蛋白胶联剂京尼平与戊二醛的生物学特性比较

目的：从交联度、细胞毒性、溶胀率与降解率方面比较京尼平和戊二醛交联明胶的生物学特性。方法：实验于2005-06／2006-01在哈尔滨医科大学附属第二医院实验中心完成。①材料分为两组，京尼平组用10g／L京尼平交联明胶72h，戊二醛组用10g／L戊二醛交联明胶24h。②检测交联度：每组材料取8个样本，其中5个加入碳酸氢钠和三硝基苯磺酸，再加盐酸，在346nm测吸光度值（A三硝基萃磺酸）。另取3个样本先加盐酸，然后再加三硝基苯磺酸，其余步骤相同，测得吸光度取平均值作为对照（A对），交联后吸光度值为：A变联后=A三硝基萃磺酸 A对o再取11mg明胶加19μL水，不加京尼平，同样步骤测吸光度，得到交联前吸光度（A交联前）。交联度=（A交联前-A交联后）／A交联前&;#215;100％。③细胞毒性试验：按照1cm^2／mL比例用培养液浸提5组材料制备浸提液，将中国仓鼠V-79细胞种植于96孔板，分为3组：阴性组（单纯培养液）、京尼平组（加京尼平明胶浸提液）、戊二醛组（加戊二醛明胶浸提掖），48h后做四甲基氮唑蓝检测。细胞相对增殖率=浸提液组平均A值／阴性对照组平均A值&;#215;100％。各组的细胞相对增殖率转换成6级（0—5级）细胞毒性以评定材料的毒性程度。④溶胀度与降解率：材料交联完成后立即称重（Wo）。然后在离心管中加2mL无菌磷酸盐缓冲液，24h后两组各取8个材料，用无菌滤纸擦干水分后称重（W1）。溶胀率=（W1-W0）／Wo&;#215;100％。其他材料3d换液1次，于1，2，3，4，8，12周分别取出两组材料各8个，用无菌滤纸擦干水分后称重（W2）。降解率=（W1-W2/W1&;#215;100％。结果：①京尼平和戊二醛交联明胶材料的交联度分别为79．1％和52．3％。②京尼平材料的溶胀度高于戊二醛材料【（166&;#177;38）％，（133&;#177;31）％，P〈0．05】。⑧京尼平和戊二醛材料在磷酸盐缓冲液中浸泡12周，降解率差异无显著性（14．1％，12．6％）。④戊二醛交联明胶的浸提液培养的细胞出现坏死现象，而京尼平材料浸提液培养的细胞生长良好。京尼平和戊二醛材料的细胞增殖度分别为96．6和23．1。结论：京尼平交联明胶材料与戊二醛交联明胶材料比较，交联度降低，溶胀度增加，但二者制成的材料在磷酸盐缓冲液中浸泡12周都仅有少量降解，差异无显著性。京尼平的细胞毒性明显低于戊二醛。     

牙周细胞在离子化胶原表面的黏附与生长

目的:评价离子化胶原对不同交联剂的作用及交联后对牙周细胞的黏附与生长的影响。方法:实验于2006-10/2007-01在四川大学生物材料工程研究中心实验室完成。①通过胶原蛋白与甲醇在低温反应得到化学修饰离子化胶原,将胶原海绵和离子化胶原海绵分别与戊二醛、碳化二亚胺,京尼平在室温条件下发生交联反应,控制交联剂的终质量分数为0.006,交联时间均为24h。②通过测溶液中羟脯氨酸含量测交联产物的交联度;用胶原酶测交联产物体外降解时间;通过牙周细胞在交联产物上的生长情况(A570)确定交联产物对细胞的作用。nm结果:①吸液率和交联度:离子化胶原与各交联剂交联后吸液率都低于胶原交联后,交联度相应提高,胶原和离子化胶原与戊二醛交联其交联度最高,分别为81%,85%。②降解率:离子化胶原的降解率总的趋势低于胶原样品,离子化胶原、胶原被炭化二亚胺交联后,其降解率分别为0.5%,45.0%。③牙周细胞生长情况:离子化胶原交联产物上牙周细胞A570值高于胶原交联nm产物。结论:离子化胶原在交联过程中显示了较好的抗生物降解性能,离子化胶原交联产物在牙周细胞培养过程中显示出了低的细胞毒性,提示其对牙周细胞黏附与生长具有促进作用,可以代替胶原应用于牙周组织治疗。     

