逆行隔离灌注化疗可减轻对大鼠肝脏的毒性及药物的泄漏

目的 采用大鼠肝脏隔离灌注模型探讨逆行隔离灌注(RIHP)较顺行隔离灌注(IHP)能否减少正常肝组织损伤及化疗药物外周泄漏率.方法 将90只体重300～350 g雄性SD大鼠随机分为A、B、C三组,每组30只:A组为空白对照组,经肝动脉及门静脉灌注乳酸林格液,以下腔静脉为灌注液流出道;B组行IHP,经肝动脉灌注含有350 mg/kg的氟尿嘧啶(5-Fu),门静脉灌注乳酸林格液,以下腔静脉为灌注液流出道;C组行RIHP,经肝动脉灌注含有350 mg/kg的氟尿嘧啶(5-Fu),经下腔静脉灌注乳酸林格液,以门静脉为灌注液流出道.术后1、3、5、7 d分别行血清ALT测定及肝组织病理学检查;高效液相色谱分析仪检测B、C组术中外周血药浓度.结果 三组术后3 d存活率分别为90.0%、86.7%和90.0%,三者差异无统计学意义.三组血清ALT均在术后第一天达到峰值,A组为(481.6±207.6)μmol/L;B组为(1641.6±658.0)μmol/L;C组为(913.0±353.5)μmol/L.B、C组均显著高于A组(P＜0.05);B组显著高于C组(P＜0.05).B组与C组术中外周血药浓度峰值分别为(131.2±29.4)μg/ml和(65.3±28.4)μg/ml.两组外周浓度有显著性差异(P＜0.05).A组术后肝脏病理改变较轻,术后7 d基本恢复正常;B组术后肝脏病理学改变相对严重,术后7 d局部仍可见坏死灶;C组术后肝脏病理改变后较A组严重,但较B组轻,术后7 d基本恢复正常.结论 RIHP较之IHP能够显著减轻化疗药物对正常肝组织的毒副作用和药物的外周泄漏,有望成为一种对肝癌更加有效安全的区域化疗方法.     

大鼠膀胱内灌注~(125)I脱氧尿嘧啶核苷的药代动力学及组织分布

目的探讨125I-脱氧尿嘧啶核苷(125I-UdR)在大鼠膀胱内灌注后药代动力学及组织分布情况。方法将8只SD大鼠随机分成2组,每组4只。A组每只大鼠单纯125I-UdR(7.5MBq/kg体重)膀胱内灌注给药,B组每只大鼠单纯125I-UdR(7.5MBq/kg体重)经尾静脉注射给药。连续采集血液,用γ计数仪测定其放射性;12只SD大鼠随机分为3组,每组4只。每只膀胱内灌注125I-UdR1.5MBq,经0.5、2、24h后分组处死,取相关脏器后测量放射性计数。结果膀胱灌注125I-UdR后的大鼠体内代谢符合二房室分布模型,按化学剂量100μg/kg体重灌注后测得,平均T1/2α为3.34h,T1/2β为36.78h,Cmax为0.54μg/L,Tmax为1.72h。静脉注射125I-UdR后的大鼠体内代谢符合一房室分布模型,按化学剂量100μg/kg体重静注后测得,平均T1/2为0.09h,Cmax为14.55μg/L,Tmax为0.00h,膀胱灌注的绝对生物利用度F为38.46%。膀胱灌注后125I-UdR主要分布在大鼠膀胱,肝脏,脾脏中。结论125I-UdR用于膀胱灌注可以提高局部组织药物浓度,延长其在靶器官的滞留时间,并可减少对周围组织的毒副作用。     

经皮选择性肝脏隔离灌注化疗的实验研究

目的探讨经皮选择性肝脏隔离灌注化疗的可行性及隔离效果。方法将12只猪随机分为两组:HAI组6头,进行常规经肝动脉灌注化疗;PSIHP组6头,利用介入放射学方法进行经皮选择性隔离肝脏灌注化疗结合血液灌流。化疗药物选用5-FU。分别检测肝静脉及外周血液中的血药浓度,并对肝组织行病理学检查。结果HAI组右肝静脉血和外周静脉血浓度峰值分别为(4082.530±415.213)mg/L,(1682.230±216.834)mg/L;PSIHP组右肝静脉血、外周静脉血血药浓度峰值分别为(5321.711±517.318)mg/L,(510.834±52.518)mg/L。两组间有显著性差异(P<0.01)。PSIHP组过滤后肝静脉血血药浓度峰值为(1192.063±114.864)mg/L,碳肾率过滤达到(77.6±0.9)%。PSIHP组灌注区域肝脏组织损害程度比HAI组大。结论PSIHP是一种简单有效的肝脏隔离灌注化疗技术,与常规经肝动脉灌注化疗相比,不仅可以增加局部血药浓度,更可以降低外周的血药浓度,降低毒副作用。     

