野生型p53基因转染对人胃癌细胞的作用

目的评价外源性p53基因对人胃癌细胞生物学行为的影响。方法以复制缺陷型重组腺病毒为载体,将人野生型p53基因导入不同p53状态的3种人胃癌细胞系,用免疫组化法检测p53基因在胃癌细胞中的表达;用流式细胞计数、细胞DNA片段化分析检测细胞周期分布和凋亡。结果在高MOI病毒剂量下,外源p53基因在3种胃癌细胞的胞核中均高效表达,并可使细胞产生明显的G2／M阻滞和凋亡,而且这种作用不依赖细胞内在的p53基因状态。结论无论体外还是体内实验,野生型p53基因转染胃癌细胞后均有明显的生物效应。该实验为进一步开展p53基因治疗的临床研究提供了理论依据。     

重组人p53腺病毒提高胃癌细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的：研究重组人p53腺病毒增加胃癌细胞对顺铂敏感性的作用。方法：重组人p53腺病毒感染胃癌细胞BGC-823，Western blot法检测p53蛋白在胃癌细胞中高表达；MTT法测定重组人p53腺病毒单独及联合顺铂用药的不同浓度处理细胞的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡率。结果：重组人p53腺病毒感染BGC-823 48h，p53蛋白在BGC-823中高表达，并产生G2／M期阻滞和细胞凋亡。重组人p53腺病毒联合顺铂用药增加顺铂的敏感性，有剂量时间的依赖性。结论：腺病毒介导p53基因感染BGC-823细胞诱导凋亡并增加胃癌细胞对顺铂的敏感性，为p53基因治疗与胃癌化疗临床结合提供了可靠的实验依据。     

抑癌基因p53提高人胃癌细胞热敏感性的作用

目的　评价抑癌基因 p5 3对人胃癌细胞 (BGC82 3 )热敏感性的影响。 方法　 4种不同 p5 3基因状态的人胃癌细胞系始终用于本实验。用流式细胞光度术 (FCM )分析加热 42℃ 2h或 43℃ 3 0min后 ,在 3 7℃下培养 8h或 16h ,4种细胞系细胞周期分布和凋亡的反应。以 43℃ 2 0min两次加热后的种植肿瘤的抑制曲线比较 4种细胞的热敏感性。结果　在 3 7℃正常条件下 ,4种细胞系细胞周期各时相比例都没有明显的差异。加热 42℃ 2h或 43℃ 3 0min后 3 7℃恢复 8或 16h ,p5 3正常的wtp5 3细胞出现强烈的S期阻滞 ,而且 ,恢复 16h该细胞出现明显的预示凋亡的亚G1峰 ;而在同样条件下 ,其他 3种 p5 3异常的细胞系S期比例没有显著的变化 (P >0 .0 5 ) ,且都没有出现亚G1峰。两次加热wtp5 3细胞种植肿瘤生长比其他 3种细胞肿瘤更明显受到抑制 (P <0 .0 5 )。结论　以上结果证实了 p5 3基因促进了加热后肿瘤细胞的S期阻滞和凋亡 ,从而明显地提高肿瘤细胞的热敏感性。     

腺病毒介导p53基因治疗膀胱癌

膀胱癌是常见的恶性肿瘤之一,据美国癌症学会2006年报道,美国每年有超过56000名新发膀胱癌病例,位居男性癌症发病率中第四位、女性癌症发病率第九位。膀胱癌90％是移行细胞癌（transitional cell carcinomas,TCC）,目前主要的治疗方法为经尿道膀胱肿瘤切除术（transurethral resection of bladdertumor,TURBT）,但该手术术后5年内复发率高达70％,其中有25％的复发患者会进展为浸润性膀胱癌,进一步侵及膀胱肌层。     

