地塞米松对体外培养星形胶质细胞周期素Cyclin E和Cyclin A表达的影响

目的:探讨地塞米松引起星形胶质细胞周期进程受阻与Cyclin E和Cyclin A表达的关系。方法:不同浓度的地塞米松(浓度为0、10-5、10-4、10-3mol/L)与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24小时后,用免疫细胞化学方法检测CyclinE和Cyclin A在星形胶质细胞内的表达情况,表达的强弱用平均光密度表示。结果:Cyclin A的表达随着地塞米松浓度的升高而减弱,各浓度组之间存在显著性差异(P<0.05),Cyclin E的表达在0、10-5、10-4mol/L浓度组随着地塞米松浓度的升高而减弱,但在10-3mol/L浓度组反而表达增强,各浓度组之间存在显著性差异(P<0.05)。结论:10-5、10-4mol/L浓度组星形胶质细胞周期进程受阻与Cyclin E和Cyclin A表达降低有关,而10-3mol/L浓度组星形胶质细胞周期进程受阻主要与Cyclin A表达降低有关。     

蕨麻多酚抗缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡作用研究

摘要：目的:探究蕨麻多酚在缺氧条件下对心肌细胞的抗凋亡作用。方法:取新生1～3 d SD大鼠心肌细胞进行原代培养,随机分成5组:正常对照组、缺氧损伤模型组、蕨麻多酚低(0.11 mg·ml-1)、中(0.22 mg·ml-1)、高(0.44 mg·ml-1)浓度组。细胞在5%CO2-95%N2环境下37℃培养6 h,建立缺氧损伤模型;流式细胞术检测细胞凋亡率; Hoechst-PI荧光染色法观察缺氧损伤后心肌细胞凋亡情况;逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组细胞p53、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax） mRNA的表达水平;蛋白质印迹法（Western Blotting）检测各组细胞p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果:与正常对照组相比,缺氧损伤模型组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Hoechst-PI染色可见呈亮蓝色荧光的早期凋亡细胞及大量亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞; p53、Bax mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著下降（P<0.01）;蕨麻多酚干预后细胞较缺氧损伤模型组凋亡率显著降低（P<0.01）,Hoechst-PI染色亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞数量减少。蕨麻多酚各浓度组p53、Bax mRNA及蛋白表达均显著降低（P<0.01）,Bcl-2 mRNA及蛋白表达均显著升高（P<0.01）。结论:缺氧时蕨麻多酚能够通过下调心肌细胞p53和Bax水平,上调Bcl-2表达,抑制心肌细胞凋亡,从而减轻缺氧导致的心肌损伤。     

银杏叶总黄酮对缺氧条件下大鼠星型胶质细胞活力、细胞凋亡率及IPS-1/TRAF6信号通路的影响

摘要：目的:探讨银杏叶总黄酮对缺氧条件下大鼠星型胶质细胞活力、细胞凋亡率及干扰素β启动子刺激因子1（IPS-1）/肿瘤坏死因子TNF受体相关因子6（TRAF6）信号通路的影响。方法:设立大鼠星型胶质细胞对照组（培养环境为20%O2、5%CO2、75%N2）、缺氧组（培养环境为1%O2、5%CO2、94%N2）、银杏叶总黄酮低、中、高剂量组(终浓度100,200,400μg·ml-1)。培养结束后,测定各组细胞活力、凋亡水平、细胞周期、IPS-1、TRAF6 mRNA和蛋白水平。结果:与对照组比较,缺氧组光密度（OD）值、存活率水平显著降低（P<0.05）,凋亡率、G1期水平、IPS-1、TRAF6 mRNA和蛋白水平显著升高（P<0.05）;与缺氧组比较,银杏叶总黄酮各剂量组OD值、存活率水平显著升高（P<0.05）,凋亡率、G1期水平、IPS-1、TRAF6 mRNA和蛋白水平显著降低（P<0.05）;且各指标变化与银杏叶总黄酮浓度呈正相关（P<0.05）。结论:银杏叶总黄酮能提高缺氧条件下大鼠星型胶质细胞活力、抑制其凋亡;其机制与银杏叶总黄酮抑制星型胶质细胞IPS-1、TRAF6 mRNA和蛋白表达水平有关。     