5-氟尿嘧啶腹腔内缓释化疗的家兔门静脉血药浓度测定

目的:测定5-氟尿嘧啶(5-FU)腹腔内缓释化疗后家兔门静脉血中的药物浓度。方法:以家兔为模型分别行5-FU静脉化疗、腹腔化疗和缓释化疗,用高效液相色谱法测定门静脉血中的5-FU浓度。根据各组门静脉血浓度-时间曲线,计算曲线下面积(AUC)。结果:缓释化疗组家兔门静脉血药浓度最高值出现在给药后2h左右,达0.82μg/ml,但持续时间较长,且随时间延长门静脉血药浓度变化较小,在给药16d后仍可测出。腹腔化疗组给药后15min门静脉血5-FU浓度达20.67μg/ml,但持续时间短,24h后浓度极低。AUC静脉组=21.57(μg/ml·h),AUC腹腔组=42.85(μg/ml·h),AUC缓释组=70.08(μg/ml·h)。结论:5-FU腹腔内缓释化疗延长了门静脉血中有效浓度的持续时间,增强了对肝脏的化疗效果。     

氟尿嘧啶经胃左动脉和外周静脉化疗的药代动力学比较

目的探讨胃左动脉区域灌注化疗治疗胃癌的合理性.方法比较氟尿嘧啶(5-FU)经胃左动脉和外周静脉给药后的药代动力学变化.结果胃左动脉给药组的门静脉血中5-FU浓度为外周静脉给药组的4～200倍,而且5-FU高浓度的维持时间明显延长;癌组织和癌旁淋巴组织中5-FU水平分别为静脉给药组的19倍和23倍.结论胃左动脉区域灌注化疗可明显增加癌肿局部的化疗药物浓度,提高化疗疗效.     

经肝动脉区域肝脏隔离灌注的研究

目的　研究幼猪经肝动脉区域隔离肝灌注的效果。　方法　14只幼猪随机分为2组:对照组(7只):采用经肝动脉灌注;实验组( 7只):左肝动脉及左肝静脉插管,进行左肝区域隔离肝灌注。灌注液为氨甲喋呤溶液(1mg/kg), 灌注时间为60min。于灌注5、10、20、30、45、60min时分别抽取外周血、肝脏灌注区域血、肝脏未灌注区域血(实验组)测定血药浓度; 灌注后切取左肝及右肝组织进行病理检查。　结果　在所有时间点, 实验组肝脏灌注区域氨甲蝶呤的血药浓度明显高于非灌注区和外周血(P<0. 01), 60min时最高, 达( 40. 211±3. 756 )μg/ml, 而非灌注区和外周血中仅为(1. 584±0. 347)μg/ml和(0. 773±0. 096)μg/ml。实验组灌注区域血药浓度均高于对照组肝脏血药浓度(P<0. 01), 60min时分别达(40. 211±3. 756)μg/ml和(4. 498±1. 643)μg/ml。实验组灌注区浓度-时间曲线下面积为218. 295μg/ml,而在对照组肝脏仅为260. 860μg/ml。病理检查提示两组灌注肝脏均有肝细胞浊肿、气球样细胞,但实验组肝脏灌注区域肝细胞坏死率为85. 7% (6 /7),明显高于对照组28. 6% (2 /7)。实验组肝脏未灌注区域无明显病理损害。　结论　动物实验证实经肝动脉区域隔离肝灌注是一种灌注及隔离效果好、肝功能损害小的区域化疗方法。     