幽门螺杆菌和p53基因与胃癌的关系研究

研究幽门螺杆菌（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）感染、突变型 ｐ５３基因表达与胃癌的关系,以及胃癌时 ＨＰ感染与突变型ｐ５３基因表达的关系。方法：用快速尿素酶试验和ＥＬＩＳＡ法检测ＨＰ和ＨＰ抗体,用免疫组化方法测定突变型ｐ５３蛋白。结果：胃癌和胃癌前病变组ＨＰ阳性率高于其它组（Ｐ＜０．０５）,而胃癌组ＨＰ阳性率和胃癌前病变组无显著差异（Ｐ＞０．０５）,胃癌组突变型 ｐ５３蛋白阳性率高于胃癌前病变组（Ｐ＜０．０５）,胃癌中 ＨＰ阳性者突变型 ｐ５３蛋白阳性率高于 ＨＰ阴性者（Ｐ＜０．０５）。结论：胃癌的发生和ＨＰ感染、突变型ｐ５３基因表达有关,胃癌时ＨＰ感染与突变型ｐ５３基因表达也存在相关性。     

重组人p53腺病毒治疗恶性肿瘤的护理进展

阐述了重组人p53腺病毒作用机制,从药品使用注意事项、重组人p53腺病毒常见不良反应及防治措施方面对重组人p53腺病毒治疗恶性肿瘤的护理进展进行了综述。     

腺病毒介导的PTEN和p16基因对前列腺癌细胞系的作用

[目的]探讨腺病毒介导的PTEN和p16基因蛋白对抑制前列腺癌细胞增殖和调控其凋亡的作用.[方法]构建携带人PTEN和p16基因的腺病毒载体,转染体外培养的前列腺癌细胞系PC-3,采用RTPCR、Westem b1ot检测目的基因的表达.通过细胞生长试验、流式细胞仪检测PC-3转染前后细胞增殖和凋亡的变化.[结果]病毒滴度 Ad-PTEN为1.8×107 pfu/ml、Ad-p16为1.2×1010 pfu/ml,RT-PCR检测可见PTEN-mRNA(462bp)和p16-mRNA(520bp)表达,Western blot检测有PTEN蛋白(60KD)和p16蛋白(16KD)特异表达,并可明显抑制PC-3细胞的增殖,诱导其凋亡,联合基因治疗组与单基因组相比差异显著.[结论]PTEN和p16可明显的抑制前列腺癌细胞株PC 3的增殖,增加细胞的凋亡,转染携带PTEN和p16的重组腺病毒载体有望成为治疗前列腺癌的有效方法.     

重组人p53腺病毒注射液治疗口腔癌患者的护理

目的探索重组人p53腺病毒注射液治疗口腔癌患者的可行性以及基因治疗的护理方法。方法自2008年8月—2009年6月,我科对15例晚期口腔癌患者应用重组人053腺病毒注射液进行瘤体内注射、颞浅动脉插管泵人治疗进行疗效观察及护理。结果15例患者均康复出院,肿瘤完全消退（CR）3例,肿瘤部分消退（PR）12例,无护理并发症发生。结论应用重组人p53腺病毒注射液治疗口腔癌值得在临床推广;同时对应用重组人p53腺病毒注射液治疗的口腔癌患者实施针对性护理措施,能减少护理并发症,充分保证药物疗效。     

重组腺病毒 Ad-p53对食管癌细胞的杀伤作用与腺病毒受体表达相关

<正>食管癌是发生在食管的恶性肿瘤,虽然早期发现和根治性手术能够起到良好的治疗效果,但对于手术耐受性差的老年或晚期患者,应用基因治疗有可能改善患者预后和生活质量。重组人p53腺病毒(Ad-p53)已经获准在临床上应用于头颈部肿瘤,但在食管癌中的应用研究仍然有限。据已完成的临床试验报道显示,Ad-p53对食管癌细胞具有细胞毒性且在食管癌患者的瘤内注射是安全的[1-2]。诱导细胞凋亡是Ad-p53直接的抗肿瘤机制[2]。Ad-p53属     

寡核苷酸芯片在胃癌p53基因热点突变检测中的应用研究

目的：应用寡核苷酸芯片检测胃癌p53基因突变，初步建立检测多位点基因突变的方法。方法：提取胃癌基因组DNA，以荧光标记引物进行PCR，扩增p53基因特异性片段；将修饰合成的探针按微矩阵排列点样于化学处理过的载玻片上，制成寡核等酸芯片；将PCR产物与寡核等酸芯片进行杂交，经严格洗片后在激光共聚焦扫描仪上扫描芯片，获取图象分折结果。结果：检测10例胃癌组织标本的p53基因突变情况，发现其中7例为野生型，3例在第7外显子发生；氟突变。结论：p53基因突变与胃癌发生机制有关，同时芯片技术在检测基因突变方面的应用将对胃癌研究的基础理论及临床应用具有重要意义。     