rhEPO对高糖状态下大鼠Müller细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant hu-man erythropoietin,rhEPO)对高浓度葡萄糖作用下体外培养大鼠视网膜Müller细胞凋亡的保护作用及对Bcl-2和Bax表达的影响。方法提取大鼠视网膜神经细胞及胶质细胞进行混合培养,反复胰酶消化法提纯Müller细胞,随机分为空白组,高糖组及不同浓度rhEPO干预组,培养48 h后应用TUNEL法检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 TUNEL法检测显示空白组见少量凋亡阳性细胞,高糖组阳性细胞明显增多(P<0.05),各rhEPO干预组同高糖组相比凋亡细胞明显减少(P<0.05)。酶联免疫吸附法见高糖组Bcl-2蛋白的表达降低而Bax蛋白表达增高,与对照组相比活性下降,而各浓度rhEPO干预组与高糖组相比细胞活力明显增强,Bcl-2蛋白的表达增加(P<0.05),Bax蛋白的表达降低(P<0.05)。结论高糖能够引发大鼠视网膜Müller细胞发生凋亡,而rhEPO能减少体外培养高浓度葡萄糖状态下大鼠视网膜Müller细胞的凋亡,并能明显增强Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达。提示上调Bcl-2及下调Bax蛋白的表达可能是rhEPO对视网膜Müller细胞抗凋亡保护作用的机制之一。     

鬼臼毒素衍生物QW-83对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:研究鬼臼毒素衍生物QW-83对人宫颈癌He La细胞凋亡的影响及其机制。方法:以0(阴性对照)、0.01、0.1、1、10μmol/L QW-83和阳性药物依托泊苷(VP-16)分别培养人宫颈癌He La细胞48 h后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制率和半数抑制浓度(IC50);以0(阴性对照)、2.5、5、10μmol/L QW-83培养细胞48 h后,采用Hochest 33342染色观察细胞形态,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞中凋亡相关基因P53、Bax、Casepase-3、Casepase-8、Casepase-9和Bcl-2 m RNA的表达。结果:与阴性对照比较,1、10μmol/L VP-16和QW-83对He La细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01),IC50值分别为(5.11±0.43)、(4.96±0.54)μmol/L;染色结果显示,QW-83作用后细胞凋亡明显,细胞固缩;流式细胞检测结果显示,QW-83作用后细胞凋亡率呈浓度依赖性升高,为16.89%~62.56%;RT-PCR结果显示,QW-83作用后细胞中P53、Bax、Casepase-3、Casepase-8、Casepase-9 m RNA的表达增强,Bcl-2 m RNA的表达减弱,Bax/Bcl-2比例升高(P<0.05)。结论:鬼臼毒素衍生物QW-83能诱导人宫颈癌He La细胞的凋亡,其机制可能与调控凋亡相关基因m RNA的表达有关。     

