血液透析中氧化应激及其预防

一、氧化与抗氧化的平衡 氧化和抗氧化的平衡是维持人体内环境稳定的必要因素。生理状态下,白细胞膜上的还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶复合体处于静止状态,受到外来刺激时,NADPH被激活,进一步活化细胞质膜上的氧化酶复合体,发生呼吸爆炸,同时释放出大量的氧自由基(ROS),如超氧阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(OH·)、次氯酸等,这些物质协同作用清除外来抗原物质。然而,如果人体内产生     

活性氧与耳蜗氧化损伤关系的研究进展

活性氧（reactive oxygen species，ROS）是还原氧化产生的、并在分子组成上含有氧的一类化学性质非常活泼的物质的总称，包括自由基（O2^-、OH^-、NO^-、OONO^-、R等）和过氧化氢（H2O2）。正常情况下，ROS与耳蜗内抗氧化防御系统，如超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、过氧化氢酶（catalase，     

糖尿病肾病的抗氧化治疗

糖尿病肾病是糖尿病严重的并发症,至今其发病机制尚未完全阐明,氧化应激可能起重要作用[1]。糖尿病患者由于代谢紊乱,自由基产生增多;同时高糖还可以影响清除自由基的各种抗氧化酶的活性及表达,也可以导致自由基水平升高,升高的自由基可以损伤肾脏组织。1氧化应激在糖尿病肾病中的作用1.1氧化应激概述机体在利用氧元素时生成活性氧代谢产物,是具有不配对电子的分子、离子或基团,主要包括超氧阴离子自由基(O2-)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(OH·)等,被称为氧自由基或活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)。机体内存在两类自由基防御系统…     

红细胞内peroxiredoxin-2抗氧化作用研究进展

红细胞没有细胞核,是特殊的体细胞,在机体运输氧气和二氧化碳中起重要作用。红细胞携氧导致红细胞不断暴露于内源性和外源性活性氧族(ROS)所引起的氧化损伤中。由于红细胞没有细胞器,不能合成新蛋白以替代损伤的蛋白质,因此红细胞建立了强大的抗氧化及损伤修复系统来及时清除ROS并保护细胞免受过氧化损伤。硫氧还蛋白过氧化物酶(Prx2)是红细胞内含量最丰富的抗氧化蛋白,能清除红细胞内内源性低浓度的过氧化氢(H2O2),在红细胞抗氧化损伤中起非常重要的作用。     

谈维生素C对甘油三酯(TG)测定结果的干扰

近年来，在临床生物化学检验中，酶比色测定法的应用越来越广泛。许多项目的测定都使用工具酶参与的反应，常用的是利用葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶、甘油氧化酶等测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯等的酶法Trinder反应，即H2O2偶联过氧化物酶反应。是利用较高特异性的氧化酶产生过氧化氢（H2O2），再加氧化发色剂比色。该酶法的单试剂一步终点法，操作简便、快速准确、微量、试剂稳定，在半自动生化分析仪上的使用更是普及。但在实际工作中，却存在一些物质对该反应的干扰，给测定结果带来一定的分析误差。本文作者对一定浓度的维生素     

抗氧化酶交联的多聚血红蛋白对H_2O_2引起的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨交联了抗氧化酶的聚合人血红蛋白对过氧化氢(hydrogenperoxide,H2O2)引起的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法按照对细胞处理方法的不同,分为正常对照组、单加H2O2组、抗氧化酶交联的多聚血红蛋白(PolyHb-SOD-CAT)+H2O2组、多聚血红蛋白(PolyHb)+H2O2组、单加PolyHb-SOD-CAT组和单加PolyHb组,化学比色法检测细胞内还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Ca2+浓度,免疫组化技术检测核转录因子NF-kB在细胞内的分布,RT-PCR技术检测血红素氧化酶(heme oxygenase,HO-1)、内皮型一氧化氮合酶(endothelialnitric oxide synthase,eNOS)的mRNA表达情况,流式细胞术检测细胞死亡情况。结果与对照组相比,单加H2O2组的GSH浓度为(0.006 4±0.003 9)mmol/L,Ca2+浓度为(690.05±145.11)nmol/ml,NF-kB大量位移入核,HO-1、eNOS的mRNA表达量上升,细胞死亡率高;而与单加H2O2组比,PolyHb-SOD-CAT+H2O2组的GSH浓度为(0.0214±0.009 8)mmol/L,Ca2+浓度为(172.43±24.09)nmol/ml,NF-kB绝大部分仍位于胞浆内,HO-1、eNOS的mRNA表达量明显降低,细胞死亡率下降。结论PolyHb-SOD-CAT能够抑制H2O2引起的血管内皮细胞氧化损伤。     