重组人p53腺病毒基因治疗腹膜后平滑肌肉瘤1例的护理体会

肿瘤基因治疗是指应用基因工程和细胞生物学技术将外源基因导入体内,修复或补充失去正常功能的基因,抑制体内某些基因的过度表达,从而达到治疗目的。重组人p53腺病毒注射液(商品名：今又生)是治疗恶性肿瘤的基因制品,用于治疗头颈部鳞癌和多种非头颈部肿瘤;采用瘤内给药,胸腔、腹腔、肝动脉注射和气管、膀胱内给药以及静脉滴注等方式;可单独使用,也可联合放疗、化疗、手术治疗。我科于2004年12月为1例腹膜后平滑肌肉瘤患者实施了2次重组人p53腺病毒基因治疗,现报告如下。     

重组人p53腺病毒改善晚期肝癌患者的生存质量研究

目的：评价重组人p53腺病毒（recombinant adenovirus-p53 ）注射液治疗晚期肝癌对患者生存质量的改善作用。方法：自2003年10月至2006年10月，临床观察晚期肝癌病例共69例，其中应用重组人p53腺病毒注射液治疗39例，一般营养支持治疗30例作为对照组。每次基因治疗剂量1×10^12 VP或2×10^12 VP，每周1次．4次为1个疗程。记录患者生存质量评分。结果：重组人p53腺病毒注射液治疗晚期肝癌，大部分患者病情稳定．生存质量评分增加，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：应用重组人p53腺病毒注射液可以改善晚期肝癌患者的生存质量。[著者文摘]     

突变型p53在胃癌中的表达及临床意义

目的 研究突变型ｐ５３基因在人胃癌组织中的表达及临床意义。方法 分别应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及原位分子杂交技术,检测４１例胃癌组织和２６例癌旁非病变粘膜ｐ５３基因点突变及ｍＲＮＡ过表达情况。结果 人胃癌组织存在ｐ５３基因突变和ｍＲＮＡ过表达率明显高于癌旁非病变粘膜（Ｐ〈０．０５）。肿瘤组织分化越差,ｐ５３突变率越高,ｍＲＮＡ过表达的分布越广泛（Ｐ〈０．０５）。发生ｐ５３基因突变的胃癌病人较未发生者更易发生淋巴结转移（Ｐ〈０．０５）。结论 胃癌的发生、发展与ｐ５３基因突变有关,检测胃癌组织中ｐ５３突变情况可为胃癌的诊断、分期及预后评估提供可靠依据。     

重组人p53腺病毒治疗中晚期肝癌的毒副反应护理

重组人p53腺病毒(rAd-p53)是世界上第1个获准上市的肿瘤基因治疗药物,由复制缺陷性腺病毒载体和野生型p53基因组成。rAd-p53通过腺病毒感染肿瘤细胞把野生型p53基因带入肿瘤细胞内,表达的p53蛋白具有抗肿瘤作用。目前,rAd-p53已用于多种实体性恶性肿瘤,并成为     

腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对血管平滑肌细胞的作用

目的：研究腺病毒载体介导肝细胞生长因子（HGF）基因感染血管平滑肌细胞后在缺氧和正常供氧时的细胞凋亡和迁移情况。方法：以肝细胞中抽提的总RNA为模板，反转录cDNA，采用逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）获得HGF基因，并引入酶切位点，转染大肠杆菌，筛选阳性菌落，经酶切及测序，转染腺病毒，经三轮扩增，制备高效表达HGF基因腺病毒载体（Ad-HGF），再感染人血管平滑肌细胞（VSMC）为观察组（Ad-HGF组）；未感染为阴性对照组（DMEM组）；以含人工合成HGF为阳性对照组（HGF组），分别在正常供氧和缺氧情况下观察细胞的凋亡和迁移情况。结果：与DMEM组及HGF组比较，Ad-HGF组在缺氧和正常供氧时VSMC的迁移率及凋亡细胞数差异均无显著性意义。结论：HGF基因感染VSMC后，在缺氧情况下并不促进VSMC的迁移。亦不抑制其凋亡。     