新型抗钙化牛颈静脉管道材料的体外细胞毒性评价

背景:TritonX-100、环氧氯丙烷联合改性处理戊二醛固定的牛颈静脉管道是一种新型抗钙化右心管道材料,其生物相容性方面的研究较少。目的:评价新型抗钙化牛颈静脉管道的体外细胞毒性。方法:通过CCK-8法检测新型抗钙化牛颈静脉管道(实验组)及单纯戊二醛处理牛颈静脉管道材料浸提液(对照组)对L-929小鼠成纤维细胞的毒性作用,以第2,4天为检测时间点,计算细胞相对增殖率、对材料毒性进行分级。结果与结论:CCK-8法细胞毒性试验显示新型抗钙化牛颈静脉管道材料浸提液第2,4天L-929细胞增殖率均在85%以上,毒性分级为1级,无细胞毒性,且显著优于对照组(P<0.05)。提示经戊二醛、TritonX-100、环氧氯丙烷联合处理制备的新型抗钙化牛颈静脉管道材料无细胞毒性。     

纳米羟基磷灰石根管充填材料的生物相容性及细胞毒性实验

背景：传统的根管充填材料主要有氧化锌类、树脂类、磷灰石类和氢氧化钙类等,它们分别存在组织刺激性强、成形困难、根管封闭性较差及易降解等缺点。目的：测试牙科纳米羟基磷灰石根充材料的细胞毒性和细胞增殖性,评价其作为新型根充材料的可行性。设计、时间及地点：细胞毒理学体外对比观察,于2008-01/03在湖州师范学院细胞工程研究所完成。材料：采用DMEM培养液配制80,40g/L纳米羟基磷灰石根充糊剂浸提液。方法：体外培养成骨细胞,培养至70%～80%贴壁、生长良好,然后分为4组：80,40g/L浸提液组在培养基中添加80,40g/L的纳米羟基磷灰石根充糊剂浸提液,阳性对照组添加60g/L根管充填剂（充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合制剂）糊剂浸提液,以无添加物的浸提液为阴性对照组。4组均置于37℃、体积分数为0.05的CO2细胞培养箱中培养。主要观察指标：倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化和生长状况;培养后1,3,5,7dMTT法测试各组细胞吸光度,并计算细胞增殖度,评价细胞毒性。结果：80,40g/L浸提液组的A值比较差异无显著性意义（P〉0.05）,随培养时间延长,A值都逐渐增高,2组各时间点A值与阴性对照组比较差异均无显著性意义（P〉0.05）;阳性对照组各时间点A值均低于其他3组（P〈0.05）。80,40g/L浸提液组的细胞增殖都与阴性对照组走势相似,与阳性对照组差别明显。纳米羟基磷灰石根充材料细胞毒性分级与阴性对照同为0～1级,阳性对照毒级为4级。结论：纳米羟基磷灰石根充材料体外细胞毒性实验阴性,有很好的安全性和良好的生物相容性,将可能取代传统的根管充填剂糊剂,作为根充材料具有可行性。     

