转录因子Foxp3和IL-10、TGF-β在小鼠衰老过程中的变化规律

目的:研究衰老进程中各年龄段小鼠外周单个核细胞Foxp3 mRNA表达差异及其与血清白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)的相关性。方法:选取SPF级健康雄性BALB/c小鼠24只,随机等分为2月龄组(青年)、6月龄组(中年)和15月龄组(老年),每组8只。采用流式细胞术检测分析小鼠脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+细胞水平,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR法检测外周PBMC中Foxp3 mRNA的表达,同时利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中IL-10和TGF-β水平,并分析三者之间及其与免疫衰老之间的相关性。结果:流式细胞术检测提示15月龄组脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+细胞比例较2月龄组明显增高(P0.01),15月龄组外周PBMC中Foxp3 mRNA的表达水平显著高于2月龄组(P0.01),15月龄组血清中IL-10和TGF-β的含量显著高于2月龄组(P0.01);15月龄组血清中IL-10和TGF-β含量与外周PBMC中Foxp3 mRNA的表达水平无相关性。结论:小鼠衰老过程中,可能存在有CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化增强的可能。在机体衰老进程中Foxp3 mRNA表达上调,抑制性细胞因子IL-10和TGF-β的生成增多,提示Foxp3、IL-10和TGF-β的表达提高可能参与了免疫衰老的发生机制。应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测Foxp3 mRNA表达水平简便、经济、可行。     

RT-qPCR检测人IL-6 mRNA的方法建立与运用

目的：建立实时定量检测人IL-6mRNA的方法并加以应用。方法：抽取人外周静脉血，EDTA抗凝，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，用Trizol裂解液提取总RNA，将总RNA逆转录为cDNA，然后用IL-6引物进行实时荧光定量PCR扩增，扩增体系中加入SYBR GreenⅠ。结果：该法检测IL-6 mRNA线性范围广。灵敏度高，特异性好，重复性好，方法简单。结论：该法可较为精确地定量IL-6 mRNA。     

实时定量PCR检测自身免疫中APRIL mRNA表达

建立检测增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法,了解自身免疫性疾病[系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)]患者外周血单个核细胞(PBMC)中APRIL的表达水平,研究APRIL mRNA的表达与自身免疫性疾病发病机制、预后之间的关系。方法构建克隆载体pGEM-T Easy-APRIL作为定量模板,Line Gene FQD-33A荧光定量PCR仪定量检测58例自身免疫性疾病(SLE、RA)确诊病人和20例正常健康献血者的外周血APRIL mRNA表达含量,以APRIL mRNA和内参GAPDH mRNA含量比值作为APRIL表达水平的指标。结果58例自身免疫病患者的APRIL mRNA表达范围3.95～192,均值为29.68±4.5。20例正常对照标本PBMC APRIL mRNA的表达范围3.1～18.7,均值为10.56±2.0。自身免疫病患者外周血中APRIL mRNA的表达水平高于正常对照组,其中久治不愈或疗效差者APRIL mRNA表达水平明显高于初发患者及治疗后缓解患者,但后两组差异无显著性意义。结论成功建立了人APRIL基因表达含量的SYBR GreenⅠ实时定量检测方法。自身免疫性疾病(SLE、RA)患者的APRIL mRNA的表达含量升高,其中疗效差久治不愈患者有更高表达水平。研究APRIL表达和自身免疫病发展、早期诊断、预后等相关性,为寻找自身免疫病治疗新靶点打下基础。     