卡托普利对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响

目的:研究心肌细胞凋亡和凋亡相关基因在心力衰竭发展中的变化及卡托普利的干预作用,从细胞凋亡角度探讨血管紧张转化酶抑制剂治疗心力衰竭的机制。方法:选用雄性SD大鼠,随机分为假手术组(sham组)、心梗组(M I组)和心梗后卡托普利干预组(M I+C ap组),经冠脉前降支结扎术建立心肌梗死模型,术后24小时的M I+C ap组大鼠给予C ap 400m g.kg-1.-d 1,饮水给药,sham组和M I组大鼠饲普通饮用水。术后4周、6周检测大鼠非心梗区心肌细胞凋亡指数;w estern蛋白印迹检测心肌细胞凋亡加速基因Bax和凋亡抑制基础B cl-2的蛋白表达水平,并计算Bax/B cl-2蛋白比;压力传感器记录左室血流动力学改变。结果:①术后6周非心梗区心肌细胞凋亡指数,M I组及M I+C ap组均显著高于sham组(P<0.01),但M I+C ap组显著低于M I组(P<0.01);②与sham组相比,M I组和M I+C ap组术后6周时的Bax蛋白表达量均显著增高(P<0.01),但M I+C ap组显著低于M I组(P<0.01);M I组和M I+C ap组的B cl-2蛋白表达量均低于sham组(P<0.01),而M I+C ap组显著高于M I组(P<0.01);③M I组和M I+C ap组大鼠的心功能明显降低(与sham组比,P<0.01),而M I+C ap组大鼠的心功能显著改善(与M I组比,P<0.01)。结果:血管紧张素转化酶抑制剂可通过调节凋亡相关基因Bax和B cl-2的蛋白表达,减少心肌细胞凋亡,改善心功能。     

糖皮质激素诱导大鼠原代培养杏仁核神经元的凋亡

目的探讨糖皮质激素(GC)对大鼠杏仁核神经元凋亡的影响。方法原代培养大鼠杏仁核神经元,首先采用免疫荧光技术对培养的原代神经元及其是否存在丰富的糖皮质激素受体分别进行了鉴定,并用流式细胞术检测不同浓度的人工合成糖皮质激素地塞米松(10~(-9)~10~(-6)mol·L~(-1))对杏仁核神经元细胞凋亡的影响。然后将实验分为4组:对照组(CON)、地塞米松(DEX)刺激组、地塞米松和米非司酮(受体抑制剂)共同刺激组(DEX+MIF)、米非司酮刺激组(MIF)。用TUNEL原位技术检测各组的凋亡情况,并用RTPCR技术检测各组Bax mRNA的表达变化。结果 (1)与CON组相比,不同浓度的DEX作用于神经元后,神经元凋亡率明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性;(2)TUNEL染色结果显示,DEX组细胞凋亡率明显高于CON组(P<0.05),而与DEX组相比,DEX+MIF组凋亡率明显降低(P<0.05),MIF组与CON组相比无明显差异(P>0.05);(3)与CON组相比,DEX组Bax mRNA的表达量明显升高(P<0.05),而与DEX组相比,DEX+MIF组的Bax mRNA的表达量明显降低(P<0.05),MIF组与CON组相比无明显差异(P>0.05)。结论糖皮质激素可以通过其受体诱导大鼠原代培养杏仁核神经元的凋亡。     

银杏叶提取物对Aβ25-35诱导的神经细胞毒性的防治作用

目的探讨银杏叶提取物对Aβ25-35诱导体外培养神经细胞毒性的防治作用。方法 培养大鼠大脑皮质神经元细胞,构建AD细胞模型,制模前后加用银杏叶提取物(EGb)干预,四甲基噻唑蓝比色法(MTT)测定神经细胞活力,West-ern印迹分析法测Caspase3、Bcl-2、Bax表达。结果 EGb显著提高预防组细胞活力(P<0.01),增强预防组及治疗组Bcl-2表达(P<0.01),明显抑制预防组及治疗组Caspase3、Bax表达(P<0.01)。结论 EGb可有效的对抗Aβ25-35的神经毒性作用,抑制细胞凋亡。     

