肝癌细胞系MHCC97亚群中甲胎蛋白的表达差异

目的：探讨甲胎蛋白（AFP）在不同肝癌细胞亚群中的表达差异．方法：应用流式细胞荧光激活分选法将肝癌细胞分成边缘群（SP）及非边缘群（Non—SP）2个细胞亚群,采用免疫细胞化学方法观察AFP在2个不同肝癌亚群中的表达变化及含量．结果：SP细胞仅占细胞总体的1．8％,SP细胞AFP表达明显高于Non—SP细胞（P〈0．01）．结论：AFP在肝癌细胞中表达有差异,强阳性多数分布在SP细胞亚群中,进一步证实了肿瘤的异质性．     

原代大鼠边缘群肝细胞的分离及端粒酶活性分析

目的:通过检测端粒酶活性(TMA)在原代大鼠边缘群及非边缘群肝细胞中表达差异,探讨边缘群细胞是否具有肝脏干细胞的部分特征. 方法:原位两步胶原酶法分离大鼠肝细胞. 应用流式荧光激活细胞分选术(FACS)将肝细胞分成边缘群(SP)及非边缘群(Non-SP),并定量分析两群细胞中TMA水平. 结果:存在SP细胞并占细胞总体2.1%,SP细胞TMA高于Non-SP细胞(28.1±1.3 vs 2.0±0.2 TPG,P＜0.01). 结论:大鼠边缘群肝细胞具有更强的自我更新能力,即具有干细胞的部分特征.     

MHCC97中边缘群细胞的成瘤性及其侵袭性观察

目的:分离肝癌细胞系MHCC97中边缘群细胞并观察其成瘤性和侵袭性.方法:利用流式细胞荧光激活分选法将肝癌细胞系MHCC97分成边缘群(SP)和主群(MP)细胞两个亚群. 对两个亚群细胞分别采用软琼脂克隆形成实验和裸鼠成瘤试验观察其体内外成瘤能力;Transwell小室法检测两个亚群细胞的体外侵袭力.结果:SP细胞的体外克隆形成率为57%,MP细胞仅为13%;1×103个SP细胞可在4 wk后形成明显的皮下移植瘤(2/8),MP细胞则需1×105个才能成瘤(2/8). Transwell侵袭试验结果显示,SP表型细胞穿过人工基底膜的细胞数为(66.6±4.0)个,MP表型细胞仅为(18.2±1.9)个.结论:肝癌细胞系MHCC97中SP亚群的成瘤性和侵袭性均强于MP亚群细胞,表明SP表型的细胞在肝细胞癌的生长、转移中具有重要的地位.     

大鼠肝癌细胞表面特标记与成瘤能力有关

目的:研究大鼠肝癌细胞表面标记特征与成瘤能力关系. 方法:二乙基亚硝胺为诱癌剂制造大鼠肝癌模型,分离培养肿瘤细胞,按照卵圆细胞表面标记(CD34,c-Kit,Thy-1,AFP,CK7,CK8,CK14,CK18,CK19和GGT)分选肿瘤细胞,比较各个表面标记阳性肿瘤细胞亚群与阴性肿瘤细胞亚群移植裸鼠后成瘤能力差异,并且对数稀释成瘤能力强的细胞亚群,分析低密度下强成瘤能力细胞亚群与相应阴性细胞亚群成瘤差异. 结果: CD34,Thy-1,CK7,CK8,AFP和GGT等6个标记的阳性与阴性肿瘤细胞移植裸鼠后,成瘤能力差异显著(P<0.05或0.01);1/100～1/10细胞密度的CK7阴性与AFP阳性细胞亚群成瘤能力仍然比其对应细胞亚群为高. 结论:大鼠原发性肝癌肿瘤细胞中存在成瘤能力差异巨大的肿瘤细胞亚群. CK7(-)和AFP( ),可能是大鼠肝癌干细胞的部分表面标记特征.     

