脊髓半横断损伤后大鼠皮层神经元细胞骨架蛋白基因表达的变化

目的　探讨神经再生过程中细胞骨架蛋白的作用机制 ,了解中枢和外周神经系统神经元应答神经损伤和再生的差异。　方法　用原位分子杂交方法观察了大鼠T10～ 11脊髓半横断损伤后 1、3、5、7、10、14、2 1、2 8、5 6d皮层感觉运动区皮层神经元中α 管蛋白和 3个神经丝蛋白亚基mRNA的表达变化。　结果　脊髓半横断损伤后损伤侧皮层感觉运动区皮层神经元中α 管蛋白、神经丝 L、 M、 HmRNA表达明显下调。α 管蛋白mRNA表达水平在损伤后 1d降低 ,而神经丝亚基mRNA表达水平直到下一个时间点 (损伤后 3d)才下调 ,至损伤后 5 6d均无恢复趋势。结论　皮层神经元损伤后α 管蛋白mRNA的表达被抑制 ,提示皮层神经元和外周神经元应答损伤的信号不同     

脊髓半横断损伤后大鼠皮神经元细胞骨架蛋白基因表达的变化

目的 探讨神经再生过程中细胞骨架蛋白的作用机制,了解中枢和外周神经系统神经元应答神经损伤和再生的差异。方法 用原位分子杂交方法观察了大鼠T10－11脊髓半横断损伤后1、3、5、7、10、14、21、28、56d皮层感觉运动区皮层神经元中α－管蛋白和3个神经丝蛋白亚基mRNA的表达变化。结果 脊髓半横断损伤后损伤侧皮层感觉运动区皮层神经元中α-管蛋白、神经丝－L、－M、－H mRNA表达明显下调。α－管蛋白mRNA表达水平在损伤后1d降低,而神经丝亚基mRNA表达水平直到下一个时间点（损伤后3d）才下调,至损伤后56d均无恢复趋势。结论 皮层神经元损伤后α－管蛋白mRNA的表达被抑制,提示皮层神经元和外周神经元应答损伤的信号不同。     

脊髓半横断损伤后trkB基因表达的变化

脊髓损伤后期trkB的变化及作用仍不清楚,本实验建立脊髓半横断损伤模型（hSCI）,术后14天取损伤脊髓用定量PCR测定trkB表达水平。结果显示,与假手术组比较,损伤脊髓trkB mRNA水平明显下调。推测trkB减少可能是不利于修复的因素之一,值得重视。     

脊髓半横断损伤后p53基因表达的变化

脊髓损伤亚急性期p53的表达变化仍不清楚,本实验建立脊髓半横断损伤（hSCI）大鼠模型,用定量PCR探讨脊髓p53基因水平变化,结果发现,术后14天,损伤脊髓p53基因表达明显下调。提示p53参与了hSCI损伤修复过程,值得重视。     

大鼠脊髓半横断损伤后硫酸软骨素蛋白多糖Versican的变化

目的观察大鼠脊髓半横断损伤(hSCI)位点头尾段硫酸软骨素蛋白多糖Versican的表达变化,探讨其与脊髓损伤修复的关系。方法20只成年健康SD大鼠随机分为假手术对照组和脊髓半横断损伤3d、7d和14d组。建立成年SD大鼠脊髓半横断(T9～T10)模型。取损伤位点头尾段T9、T10节段制作冰冻切片,运用Versican抗血清进行免疫组化ABC法染色。分别观察并计数各组前角中Versican阳性细胞数,采用计算机图像分析技术测量免疫阳性产物的平均光密度(A)值。结果Versican阳性产物主要分布于细胞外基质中,前角神经元和胶质细胞的胞浆中也有分布;损伤后前角中Versican阳性神经元和胶质细胞数较对照组明显减少(P<0.05),免疫阳性产物平均A值较对照组明显增加(P<0.05)。结论脊髓半横断损伤后,表达增加的Versican很可能参与损伤后轴突生长被抑制的过程。     