实时定量PCR分析小鼠树突状细胞TLR4 mRNA表达及地塞米松的调节

目的: 建立检测小鼠Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ实时定量PCR实验; 观察小鼠骨髓源树突状细胞(DC)发育成熟过程中TLR4 mRNA表达水平的动态变化以及地塞米松(DEX)对DC TLR4 mRNA表达的影响.方法: (1)用细胞因子定向诱导的方法将小鼠骨髓细胞培养为DC; (2)构建pUCm-T/TLR4和pUCm-T/β-actin重组质粒, 建立检测小鼠TLR4 mRNA水平的实时定量PCR实验; (3)用实时定量PCR技术对体外培养4、 6、 8、 10、 12 d的DC TLR4 mRNA表达水平进行动态观察; (4)在DC培养体系中加入DEX, 与常规培养DC TLR4 mRNA表达水平进行比较.结果: (1)从小鼠骨髓细胞中成功诱导培养了DC, 经免疫磁珠纯化后其纯度可达90%以上; (2)建立了能精确分析小鼠TLR4 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ实时定量PCR实验; (3)在DC培养前期TLR4 mRNA表达水平变化不大, 后期则明显升高; (4)DEX可使DC TLR4 mRNA表达增强.结论: 小鼠骨髓源DC TLR4 mRNA表达水平与其发育成熟阶段密切相关; DEX促进DC TLR4 mRNA表达.     

慢性粒细胞白血病病人TCRζ链表达特点

目的:建立实时定量PCR方法检测TCRζ链表达水平的方法,了解慢性粒细胞白血病(CML)外周血TCRζ链表达水平.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR,相对定量检测30例CML患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-ΔΔCt计算CML病人与正常人TCRζ链表达差异倍数.结果:成功建立SYBR Green荧光实时定量PCR检测TCRζ链表达检测技术.18例CML患者TCRζ链出现表达低于正常人,而12例CML患者TCRζ链出现表达高于正常人.结论:CML病人中TCRζ链表达水平可分为表达下调(60%)和表达上调(40%)2组,提示部分CML病人的细胞免疫缺陷可能与其TCRζ链表达下调有关.     

LY294002对糖尿病肾病大鼠肾组织IL-1β与IL-6表达的影响

目的研究经静脉注射PI3K抑制剂LY294002对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织白介素-1β(IL-1β)与白介素-6(IL-6)表达的影响。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和PI3K抑制剂(LY294002)处理组。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测三组大鼠肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达;RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织IL-1βmRNA与IL-6mRNA的表达。结果 Western blot结果显示,模型组与LY294002处理组肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达量均显著高于假手术组(0.05),而LY294002处理组比模型组肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达量明显降低(0.05)。RT-PCR结果显示,与假手术组比较,模型组与LY294002处理组肾组织IL-1βmRNA与IL-6mRNA的表达量均显著升高(0.05),而LY294002处理组肾组织IL-1βmRNA与IL-6 mRNA的表达则明显低于模型组(0.05)。结论 PI3K抑制剂LY294002能够下调DN大鼠肾组织IL-1β与IL-6的表达。     

多发性骨髓瘤患者外周血CD3ε基因的表达特点

目的:建立荧光定量PCR法检测CD3ε链表达水平的方法,了解多发性骨髓瘤(MM)T细胞信号传导分子CD3ε基因的表达特点。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测22例MM患者及22例正常人外周血单个核细胞CD3ε基因的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,22例健康人作为对照,采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算MM患者CD3ε基因相对mRNA表达量。结果:MM患者和正常人外周血单个核细胞均表达CD3ε基因,具体表达量呈现很大的个体差异性。MM患者CD3ε基因mRNA相对表达量最高为39.78%,最低为0.48%,正常人CD3ε基因mRNA相对表达量最高为5.15%,最低为0.01%。MM患者CD3ε基因表达量明显高于正常人(P0.05)。结论:成功建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测CD3ε链表达水平的方法,率先报道了多发性骨髓瘤中CD3ε基因高表达的特点,为了解多发性骨髓瘤T细胞免疫学特点提供新的资料。     

