空肠弯曲菌外膜蛋白亚单位脂质体佐剂疫苗的免疫原性研究

目的 初步探讨自制的空肠弯曲菌（campylobacter jejuni）亚单位（M,28 000-31 000外膜蛋白）脂质体佐剂疫苗的免疫原性,为该疫苗的临床前研究打下基础。方法 用双向免疫琼脂扩散试验、试管凝集试验、ELISA（间接法）分别检测经GJ疫苗免疫后的新西兰兔血清IgG抗体效价。结果 GJ阴离子组与GJ阳离子组比较,血清IgG A值显著增高（P〈0．01）,与GJ弗氏组无统计学差别（P〉0．1）;CJ阴、阳离子组脂质体疫苗接种剂量在0．50mg／kg时,血清IgGA值最大;CJ阳离子皮下注射组与肌肉注射组IgGA值无统计学差别（P〉0．1）;特异性IgG抗体经6个月动态观察,5个月后抗体效价下降。结论 实验组全程免疫后均有特异性抗体产生;同一剂量的阴离子脂质体疫苗比阳离子脂质体疫苗血清抗体水平显著增高;脂质体疫苗最佳接种剂量为0．50mg／kg,肌肉注射与皮下注射免疫效果无显著差异;特异性抗体高水平维持5、6个月后应加强免疫。     

破伤风类毒素非磷脂脂质体疫苗的实验研究

以二氧乙烯十六烷醚、胆固醇和油酸为原料制备非磷脂脂质体 ,试验证明其包裹率高、稳定性好。与破伤风类毒素(TT )铝佐剂疫苗相比较 ,TT非磷脂脂质体疫苗二针免疫小鼠产生的抗体应答水平高一倍左右 ,抗体亚类以IgG1为主 ,加入IFN γ可增加IgG2a亚类应答。但免疫脾细胞IL 2产量不高。此外 ,该疫苗鼻粘膜接种可诱导显著的血清抗体应答。因而这种新型脂质体值得疫苗工作者重视。     

EHF疫苗不同途径免疫后血清及黏膜抗体应答情况

目的探讨EHF疫苗经不同剂量和途径免疫后血清IgG及黏膜IgA产生情况,以探讨合适的免疫剂量和接种途径。方法以不同剂量EHF双价灭活疫苗分别经皮下和灌胃免疫小鼠,共3次（第0、5、10天）,末次接种后5d收集血清和小肠冲洗液,用间接免疫荧光法（IFA）检测血清EHF IgG抗体和小肠冲洗液IgA抗体。结果皮下注射能诱导血清特异性IgG和黏膜IgA的产生,灌胃免疫未见抗体产生,1．4 TCID50的EHF疫苗剂量在皮下注射组血清IgG和小肠冲洗液IgA有100％阳性率。结论EHF疫苗皮下注射能诱导血清特异性IgG和黏膜IgA的产生,1．4 TCID50的剂量为较佳剂量。     

包裹天然骨架CpG ODN和HBsAg的非磷脂脂质体疫苗的免疫效果

非磷脂脂质体NovasomeR○(Np )是由Brij5 2、胆固醇和油酸组成 ,可作为同时传递佐剂和抗原的载体。我们将HBsAg与天然骨架CpGODN (phosphodiesterCpGODN ,pdCpGODN )包裹于Np后免疫BALB/c小鼠 ,检测其免疫效果。结果显示 ,包裹pdCpGODN和HBsAg的Np在小鼠中诱导了很高滴度的抗 HBs抗体产生并诱生了HBsAgS2 8 3 9特异性的CTL ,而铝佐剂组和仅包裹HBsAg的Np组诱生的抗体滴度较低 ,未检测到CTL活力。抗体亚类分析结果表明包裹pdCpGODN和HBsAg的Np诱生的免疫应答类型与pdCpGODN剂量有关 ,较低剂量 (2 4 μgpdCpGODN )诱生的为IgG2a为主的Th1型应答 ,而较高剂量(4 7μgpdCpGODN )诱生的是Th1/Th2混合型应答。铝佐剂和仅包裹HBsAg的Np组诱生的是以IgG1为主的Th2型应答。此外 ,包裹pdCpGODN和HBsAg的Np免疫小鼠脾淋巴细胞在体外HBsAg刺激培养后特异性增殖并分泌高水平的IFN γ。这些结果表明包裹pdCpGODN和HBsAg的Np能增强HBsAg的免疫原性 ,诱生体液 /细胞免疫均衡应答 ,有可能发展为慢性乙肝的治疗性疫苗     