脊髓横断损伤后再生基因蛋白的表达

目的探讨再生基因蛋白(Reg-2)在脊髓横断损伤后表达的时序变化及其可能的意义。方法SD雌性大鼠45只,实验分为脊髓损伤组(30只)、假手术组(15只)。脊髓损伤组大鼠麻醉后于T9、T10脊髓节段之间用手术刀完全切断脊髓,建立大鼠脊髓横断损伤模型;假手术组大鼠只打开推板,不损伤脊髓,为阴性对照。分别于脊髓损伤后1h、1d、3d、7d1、4d用多聚甲醛灌注后,以T10节段为中心取出长约2cm的脊髓,制作冠状切面及横断切面冷冻切片。分别通过免疫组织化学、免疫荧光和Western blotting法检测Reg-2的表达水平及部位,并与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、少突胶质细胞系转录因子2(Olig2)以及神经肽Y(NPY)、降钙素基因相关肽(CGRP)、神经性生长蛋白-43(GAP-43)等神经细胞特异性标记物做双重标记。结果脊髓损伤组中,表达Reg-2的阳性细胞随着时间的推移,先增加后减少,脊髓损伤后的1周内维持在较高水平,其中第3d后角神经元的Reg-2表达最高,第7d前角神经元Reg-2的表达最高。结论Reg-2可能参与了脊髓损伤后早期的神经再生和重建进程。     

大鼠脊髓横断损伤后细胞周期蛋白H的表达变化及意义

目的:探讨大鼠脊髓半切损伤后细胞周期蛋白H的表达变化及意义。方法:取雌性SD大鼠,随机分成对照组、脊髓损伤组,脊髓损伤组大鼠建立脊髓半切损伤模型,而对照组大鼠仅切除椎板而不损伤脊髓组织。于术后12 h、1 d、3 d、7 d、14 d采集损伤区域的脊髓组织,分别通过免疫荧光组织化学显色、免疫印迹检测各组各时间点细胞周期蛋白H含量。结果:脊髓损伤后12 h在脊髓内检测到细胞周期蛋白H,并在3d达到高峰,并以较高水平维持,14 d之后下降。结论:脊髓损伤后神经细胞大量表达细胞周期蛋白H,激活了细胞增殖因子,促进神经细胞再生修复,有利于神经系统的功能恢复。     

大鼠脊髓半横断损伤后Versican及其受体CD44的表达变化

目的探讨大鼠脊髓半横断(hemisected spinal cord injury,hSCI)损伤后14d硫酸软骨素蛋白多糖Versi-can及其受体CD44的表达变化。方法10只成年SD大鼠随机分为正常对照组和术后14d组。建立成年SD大鼠脊髓半横断(T9~T10)模型。14d后取损伤位点头尾段T9、T10节段制作冰冻切片,运用Versican、CD44抗血清进行免疫组化ABC法染色。分别观察并计数脊髓腹角和Ⅰ、Ⅱ板层内Versican、CD44的免疫反应阳性细胞数。结果Ver-sican主要分布于正常大鼠脊髓腹角,CD44主要分布于正常大鼠脊髓Ⅰ、Ⅱ板层和腹角。损伤后14d腹角Versican阳性细胞数较正常组明显下降(P<0.05),Ⅰ、Ⅱ板层和腹角的CD44阳性细胞数也较正常组明显下降(P<0.05)。而手术组损伤侧与未损伤侧Versican和CD44表达水平均无明显差异(P>0.05)。结论大鼠脊髓半横断损伤14d后Versican、CD44表达均明显下降,提示脊髓半横断损伤对脊髓灰质内细胞表达Versican、CD44有影响。     

大鼠脊髓全横断损伤后脊髓caspase-3的表达变化

目的观察大鼠脊髓全横断(SCT)后横断端细胞凋亡及caspase-3 mRNA、蛋白的表达变化并探讨其意义。方法SD大鼠90只,手术组(SCT组)动物选择在T10节段全横断脊髓,假手术组除不横断外其余步骤相同。TUNEL法检测脊髓横断端凋亡情况,免疫组织化学、RT-PCR、Western blot技术检测不同时间点caspase-3 mRNA、蛋白表达变化。结果SCT后横断端脊髓灰质白质均检测到凋亡细胞,caspase-3在损伤周围组织呈阳性,RT-PCR、Western blot显示1d组基因及蛋白均明显上调,3d、7d、14d、21d组mRNA逐渐下降,且3d组依然高于假手术组;3d、7d、14d组蛋白逐渐下降而21d组又略有回升,且3d、21d组依然高于假手术组。结论SCT后凋亡主要在早期出现,随时间进展呈逐渐下降趋势。     

大鼠脊髓半横断损伤后脊髓神经细胞凋亡与caspase-3的表达

为研究损伤脊髓神经细胞凋亡和相联系的caspase-3的表达,用原位末端标记法(TUNEL)检测了成年大鼠胸脊髓(T9)半横断损伤(hSCI)后脊髓神经细胞的凋亡变化,并用免疫组织化学染色方法观察了caspase-3的表达。结果显示:hSCI后6h损伤侧脊髓腹角即出现较多的TUNEL阳性神经细胞,并持续至5周。损伤脊髓的吻侧段于手术后4d达高峰,尾侧段脊髓于伤后1d达高峰。与假手术组相比,在所有观察的时间点TUNEL阳性神经细胞的数量在损伤侧均有明显增加。caspase-3免疫组化染色显示,与假手术组相比,伤后6h损伤侧脊髓腹角caspase-3表达也明显增加,并持续至5周。以上结果提示hSCI后,脊髓可出现神经细胞凋亡,且此凋亡的发生可能与caspase-3的表达有关。     