SYBR Green Ⅰ联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义

目的探索SYBR GreenⅠ联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义。方法选择浓度为10^8.48、10^5.70和10^3.70copies/ml的3种HBV-DNA阳性血清和〈1×10^3.0copies/ml的阴性血清各1份,在TaqMan-PCR混合反应体系中加入SYBR Green Ⅰ组成双荧光PCR（TaqMan＋SYBR Green Ⅰ组）,同时进行TaqMan和SYBR Green Ⅰ的单荧光PCR（分别为TaqMan组和SYBR Green Ⅰ组）,设置同一PCR和熔解曲线的循环参数,检测HBV-DNA含量及其Tm,每种方法一次检测每份血清5次。结果TaqMan＋SYBR Green Ⅰ组检测的HBV-DNA阳性血清均为阳性,其平均含量为10^8.55±0.32、10^5.79±0.29、10^3.81±0.30,与TaqMan组的10^8.49±0.31、10^5.69±0.34、10^3.72±0.26copies/ml0.320.290.300.310.300.25对应浓度值取10对数比较,无统计学意义（t=0.31、0.54和0.27,P〉0.05）;与SYBR Green I组的10^8.41±0.35,10^5.21±0.34和10^3.26±0.26copies/ml（不含未检出的两次血清）比较,除高浓度外,中低浓度有统计学意义（t=2.90和0.340.262.62,P〈0.05）。TaqMan＋SYBR Green I组和SYBR Green Ⅰ组阳性血清均出现明显熔解曲线,熔解温度（Tm）分别为71.8℃、72℃和79.8℃,阴性血清未出现扩增曲线和Tm值。结论SYBR Green Ⅰ联合TaqMan-PCR检测HBV-DNA时,具有能维持TaqMan-PCR的高灵敏度、特异性更强,并能同时检测HBV-DNATm的特点,为HBV的DNA多态性分析,尤其是在HBV基因分型方面提供了新的检测思路。     

应用荧光定量PCR检测缺失型DMD携带者的研究

目的建立荧光定量PCR技术检测缺失型DMD携带者.方法应用9对引物扩增抗肌萎缩蛋白缺失热点区域,检测出常见的缺失型DMD患儿17例.用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术对缺失型DMD患儿家系中21例女性亲属进行检测.结果1例肯定携带者、11例可疑携带者和3例可能携带者证实为携带者;5例可疑携带者和1例可能携带者被排除.结论SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术是一种检测缺失型DMD携带者的准确、快速、简便的方法.     

高血压对急性心肌梗死患者血清IL-1β、IL-6及IL-8水平的影响

为探讨高血压对急性心肌梗死（AMI）患者血清白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）及白介素-8（IL-8）的影响。AMI患者67例,根据高血压病史分为非高血压组37例,高血压组30例,对照组28名,采用ELISA测定各组患者入院第24h、第14d及对照组的血清IL-1β、IL-6及IL-8水平。结果表明非高血压组患者的炎性因子水平于AMI发病第24h显著高于对照组（P〈0．001）,发病第14天炎症因子水平与对照组相比无显著性差异,高血压组患者AMI发病第24h、第14d血清炎症因子水平均显著高于非高血压组和对照组（P〈0．001）。结果显示,IL-1β、IL-6及IL-8参与了AMI的发病,但高血压对炎性因子的升高起到了关键作用。     

IL-27在Graves病患者外周血中的表达

为了探讨IL-27与Graves病发病的关系检测了Graves患者外周血单个核细胞中IL-27p28/EBI3mRNA的表达和外周血血清中IL-27的水平。收集Graves患者及健康对照者抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),采用实时定量PCR(real-time PCR)技术,检测IL-27p28/EBI3mRNA的表达;通过收集Graves患者及正常对照者外周静脉血,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中IL-27的水平。结果显示:1、与对照组相比,IL-27p28/EBI3mRNA在Graves患者外周血PBMC中的表达升高(P0.05)。2、Graves患者血清中IL-27水平较健康对照者升高(P0.05)。3、血清中IL-27水平与促甲状腺素受体抗体滴度之间无相关性(P0.05)。因此,我们推测IL-27参与了Graves的发病,未来仍需进一步的研究阐明IL-27在Graves中发挥的具体作用。     

