丙丁酚对氧化型低密度脂蛋白和氧自由基促血管平滑肌细胞增殖的影响

本文用细胞计数和MTT快速比色计量法观察到体外培养的半主动脉平滑肌细胞分别与氧化型低密度脂蛋白和黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶共厕培养后,前者明显增殖(p<0.01)。抗氧化剂丙丁酚(100μmol·L-1)能抑制氧化型低密度脂蛋白和黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶促平滑肌细胞增殖作用;一氧化氮合成酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸对两者促平滑肌细胞增殖的作用无影响,同时也不能阻断丙丁酚的抑制两者促细胞增殖作用.这一结果提示,丙丁酚能抑制氧化型低密度脂蛋白和外源性氧自由基促平滑肌细胞增殖,这一作用可能与血管平滑肌细胞中一氧化氮的合成及释放无关。     

丙丁酚抑制低密度脂蛋白氧化的作用

丙丁酚是临床应用的降脂药物,由于其结构中两个羟基取代的苯环而具有断链抗氧化剂活性,可干预抵密度脂蛋白的氧化修饰,抑制氧化型低密度脂蛋白形成,从而对动脉粥样硬化的防治有重要意义。     

泽泻汤对氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察泽泻汤对血管平滑肌细胞(VSMC)周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E、增殖细胞核抗原(PCNA)和p27表达的影响,探讨泽泻汤在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的VSMC增殖中的作用和机制。方法通过体外50 mg/L ox-LDL诱导VSMC,建立VSMC增殖的动脉粥样硬化细胞模型;应用空白血清及20%泽泻汤含药血清干预。MTS法检测泽泻汤含药血清对VSMC增殖的影响;Western blot检测增殖相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E、PCNA和p27表达水平。结果 50 mg/L ox-LDL可明显诱导VSMC增殖。与ox-LDL组比较,泽泻汤含药血清可显著抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,下调细胞Cyclin D1、Cyclin E和PCNA的表达,同时促进p27蛋白表达。结论泽泻汤具有抗VSMC增殖的作用,机制可能与上调p27蛋白和抑制Cyclin D1、Cyclin E、PCNA表达有关。     

氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

为研究氧化型低密度脂蛋白引起血管平滑肌细胞凋亡及其凋亡的机制,采用细胞形态学ＤＮＡ末标记法,流式细胞仪,Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｔｔｉｎｇ观察氧化型低密度脂蛋白诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。结果发现,在氧化型低密度脂蛋白作用下,血管平滑肌细胞阻滞在分裂期的中期,并发生凋亡,ＤＮＡ末端标记法和流式细胞仪检测发现氧化型低密度脂蛋白引起细胞凋亡明显高于天然低密度脂蛋白（前者是后者的１０倍）。电镜下凋亡细胞     

不同程度氧化修饰的低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究不同程度氧化修饰的低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法　氧化低密度脂蛋白的制备参照Takauya等报道方法。测得天然低密度脂蛋白弱氧化型低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白的硫代巴比妥酸反应物质值分别为 0 .37、2 .5 8和 6 .6 7μmol g。消化培养法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的原代培养。常规传代取第 3和第 4代细胞用于实验和生物学鉴定。用含 0 .1%小牛血清的DMEM培养基培养 2 4h使细胞静止后 ,用包含 5 0 0mg LB、10mg L胰岛素、2 0mg L转铁蛋白、2 5mg L硒酸钠的DMEM培养基代替进行培养。加入 10mg L的低密度脂蛋白、弱氧化型低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白后 ,用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法分别检测 11～ 12、15～ 16、19～ 2 0和 2 3～ 2 4h的DNA合成率。结果　在刺激后 12h弱氧化型低密度脂蛋白组DNA合成率明显高于氧化型低密度脂蛋白和低密度脂蛋白两组 (分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1) ,氧化型低密度脂蛋白组明显高于低密度脂蛋白 (P <0 .0 5 )。在 16h各组的DNA合成率均较 12h增加 ,弱氧化型低密度脂蛋白组与另两组比较差异更明显 ,而低密度脂蛋白组反比氧化型低密度脂蛋白组高 ,但差异无显著性意义。到 2 0h ,低密度脂蛋白和弱氧化型低密度脂蛋白的DNA合成率快速降     