预输注经5-FU处理的同种异基因淋巴细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的初步研究

目的探讨预输注5-FU处理的同种异基因淋巴细胞对大鼠肝移植免疫耐受的影响。方法实验分4组,均行Wistar大鼠至SD大鼠的肝移植。对照组:仅行肝移植;单纯淋巴细胞组:受体术前第7天与第4天各输注Wistar大鼠淋巴细胞(5×106个/ml)悬液1ml;低浓度5-FU+淋巴细胞组:受体术前第7天与第4天各输注经7.5μg 5-FU诱导过的Wistar大鼠淋巴细胞(5×106个/ml)悬液1ml;高浓度5-FU+淋巴细胞组:受体术前第7天与第4天各输注经15μg 5-FU诱导过的Wistar大鼠淋巴细胞(5×106个/ml)悬液1ml。术后第7天处死SD大鼠观察移植肝的病理改变。结果低浓度5-FU+淋巴细胞组受体大鼠的肝组织病理改变呈急性轻度排斥反应,肝细胞条索状排列基本整齐,肝小叶结构存在;中央静脉血管周围少量炎性细胞浸润;汇管区少量淋巴细胞浸润。对照组肝组织呈急性重度排斥反应。单纯淋巴细胞组和高浓度5-FU+淋巴细胞组肝组织呈急性中度排斥反应。结论 预输注经低浓度5-FU处理的同种异基因淋巴细胞可以较好地诱导大鼠肝移植免疫耐受。     

同种异体肝细胞移植促进大鼠肝纤维化逆转

目的 探讨肝细胞移植对大鼠肝纤维化的改善作用及其机制.方法 经腹腔注射四氯化碳制备的肝纤维化Wistar大鼠接受正常Wistar大鼠肝细胞移植(实验组),另以不接受肝细胞移植的肝纤维化大鼠(肝纤维化组)和接受肝细胞移植的正常Wistar大鼠(移植对照组)为对照.肝细胞移植于注射四氯化碳后21 d进行.分别于移植前及移植后第1、2、7和14天采集抗凝血(肝纤维化组同步采集),测定血浆总转化生长因子β1(TGF-β1)、活性TGF-β1、纤溶酶及α2-巨球蛋白(α2M)水平,并取其肝脏,进行肝脏的纤维成像和定量分析,检测肝脏星形细胞活性.结果 肝细胞移植后的第14天,实验组肝脏内成胶原纤维面积百分比为(3.69±0.44)%,低于肝纤维化组的(8.25±0.69)%(P＜0.01);实验组肝内α-SMA阳性信号面积百分比为(0.43±0.03)%,明显低于肝纤维化组同期的(2.79±0.40)%(P＜0.01).移植前实验组大鼠血浆中总TGF-β1和活性TGF-β1水平分别为(4543.2±307.2)μg/ml和(2380.7±150.8)μg/ml,移植后1 d,二者均显著下降,分别为(2109.9±425.2)μg/ml(P＜0.01)和(1758.9±429.2)μg/ml(P＜0.05).实验组肝细胞移植前血浆纤溶酶水平为(5.16±0.42)μg/ml,移植后下降至(2.96±0.11)μg/ml(P＜0.01).实验组肝细胞移植前血浆α2M水平为(152.4±27.6)mg/ml,移植后升高至(343.0±48.8)mg/ml,为移植前的2倍,而移植对照组的α2M水平移植后升高30余倍.结论 肝细胞移植能有效改善大鼠肝纤维化,其机制可能与肝内活性星形细胞减少及TGF-β1水平降低有关.     

抑制Caspase-8基因表达对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用

目的 观察抑制半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶8(Caspase-8)基因的表达对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用.方法 构建针对大鼠Caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.将Lewis大鼠随机分为3组,每组8只.(1)假手术组:麻醉后,取腹部正中切口,缝合关腹;(2)磷酸盐缓冲液(PBS液)组:阻断肝门血流前48 h经门静脉注射PBS液1 ml,然后行肝脏缺血再灌注;(3)shRNA组:阻断肝门血流前48 h经门静脉注射Caspase-8 shRNA 50 μg(总体积为1 ml),然后行肝脏缺血再灌注.肝脏缺血再灌注的方法为阻断大鼠70%入肝血流40min.于再灌注6 h、12 h、24 h、3 d、5 d、7 d时检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;检测肝组织中Caspase-8 mRNA的表达、细胞凋亡情况、丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS液组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h,血清中ALT和AST水平显著降低(P<0.05);肝组织中Caspase-8 mRNA水平、肝细胞凋亡指数(shRNA组和PBS液组分别为22.33%±4.28%和35.24%±2.33%)以及肝组织中MDA含量[shRNA组和PBS液组分别为(94.5±11.2)nmol/mg和(133.5±12.4)nmol/mg]均显著降低(P<0.05),而肝组织中SOD活性显著升高[shRNA组和PBS液组分别为(21.6±3.7)U/mg和(12.2±3.1)U/mg,P<0.05].结论 通过RNA干扰Caspase-8基因的表达可以抑制肝细胞凋亡的发生,减轻肝脏缺血再灌注损伤.     