外周血单核细胞中NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、IL-1β及IL-18表达水平与重症肺炎患者病情严重程度及预后的相关性分析

目的 探讨外周血单核细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体水平与重症肺炎患者病情严重程度及预后的相关性.方法 选取2018年5月至2020年8月期间我院收治的170例肺炎患者作为本研究对象,按病情程度将其分为普通肺炎组(n=90)和重症肺炎组(n=80).另同期选取在我院进行体检的健康人80例作为对照组.记录三组研究对象的一般资料(年龄、性别及体质量指数),三组对象均于入院当天进行采集其空腹8～12 h的外周静脉血,离心提取外周血单个细胞后,采用实时荧光定量PCR仪检测炎性小体NLRP3 mRNA及半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)mRNA水平;采用酶联免疫吸附法测定三组对象外周血的白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-18(IL-18)水平;采用Pearson分析重症肺炎患者NLRP3 mRNA与Caspase-1 mRNA、IL-1β及IL-18的相关性;采用接收者操作特征曲线(ROC)分析上述各临床指标对重症肺炎患者预后的评估效力.结果 与对照组相比,重症肺炎组和普通肺炎组NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、IL-1β及IL-18表达水平均有明显升高(P<0.05),且重症肺炎组NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、IL-1β及IL-18表达水平显著高于普通肺炎组(P<0.05);Pearson相关性分析中,NLRP3 mRNA与Caspase-1 mRNA表达水平、IL-1β及IL-18水平呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示,NLRP3预测重症肺炎患者预后的AUC为0.882(95％CI:0.796～0.967,P<0.001),明显高于IL-1β(AUC=0.851)及IL-18(AUC=0.860),此时NLRP3灵敏度为87.332％,特异性为84.251％.结论 在重症肺炎患者外周血中NLRP3、IL-1β及IL-18表达水平异常升高,且病情越严重上述指标表达水平越高,说明NLRP3、IL-1β及IL-18表达水平与重症肺炎患者病情严重程度及预后有密切相关性,可作为重症肺炎发生的早期预测指标,具有一定的临床治疗指导价值.     

脂肪源性干细胞移植对大鼠慢性坐骨神经缩窄性损伤IL-10和IL-1β表达的影响

目的探讨脂肪源性干细胞(ADSCs)移植对慢性坐骨神经缩窄性损伤(CCI)大鼠热痛阈和机械痛阈表达及坐骨神经中白介素-10(IL-10)和白介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法通过在坐骨神经上结扎四个松结制备实验CCI大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组和ADSCs组。ADSCs组尾静脉注射ADSCs细胞悬液,造模后14 d检测各组热痛阈和机械痛阈,实时荧光定量PCR检测坐骨神经IL-10和IL-1βm RNA表达。结果与正常组比较,模型组、ADSCs组热痛阈和机械痛阈显著降低,IL-10和IL-1βm RNA表达显著增高(0.01)。与模型组比较,ADSC组坐骨神经热痛阈、机械痛阈、IL-10 m RNA显著增高,IL-1βm RNA表达显著降低(0.01)。结论脂肪源性干细胞移植降低CCI神经性疼痛可能与调节CCI大鼠模型坐骨神经IL-10和IL-1β等抗炎症因子和前炎症因子的表达,上调热痛阈和机械痛阈相关。     

肾移植术后血清IL-18的动态监测及临床意义

目的:观察肾移植术后发生急性排斥反应、感染、环孢霉素A(CsA)中毒时血清白介素-18(IL-18)的变化, 探讨IL-18在急性排斥反应中的早期诊断及鉴别诊断的意义.方法:采用 ELISA法对90例肾移植患者手术前后的血清IL-18水平进行动态监测.结果:肾移植患者术前血清IL-18水平与健康对照组比较明显升高(P<0.01), 术后第1天明显升高, 10 d左右基本降至术前水平.发生急性排斥反应时, 血清IL-18持续升高, 经甲基强的松龙(MP)冲击有效后迅速下降, 治疗无效者, 血清IL-18持续在高水平.并发感染时, IL-18也显著升高, 与急性排斥反应组相比差别无显著性意义;而CsA中毒时, IL-18变化不明显.结论:动态监测IL-18有助于用于急性排斥反应的早期诊断和鉴别诊断.     

