份副溶血性弧菌检出率最高。结论:温州市鹿城区、瓯海区和洞头县各类食品副溶血性弧菌污染程度无显著性差异,贝、虾类水产品污染高于鱼和蟹。     

2015年-2018年桐乡市市售海产品副溶血性弧菌监测结果分析

目的 了解桐乡市海产品副溶血性弧菌的污染情况,为风险评估及食物中毒预防提供科学依据。方法 采集样品进行副溶血性弧菌的分离与鉴定、分型;应用Real-time PCR方法检测其毒力基因 tlh、tdh 和 trh。结果 2015年-2018年总检出率为42.24%（49、116）不同年份（x2=25.71）、不同季度（x2=25.09）和不同地点（x2=6.24）样品的副溶血性弧菌检出率差异有统计学意义（P<0.05）;不同种类(x2=5.45)、不同采样场所(x2=4.98)样品的副溶血性弧菌检出率差异无统计学意义（P>0.5）。血清型分型以O3:KUT（32.65%）、O4:KUT（26.53%）、O1∶KUT（20.41%）为主;毒力基因阳性率tlh100.00％（49／49）、tdh0.00％（0／49）和trh2.04%(1/49,来自三文鱼)。结论 桐乡市市售生鲜海产品中副溶血性弧菌检出率较高,建议应加强对该菌的食源性主动监测及措施。     

弧菌显色培养基对副溶血弧菌检测效果的初步评估

目的评估弧菌显色培养基对副溶血弧菌检测效果。方法通过弧菌显色培养基(chromID Vibrio)同硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖(TCBS)琼脂培养基进行比对,采用阳性菌株污染、人工污染样品和实际样品检测的方法,对chromID Vibrio的灵敏性、特异性和检测效果进行了初步评价。结果得到粉红色副溶血弧菌典型菌落;阳性菌株污染中,在稀释度为10-7CFU/ml时,chromID Vibrio能检测出目标菌,而TCBS平板未能检测;对人工污染样品,稀释度10-8CFU/ml chromID Vibrio有检出、TCBS平板未检出;对采集的150份实际样品进行检测,用ChromID Vibrio方法检出副溶血弧菌12株,比TCBS方法检出的检测效率高。结论chromID Vibrio灵敏性和TCBS相当,并具有较好的特异性,大大提高副溶血性弧菌的检测效率。     

深圳地区2002-2008年副溶血弧菌分子特征研究

目的了解深圳地区副溶血弧菌主要血清型和分子分型以及毒力因子分布,分析新O3:K6型克隆群与国际流行株的进化关系.方法对2002-2008年深圳地区1005株副溶血弧菌临床分离株进行血清型分型;采用荧光PCR方法对68种不同血清型的28 1株副溶血弧菌进行tlh、toxR、tdh和trh毒力基因检测;对281株菌株进行orf8检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对不同分离时间的5种主要血清型菌株进行分子分型,根据有代表性的分子分型图谱选取82株副溶血弧菌菌株进行GS-PCR检测,并选取60株副溶血弧菌菌株进行toxRS基因测序;进而对41株O3:K6和O1:K25副溶血弧菌菌株进行多位点序列分型(MLST)分析,采用eBURST软件分析进化关系.结果1005株菌共得到79种不同的血清型,主要血清型为O3:K6、O4:K8、O1:K25、O1:KUT、O4:K68、O1:K56和O9:K44,所占比例分别为57.9%、8.16%、5.27%、5.87%、1.39%、1.39%和0.99%.243株为tlh+、toxR+、tdh+、trh-,37株为tlh+、toxR+、tdh-和trh-,1株tlh+、toxR+、tdh+和trh+.35株O3:K6型菌株的MLST序列类型为ST3,是同源复合体CC3,O4:K8型副溶血弧菌的序列类型为ST189,无同源复合体.结论深圳地区主要流行的副溶血弧菌为tdh+、trh-的O3:K6、O4:K8和O1:K25菌株,2006年后出现O1:K56、O9:K44、O3:K29、O4:K9新的血清型;其中O3:K6血清型属于新的O3:K6克隆群,与其他国家流行的副溶血弧菌属于同一克隆群,同时也存在新、旧克隆群.血清的多样性和新旧克隆群的存在是造成深圳地区副溶血弧菌腹泻病高发态势的主要原因之一.