大鼠膀胱内灌注125 Ⅰ脱氧尿嘧啶核苷的药代动力学及组织分布

目的探讨^125Ⅰ-脱氧尿嘧啶核苷（^125Ⅰ-UdR）在大鼠膀胱内灌注后药代动力学及组织分布情况。方法将8只SD大鼠随机分成2组，每组4只。A组每只大鼠单纯^125Ⅰ-UdR（7．5MBq／kg体重）膀胱内灌注给药，B组每只大鼠单纯^125Ⅰ-UdR（7．5MBq／kg体重）经尾静脉注射给药。连续采集血液，用7计数仪测定其放射性；12只SD大鼠随机分为3组，每组4只。每只膀胱内灌注^125Ⅰ-UdR1．5MBq，经0．5、2、24h后分组处死，取相关脏器后测量放射性计数。结果膀胱灌注^125Ⅰ-UdR后的大鼠体内代谢符合二房室分布模型，按化学剂量100μg／kg体重灌注后测得，平均T1／2α为3．34h，T1／2β为36．78h，Cmax为0．54μg/L，Tmax为1．72h。静脉注射^125Ⅰ-UdR后的大鼠体内代谢符合一房室分布模型，按化学剂量100μg/kg体重静注后测得，平均T1／2为0．09h，Cmax为14．55μg／L，Tmax为0．00h，膀胱灌注的绝对生物利用度F为38．4696。膀胱灌注后找^125ⅠUdR主要分布在大鼠膀胱，肝脏，脾脏中。结论^125Ⅰ-UdR用于膀胱灌注可以提高局部组织药物浓度，延长其在靶器官的滞留时间，并可减少对周围组织的毒副作用。     

不同给药途径下表阿霉素在大鼠胰腺及血浆中分布的差异

目的 使用静脉推注和区域性动脉灌注两种给药途径,研究表阿霉素在大鼠胰腺和血液中的分布。方法 经颈静脉推注表阿霉素或经髂外动脉插管至腹腔干动脉及肠系膜动脉,行胰腺区域性动脉灌注,剂量均为７．５ｍｇ／ｋｇ体重。用高效液相色谱法测定血浆及胰腺组织中表阿霉素的含量。结果 区域性动脉灌注给药上升２１．６９％。结论 与静脉推注法比较,区域性动脉灌注法可提高胰腺组织中表阿霉素的浓度。     

In vivo isolated liver perfusion technique in a rat hepatic metastasis model: 5-fluorouracil concentrations in tumor tissue

An in vivo method of isolated rat liver perfusion was developed with true vascular isolation and recirculating perfusate. This new surgical technique to temporarily isolate the liver vascularly, and the perfusion procedure are described in depth. Twelve inbred WAG/RIJ rats were subjected to 25 min of normothermic liver perfusion without chemotherapy, and all rats survived the procedure. Hepatic functional and histological integrity were not significantly altered during perfusion. To determine the role of isolated liver perfusion (ILP) as a means of improved targeting of antitumor agents, 5-fluorouracil (5-FU) concentrations were monitored in hepatic tumor and liver tissues and in systemic plasma using high-performance liquid chromatography. Fifty-one rats with hepatic tumors of colonic origin were randomly assigned to one of three dosage groups (20, 40, or 80 mg/kg) receiving 5-FU by ILP, hepatic artery infusion (HAI), or jugular vein infusion (JVI). ILP resulted in significantly increased 5-FU concentrations in liver tissue. However, no significant differences were found in tumor tissue concentrations of 5-FU between the three treatment modalities. 5-FU concentrations in tumor tissue increased as a function of the dose with ILP, HAI, and JVI. ILP was associated with the lowest systemic drug concentrations. The low systemic 5-FU concentrations with ILP suggest a higher maximum tolerable dose. This mode of treatment deserves to be studied further in our model before conclusions can be drawn regarding its therapeutic potential.     