去卵巢大鼠脑内凋亡基因蛋白表达及半枝莲黄酮的干预作用

目的:探讨去卵巢大鼠脑内凋亡基因Bcl-2,Bax和p53的蛋白表达及半枝莲黄酮（Scutellaria barbata flavonoid, SBF）的干预作用。方法:摘除3月龄雌性Sprague-dawley(SD)大鼠卵巢10个月,模拟老年性痴呆（Alzheimer’s disease,AD）模型,采用免疫组化法检测脑内凋亡基因Bcl-2,Bax和p53的蛋白表达,评价SBF对摘除卵巢诱导大鼠神经细胞凋亡的抑制作用。结果:摘除大鼠双侧卵巢可使大脑皮质中Bcl-2,Bax和p53的表达异常改变,Bcl-2阳性表达神经元数量明显减少,Bax和p53阳性表达神经元数量明显增多。去卵巢大鼠连续36 d灌胃（ig）SBF 17.5,35和70 mg?kg-1可不同程度地改善去卵巢大鼠大脑皮层凋亡基因的异常表达。结论:摘除大鼠卵巢10个月可以诱导神经细胞凋亡,SBF对神经细胞凋亡有对抗作用,提示SBF可能有利于对AD的治疗。     

槐定碱对缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子释放和细胞凋亡的影响

摘要：目的:研究槐定碱（sophoridine）对缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子释放和细胞凋亡的影响及机制。方法:星形胶质细胞分成对照组、缺氧复氧（H/R）组、sophoridine低、中、高剂量组(10,20,40 mg·L-1)、sophoridine(40 mg·L-1)+pcDNA(阴性对照载体组、sophoridine(40 mg·L-1)+pcDNA-Toll样受体4（TLR4）（TLR4过表达载体）组。CCK-8法检测细胞增殖活性变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、TLR4蛋白表达,ELISA法检测细胞分泌的肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）变化。结果:与对照组比较,H/R组星形胶质细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6增多,TLR4蛋白水平升高（P<0.05）。与H/R组比较,sophoridine低、中、高剂量组星形胶质细胞增殖活性逐渐升高,细胞凋亡率逐渐降低,细胞中Bax蛋白表达逐渐减少,Bcl-2蛋白表达逐渐增多,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6逐渐减少,TLR4蛋白水平逐渐降低（P<0.05）,且呈剂量相关性（P<0.05）。与sophoridine+pcDNA组比较,sophoridine+pcDNA-TLR4组星形胶质细胞中TLR4蛋白表达增多,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6增多（P<0.05）。结论:槐定碱通过下调TLR4从而抑制缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子的释放和细胞凋亡     

高磷通过SET8调控p53/Bcl-2/Caspase信号通路促进血管平滑肌细胞钙化

摘要：目的 探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET8在高磷诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化中的作用及机制。 方法 选取80～100 g的清洁雄性SD大鼠6只,取其胸主动脉,分离VSMCs后进行原代培养。VSMCs传至第3～4 代,铺6孔板,并给予相应刺激。将VSMCs随机分为正常组和高磷组（10 mmol/L β-甘油磷酸）,培养4 d后茜素红染 色观察钙结节形成情况,甲基麝香草酚蓝比色法钙含量,流式细胞数检测细胞凋亡,RT-PCR 和 Western blot 检测 SET8、p53、Bcl-2、Bax、Caspase3的mRNA和蛋白的表达水平。之后用脂质体将SET8-shRNA质粒与NS-shRNA转染 VSMCs 作为 SET8-shRNA 组和空质粒组,未转染组作为正常对照组,RT-PCR 和 Western blot 检测 p53、Bcl-2、Bax、 Caspase3的mRNA和蛋白的表达水平。结果 （1）高磷组钙盐沉积较正常组明显增加（P＜0.05）。（2）流式细胞仪检 测结果显示,与正常组相比,高磷组VSMCs的细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）。（3）与正常组相比,高磷组Bcl-2、SET8 的mRNA和蛋白表达水平下降;p53、Bax、Caspase3的mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.05）。（4）干扰SET8基因表达 后钙盐沉积增加（P＜0.05）,Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平下降;p53、Bax、Caspase3的mRNA和蛋白表达水平升高 （P＜0.05）。结论 高磷通过SET8调控p53/Bcl-2/Caspase信号通路,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,上调促凋亡蛋白 Bax和Caspase3的表达,进而参与调控VSMCs的钙化。     

Methyl methanesulfonate and hydrogen peroxide differentially regulate p53 accumulation in hepatoblastoma cells.