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶11在大鼠脊髓横断性损伤后的表达变化

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶11(CDK11)在横断性脊髓损伤(tSCI)后的表达变化以及定位情况.方法 将36只成年SD大鼠随机分为假手术组,T9断伤1d、3d、5d、7d和14d组,每组6只.采用Westem blotting测法损伤后各时间段CDK11蛋白水平在脊髓中的表达变化.采用免疫组织化学方法检测CDK11在假手术组以及损伤组脊髓中的分布和定位.结果 Western blotting显示,CDK11蛋白水平在SCI后呈现先升高后下降的趋势,CDK11p58的表达于损伤后3d开始显著升高,一直持续到第7d,之后逐渐下降.而CDK11p110也在3d、5d时高于假手术组,伤后7d则明显降低,至14d时有所回升.免疫组织化学表明,CDK11在假手术组脊髓中均匀分布,损伤后3d,CDK11在脊髓灰质和白质中表达明显增加;免疫荧光双标记表明,CDK11与神经元的标记物神经元核抗原(NeuN)、少突胶质细胞标记物环核苷酸-3'磷酸水解酶(CNPage)有明显共定位,与星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)也存在部分共定位.结论 脊髓损伤后CDK11蛋白水平呈现明显的时相变化,并且与神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞存在共定位,提示CDK11参与了脊髓损伤后的病理生理过程.     

脊髓半横断损伤后大鼠运动终板的氯化金染色研究

脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)是一种严重危害人类健康的疾病。SCI后,受脊髓支配的骨骼肌因失去脊髓的神经支配而废用及没有神经营养作用而发生萎缩,影响骨骼肌功能的恢复。临床或实验过程中经常需要确定肌肉组织神经支配情况。上运动神经元损伤后骨骼肌运动终板存在退变现     

体外培养脊髓神经元损伤后c-Jun蛋白表达

目的建立一个模拟脊髓全横断损伤后脊髓组分——原代培养的脊髓神经元损伤的模型。探讨中枢神经损伤后损伤应答基因c-jun的表达及变化。方法取Wistar大鼠(孕14d)脊髓,培养10～12d后,采用所设计的标准模板,直视下进行损伤。观察损伤前、后不同时间神经元的形态及即刻早期基因c-jun的表达及变化。结果脊髓神经元损伤10min后胞核即有c-Jun标记,损伤2h后最多,而且阳性神经元的密度与划痕之间的距离呈明显的反比关系。结论受机械损伤的神经元中,c-Jun表达阳性意味着此即刻早期基因产物已进入细胞核内起着“第三信使”的作用。     

脊髓半横断猕猴的护理

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）是脊柱骨折的严重并发症。有效的动物模型是脊髓损伤修复研究的基础。以往的研究都是建立在啮齿类动物上的,而人类神经系统生理结构及修复能力与啮齿类动物有很大不同。建立猴脊髓半横断（hemi-sected SCI,hSCI）和全横断（transected SCI,tSCI）脊髓损伤模型,更深入地研究脊髓损伤修复机理,为临床提供治疗脊髓损伤提供新的策略。动物模型建立之后,正确的护理是实验成功的必要环节,常常决定了实验的成败。为提高非人灵长类动物在脊髓损伤与修复研究中的成活率,本对实践中猴脊髓半横断损伤模型有效的护理经验进行了总结。     

脊髓全横断损伤后凋亡因子Fas和FasL的表达变化

本研究通过制备SD大鼠脊髓全横断性损伤模型,应用免疫组织化学ABC法和灰度值测定揭示促凋亡因子Fas和FasL在脊髓完全性损伤后,不同时间点之间的相互变化趋势,以探讨Fas和FasL在脊髓损伤中的作用。结果显示:正常和脊髓全横断损伤后的不同时间组SD大鼠脊髓灰质的前角神经元中均可观察到Fas和FasL的免疫阳性产物。与正常组比较,Fas、FasL阳性神经元细胞数在术后1、3、7、14d组均升高(P<0.05),21d组则降低(P<0.05)。前角Fas、FasL阳性神经元的灰度值在术后1、3、7d组较正常组降低(P<0.05),14、21d组无显著性差异(P>0.05)。结果提示大鼠脊髓全横断损伤后,在损伤节段尾侧脊髓前角神经元Fas与FasL的表达经历了由增高到降低的过程,Fas和FasL表达增加有诱导神经细胞凋亡的趋势,可能参与诱导了脊髓继发性损伤。     