MDA-MB-453细胞中分离CD44+/CD24-/low和SP细胞及其Wnt和Notch通路状态分析

目的:通过分离人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)过表达乳腺癌细胞MDA-MB-453中的CD44 /CD24-/low和SP(side population)细胞亚群,探索其干细胞表型,同时分析其SP细胞亚群与wnt和Notch信号传导通路中的关键蛋白([β-catenin和Notch-1)基因扩增的关系,研究其SP细胞亚群与HER2和人类表皮生长因子3(human epidermal growth factor 3,HER3)基因扩增的相关性.方法:应用流式细胞技术,检测HER2过表达乳腺癌细胞MDA-MB-453和HER2阴性细胞MCF-7是否存在CD44 /CD24-/low细胞亚群和SP细胞亚群.应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法检测MDA-MB-453细胞中母β-catenin和Notch-1的基因扩增情况,粗略比较在MDA-MB-453细胞及其SP细胞亚群中β-catenin,Notch-1,HER2和HER3蛋白基因扩增量的差异.结果:MDA-MB-453细胞系未检测到CDM44 /CD24-/low细胞亚群,但可检测出SP细胞亚群.在MDA-MB-453细胞和MCF-7细胞均可扩增到β-catenin和Notch-1.β-catenin和Notch-1的基因扩增在MDA-MB-453细胞中低于其SP细胞哑群;然而,HER2和HER3的基因扩增在两个细胞亚群中是类似的.结论:SP细胞能够富集MDA-MB-453乳腺癌干细胞.wnt和Notch信号通路在MDA-MB-453细胞中处于开放激活状态,这些信号传导通路可能与MDA-MB-453乳腺癌干细胞的维持和活性相关.     

人肺腺癌细胞系(LAC)中SP细胞亚群的分选及其干细胞特性分析

目的: 分选人肺腺癌细胞系(LAC)中SP细胞(side population cells)亚群并分析其具有的干细胞特性?方法:运用流式细胞荧光激活分选技术(FACS)分选LAC中SP细胞亚群和非SP细胞亚群,利用MTT?体外克隆形成和皮下移植瘤试验分析其体内?外增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期及细胞分化,RT-PCR方法检测其ATP结合盒转运蛋白(ABCG2)基因的表达情况?结果:流式细胞荧光激活分选结果显示:LAC中含有约1.88%的SP细胞亚群?MTT和体外克隆形成试验表明:SP细胞亚群的体外增殖能力显著强于非SP细胞亚群?同时,裸鼠皮下接种SP细胞亚群,其体内成瘤能力也要显著强于非SP细胞亚群?流式细胞仪分析结果表明:SP细胞亚群的G0/G1期比例显著高于非SP细胞(P < 0.05)?细胞分化实验结果表明:两个亚群中SP细胞比率分别为(1.46±0.08)%和(0.12±0.04)%?RT-PCR结果显示:ABCG2基因mRNA在SP细胞亚群中的表达水平是其在非SP细胞亚群中的3.3倍(P < 0.05)?结论:利用LAC中SP细胞亚群具有肺癌干细胞的特性,流式细胞荧光激活分选肺腺癌SP细胞亚群可能是分离肺腺癌干细胞的有效方法?     

乳腺癌骨转移瘤中干细胞样肿瘤细胞的分离及其MDR1、ABCG2的表达研究

目的对乳腺癌骨转移瘤干细胞样肿瘤细胞(类SP细胞)进行分选,检测MDR1、ABCG2在乳腺癌骨转移瘤细胞分选亚群中的蛋白表达差异。方法应用Rho123结合流式细胞分选术(FCA)对乳腺癌骨转移原代细胞进行Rho123low和Rho123high亚群分选,采用western-blot方法检测MDR1、ABCG2蛋白在2个亚群中的表达状况。结果在乳腺癌骨转移瘤原代细胞中存在Rho123low和Rho123high2个亚群,2个亚群细胞中MDR1、AB-CG2蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用Rho123结合FCA可在乳腺癌骨转移瘤原代细胞中分选出具有干细胞特性的Rho123low亚群(类SP细胞)。     