一例非血缘脐血造血干细胞移植治疗慢性肉芽肿患儿的护理

正小儿慢性肉芽肿病(CGD)是致死性遗传性白细胞功能缺陷,临床主要特征为由于某种原因吞噬细胞NADPH氧化酶缺乏,导致宿主吞噬细胞系统产生的活性氧、H2O2产生减少,杀菌功能缺陷[1]。患儿对各种过氧化氢酶阳性菌属,如葡萄球菌、沙雷菌、曲酶属等高度敏感,反复发生慢性细菌感染,感染局部形成慢性肉芽肿。以皮肤、肺及淋巴结广泛肉芽肿性损害为特点。发病多在2岁以内,少数可晚至10岁以后。     

NADPH氧化酶与肺损伤研究进展

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide—adenine clinucileotide phosphate，NADPH)氧化酶在肺炎症反应、缺血／再灌注损伤、肺血管平滑肌和内皮细胞增生的病理生理过程中起着关键性的作用。该酶激活后产生大量活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)参与多种细胞内信号转导途径，引发炎症反应，细胞增殖等过程，导致急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)及肺动脉高压等病理生理改变。     

不同浓度PKA抑制剂对血小板凋亡的诱导作用及机制

目的:探讨不同浓度PKA抑制剂H89对血小板凋亡的诱导作用和机制。方法:取健康志愿者外周静脉血分离血小板,选择不同浓度梯度的PKA抑制剂H89与经洗涤的血小板共同孵育,应用酶联免疫吸附试验、流式细胞术等检测不同浓度PKA抑制剂H89对血小板线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,Δψm)、磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的影响。结果:不同浓度PKA抑制剂H89均能诱导血小板发生Δψm去极化和PS暴露,但高浓度(100μmol/L) PKA抑制剂H89可诱导血小板产生ROS,而中低浓度则不会诱导血小板内ROS的产生,并且多种ROS抑制剂均可抑制高浓度H89诱导的凋亡。结论:高浓度的PKA抑制剂H89能诱导血小板凋亡,但是作用机制不同于中低浓度。     

晚期糖基化终产物刺激单核细胞产生活性氧的信号传导机制

目的 ：探讨晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGE）诱导单核细胞产生活性氧的机制。方法采用密度梯度离心法分离健康成人外周血单核细胞,经AGE修饰的人血清白蛋白（AGE-HSA）刺激后,用化学发光法测定活性氧（reactive oxygen species,ROS）的生成;分别应用超氧化物歧化酶（SOD）、NADPH氧化酶特异性抑制剂apocynin、抗AGE受体（RAGE）抗体预处理单核细胞,观察AGE-HSA刺激单核细胞生成ROS的变化。结果 AGE-HSA可以诱导单核细胞产生ROS。SOD可以有效的清除AGE刺激单核细胞后分泌的大量的ROS;抗RAGE抗体、apocynin通过阻断AGE与RAGE的结合及抑制NADPH氧化酶的活性可以有效地抑制ROS产生。结论 AGE可通过RAGE激活NADPH氧化酶产生ROS。     