Genotoxic chemicals not only damage cellular DNA, but may also induce cell apoptosis if they are lethal to the cell. p53, Bcl-2 and Bax play important roles in the regulation of genotoxic chemical induced cell apoptosis. Since the mechanisms by which cellular DNA damaged by different DNA-damaging chemicals may not be the same, we studied the involvement of p53, Bcl-2 and Bax in apoptosis induced by methyl methanesulfonate (MMS) and hydrogen peroxide (H2O2). H2O2 damages DNA by free radical generation and MMS damages DNA by DNA methylation. At non-lethal doses, both H2O2 and MMS induced high level of p53 protein accumulation. Nevertheless, while the amount of p53 protein increased with the dose of MMS and the occurrence of apoptotic cell death events, H2O2 doses that induce cell apoptosis attenuated the p53 protein accumulation level. Lethal MMS treatment also increased Bax, but not Bcl-2 expression, whereas in H2O2 induced apoptosis, the level of both Bcl-2 and Bax declined. These results indicate that toxic chemicals differentially regulate the accumulation of p53 protein. Thus, the pathways of toxic chemicals induced cell apoptosis are different and independent.     

Differential regulation of P53, c-Myc, Bcl-2, Bax and AFP protein expression, and caspase activity during 10-hydroxycamptothecin-induced apoptosis in Hep G2 cells

10-Hydroxycamptothecin (HCPT), a DNA topoisomerase I (Topo I) inhibitor, exhibited a remarkable apoptosis-inducing effect on human hepatoma Hep G2 cells. We studied the effect of HCPT upon the expression of P53, c-Myc, Bcl-2, Bax and alpha-fetoprotein (AFP) proteins, and caspase (caspase-1 and caspase-3) activity of Hep G2 cells. It showed that HCPT at a dose of 0.1 microg/ml increased the expression of P53, c-Myc and Bax protein, and decreased the expression of Bcl-2 and AFP. The increase of P53, which was remarkable after only 3 h incubation with HCPT, occurred much earlier than the changes of other proteins, suggesting that the increase of P53 expression may be the upstream event in the apoptosis of Hep G2 cells induced by HCPT. Both caspase-1 and caspase-3 were activated in Hep G2 cells by HCPT treatment, suggesting that caspase-1 and caspase-3 are involved in the process of apoptosis in Hep G2 cells, and may be the main effectors of the apoptosis.     

Altered expression of p53, Bcl-2 and Bax induced by microcystin-LR in vivo and in vitro.

It has been reported that MC-LR could induce apoptosis in a variety of cell types. Although the induction of oxidative stress and mitochondrial alteration played critical role in MC-LR induced apoptosis, but the exact mechanisms of MC-LR induced apoptosis are still unknown. In spite of extensive studies on MC-LR mediated cell damages, there is little information on the protein expression of p53 and Bcl-2, Bax in vivo and in vitro, which are vital regulator of apoptosis in response to a variety of stimuli. The present study was undertaken to determine the expression level of p53 and Bcl-2, Bax in cultured hepatocytes and rat liver tissues. The results show that MC-LR can increase the expression of p53 and Bax significantly both in vivo and in vitro, however, MC-LR can only decrease the expression of Bcl-2 significantly in vitro and there is no difference observed in vivo. It can be concluded that the expression of p53, Bcl-2 and Bax are involved in the regulation of MC-LR induced apoptosis.     