镁合金的初步生物安全性评价

目的初步评价AZ31B镁合金的生物安全性。方法体外细胞毒性:L929细胞分别与实验组(M)镁合金培养基浸提液、空白对照组(N)DMEM培养基,阳性对照组(P)5%DMSO培养基培养,3 d后进行细胞毒性分级。体外溶血率:稀释兔血分别与实验组(M)镁合金生理盐水浸提液、空白对照组(N)生理盐水、阳性对照组(N)蒸馏水混合后置37℃水浴中孵育,60 min后离心,取上清液测定吸光度(OD),计算镁合金材料溶血率。体外浸提液分析:检测镁合金材料浸提液中镁离子和钠离子浓度,以及pH值。体内急性毒性:分别自小白鼠腹腔注射空白对照组(N)生理盐水和镁合金组(M)镁合金材料生理盐水浸提液,观察和记录动物的状态,72 h后计算动物体质量变化。结果 N组毒性反应分级为0级,M组为4级,P组为3级。M组溶血率为68.1%,具有溶血作用。浸提液镁离子浓度为1.33 mmol/L,钠离子浓度为134 mmol/L;浸提液pH值为10.10±0.29。所有动物注射后在各时间点无不良反应,一般情况好。M组和N组动物体质量的平均变化分别为1.97%和0.43%,小鼠体质量增加百分比差异无统计学意义(t=0.499,P=0.624)。结论体外实验显示高腐蚀率的镁合金有细胞毒性和溶血率,但体内实验并未见到急性毒性反应。     

碳纳米管／羟基磷灰石／聚乳酸椎间融合器的细胞相容性

目的:前期实验证实碳纳米管/羟基磷灰石/聚乳酸椎间融合器能很好地满足人体脊椎的生物力学要求,尚需进一步观察其细胞相容性,为临床应用提供参考数据。方法:实验于2007-03/06在南方医科大学南方医院脊柱骨病科实验室完成。①材料和浸提液制备:将聚乳酸、羟基磷灰石、碳纳米管按质量比6∶3∶1制备碳纳米管/羟基磷灰石/聚乳酸复合材料,并提取浸提液。②细胞毒性测试:参照GB/T16886.5-1997-ISO 10993-5:1992《医疗器械生物学评价细胞毒性试验体外法》的评价标准和要求,设立阴性对照组(生理盐水)、实验组(浸提液)、阳性对照组(质量浓度为64g/L的苯酚),用L929细胞与材料浸提液共培养的方式进行。采用细胞形态观察法进行定性观察,观察L929细胞在培养24,48,72h各时相点的细胞形态学变化,运用MTT比色法,测定上述各组L929细胞培养2,4,7d的相对增殖度,判断材料对细胞的毒性程度。结果:①细胞增殖变化:随时间延长,3组细胞的吸光度值均明显增加(P<0.01)。实验组L929细胞相对增殖度在第2,4,7天分别为94.3%,96.5%和97.2%,参照国家标准碳纳米管/羟基磷灰石/聚乳酸的细胞毒性为1级;实验组与阴性对照组比较差异不显著(P>0.05);阳性对照组与其他2组比较差异显著(P<0.05)。②细胞形态变化:实验组细胞形态正常,呈梭形,贴壁生长良好。根据细胞形态学标准,碳纳米管/羟基磷灰石/聚乳酸浸提液无细胞毒性。结论:碳纳米管/羟基磷灰石/聚乳酸复合材料细胞相容性良好,细胞毒性为1级,参照GB/T16886.5-1997-ISO10993-5:1992标准属于安全范围。     

纳米含氟羟基磷灰石牙种植体的生物相容性

背景：有关纳米含氟羟基磷灰石牙种植体材料生物相容性的报道较少。目的：检测纳米含氟羟基磷灰石牙种植体材料的体外生物相容性。方法：采用溶胶凝胶技术分别制备羟基磷灰石与纳米含氟羟基磷灰石。①溶血性实验：在0.2 mL稀释兔抗凝血中分别加入0.01,0.15,0.2 g/L纳米含氟羟基磷灰石溶液、生理盐水及蒸馏水各10 mL,检测各组上清液吸光度值。②体外细胞毒性实验：分别以100%,50%纳米含氟羟基磷灰石浸提液、100%羟基磷灰石浸提液、苯酚溶液及RPMI1640培养液培养传至第2代的L929细胞,MTT法检测培养2,4,7 d的吸光度值。结果与结论：体外溶血性实验显示,各浓度梯度纳米含氟羟基磷灰石的溶血率均在5%以内,符合医用材料的溶血要求。体外细胞毒性实验显示,随着培养时间的增加,100%,50%纳米含氟羟基磷灰石浸提液组细胞贴壁覆盖率增加,细胞密度增高,细胞为长梭形或多角形,细胞增殖及形态与RPMI1640培养液组、羟基磷灰石组无明显差别,细胞毒性为0级。     