ICAM-1在急性膀胱扩张诱导的大鼠肾氧化损伤中的作用机制研究

目的 探讨血管紧张素Ⅱ-1型(AT1)受体介导的细胞间黏附分子1(ICAM-1)在急性膀胱扩张(AUBD)导致大鼠肾氧化损伤中的作用及机制。方法 30只雌性SD大鼠根据随机数字表法分为对照组、AUBD组、AUBD+血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)组,每组10只。对照组大鼠只进行充盈性膀胱测压。AUBD组大鼠用2倍正常膀胱容量充盈膀胱2 h,在排空后1 h进行充盈性膀胱测压。AUBD+ARB组大鼠在膀胱排空前10 min肾内注射2mg/kg的AT1受体阻断剂缬沙坦,其余处理同AUBD组。检测各组大鼠膀胱顺应性、不稳定收缩频率以及膀胱和肾组织中活性氧(ROS)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶和过氧化物酶含量,苏木精-伊红染色和免疫组化检测各组大鼠肾形态学、巨噬细胞浸润和ICAM-1表达。结果 与AUBD组(0. 018±0. 006 ml/cm H2O)对比,AUBD+ARB组(0. 057±0. 014 ml/cm H2O)大鼠膀胱顺应性显著增加,而不稳定收缩频率(6. 81±1. 405次/10 min vs. 2. 65±0. 813次/10 min)显著降低,差异均具有统计学意义(P 0. 05)。与过度充盈前对比,AUBD组(0. 114±0. 013 ml/cmH2O vs. 0. 018±0. 006 ml/cmH2O)和AUBD+ARB组(0. 113±0. 020 ml/cm H2O vs. 0. 057±0. 014 ml/cm H2O)大鼠过度充盈后膀胱顺应性显著降低,而不稳定收缩频率(AUBD组:0. 56±0. 019次/10 min vs. 6. 81±1. 405次/10 min; AUBD+ARB组:0. 43±0. 027次/10 min vs. 2. 65±0. 813次/10 min)显著增加,差异均具有统计学意义(P 0. 05)。与对照组对比,AUBD组大鼠膀胱和肾组织中ROS(膀胱:215. 72±36. 81;肾:141. 93±12. 75)、NADPH氧化酶(膀胱:9. 46±1. 28 ml/cm H2O;肾:5. 34±1. 21 ml/cm H2O)和过氧化物酶(膀胱:4. 85±0. 91μmol·min-1·g-1;肾:4. 85±0. 91μmol·min-1·g-1)含量显著增加,AUBD组(ROS:膀胱1 146. 29±59. 45,肾846. 48±43. 71; NADPH氧化酶:膀胱17. 39±1. 53,肾19. 62±1. 68;过氧化物酶:膀胱27. 47±3. 16μmol·min-1·g-1,肾27. 47±3. 16μmol·min-1·g-1)显著低于AUBD+ARB组(ROS:膀胱597. 66±46. 84,肾511. 64±49. 69; NADPH氧化酶:膀胱12. 74±1. 55μmol·min-1·g-1,肾9. 51±1. 07μmol·min-1·g-1;过氧化物酶:膀胱6. 44±1. 15 U/mgprot,肾4. 46±1. 08 U/mgprot),差异均具有统计学意义(P 0. 05)。与AUBD组相比,AUBD+ARB组大鼠肾小管病变缓解。与对照组对比,AUBD组大鼠肾组织F4/80阳性率和ICAM-1阳性率显著增加,AUBD组显著低于AUBD+ARB组,差异均具有统计学意义(P 0. 05)。结论 AUBD可导致肾氧化损伤,其机制可能与激活AT1介导的ICAM-1表达有关。     

NADPH氧化酶NOX家族与疾病的关系

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶的非吞噬细胞氧化酶(non-phagocytic cell oxidase,NOX)家族是许多非吞噬细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的主要来源。正常状态下,通过该途径产生的ROS作为信号分子参与了细胞分化、增殖、凋亡等的调节,但在环境胁迫下,NOX蛋白家族在感受细胞外信息刺激时,能够迅速活化产生过量的ROS,引起的氧化压力会诱导机体多种疾病的发生、发展。本文主要从NADPH氧化酶NOX家族蛋白的结构、活化、功能及与疾病发生、发展的关系等方面进行简述。     

姜黄素与银杏内酯B联合三氧化二砷在治疗白血病中对心肌细胞氧化损伤保护的作用比较

目的 研究比较银杏内酯B与姜黄素联合三氧化二砷(As2O3)治疗白血病过程中对心肌细胞氧化损伤的保护作用.方法 对人白血病细胞株NB4进行培养,设立对照组、As2O3组、银杏内酯B组及姜黄素组.对照组:原营养液继续培养;As2Oa组:加入As2O3 2μmol/L;银杏内酯B组:加入As2O3 2 μmol/L+银杏内酯B 0.1mmol/L;姜黄素组:加入As2O3 0.5 μmol/L+姜黄素50 μmol/L.以分光光度法检测超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX),流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果 经姜黄素、银杏内酯B干预后的NB4细胞超微结构都能得到明显改善,姜黄素、银杏内酯B均显著提高了NB4细胞内ROS、SOD含量及GSH-PX活力,姜黄素组较银杏内酯B组显著提高NB4细胞内ROS、SOD含量及GSH-PX活力(P＜0.01).结论 姜黄素、银杏内酯B均可联合As2O3,上调机体ROS、SOD水平,提高GSH-PX的活性,拮抗自身氧化损伤,姜黄素对心肌细胞氧化损伤的保护作用优于银杏内酯B,为进一步提高白血病临床疗效打开了新思路.     