The measurement of hepatic circulation before and after orthotopic liver transplantation in dog--by using transit-time blood flow meter and H2 clearance method

Orthotopic liver transplantation was successfully carried out in 40 mongrel dogs, in which hepatic circulation was investigated before and after grafting. Blood flows in hepatic artery, portal vein and intrahepatic inferior vena cava were measured by using transit-time ultrasonic blood flow meter and regional tissue blood flow was determined by hydrogen gas clearance method. Before transplantation the mean blood flows were 234 +/- 95mg/min in portal vein, 118 +/- 76ml/min in hepatic artery and 291 +/- 103ml/min in inferior vena cava in 40 recipients. The blood flow ratio of portal vein and hepatic artery was 2.9 +/- 2.2. The mean regional blood flow of the liver was 63 +/- 24ml/min/100g. After transplantation, the mean blood flows decreased to 189 +/- 86ml/min in portal vein, 77 +/- 51ml/min in hepatic artery and 179 +/- 111ml/min in inferior vena cava and the regional tissue blood flow was 57 +/- 25ml/min/100g. Hepatic arterial flow decreased by 37 percent after transplantation, however, portal venous flow decreased by 24 percent and the regional blood flow decreased by 9 percent after transplantation of the liver. These data suggested that the microcirculation of the liver was slightly disturbed after liver transplantation in dog, which was in part due to the decreased blood flows of the hepatic artery and portal vein.     

门静脉高压症动物模型血流动力学的CT灌注成像研究

目的 探讨CT灌注成像监测肝硬化门静脉高压症(PHT)门静脉压力变化的应用价值.方法 采用门静脉主干缩窄联合硫代乙酰胺溶液喂养诱导建立比格犬肝硬化门静脉高压症模型,分别对PHT组和对照组比格犬行螺旋CT肝脏灌注成像扫描,用去卷积法计算肝脏各血流灌注参数,开腹后采用玻璃水柱法测定两组比格犬的门静脉压力,并将相应指标进行统计学分析.结果 ①对照组门静脉压力为(14.5±2.2) cm H2O,PHT组门静脉压力为(23.1±2.8)cm H2O,两组之间相比差异具有统计学意义(t=-8.979,P＜0.05).②对照组与PHT组肝血流量分别为(112±14)ml·100 g-1·min-1和(96±11)ml·100 g-1·min-1;肝血容量分别为(10±3)ml·100 g-1和(11±5)ml·100 g-1;平均通过时间分别为(7.1±2.0)s和(10.4±3.5) s;肝动脉分数分别为(24%±5%)和(37%±6%);肝动脉灌注量分别为(27±6)ml·100 g-1·min-1和(35±5)ml·100 g-1·min-1;门静脉灌注量分别为(85±13)ml·100 g-1·min-1和(61±11)ml·100 g-1·min-1,统计结果显示两组除肝血容量外其余各参数之间相比差异均有统计学意义(P＜0.05).③PHT组门静脉压力与门静脉灌注量、肝血流量之间呈负相关,与平均通过时间、肝动脉分数之间呈正相关,其中与门静脉灌注量相关性最显著(r=-0.842),两者关系的直线回归方程为Y=36.624-0.219X.利用门静脉压力与门静脉灌注量的直线回归方程计算PHT组比格犬门静脉压力为(23.2±2.4)am H2O,与手术实测的门静脉压力(23.1±2.8)cm H2O具有良好的相关性(r=0.843,P＜0.05).结论 肝脏CT灌注成像为无创、有效监测门静脉压力提供了一种新途径.

