早发性和迟发性帕金森病患者parkin基因的检测

目的观察早发性帕金森病(EOP)和迟发性帕金森病(LOP)患者中parkin基因的突变情况.方法EOP17例,LOP27例.抽取患者外周血后提取DNA,PCR扩增parkin基因Exon3、4、5、7,琼脂糖凝胶电泳鉴定外显子缺失突变,单链构象多态性检测点突变.结果17例EOP中存在Exon3和Exon5联合缺失1例,27例LOP中存在Exon5缺失1例.单链构象多态性未发现单链泳动异常.4例有家族史的患者中存在parkin基因突变1例(25%),40例散发患者中存在parkin突变1例(2.5%).结论无论是EOP还是LOP患者中均可检测到parkin基因突变.     

散发性早发帕金森病parkin基因1、2号外显子突变的研究

[目的]研究parkin基因1、2号外显子突变与散发性早发帕金林病发病的关系。[方法]应用聚合酶链反应（PCR）、琼脂糖凝胶电泳和单链构象多态性（SSCP）方法检测52例散发性早发帕金森病病人外周血白细胞DNA的parkin基因1、2号外显子突变情况,并对SSCP有异常泳动外显子进行DNA测序。[结果]发现1例病人（1.9％）存在parkin基因2号外显子缺失,2例病人（3.8％）分别存在parkin基因1、2号外显子PCR产物 SSCP发生泳动变位,测序发现1号外显子为杂合突变（T103C）,2号外显子 为纯合突变（G237C）。[结论]parkin基因1、2号外显子突变可能与部分散发性早发帕金森病发病有关。     

散发性早发帕金森病parkin基因1、2号外显子突变的研究

【目的】研究parkin基因1、2号外显子突变与散发性早发帕金森病发病的关系。【方法】应用聚合酶链反应（PCR）、琼脂糖凝胶电泳和单链构象多态性（SSCP）方法检测52例散发性早发帕金森病病人外周血白细胞DNA的parkin基因1、2号外显子突变情况,并对SSCP有异常泳动外显子进行DNA测序。【结果】发现1例病人（1.9%）存在parkin基因2号外显子缺失,2例病人（3.8%）分别存在parkin基因1、2号外显子PCR产物SSCP发生泳动变位,测序发现1号外显子为杂合突变（T103C）,2号外显子为纯合突变（G237C）。【结论】parkin基因1、2号外显子突变可能与部分散发性早发帕金森病发病有关。     

中国人群MEF2A基因与冠状动脉疾病的易感性

目的：探讨中国人群MEF2A基因与CAD的易感性关系。方法：对175例冠状动脉疾病（CAD）患者和228例正常对照的血标本进行PCR扩增MEF2A基因的11个外显子,然后采用SSCP方法检测外显子的突变并对扩增产物进行纯化和测序分析。结果：MEF2A基因的第11外显子存在三核苷酸（CAG）重复多态性,CAD患者和正常对照之间无统计学差异（P〉0．05）;另发现4例CAD患者在第11外显子存在1个CCG的缺失突变,突变率约为2．3％,而正常对照未见此突变;CAD患者和正常对照组MEF2A基因的其它外显子未发现突变。结论：中国人群MEF2A基因第11外显子存在1个CCG的缺失突变可能与冠状动脉疾病惠者易感性有关。     

应用实时荧光定量PCR技术检测常染色体 隐性遗传性早发型帕金森综合征的 DJ 1基因外显子重排突变

目的：建立应用实时荧光定量PCR技术（real time polymerase chain reaction,real time PCR）检测DJ 1基因外显子重排突变的技术平台,并应用该技术对常染色体隐性遗传性早发型帕金森综合征（autosomal recessive early onset Parkinsonism, AREP）DJ 1基因进行外显子重排突变分析。方法：应用实时荧光定量PCR分析方法,对22个AREP家系先证者和30个正常对照的DJ 1基因进行外显子重排突变分析。结果：本研究中获得了扩增效率和特异性均满意的DJ 1基因各编码外显子实时荧光定量PCR反应条件及各外显子引物;本组AREP患者未发现DJ 1基因的外显子重排突变。结论：建立了应用实时荧光定量PCR技术进行DJ 1基因外显子重排突变检测的技术平台;中国人群AREP患者DJ 1基因外显子重排突变可能罕见。     

帕鑫森病患者parkin基因缺失突变的初步研究

为观察中国不同亚型帕金森病（Parkinson′s disease,PD)患者的parkin基因外显子2－10的缺失分布，并探讨parkin基因在PD发病机制中的可能作用，对63例PD患者进行了观察。根据起病年龄将63例患者分为早发性PD组和晚发性PD组。以提取的基因组DNA为模板，扩增parkin基因2－10号外显子，然后行琼脂糖凝胶电泳，观察外显子缺失分布。在63例PD患者中发现外显子2、4缺失各1例，外显子3缺失2例，这些缺失均出现于早发性PD组。结果表明：parkin基因外显子缺失是我国早发性PD患者的致病原因之一。     