ALDH2基因导入对K562细胞增殖和抗氧化损伤的影响

目的 克隆人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因,研究ALDH2基因导入慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞后对其增殖和抗氧化损伤的影响.方法 从肝细胞中克隆人ALDH2基因,构建真核表达载体,用脂质体法将其导入K562细胞中,用RT-PCR和Western blot法检测ALD-H2基因的表达,锥虫蓝拒染法和MTT法检测转基因组细胞的增殖水平及对氧自由基引起的氧化损伤的反应;在此基础上,利用RT-PCR以及荧光分光光度法进一步检测氧自由基诱导后转基因组细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)的表达和细胞内活性氧类(ROS)的产生.结果 成功克隆人ALDH2基因并将构建的真核表达载体转染K562细胞,RT-PCR和Western blot法检测到ALDH2的高表达.锥虫蓝拒染法和MTT结果显示转基因组细胞增殖水平明显高于对照组(P＜0.05),经基因修饰的细胞对H2O2耐受性增高,H2O2的IC50值提高了7.8倍(IC50值分别为12.3μnol/L和1.4 μmol/L,P＜0.01).HO-1的表达和ROS的产生随H2O2浓度的增大而增加,而一定浓度H2O2诱导后HO-1的表达和ROS的产生在转基因组中显著低于对照组(P＜0.05).结论 ALDH2基因导人K562细胞后可增加对氧自由基引起的细胞损伤的耐受性,起到保护作用,该过程伴随着ROS水平以及HO-1表达的降低.     

以DA-64为色原酶法测定糖化血清蛋白

目的研制、评价以N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-二(甲基氨基)-联苯胺[DA-64]为色原酶法测定糖化血清蛋白试剂盒,以用于血清中糖化血清蛋白的测定。方法糖化血清蛋白被蛋白酶消化产生果糖氨基酸,果糖氨基酸氧化酶作用于果糖氨基酸产生H2O2,H2O2在过氧化物酶的催化下与色原DA-64反应,使DA-64转变为一种绿色的产物,此产物含量与样本中糖化血清蛋白含量成正比。结果该法线性范围为6-1800μmol/L,平均回收率为100.9%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为0.025、0.041,与Diazyme Laboratores酶法测定试剂比较具有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=0.994X 3.88,r=0.9790,P>0.05。76例健康人糖化血清蛋白为195.80-295.52μmol/L(x±2s)。配制的果糖氨基酸氧化酶法液体试剂在2-8℃保存至少稳定6个月。结论用以DA-64为色原果糖氨基酸氧化酶法试剂盒测定糖化血清蛋白方法简便、灵敏可靠,适合临床应用。     

钙调蛋白抑制剂诱导血小板GP Ⅰ bα酶切的分子机制研究

目的 探讨钙调蛋白抑制剂在GP Ⅰ bα酶切中的作用和分子机制.方法 取健康志愿者静脉血5份[(10 ml/(人)份],分离得到洗涤血小板3 ml/份,将洗涤血小板分别与Calpain抑制剂、活性氧(ROS)拮抗剂、NAD(P)H氧化酶抑制剂、线粒体ROS拮抗剂或溶剂对照(DMSO)等预孵育,再与钙调蛋白抑制剂W7孵育;流式细胞仪检测GPⅠ bα表达、胞内Ca2+和ROS浓度;Western blot检测GP Ⅰ bα酶切产物、Calpain底物talin的酶切.结果 W7浓度依赖地引起血小板胞内Ca2+浓度升高,Ca2+平均荧光强度DMSO为52±9,而W7在25、50和100μmol/L时分别为121±17、225±23和308±25;W7浓度依赖地诱导血小板ROS产生,与DMSO比较,W7在25、50和100μmol/L时诱导的ROS相对浓度分别为150±11、209±20和297±18;ROS拮抗剂和Calpain抑制剂单独使用时都部分抑制W7诱导的GPⅠ bα酶切,联合使用时则完全抑制W7诱导的GP Ⅰ bα酶切.结论 钙调蛋白抑制剂通过活化Calpain和产生ROS共同调控ADAM17介导的GP Ⅰ bα酶切.     