扇贝多肽对抗UVB辐照所致小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的研究

目的研究扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐照损伤小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用。方法以UVB辐照制备损伤模型,预先给予PCF,应用透视电镜观察细胞超微结构的变化;免疫细胞化学检测细胞p53,Bcl-2,Bax基因蛋白的表达;原位杂交检测细胞P38mRNA的基因表达。结果UVB辐照引起小鼠胸腺淋巴细胞凋亡,PCF能明显减轻UVB辐射损伤引起的细胞超微结构改变。PCF还能抑制突变型p53蛋白和促凋亡蛋白Bax的表达,增强凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达以及抑制P38 mRNA基因的表达。结论PCF对UVB辐照的体外小鼠胸腺淋巴细胞具有明显的保护作用。     

SB203580对大鼠再灌注损伤肺细胞凋亡的干预

目的：探讨P38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）特异性抑制剂SB203580对再灌注损伤肺细胞凋亡的影响。方法：30只SD大鼠随机分为3组：假手术对照（control,C）组,肺缺血／再灌注（I／R）组,肺缺血／再灌注＋SB203580（S组）;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡的改变：免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达;电镜观察肺组织形态学改变。结果：I／R组与C组比较,Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达均明显上调（均P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值显著下降（P〈0．01）,凋亡指数（AI）显著增高（P〈0．01）,肺组织超微结构明显异常;使用SB203580后,Bcl-2蛋白表达上调（P〈0．01）,Bax蛋白表达下调（P〈0．01）,Bel-2／Bax比值上升（P〈0．01）,AI显著下降（P〈0．01）,肺组织超微结构异常改变不同程度减轻。结论：SB203580可通过上调Bcl-2蛋白的表达、下调Bax蛋白的表达、调控Bcl-2／Bax蛋白之间的平衡而减轻细胞凋亡,对肺缺血／再灌注损伤发挥积极的防治作用。     

The course of uncarinic acid E-induced apoptosis of HepG2 cells from damage to DNA and p53 activation to mitochondrial release of cytochrome c

Uncarinic acid E, an active component isolated from Gelsemium elegans BENTH, has been reported to exhibit antitumor effects, but little is known about its molecular mechanisms of action. In this study, the growth-inhibitory activity of uncarinic acid E for HepG2 cells is in time- and dose-dependent manner. HepG2 cells treated with uncarinic acid E exhibited several typical characteristics of apoptosis through photomicroscopical observation, DNA agarose gel electrophoresis. The inhibitory effect of uncarinic acid E on HepG2 cells was partially reversed by the inhibitors of pan-caspase, caspase-3 and caspase-6. The protein expression ratio of Bcl-xL/Bax and Bcl-2/Bax was down-regulated and uncarinic acid E-induced apoptosis involves the initial phase mediated by the balance among Bcl-xL, Bcl-2 and Bax proteins, resulting in cytochrome c release from the mitochondria. Uncarinic acid E significantly increased the expression of p53 proteins indicates that p53 plays a pivotal role in the initiation phase of uncarinic acid E-induced HepG2 cell apoptosis. The phoshatidylinositol 3-kinase (PI3-K) family inhibitor wortmanin and the MEK inhibitor (PD98059) rescued the viability loss induced by uncarinic acid E through the expression of p53. Taken together, uncarinic acid E induces apoptosis in HepG2 cells via accumulation of p53, alters the Bax/Bcl-2 ratio, and activates caspases, resulting in cytochrome c release from the mitochondria.     

XPD和P53对HepG2.2.15增殖及乙型肝炎病毒X蛋白表达的影响

目的:探讨人着色性干皮病基因D(XPD)和P53对人肝癌细胞株HepG2.2.15增殖及乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)、Bcl-2和Bax基因表达的影响.方法:用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2转染HepG2.2.15细胞,转染后第2天给予20 μmol/L的Pifithrin-α(P53抑制剂)孵育24h.分为空白对照组、pEGFP-N2组、pEGFP-N2/XPD组、pEGFP-N2/XPD+Pifithrin-α组及Pifithrin-α组.用RT-PCR和Western blotting方法检测XPD、HBx、Bcl-2和Bax表达的变化;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期.结果:(1)重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高(均P＜0.001);XPD表达增高使得HBx和Bcl-2表达降低,同时使得Bax表达增高,而Pifithrin-α能抑制XPD这一作用(均P＜0.01).(2)XPD表达增高抑制了细胞增殖活力,而Pifithrin-α能抑制XPD降低细胞活力的作用(均P＜0.001).(3)XPD表达增高引起了细胞G1期增加、S期减少,而Pifithrin-α能抑制XPD这一作用(均P ＜0.001).结论:XPD是通过P53途径抑制肝癌细胞增殖,下调HBx和Bcl-2的表达并上调Bax的表达;XPD、P53和HBx三者之间能相互作用、相互影响,共同调节肝癌的发生与发展.     