纳米颗粒包裹CpG序列对猪副伤寒疫苗接种小鼠免疫应答的影响

本实验制备聚乙交酯丙交酯(PLG)纳米颗粒,比较了阳离子PLG纳米颗粒和脂质体作为包装分子包裹pUC18-CpG质粒对猪副伤寒疫苗接种小鼠体液IgG和特异抗体滴度、脾脏淋巴细胞增殖和白细胞介素-2诱生活性的影响。实验结果发现:与裸pUC18-CpG质粒接种小鼠比较,阳离子纳米颗粒包裹pUC18-CpG质粒能显著提高免疫小鼠IgG含量和特异抗沙门氏菌抗体滴度,增强淋巴细胞增殖活性及白细胞介素-2的诱生活性;同阳离子脂质体作为包装分子的细胞和体液免疫佐剂效应相似或较强。证明阳离子PLG纳米颗粒包装能显著提高裸CpG质粒的免疫增强活性。     

鼠疫F1-V重组蛋白疫苗滴鼻免疫应答效果的研究

目的 以重组霍乱毒素B亚单位（rCT-B）为鼠疫F1-V重组蛋白的佐剂制备黏膜疫苗,观察小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答效果。方法以制备的鼠疫黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠4次免疫后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分类,检测鼻咽喉、肺、小肠及阴道灌洗液中特异性抗F1-V的黏膜分泌型IgA;采用流式细胞术检测鼻相关淋巴组织淋巴细胞、脾淋巴细胞、肠系膜淋巴结及小肠PP结T淋巴细胞表型的变化。结果以rCT-B为佐剂的鼠疫F1-V重组蛋白黏膜疫苗滴鼻免疫后,能够诱导血清中IgG、IgA抗体比正常对照组显著升高（P〈0．01）,同时诱导鼻咽、肺、小肠和阴道内特异性黏膜抗体升高,尤其是肺和生殖道冲冼液内抗体升高极为显著（P〈0．01）。与单纯的F1-V组相比,不同剂量比例疫苗组都能诱导较高、较快的血清IgG、IgA和黏膜sIgA,其中1：2疫苗组能诱导更强的系统免疫和黏膜免疫,但是相比之下,5：1疫苗组是最合适的免疫剂量。结论rCT-B佐剂不仅能提高鼠疫F1-V黏膜疫苗的系统全身免疫应答,还能促进诱导呼吸道、消化道和生殖道等局部黏膜sIgA抗体,增强局部免疫应答,提示rCT-B佐剂能显著提高鼠疫感染的免疫应答作用,这为下一步疫苗的免疫保护评价奠定了基础。     

高致病性人禽流感H5N1疫苗滴鼻免疫应答效果的初步研究

目的 通过高致病性人禽流感H5N1全病毒-MF59佐剂疫苗滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价该疫苗所诱导的系统免疫与黏膜免疫应答效果.方法 以不同剂量抗原按比例与MF59佐剂配伍制成粘膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,二免2周采血检测血清IgG、IgM效价及血清中HAI(HA inhibitor)的中和抗体效价,同时收集鼻、肺灌洗液,检测其lgG和slgA抗体效价.结果 H5NI+MF59组血清抗体效价较H5NI组有显著升高(P＜0.01);在各剂量组中,随着剂量的增加抗体效价呈上升趋势.12μg腭后抗体效价呈下降趋势,以HSNI+MF59(12μg)组效价最高;肺鼻灌洗液中,均可检测到特异性分泌型IrA、IsG,其中特异性分泌型IgA效价略高于IgG;抗体亚型的分布以IgG1、IgG2b为主.结论 灭活高致病性禽流感全病毒H5N1在佐剂MF59作用下可诱导机体产生体液免疫应答,同时还可以在黏膜局部产生特异性分泌型IgA、IsG,为高致病人禽流感病毒I-15N1黏膜疫苗的研制奠定了基础.     