Abstract：

Objective To evaluate perfusion computed tomography in the assessment of portal vein pressure changes in an experimental dog model of liver cirrhosis and portal hypertension.Methods The canine model of cirrhosis and portal hypertension was induced by portal vein stenosis with combination of systemic thioacetamide(TAA) feeding in drinking water.All of the Beagles in control group and cirrhotic group underwent hepatic perfusion on a spiral CT scanner.The parameters of hepatic perfusion were calculated by the method of deconvolution.The portal vein pressure was measured by a laparotomy surgery.Results ① In control group, the portal vein pressure was ( 14.5 ± 2.2) cm H2O, while it was (23.1 ± 2.8) cm H2O in PHT group, there was significant difference in the portal vein pressure between the two groups (P＜0.05).② The blood flow(BF) was (112 ±14) ml·100 g-1·min-1 in controls, while ( 96 ± 11) ml·100 g-1·min-1 in PHT group; the blood volume ( BV ) in control group and PHT group was (10 ±3) ml·100 g-1 and (11 ± 5) ml· 100 g-1, respectively; the mean transit time( MTT) was (7.1 ± 2.0) s and (10.4 ± 3.5) s, respectively; the hepatic arterial fraction (HAF) was ( 24 ± 5) % and ( 37 ± 6)% , respectively; the hepatic arterial perfusion (HAP) was(27 ±6) ml·100 g-1·min-1 and (35 ±5) ml·100 g-1·min-1, respectively; the portal venous perfusion (PVP) was (85 ± 13) ml·100 g-1·min-1 and (61 ±11) ml·100 g-1·min-1, respectively.There was significant difference in all parameters between the two groups except the parameter BV(P ＜ 0.05).③ In PHT group, the PVP and BF were negatively correlated with the portal vein pressure, while positively correlated with MTT and HAF.Portal vein pressure was negatively correlated with PVP, the equation, Y = 36.624 -0.219X, was deduced with linear regression analysis, by which the portal vein pressure in PHT Beagles was ( 23.2 ± 2.4) cm H2O, which was correlated with the observed by laparotomy value (23.1 ± 2.8) cm H2O (r = 0.843, P ＜ 0.05).Conclusion CT perfusion is a new non-invasive and effective method for assessment of portal vein pressure.     

控制性低中心静脉压对兔肝缺血再灌注损伤的影响

目的 评价控制性低CVP对兔肝缺血再灌注损伤的影响.方法 新西兰大白兔32只,随机分为4组(n=8):假手术组(S组)、控制性低CVP组(L组)、肝缺血再灌注组(IR组)和控制性低CVP下肝缺血再灌注组(LIR组).L组静脉输注硝酸甘油10～30μg·kg~(-1)·min~(-1)和多巴胺30～40μg·kg~(-1)·min~(-1),在5 min内使CVP降至4～5 cm H_2O且维持MAP≥90 mm Hg,持续至再灌注6 h.IR组采用夹闭肝门30 min后再开放的方法建立肝缺血再灌注模型.LIR组在控制性低CVP模型制备成功后立即进行肝缺血再灌注.分别于实施控制性低CVP前(T_0,基础状态)、再灌注即刻(T_1)、30 min(T_2)、1 h(T_3)、2 h(T_4)、4 h(T_5)、6 h(T_6)时采用彩色超声多普勒诊断仪测定门静脉、肝动脉和肝静脉的血流速度,同时采集动脉血样,测定血浆AST和ALT的活性.于再灌注6 h时,取肝组织,电镜下观察细胞超微结构.结果 与S组比较,L组各时点门静脉、肝动脉、肝静脉的血流速度、血浆AST和ALT的活性差异无统计学意义(P＞0.05),IR组T_(1～5)时肝动脉血流速度减慢,T_(5,6)时肝静脉血流速度增快,血浆AST和ALT的活性升高,LIR组T_(1～6)时肝静脉血流速度度增快,T_(1～6)时血浆AST和ALT的活性升高(P＜0.05);与IR组比较,LIR组T_(1,2)时肝动脉血流速度增快,T_1～6时肝静脉血流速度增快,T_(1,4～6)时血浆ALT和AST的活性降低(P＜0.05).与IR组比较,LIR组肝细胞线粒体及窦周间隙面微绒毛的肿胀程度减轻,肝血寞窦壁覆盖完整.结论 控制性低CVP可减轻兔肝缺血再灌注损伤,其机制可能与增加再灌注期间肝血流量,减轻肝细胞及肝血窦损伤,从而改善肝灌注有关.     