1，25-二羟基维生素D3减少Heymann肾炎鼠足细胞凋亡脱落

：观察凋亡蛋白p53、Bax、Bcl-2,粘附蛋白整合素α3β1、肌营养不良蛋白聚糖（DG）在Heymann肾炎鼠肾小球的表达,以及1,25-（OH）,D,对其表达的影响。方法：雌性SD大鼠随机分为对照组和Heymann肾炎模型组;后者经腹腔注射FX1A抗原诱导肾炎模型,再随机分Heymann肾炎组和1,25-（OH）2D3组。1,25-（OH）2D3组皮下埋置渗透性微量泵,给予1,25-（OH）,D,3ng·100g^-1·d^-1,连用4周。检测大鼠尿蛋白、尿足细胞。电镜检测每视野足细胞数、足突平均宽度。免疫组织化学sP法观察肾小球p53、Bax、Bcl-2,整合素仅381、肌营养不良蛋白聚糖（DG）蛋白的表达。原位末端标记（TUNEL）法检测足细胞凋亡。结果：与对照组相比,Heynmnn肾炎组大鼠尿蛋白、尿足细胞排泄明显升高;足细胞数目减少,足突宽度增加;肾小球p53、Bax表达增高,Bcl-2表达减少,足细胞凋亡明显增多;整合素α3β1、DG表达明显减少。与Heymann肾炎组相比,1,25-（OH）2D3组尿蛋白、尿足细胞排泄明显减少;肾小球p53、Bax表达减少,Bcl-2表达增加,足细胞凋亡减少;整合素α3β1、DG表达明显增加。结论：1,25-（OH）2D3可减少Heymann肾炎鼠肾小球p53、Bax的表达,增加Bcl-2的表达,减少足细胞凋亡。亦可增加整合素α3β1、DG在肾小球中的表达,减少足细胞脱落。从而维持肾小球足细胞数量。     

T-2 toxin induces apoptosis, and selenium partly blocks, T-2 toxin induced apoptosis in chondrocytes through modulation of the Bax/Bcl-2 ratio.

T-2 toxin is one of the mycotoxins, a group of type A trichothecenes produced by several fungal genera including Fusarium species. In the present study, we have investigated the apoptotic effects of T-2 toxin on chondrocytes and the relationship between T-2 toxin induced chondrocyte apoptosis and its influence on Bcl-2/Bax protein and mRNA expression. We have also examined the inhibitory effects of selenium on chondrocyte apoptosis induced by T-2 toxin. We have combined morphological and biological techniques to establish the relevance of apoptosis in human chondrocyte death induced by T-2 toxin. Treatment with T-2 toxin caused accelerated apoptosis in a concentration dependent manner. The apoptosis induced by T-2 toxin involved an increased Bax/Bcl-2 ratio. Bcl-2 mRNA expression remained unchanged in chondrocyte apoptosis induced by T-2 toxin treatment, while Bax mRNA expression increased following treatment with T-2 toxin. Selenium could partly block the apoptosis of chondrocytes induced by T-2 toxin through decreasing the Bax/Bcl-2 ratio. These results suggest that, under our experimental conditions, apoptosis of chondrocytes can be induced by T-2 toxin (1-20ng/mL) via the Bcl-2 and Bax proteins, and the Bax/Bcl-2 ratio may play a critical role in governing the susceptibility to apoptosis induced by T-2 toxin in human chondrocytes.