肾移植受者血清TNF-α、IL-6和sIL-2R水平变化及临床意义

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)在肾移植术后急性排斥反应中的变化。方法:采用固相酶标记化学发光免疫分析技术动态监测36例患者肾移植前后血清TNF-α、IL-6和sIL-2R水平,并结合临床资料作全面分析。结果:肾移植受者术后第1天血清TNF-α、IL-6和sIL-2R均明显升高,其中移植稳定组血清IL-6和sIL-2R第1天出现峰值后开始下降,而TNF-α则在术后5天达峰值后开始下降,至第10天均接近术前水平。急性排斥组血清TNF-α、IL-6和sIL-2R水平与肾功能稳定组比较,差异有显著性(P<0.05),抗排斥治疗有效后迅速下降。而环孢素A中毒组与稳定组比较,差异无显著性(P<0.05)。结论:肾移植术后受者血清TNF-α、IL-6和sIL-2R水平的检测,可在一定程度上反映肾移植受者的免疫反应状态,并为急性排斥反应的监测和诊断提供客观依据。     

生长激素对SD大鼠子宫内膜容受性的影响

目的 观察生长激素对着床期SD大鼠子宫内膜整合素αvβ3(Itgαvβ3)及骨桥蛋白(OPN)表达的影响,以探讨改善子宫内膜容受性的方法.方法 随机将50只雌性SD大鼠平均分成两组,对照组为生理盐水(NS)组,实验组为生长激素(GH)组.取发现阴栓后第4天子宫内膜,用免疫组织化学技术检测子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达,同时首次通过SYBR Green嵌合荧光实时定量PCR技术检测子宫内膜上述两种因子mRNA的表达.结果 GH组子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达呈强阳性,对照组表达弱于GH组,两组差异有统计学意义(Itgαvβ3:77.33±4.23比92.56±16.80,0PN:71.75±8.77比80.73± 13.00,均P＜0.05).实时荧光定量PCR结果与免疫组织化学结果相符.结论 生长激素可以增强着床期子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达,可能可改善子宫内膜容受性,提高临床妊娠率.     

偏执型精神分裂症外周血IL-1β、TNF-α和酪氨酸羟化酶的mRNA表达水平

目的检测偏执型精神分裂症患者白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和酪氨酸羟化酶(TH)的基因表达水平,探讨偏执型精神分裂症的外周神经免疫机制.方法采用RT-PCR和半定量技术,分别检测39例偏执型精神分裂症患者和30例正常对照外周血单个核细胞IL-1β、TNF-α和TH的基因表达水平.结果显示病例组的IL-1β、TNF-α、TH基因表达水平均显著高于正常对照组(P＜0.01).且对照组IL-1β和TNF-α基因表达水平显著相关(r=0.847,P＜0.01);IL-1β和TH基因表达水平相关性较为显著(r=0.666,P＜0.01).病例组只有IL-1β和TNF-α基因表达水平表现为显著的相关(r=0.942,P＜0.01).结论偏执型精神分裂症患者可能存在致炎性细胞因子和儿茶酚胺类神经递质的过度表达;儿茶酚胺类神经递质和致炎性细胞因子的基因表达之间可能具有一种交互机制,而偏执型精神分裂症患者的这种交互机制发生了紊乱.     