Isolated in situ liver perfusion with high dose 5-fluorouracil in the pig

A method of isolated liver perfusion (ILP) was developed in pig with a pump-oxygenator and a specially designed catheter. The procedure lasted 60 minutes at room temperature 4 pigs were subjected to perfusion without chemotherapy. 3 survived the procedure with transient elevation of GOT and AKP but with no distinct alterations of GPT, r-GT, total bilirubin, and no pathologic signs of permanent hepatic damage. Nine pigs received a high dose (200 mg/kg) of 5-fluorouracil (5-FU) by ILP. 5-FU concentrations of the blood sampled from the hepatic vein and systemic vein were monitored using high-performance liquid chromatography. The average concentrations of 5-FU in the hepatic vein and the systemic vein were 1671.6 micrograms/ml and 5.1 micrograms/ml respectively during perfusions. Three died shortly after perfusion, and 6 survived. Moderate elevations of GPT, GOT, GAKP, and mild decreases of WBC and platelets were noted at the early stage. These abnormalities returned back to normal within 6 days. Liver biopsies showed a few scattering clusters of hepatocellular degeneration and necrosis in surviving animals. Six pigs received 5-FU at a dose of 200 mg/kg through femoral vein and all died within 2 days. It was found that this method was reliable and feasible in regional liver chemotherapy using high dose of 5-FU.     

组织转谷氨酰胺酶特异性抑制剂预防肝纤维化的实验研究

目的 观察组织转谷氨酰胺酶(tTG)特异性抑制剂六甲烯胺对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化形成的影响.方法 雄性SD大鼠100只,按随机数字表法分成正常对照组(20只)、肝纤维化组(40只)、六甲烯胺组(40只).用腹腔内注射CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,在注射CCl4的前2 d开始腹腔内注射六甲烯胺(112 mg·kg-1·d-1),直到注射CCl4的第4、8周处死大鼠,摘取肝脏并提取血清,应用RT-PCR检测tTG、α-平滑肌抗体(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)等基因的mRNA表达情况,应用Western blot检测tTG和α-SMA蛋白的表达,肝功能和肝脏组织中羟脯氨酸的含量,同时取大鼠肝脏行组织学检查,并对肝纤维化程度进行半定量计分系统分级评分.采用单因素方差分析检测结果.结果 CCl4注射8周后,肝纤维化组肝损伤明显,ALT、总胆汁酸、Tbil、羟脯氨酸、tTG、α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白酶、TIMP-1分别为(1313±157)U/L、(99.9±18.5)μmol/L、(10.9±1.6)μmol/L、(55±12)μg/g、145.6±51.2、130.3±44.6、211.3±75.1、162.4±53.5;而六甲烯胺处理后,肝纤维化程度、肝功能指标均显著降低,ALT、总胆汁酸、Tbil、羟脯氨酸、tTG、α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白酶、TIMP-1分别为(378±87)U/L、(61.0±12.7) μmol/L、(9.8±1.7)μmol/L、(70±14)μg/g、48.6±12.3、40.7±12.3、63.9±16.0、59.2±23.4.结论 六甲烯胺能通过抑制tTG途径显著改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度.     

序贯应用四种不同颜色的非放射性彩色微球测定器官血流量

目的 探讨以4种颜色的非放射性彩色微球(粉、黄、白、紫)序贯测定同一种动物经历4种不同腹腔内压状态时的脏器血流量的可行性及准确性.方法 雄性Wistar大鼠6只,通过腹腔内加压气囊建立0、5、10、15 mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa)等4种腹腔内压状态,分别以IAPx(x=0、5、10、15)表示.每次持续加压10 min,即通过左心室导管注入相应地注入粉色、黄色、白色、紫色中的一色微球.抽取参比血样后立即输注同等量的同种异体血.腹压去除后,间隔15 min.每只大鼠均依次经历4种不同的腹压状态.实验结束,静脉注入饱和氯化钾处死大鼠,并收集组织标本.标本经过碱性组织液消化、超声细胞破碎仪破碎、DMF染料提取及吸光度值测定.依照组织血流量(Qt)[ml／(min·g)]=组织吸光度值(At)×参比血样的血流量(Qb)/参比血样吸光度值(Ab)公式,用以计算脏器血流量.结果 微球于血液内分布均一,4组不同腹腔内压下左、右肾之间血流量差异无统计学意义( F=0.177,P＞0.05),[左肾血流量:(2.02±0.47)、(1.39±0.62)、(0.81±0.24)、(0.22±0.09) ml/( min·g);右肾血流量:(2.23±0.26)、(1.38 ±0.61)、(0.89±0.31)、(0.24±0.09) ml/(min·g)]具有明显相关(P＜0.01,R=0.687).随腹腔内压力的增加,肝脏等腹腔内脏器血流量下降明显[肝动脉血流量:(0.16±0.05)、(0.15 ±0.03)、(0.10±0.03)、(0.02±0.01) ml/(min·g)];门静脉血流量:(1.73±0.41)、(1.19±0.21)、(0.83±0.18)、(0.38 ±0.08)ml/( min·g)].而心、脑等重要脏器血流量在腹腔内压力处于一定范围内(5～10 mm Hg),能够在一定程度上得以维持,当腹腔内压力升至15 mm Hg时,心、脑等脏器血流量亦表现为下降趋势[心脏血流量:(2.56±0.95)、(1.69±0.95)、(1.44±0.41)、(0.71 ±0.24) ml/(min·g);大脑血流量:(0.49±0.09)、(0.22±0.07)、(0.22±0.06)、(0.19±0.02)ml/(min·g).微球回收率为(92.0±7.1)％.结论 非放射性彩色微球能够完成测定4种不同腹压状态下大鼠多脏器血流量改变,是一种准确可行的血流动力学检测方法,可用于研究同一动物经历不同状态后血流动力学的变化,对于小型动物尤为适用.     