大鼠脊髓全横断后脊髓内BDNF表达的变化

为了探讨大鼠脊髓全横断后不同时相(3、7、14、21d)脊髓内BDNF表达的变化,我们采用免疫组织化学ABC法和阳性神经元计数,来检测脊髓全横断后不同时相BDNF的表达。结果发现:(1)BDNF免疫阳性产物主要位于腹角运动神经元,胞浆着色;(2)脊髓全横断后脊髓腹角BDNF阳性细胞数3d开始增多,7d达高峰(P<0.05),14d恢复正常(P>0.05)。提示BDNF表达的变化可能与脊髓可塑性有关。     

大鼠脊髓半横断损伤后大脑皮质初级运动区caspase-3的表达

目的探讨大鼠脊髓半横断损伤（hSCI）后大脑皮质初级运动区（M1）神经细胞的凋亡情况。方法成年健康Wistar大鼠T8-9脊髓左侧半横断术后，用RT-PCR和免疫组织化学法检测各个时间点caspase-3mRNA的表达量以及阳性细胞的分布。结果手术组中左、右两侧M1区的caspase-3mRNA表达量与假手术组比较，在6h即显著上升，1d达到高峰，3d、7d、14d组下降，而在21d又略有上升；6h组M1区表达量右侧明显高于左侧。免疫组织化学显示阳性细胞主要集中在M1的多形细胞层、锥体层。结论大鼠脊髓半横断损伤后M1细胞凋亡在早期最为剧烈，不仅导致支配损伤侧的M1区细胞凋亡，同样也导致支配未损伤侧脊髓的M1区神经细胞凋亡。     

脊髓损伤后神经型一氧化氮合酶基因表达的变化

目的 :研究大鼠脊髓损伤后神经型一氧化氮合酶 (nNOS)mRNA表达的变化规律。方法 :参考Nystrom方法建立大鼠脊髓压迫伤模型 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法测定伤段脊髓组织nNOSmRNA的表达情况。结果 :正常脊髓组织内存在nNOSmRNA的表达 ,脊髓压迫伤后nNOSmRNA表达迅速逐渐增强 ,在伤后 6h达到高峰。结论 :nNOS存在于正常的脊髓组织内 ,脊髓损伤后nNOSmRNA表达迅速增强 ,提示nNOS参与了继发性脊髓损伤过程 ,并可能是一种损伤因素。     

皮质脊髓束半横断损伤模型大鼠皮质脊髓束的超微结构改变

背景：有关皮质脊髓束受损后损伤附近及远处超微结构的整体变化的报道甚少。 目的：观察大鼠皮质脊髓束半横断损伤后皮质脊髓束超微结构的变化。 方法：选择性切割SD大鼠延髓左侧锥体,建立皮质脊髓束半横断损伤模型,于造模后4,14,28 d取受损皮质脊髓束,制备电镜标本。 结果与结论：透射电镜观察发现受损皮质脊髓束髓鞘和轴索发生肿胀,形态不规则。随着时间的延长,溃变进行性加重,受损皮质脊髓束主要表现为髓鞘破坏、溶解及轴索脱髓鞘病变、胞浆浓缩、细胞器增多及空泡样变性。脊髓颈、胸、腰段受损皮质脊髓束的溃变比损伤部位严重。     

大鼠脊髓半横断损伤对脊髓versican、 CD44表达的影响

目的:观察大鼠脊髓半横断损伤(HSCI)对硫酸软骨素蛋白多糖versican及CD44在脊髓中表达的影响,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制提供实验依据.方法:成年SD大鼠随机分为假手术对照组和HSCI 3、 7和14d组.建立成年大鼠HSCI(胸9～10)模型.取损伤位点头尾段胸9、胸10节段制作冷冻切片,用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测脊髓内versican和CD44的表达.结果:Versican阳性产物主要分布于细胞外基质中,腹角神经元和胶质细胞的胞质中也有分布;CD44阳性产物主要分布于细胞外基质及腹角神经元和胶质细胞的胞质中.损伤后脊髓内versican表达较对照组明显增加,CD44表达也较对照组明显增加.结论:HSCI后versican与CD44表达都增加,两者可能相互作用共同参与损伤后轴突生长被抑制这一过程.