姜黄素对氧化应激条件下心肌细胞线粒体的保护作用

目的探讨姜黄素对氧化应激条件下心肌细胞线粒体的保护作用。方法体外培养H9c2心肌细胞,分为正常对照组、过氧化氢(H_2O_2)组、姜黄素组(姜黄素预处理)。除对照组外,其余各组用H_2O_2处理6 h,建立心肌细胞氧化应激损伤模型。姜黄素组建模前30 min加入相应浓度的姜黄素。6 h后MTT观察H9c2心肌细胞存活率;分光光度计检测细胞培养液中培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性和线粒体中丙二醛(MDA)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)活性;流式细胞仪检测线粒体膜电位;酶标仪检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量及ATP酶;激光共聚焦观察细胞内活性氧(ROS)和活性氮簇(RNS)的产生;透射电镜观察线粒体的形态结构。结果姜黄素可以显著提高氧化应激条件下H9c2心肌细胞存活率。与对照组相比,H_2O_2组线粒体及线粒体嵴水肿增加,密度降低,呈空泡化,LDH和CK-MB水平显著升高(P0.05),ROS、RNS和线粒体内MDA水平显著升高(P0.05),SOD、ATP、线粒体钠钾ATP酶(Na+k+-ATPase)和钙镁ATP酶(Ca~(2+)Mg~(2+)-ATPase)活性水平及线粒体膜电位显著降低(P0.05)。与H_2O_2组相比,姜黄素组线粒体及线粒体嵴水肿减轻,密度增加,空泡化程度减轻,LDH和CK-MB水平显著降低(P0.05),ROS、RNS和线粒体内MDA水平显著降低(P0.05),SOD、ATP、线粒体Na+k+-ATPase和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATPase活性水平及线粒体膜电位显著增加(P0.05)。结论姜黄素可以减轻氧化应激条件下H9c2心肌细胞的线粒体损伤,其机制可能与清除细胞内氧化应激产物,增强线粒体内抗氧化酶活性有关。     

NAD（P）H氧化酶及其基因多态性对心脑血管疾病的作用

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NAD（P）H）是人体中重要的生物分子,而NAD（P）H氧化酶催化NAD（P）H的反应产物为超氧阴离子（superoxideanion,·O2^-）,后者在维持机体免疫、代谢、血管生理功能等诸多方面都具有关键作用。NAD（P）H氧化酶基因多态性的发生可影响到酶生物活性功能,进而引发机体相应生理、病理反应的改变。     

抗氧化纳米材料在急性肾损伤治疗中的应用进展

临床上急性肾损伤(AKI)具有高发病率、高病死率的特点,而肾脏中过量活性氧(ROS)的产生是AKI的主要原因。为了抑制代谢异常状态下肾脏中ROS的异常增多,具有高抗氧化活性、高肾脏靶向性和高生物相容性的抗氧化纳米材料被研制和使用。本文对相关研究进行总结,重点选择了多金属氧酸盐(POMs)、石墨烯量子点(h-GQDs)、超小RuO₂纳米酶(RuQ₂NPs)和肾靶向纳米复合物NPs等几种新型纳米材料,对其抗氧化能力、作用机制等进行综述,结果显示抗氧化纳米材料在清除过量氧、抑制氧化应激反应方面具有明显效果,能够为临床预防AKI的产生和提升治疗效果带来更多选择。     

以DA-64为色原酶法测定糖化血清蛋白

目的 研制、评价以N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-二(甲基氨基)-联苯胺[DA-64]为色原酶法测定糖化血清蛋白试剂盒,以用于血清中糖化血清蛋白的测定.方法 糖化血清蛋白被蛋白酶消化产生果糖氨基酸,果糖氨基酸氧化酶作用于果糖氨基酸产生H2O2,H2O2在过氧化物酶的催化下与色原DA-64反应,使DA-64转变为一种绿色的产物,此产物含量与样本中糖化血清蛋白含量成正比.结果 该法线性范围为6-1800 μmol/L,平均回收率为100.9%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为0.025、0.041,与Diazvme Laboratores酶法测定试剂比较具有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=0.994X+3.88,r=0.9790,P＞0.05.76例健康人糖化血清蛋白为195.80-295.52 μmol/L((x)±2s).配制的果糖氨基酸氧化酶法液体试剂在2-8 ℃保存至少稳定6个月.结论 用以DA-64为色原果糖氨基酸氧化酶法试剂盒测定糖化血清蛋白方法简便、灵敏可靠,适合临床应用.