腹腔镜肝左外叶供肝获取术中供肝血管影像学解剖特征及其临床意义

目的探讨腹腔镜肝左外叶供肝获取术中供肝血管的影像学解剖特征及临床意义。方法采用回顾性描述性研究方法。收集2016年10月至2018年12月复旦大学附属华山医院收治的39例活体肝移植供者的临床资料;男10例,女29例;年龄为(31±7)岁。同时收集39例活体肝移植受者的临床资料;男26例,女13例;年龄为8个月(4~68个月)。供者术前常规行腹部增强X线计算机体层摄影术检查、三维血管重建判断供肝血管解剖情况。供者均施行腹腔镜肝左外叶供肝获取术。观察指标:(1)术前影像学检查三维血管重建情况。(2)手术情况。(3)随访情况。采用门诊方式对受者进行随访,了解受者肝移植后并发症情况。随访时间截至2019年10月。正态分布的计量资料以±s表示,组间比较采用t检验。偏态分布的计量资料以M(范围)表示。计数资料以绝对数或百分比表示。结果(1)术前影像学检查三维血管重建情况。39例供者术前影像学检查三维血管重建显示肝动脉和肝静脉解剖学特征包括:①肝动脉情况为11例供者存在肝中动脉,其中5例起始于肝右动脉,3例起始于肝右动脉和肝左动脉汇合处,3例起始于肝左动脉。2例供者肝左动脉解剖变异,均存在副肝左动脉,起始于胃左动脉。26例供者无肝中动脉,肝左动脉无解剖变异。②肝静脉情况:9例供者肝左静脉和肝中静脉分别汇入下腔静脉。7例供者存在肝左静脉左上缘支。23例供者肝左静脉与肝中静脉共干汇入下腔静脉。(2)手术情况。①39例供者均成功施行腹腔镜肝左外叶供肝获取术,手术时间为(160±32)min,术中出血量为(142±74)mL。②11例有肝中动脉供者中,8例为肝左动脉优势型,留取肝左动脉用于肝移植术中肝动脉吻合重建,3例肝中动脉起始于肝左动脉,留取肝左动脉和肝中动脉共干用于肝移植术中肝动脉吻合重建。2例肝左动脉解剖变异供者中,1例为副肝左动脉优势型,1例为肝左动脉优势型,分别留取副肝左动脉和肝左动脉用于肝移植术中肝动脉吻合重建。其余26例供者留取肝左动脉用于肝移植术中肝动脉吻合重建。③39例供者中,11例术中行肝左静脉优先入路,28例术中行非肝左静脉优先入路。肝左静脉优先入路供者手术时间和术中出血量分别为(147±22)min和(110±44)mL,非肝左静脉优先入路供者上述指标分别为(169±33)min和(154±81)mL,两者上述指标比较,差异均有统计学意义(t=4.19,2.81,P<0.05)。(3)随访情况。39例受者均获得术后10个月的随访,随访期间未出现肝动脉吻合口出血、狭窄,以及由肝动脉供血不良引起的缺血性胆管损伤和胆道狭窄等并发症,也未出现肝静脉流出道狭窄相关并发症。结论腹腔镜肝左外叶供肝获取术前影像学检查三维血管重建可发现肝中动脉和肝左动脉解剖变异,指导手术入路的选择。腹腔镜肝左外叶供肝获取术对于符合条件的供者推荐采用肝左静脉优先入路,可缩短手术时间、减少术中出血量。