氧化型低密度脂蛋白对平滑肌祖细胞增殖和表型的影响

目的 研究氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌祖细胞生物学性状的影响.方法 分离人外周血单个核细胞,用纤粘连蛋白、血小板源性生长因子BB和EGM培养基诱导培养出平滑肌祖细胞,用细胞免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应法鉴定.用分别含终浓度为25、50、100、200 mg/L氧化型低密度脂蛋白的培养基培养平滑肌祖细胞24 h,然后用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力,用细胞免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达.结果 平滑肌祖细胞呈"峰、谷"样生长,可表达α-平滑肌肌动蛋白和调宁蛋白.4种不同浓度氧化型低密度脂蛋白组细胞增殖能力均高于对照组(P<0.05),当氧化型低密度脂蛋白为50 mg/L时细胞增殖能力最强,氧化型低密度脂蛋白组细胞内α-平滑肌肌动蛋白的表达明显弱于对照组.结论 氧化型低密度脂蛋白可以促进血管平滑肌祖细胞的增殖并减弱其α-平滑肌肌动蛋白的表达.     

氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤的条件培养基对血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）损伤血管内皮细胞（VEC）的条件培养基对血管平滑肌细胞（VSMC）生长状态的影响。方法在培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞上，分别采用MTT染色法、流式细胞术及增殖细胞核抗原免疫组化方法等，检测OX—LDL诱导VEC损伤的条件培养基对VSMC生长率、细胞周期及PCNA表达的影响。结果OX—LDL可呈浓度依赖性损伤VEC的形态、减少上清液中NO含量、升高上清液中ET-1含量。终浓度为1001μg,／ml的ox-LDL与VEC共同孵育24h制备的条件培养基，能明显促进VSMC生长、提高PCNA表达及增加细胞周期S期细胞数。结论血管内皮细胞受到OX—LDL损伤时，制备的条件培养基能促进血管平滑肌细胞增殖，这可能是氧化低密度脂蛋白致动脉粥样硬化形成的原因之一。     

氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞及促血管平滑肌细胞增殖的机制

目的 观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)损伤及损伤条件培养基作用于血管平滑肌细胞(VSMC)的影响.方法 采用流式细胞术(FCM)测定ECV304细胞内Ca2+、线粒体膜电位(MMP)、凋亡率及VSMC细胞周期各时相DNA含量、增殖指数.结果 ox-LDL致ECV304细胞活力降低,细胞内Ca2+浓度升高,MMP下降,细胞凋亡率明显增高；损伤条件培养基有明显促进VSMC增殖,与正常对照组比较有显著差异(P＜0.01,P＜0.001).结论 ox-LDL导致血管内皮细胞损伤,引起ECV304细胞内Ca2超载,致线粒体功能障碍,促进细胞凋亡；促进VSMC增殖.     

芦丁抑制氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨芦丁在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法:制备ox-LDL,采用贴壁法分离培养C57BL/6J小鼠的VSMC,将细胞分为对照组、芦丁组、ox-LDL组和芦丁+ox-LDL组,MTT法检测各组VSMC细胞增殖活性,Western blot检测VSMC中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达情况。结果:芦丁组与对照组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均无明显差异(P均0.05);ox-LDL组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均显著高于对照组(P均0.05);与ox-LDL组相比,芦丁+ox-LDL组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均明显降低(P均0.05)。结论:芦丁可能通过抑制ERK信号通路,抑制ox-LDL诱导的VSMC的增殖。     