纳米银猪脱细胞真皮敷料的细胞毒性评估

背景:传统的猪皮敷料具有保护创面的作用,但不具有主动抗感染功能.目的:评估自制纳米银猪脱细胞真皮敷料的体外细胞毒性,评价其作为新型敷料的可行性.方法:用四甲基偶氮唑盐比色法检测自制纳米银猪脱细胞真皮敷料100%和50%的浸提液对小鼠成纤维细胞(L-929细胞)相对增殖率的影响,并评价其细胞毒性.倒置显微镜观察各组细胞形态变化,培养2,4,7d后用酶联免疫检测仪测定溶液吸光度值来评估细胞毒性.结果与结论:L-929细胞在自制纳米银猪脱细胞真皮敷料的浸提液中增殖良好,其细胞毒性实验显示细胞毒级为1级,实验组与阴性对照组之间的吸光度值差异均无显著性意义(P＞0.05).说明自制纳米银猪脱细胞敷料无细胞毒性,作为新敷料具有可行性.     

细胞培养法评价3种自制镍铬烤瓷合金的生物相容性

目的:检测3种自制镍铬烤瓷合金的体外细胞毒性,并与口腔科常用的镍铬合金、纯钛金属的细胞毒性进行比较,以评价3种自制镍铬烤瓷合金的生物相容性。方法:将材料浸提液与体外培养的细胞接触后,进行四唑盐比色实验来评价材料的细胞毒性。结果:自制镍铬烤瓷合金组对细胞增殖的抑制作用大于纯钛组而小于镍铬合金组,但统计学分析结果显示3种金属材料组与阴性对照组之间的吸光度值差异均无统计学意义(P>0.05),与阳性对照组之间的吸光度值差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:自制镍铬烤瓷合金仅具有极微弱的细胞毒性,符合材料临床应用的要求,为其在临床烤瓷合金中的应用提供了生物学依据。     

四种正畸矫治弓丝的细胞毒性研究

目的评价四种临床常用正畸矫治弓丝经人工唾液浸泡腐蚀后的细胞毒性。方法选择正畸常用两种超弹性镍钛矫治弓丝和两种不锈钢矫治弓丝(A组:速航国产超弹性镍钛矫治弓丝;B组:Smart国产超弹性镍钛矫治弓丝;C组:PLASDENT国产不锈钢矫治弓丝;D组:ORMAER国产不锈钢矫治弓丝),在弱酸性(pH=6.0)人工唾液中浸泡4周后,取出试件制备浓度为20%、50%、100%的浸提液。使用不同浓度浸提液培养L-929细胞24 h、48 h后,分别使用SEM及MTT实验,初步评价四种矫治弓丝的细胞毒性。结果相同培养时间下,随浸提液浓度的增加,细胞相对增殖率减小,细胞毒性相对增加(P<0.05);相同浸提液浓度下,随培养时间的延长,细胞相对增殖率减小,细胞毒性相对增加(P<0.05)。100%浸提液浓度培养24 h后,四组浸提液均未对L-929细胞产生细胞毒性,培养48 h后,A、B、D三组浸提液对L-929细胞产生了轻微的细胞毒性,细胞毒性为1级,C组浸提液未对L-929细胞产生细胞毒性。结论经唾液浸泡腐蚀后的矫治弓丝,可能会引起轻微的细胞毒性,其结果应引起临床医生的重视。