重组人p53腺病毒注射液治疗食管癌1例护理体会

2005年3月，我院应用重组人p53腺病毒注射液治疗食管癌1例，疗效满意。现报告如下。     

腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对血管内皮细胞的作用

目的：研究腺病毒载体介导肝细胞生长因子（HGF）基因感染血管内皮细胞后在正常供氧、缺氧及缺氧后复氧的情况下细胞的凋亡情况。方法：将分离、培养的内皮细胞分为3组，分别给予M199（对照组）、HGF（HGF组）和HGF基因腺病毒载体（Ad-HGF组），分别在正常供氧、缺氧及缺氧后复氧3种情况下观察细胞的凋亡情况。结果：Ad-HGF组及HGF组细胞凋亡数均低于对照组（P〈0．01），Ad-HGF组与HGF组细胞凋亡数差异无显著性意义。结论：腺病毒载体介导HGF基因感染内皮细胞后能在缺氧情况下有效地阻止细胞凋亡。     

外源性野生型p53基因对HL-60细胞的作用

野生型ｐ5 3基因是一种肿瘤抑制基因 ,急性髓系白血病(ＡＭＬ)患者伴有 17号染色体异常 [ｉ(17ｑ) ]者ｐ5 3基因点突变的发生率可高达 40 %。大多数ＡＭＬ细胞系 ,如ＨＬ 6 0、ＣＭＫ、ＭＬ 1、Ｕ937均可检出ｐ5 3基因严重缺失或者突变[1,2 ] 。我们利用脂质体介导法将两种ｐ5 3基因ｐＣ5 3 ＳＮ3(含人野生型ｐ5 3ｃＤＮＡ)、ｐＮ5 3ｃＧ(Ｖａｌ135 ) (32 .5℃表现野生型ｐ5 3基因功能 )分别导入Ｐ5 3蛋白缺失的ＨＬ 6 0细胞中 ,观察它的表达及其对ＨＬ 6 0细胞的影响。材料和方法1　细胞系及培养体系　ＨＬ 6 0细胞由福建省医学科学研究…     

外源笥野生型p53基因对K562细胞的作用

为了研究外源性野生型p53基因（wt-p53）对K562细胞的作用。探索p53基因治疗白血病的可能性,两种p53基因pC53-SN3(wtp53cDNA)和pN53cG(Val135)(32.5℃表现wtp53功能）通过脂质体介导的DNA转染法导入无P53蛋白表达的K562细胞,获得细胞克隆K-SN3及K-pN53cG。通过生长曲线、克隆形成率、细胞周期分析,片段化DNA及TUNEL检测,联苯胺染色等指标观察外源性wtp53基因对K562细胞的影响,结果显示;（1）RT-PCR检测K-SN3及K-pN53cG均获表达p53基因,但前表达明显低于后;（2）K-SN3,K-pN53cG(32.5℃）细胞生长减慢,克隆形成明显受抑,且G0/G1期增加,S期减少,以上现象均以K-pN53cG细胞（32.5℃）更明显;（3）K-pN53cG932.5℃）可检测到明显凋亡改变,而K-SN3则向红系分化,说明wtp53基因表达使K562细胞生长受到明显抑制,并提示p53低表达可能促使K562细胞向红系分化,而p53高表达诱导K562细胞出现凋亡,wtp53对于白血病基因治疗有潜在的应用价值。     

重组人P53腺病毒对逆转非小细胞肺癌细胞株A549/顺铂耐药的研究

目的 探讨重组人P53腺病毒(Ad-P53)对已产生顺铂耐药的人肺腺癌细胞的耐药逆转作用.方法 将重组腺病毒载体所携带的野生型p53基因导入人肺腺癌耐药细胞株A549/顺铂,并联合应用化疗药物顺铂,通过Western blot法分析外源野生型p53基因在细胞内的表达,MTT法观察其对细胞生长的影响.结果 Western blot法证实外源p53基因能在A549/顺铂细胞中高效表达.MIT法观察到Ad-P53对肺癌细胞的抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性效应(P均<0.05).100MOI Ad-PS3与0.5 mg/L顺铂联合应用后72 h,对A549/顺铂细胞的生长抑制率达(41.53±0.59)%,显著高于单用Ad-P53组[(15.69±0.96)%]和顺铂组[(7.40±1.13)%,P<0.001].结论 Ad-P53腺病毒可以逆转肺腺癌细胞对顺铂的耐药性.