氧化型低密度脂蛋白对人血管平滑肌细胞透明质酸表达的影响及机制

目的观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人主动脉血管平滑肌细胞透明质酸(HA)合成的影响,并初步探究其分子机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞T/G HAVSMC,使用不同浓度(10、25、50、75、100 mg/L)ox-LDL对T/G HAVSMC细胞进行干预,使用CCK-8法检测细胞存活率,并进行分组分析。采用浓度为25和50 mg/L的ox-LDL干预T/G HAVSMC细胞48 h,并设置天然LDL(native-LDL,N-LDL)组(50 mg/L的N-LDL)和对照组,使用HPLC法测定HA含量,使用实时定量PCR检测透明质酸合成酶2(HAS2)和透明质酸合成酶3(HAS3)的mRNA表达,使用Western blot法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)、氧化脂蛋白的清道夫受体(SR-PSOX)以及脂肪酸转位酶(CD36)的表达。结果低于100 mg/L的ox-LDL对T/G HAVSMC细胞无明显细胞毒性。25 mg/L和50 mg/L ox-LDL组HA含量、HAS2和HAS3的mRNA表达量明显高于N-LDL组和对照组(P0.05),N-LDL组与对照组组间差异无显著性(P0.05)。25 mg/L和50 mg/L ox-LDL组LOX-1表达明显高于N-LDL组和对照组(P0.05),而LRP-1、SR-PSOX和CD36表达无明显变化(P0.05)。结论 ox-LDL能够诱导人主动脉平滑肌细胞中HA的合成,其机制可能与结合LOX-1有关。     

氧化低密度脂蛋白与内皮素在促进血管平滑肌细胞增生中的内在联系

本实验用培养的家兔血管平滑肌细胞探讨了在促进细胞增生过程中,氧化低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein,OLDL)和内皮素之间的联系,发现二者都可刺激血管平滑肌细胞增生,内皮素A受体拮抗剂BQ123可显著抑印制OLDL的促细胞增生作用,￣3H-TdR的掺入量较单纯OLDL组减少13.3%;细胞培养液内皮素放射免疫测定表明,应用BQ123能使内皮素释放量较单纯OLDL组降低28.9%。免疫细胞化学检测结果亦与上述完全符合,提示在动脉粥样硬化发生中,OLDL促血管平滑肌细胞增生的作用可能部分是通过内皮素来实现的。     

氧化低密度脂蛋白与内皮素在促进血管平滑肌细胞增生中的内在联系

本实验用培养的家兔血管平滑肌细胞探讨了在促进细胞增生过程中，氧化低密度脂蛋白（ｏｘｉｄｉｚｅｄｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＯＬＤＬ）和内皮素之间的联系，发现二者都可刺激血管平滑肌细胞增生，内皮素Ａ受体拮抗剂ＢＱ１２３可显著抑印制ＯＬＤＬ的促细胞增生作用，￣３Ｈ－ＴｄＲ的掺入量较单纯ＯＬＤＬ组减少１３．３％；细胞培养液内皮素放射免疫测定表明，应用ＢＱ１２３能使内皮素释放量较单纯ＯＬＤＬ组降低２８．９％。免疫细胞化学检测结果亦与上述完全符合，提示在动脉粥样硬化发生中，ＯＬＤＬ促血管平滑肌细胞增生的作用可能部分是通过内皮素来实现的。     

L-精氨酸抑制内皮细胞粘附分子-1表达与氧化型低密度脂蛋白促单核细胞粘附作用下降有关

用氧化型低密度脂蛋白处理培养的猪主动脉内皮细胞，以Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈａｐａｑｕｅ分离液密度梯度离心分离人外周血单核细胞，观察Ｌ－精氨酸对内皮细胞－单核细胞粘附率的影响；采用反转录－多聚酶链反应技术检测氧化型低密度脂蛋白和Ｌ－精氨酸对内皮细胞血管细胞粘附分子－１表达的影响。结果显示：Ｌ－精氨酸具有剂量和时间依赖性地抑制氧化型低密度脂蛋白的促内皮细胞－单核细胞粘附作用。氧化型低密度脂蛋白处理内皮细胞能明显增加内皮血管细胞粘附分子。－１的表达，而Ｌ－精氨酸阻抑氧化型低密度脂蛋白的此种作用。结果提示Ｌ－精氨酸可能通过抑制血管细胞粘附分子－１表达阻抑氧化型低密度脂蛋白的促内皮细胞—单核细胞粘附作用。     