应用SYBR GreenⅠ实时荧光聚合酶链反应检测SpA患者人类白细胞抗原-B27

目的评价SYBR GreenⅠ实时荧光聚合酶链反应检测人类白细胞抗原-B27。方法对65例SpA患者和100例健康人群,分别以PCR-SSP和SYBR GreenⅠ荧光PCR检测外周血HLA-B27 DNA进行检测,比较两种检测方法。结果丳CR-SSP检测HLA-B27阳性样本呈现135bp和268两个条带,阴性标本仅有268bp一条条带。SYBR GreenⅠRT-PCR检测结果示,阳性标本的熔解曲线呈现HLA-B27的90.37℃和β-globin的86.71℃两个Tm峰,阴性标本仅有β-globin一个Tm峰;侾CR-SSP和SYBR GreenⅠRT-PCR结果符合率为100%;僑pA患者和健康人的HLA-B27阳性率分别为70.76%和6%。结论 SYBR GreenⅠRT-PCR是一种可靠、快速的检测HLA-B27方法。     

癫痫大鼠血清和脑组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平变化

目的:探讨白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对癫痫的神经免疫调节作用及卡马西平(CBZ)对它的影响。方法:180只Wistar大鼠随机分为对照组、红藻氨酸(KA)组和CBZ组,后两组再按癫痫发作后的不同时点分为6个亚组(1h、4h、12h、24h、48h和72h);以KA建立癫痫模型,采用放射免疫分析(RIA)测定IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化。结果:癫痫发作后72h内,血清和脑匀浆液中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化不同;在不同时点,KA和CBZ组的三者水平均明显高于对照组(P<0.01或P<0.05),同时,CBZ组的三者水平明显低于KA组(P<0.01)。结论:癫痫大鼠免疫系统处于活化状态,细胞因子水平的失衡可能参与了癫痫的免疫病理过程;CBZ对癫痫具有一定的免疫抑制作用。     

荧光定量-逆转录-聚合酶链反应测定IL-2mRNA和IL-4 mRNA方法的建立及其应用

目的建立荧光定量-逆转录-聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）测定TH细胞中IL-2 mRNA和IL-4 mRNA方法，并作临床初步应用。方法制备IL-2 cDNA和IL-4 cDNA，分别构建含有人IL-2基因和叫基因片段的pMD18-T质粒，克隆后作为定量阳性模板；设计和制备用于FQ-RT-PCR的引物和FAM、TAMRA标记的探针，优化实验条件，建立FQ-RT-PCR方法；用固相单抗方法从健康人、妇科良性疾患和恶性肿瘤患者以及慢性肾功能衰竭（cRF）患者PBMC中富集CD4（TH）细胞，经PMA和calcium ionophore诱导，提取总RNA，继用所建FQ-RT-PCR方法，作IL-2 mRNA和IL-4 mRNA定量测定。实验设阻actin为内控基因以监测RNA的质量。结果根据系列模板浓度的对数与CT值作直线回归建立标准曲线，线性范围为10^2～10^7copies/μl；不精密度试验显示，高值样品的批内、批间CV分别为7．8％和12．5％，低值样品的批内、批间CV分别为10．8％和19．5％；妇科恶性肿瘤患者与健康对照组和妇科良性疾患组比较，CRF患者与健康对照组比较，IL-2 mRNA表达均显著降低，IL-4 mRNA表达均显著升高（P〈0．001）。结论用所建立的FQ-RT-PCR法可对TH细胞内IL-2 mRNA和IL-4 mRNA作定量测定，方法简便、敏感、准确；妇科恶性肿瘤患者和CRF患者TH细胞内IL-2mRNA和IL-4 mRNA表达有明显的极化现象，呈TH2反应，提示恶性肿瘤患者和CRF患者TH细胞功能处于失衡状态。可通过改善和调整TH细胞的失衡提高恶性肿瘤患者的免疫监视功能和纠正CRF患者免疫紊乱。