人肝病变组织低分子量角蛋白CK19的表达

目的 研究低分子量角蛋白CK19在人肝细胞癌、肝癌前病变、肝硬化组织中的表达状况及意义。方法 采用免疫组织化学SP法检测56例细胞癌、8例肝硬化及9例正常肝组织中CK19的表达。结果 56例肝癌旁不典型增生组中异型增生细胞及卵圆细胞的CK19表达率（51.9%)显著高于癌旁非不典型组中肝细胞的表达率（17.2%),但与肝癌组织的表达率差别不大。肝硬化组中CK19的表达率为37.5(3/8)阳性细胞均为卵圆细胞及异型增生细胞,结论 肝细胞癌和增生的卵圆细胞及异型增生肝细胞表达CK19,提示CK19可做为判断肝细胞异型增生的一个指标,肝细胞癌CK19表达与其组织学类型有密切关系。     

Huh7细胞中边缘群细胞分选及其增殖分裂能力的研究

目的:探讨Huh7细胞中边缘群细胞的分选及边缘群细胞在增殖及分裂能力方面与非边缘群细胞的差异,为肝癌的治疗探索新的思路。方法:采用流式细胞仪分选Huh7细胞中的边缘群细胞和非边缘群细胞,用荧光显微镜观察其胞内Hoechst33342荧光染色强度差异;以半定量RT-PCR测定ABCG2 mRNA表达水平的差异;应用免疫荧光染色检测ABCG2蛋白表达的差异并观察其增殖和不对称分裂能力的差异。结果:非维拉帕米处理组边缘群细胞比例约为2.22%,经维拉帕米阻断后边缘群细胞比例减少至0.74%;边缘群细胞中Hoechst33342的荧光强度明显较非边缘群细胞弱,在边缘群细胞中ABCG2 mRNA表达水平是非边缘群细胞的4.32倍(P<0.01),增殖能力是非边缘群细胞的2.7倍(P<0.01),且边缘群细胞能产生ABCG2(+)和ABCG2(-)子代细胞,而非边缘群细胞只能产生ABCG2(-)子代细胞。结论:Huh7细胞中存在少量边缘群细胞(2.22%),其增殖能力较非边缘群细胞强且具有不对称分裂能力(自我更新和定向分化),具有肿瘤干细胞的特性;因此边缘群细胞分选可以作为肿瘤干细胞分离的一种方法,并且在肿瘤的耐药和进展...     

人肺腺癌A549细胞系SP细胞亚群的分选及初步探讨

目的：探讨一种简单有效的分离肺癌干细胞的方法。方法：用免疫组化方法检测人肺腺癌A549细胞系中ABCG2蛋白的表达情况;用流式细胞学方法分选A549细胞系中side population cells（SP细胞）及非SP细胞亚群,并对该两亚群细胞的分化功能进行检测;用RT—PCR方法检测两亚群细胞ABCG2的表达。结果：免疫组化方法检测A549细胞系中ABCG2蛋白的阳性表达率为2％。流式方法成功分选得到SP细胞及非SP细胞亚群,其中SP细胞含量约为A549活细胞总量的1．09％,经拮抗剂Verapamil处理后下降为0．20％,两亚群细胞经培养后重新上机检测,发现SP细胞亚群可产生SP细胞及非SP两种细胞,而非SP细胞只能产生非SP细胞。SP细胞表达ABCG2,非SP细胞则不表达。结论：人肺腺癌A549细胞系SP亚群细胞富集了肺癌干细胞。通过流式细胞仪分选肺腺癌SP细胞亚群是分离肺腺癌干细胞的有效方法。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。     

儿童腹痛328例病因诊断及分析

目的：根据儿童急性腹痛的特点,诊断儿童腹痛应综合临床及相关检查提供的依据,做出准确诊断,给予适当治疗。方法：对临床328例腹痛患儿进行选择性辅助检查和分析。结果：小儿腹痛病因复杂,腹腔内疾病占64．63％,共17种病因;腹腔外疾病占35．37％,共6种病因。结论：仔细询问病史、认真体格检查、密切观察病情、针对性地选择辅助检查,在儿童腹痛的诊断上具有重要的意义。