L-精氨酸抑制内皮细胞粘附分子-1表达与氧化型低密度脂蛋白促单核细胞粘附作用下降有关

用经型低密度脂蛋白处理培养的猪主动脉内皮细胞，以Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈａｐａｑｕｅ分离浓密度梯度离心分离人外周血单核细胞，观察Ｌ－精氨酸对内皮细胞－单核细胞粘附率的影响，采用反转录－多聚酶链反应技术检测氧化型低密度脂蛋白和Ｌ－精氨酸对内皮细胞血管细胞粘附分子－１表达的影响。结果显示：Ｌ－精氨酸具有剂量和时间依赖性地抑制氧化型低密度脂白促内皮细胞－单核细胞粘附作用，结果提示Ｌ－精氨酸可能通过抑制血管细胞粘     

丙丁酚对氧化型低密度脂蛋白损伤内皮的保护作用

用培养的人脐静脉内皮细胞为对象，用~3H-TdR掺入法，观察了抗氧化剂丙丁酚对氧化型低密度脂蛋白作用下的内皮细胞DNA合成的保护作用，并用扫描电子显微镜观察其对培养细胞形态结构的影响．结果发现，在作用24h后，氧化型低密度脂蛋白组的~3H－TdR掺入量是天然低密度脂蛋白组的48％，是丙丁酚组的56％（P＜0．001），超微结构显示丙丁酚组的细胞结构保持正常，而氧化型低密度脂蛋白组则受到破坏．本实验显示丙丁酚对内皮细胞的氧自由基损伤有明显的保护作用．     

高密度脂蛋白对氧化型低密度脂蛋白抑制的血管平滑肌细胞一氧化氮释放的影响

为观察高密度脂蛋白是否能损坏抗氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞释放一氧化氮的抑制作用，培养了人脐动脉平滑肌细胞并用脂多和γ－博古纱诱导一氧化氮的释放。应用ＧＲＩＥＳＳ试剂测定细胞培养基中亚硝酸盐的含量，以免疫组织化学染色和逆转录－聚合酶链反应分析导型一氧化氮合酶基因的表达。结果发现，氧化型低密度脂蛋白可使脂多糖和γ－干扰素诱导的平滑肌细胞一氧化氮合酶及其ｍＲＮＡ水平下降，抑制一氧化氮释放。而高密     

脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞中血管细胞粘附分子1表达的影响

目的探讨脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞分泌血管细胞粘附分子1的影响。方法用脱氢表雄酮(5μmol/L)作用于氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L)诱导的体外培养的SD大鼠血管平滑肌细胞,采用免疫细胞化学、免疫蛋白印迹法、逆转录聚合酶链反应检测其血管细胞粘附分子1蛋白及mRNA的表达。结果当细胞培养基中加入氧化型低密度脂蛋白后,血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子1的分泌明显升高(P<0.05),而同时加入脱氢表雄酮可使血管细胞粘附分子1的分泌降低(P<0.05)。结论脱氢表雄酮能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子1的分泌,而且可能是脱氢表雄酮抗动脉粥样硬化的机制之一。     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1与动脉粥样硬化

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体 1(LOX 1)是氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞的主要受体 ,研究表明它与动脉粥样硬化 (AS)、冠心病及其危险因素之间关系密切 ,它可诱导表达参与AS发生和发展的多个环节。对其表达和激活的抑制有望对心血管疾病的防治发挥重要作用。