全反式维甲酸纳米乳的制备及其疫苗佐剂效应评价

目的制备装载全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,atRA)的纳米乳佐剂,评价其黏膜佐剂效应。方法使用低能乳化法制备包裹有维甲酸的纳米乳,利用动态光散射仪、扫描电子显微镜、透射电子显微镜等对其理化性质进行表征;与BMDCs、脾淋巴细胞或肠系膜淋巴结细胞共孵育后用流式细胞术检测其促淋巴细胞成熟和分化的能力;小鼠肌注给药后,表征其诱发注射部位急性炎症情况;ELISA检测脾淋巴细胞分泌IL-4、IL-17A等细胞因子的表达水平以及血清与肠黏膜部位抗原特异性抗体的滴度,初步评价维甲酸纳米乳作为黏膜疫苗佐剂的效应。结果成功制备了平均粒径27.23 nm,Zeta电位-25.8 mV,装载0.998 mg/ml全反式维甲酸的纳米乳,与抗原物理混合后通过肌肉注射免疫小鼠,在注射部位诱导了与铝佐剂相当的IL-6与IL-15的水平,形成了有利于免疫响应的炎症微环境,在诱导高水平血清抗原特异性IgG的同时,在肠黏膜部位还诱导了高水平的抗原特异性sIgA抗体。结论维甲酸纳米乳具有良好的黏膜佐剂活性,肌肉注射后可激活体液与肠黏膜抗原特异性抗体应答,为后续研究通过肠道入侵人体病原体的疫苗提供新思路。     

脂质体佐剂对增强HBsAg免疫原性的作用

利用DC Chol制备粒径为 5 0～ 30 0nm的正电荷脂质体 ,作为乙肝疫苗 (HBsAg)的佐剂 ,免疫BALB/c小鼠后进行血清中特异性抗体IgG1及IgG2a、脾细胞产生细胞因子的检测。结果该脂质体佐剂所诱导的抗体亚类以IgG2a为主 ,脾细胞产生的IL 2、IL 5、IFN γ分别比铝佐剂组高 16 5倍、 10倍、 2倍。表明该脂质体佐剂可以诱导很强的细胞免疫反应 ,是一种能促进Th1和Th2均衡应答的佐剂 ,值得作进一步的研究     

合成纳米铝佐剂及其对乙型肝炎、狂犬病毒辅佐效应的研究

目的 通过自制纳米铝佐剂,研究其对乙型肝炎病毒和狂犬病毒的体液免疫应答。方法 在25℃条件下,采用微乳液法制备纳米铝佐剂。与常规铝佐剂比较,经皮下注射豚鼠和Balb／c小鼠后,于不同的时间测定血清中特异性酥;抗体的效价。结果 透射电镜（TEM）和差式量热扫描（DSC）,可知产物为平均粒径约为72．62nm,近球形的A1（OH）3结晶颗粒。纳米铝佐剂辅佐的HBsAg,在免疫Balb／c小鼠后第1周和第2周的血清抗体滴度明显高于常规铝佐剂组（P〈0．01;P〈0．05）;纳米铝佐剂辅佐的狂犬疫苗,其特异性IgG抗体效价高于常规铝佐剂组,并且在免疫后的第7天,抗体就呈现出阳性（P〈0．05）。结论 纳米铝佐剂在诱导HBsAg和Rabies疫苗体液免疫应答的早期优于目前的常规铝佐剂,能够快速地激活和提高Balb／c小鼠和豚鼠的免疫应答和应答水平。