帕金森病患者Parkin基因缺失突变的初步研究

为观察中国不同亚型帕金森病 (Parkinson's disease,PD)患者的 parkin基因外显子 2～ 10的缺失分布 ,并探讨 parkin基因在 PD发病机制中的可能作用 ,对 6 3例 PD患者进行了观察。根据起病年龄将 6 3例患者分为早发性 PD组和晚发性 PD组。以提取的基因组 DNA为模板 ,扩增 parkin基因 2～ 10号外显子 ,然后行琼脂糖凝胶电泳 ,观察外显子缺失分布。在 6 3例 PD患者中发现外显子 2、 4缺失各 1例 ,外显子 3缺失 2例 ,这些缺失均出现于早发性 PD组。结果表明 :parkin基因外显子缺失是我国早发性 PD患者的致病原因之一。     

胃癌中抑癌基因FHIT外显子5纯合性的缺失与突变

目的 探讨候选的抑癌基因FHIT外显子5在胃癌中纯合性缺失与突变的情况。方法 用PCR方法研究外显子5的纯合性缺失,用PCR－SSCP研究外显子5的点突变。结果 在32例原发性胃癌中外显子5的纯合性缺合率为9．38％（3／32）,没发现外显子5存在点突变。结论ＦＨＩＴ外显子５的缺失在胃癌中不一定占主导地位。     

家族性与散发性肥厚型心肌病基因突变的对比研究

目的 研究中国家族性及散发性肥厚型心肌病（HCM）患者的致病基因突变位点的异同。方法 对10个家系中36例HCM患者及50例散发的HCM患者进行B肌球蛋白重链（MYH7）、肌钙蛋白T（TNNT2）及肌球结合蛋白C（MYBPC3）扫描,聚合酶链式反应扩增,双脱氧末端终止法测序。结果家族性HCM患者中,3个家系的13例HCM患者发现MYH7错义突变,分别为18号外显子发生G12601A突变（Arg663His）、23号外显子发生G15373A突变（Glu924Lys）、20号外显子发生T13659C突变（Ile736Thr）,散发的50例HCM患者中,有1例发现MYH7的20号外显子上T13659C突变。所有HCM患者均未发现TNNT2基因突变。家族性HCM患者中有2个家系共4例发现MYBPC3基因突变：2例为18号外显子上的Arg502Trp、2例为13号外显子碱基插入突变,即在7425～7426间插入CGGCA,导致Arg346fs移码突变;50例散发性HCM患者中未发现此基因突变。结论 MYH7和MYBPC3可能为我国家族性HCM的主要致病基因之一,而我国散发性HCM患者MYH7和MYBPC3基因突变率低;TNNT2可能不是我国HCM患者的主要致病基因。     

多重竞争性荧光PCR检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变

目的 探讨多重竞争性荧光PCR在X连锁Alport综合征分子诊断中的应用。方法 选择20例在北京大学第一医院确诊且未进行基因诊断的X连锁Alport综合征患者为研究对象,同时选择2例经多重连接依赖性探针扩增技术检测到COL4A5基因大片段缺失突变的患者作为阳性对照和1例经肾活检组织电子显微镜检查证实非Alport综合征的男性作为正常对照。首先应用多重竞争性荧光PCR技术扩增COL4A5基因53个外显子和4个参照基因,对于检测到COL4A5基因缺失第1外显子者,进而应用相同技术扩增COL4A5基因外显子1~4、COL4A6基因外显子1~4、两基因共用启动子以及3个参照基因;对于检测到拷贝数缺失者,应用琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增后的PCR产物或直接测序。结果 两例阳性对照应用多重竞争性荧光PCR技术检测到的COL4A5基因缺失突变与应用多重连接依赖性探针扩增技术检测到的COL4A5基因缺失突变一致。20例患者中6例(30%)明确了基因型,其中2例患者具有累及COL4A5和COL4A6两个基因5'端的大片段缺失,2例患者具有累及COL4A5基因30个外显子以上的大片段缺失,1例患者具有累及COL4A5基因至少1个外显子的大片段缺失,1例患者具有COL4A5基因缺失13个碱基的小的缺失突变,未检测到重复突变。结论 多重竞争性荧光PCR技术可用于检测X连锁 Alport 综合征大片段缺失突变,是对该病分子诊断检测方法的重要补充。     

Exon Deletions of Parkin Gene in Patients with Parkinson Disease

Mutations in the parkin gene have recently been identified in familial and isolated patients with early-onset Parkinson disease (PD) and that subregions between exon 2 and 4 of the parkin gene are hot spots of deletive mutations. To study the distribution of deletions in the parkin gene among variant subset patients with PD in China, and to explore the role of parkin gene in the pathogenesis of PD, 63 patients were divided into early onset and later onset groups. Exons 1-12 were amplified by PCR, templated by the genomic DNA of patients, and then the deletion distribution detected by agarose electrophoresis. Four patients were found to be carrier of exon deletions in 63 patients with PD. The location of the deletion was on exon 2 ( 1 case), exon 3 (2 cases) and exon 4 (1 case). All patients were belong to the group of early onset PD. The results showed that parkin gene deletion on exon 2, exon 3 and exon 4 found in Chinese population contributes partly to early onset PD.     

肿瘤抑癌基因PTEN在骨及软组织肿瘤中的突变

目的：探讨肿瘤抑癌基因PTEN在骨及软组织肿瘤发生中的作用。方法：应用聚合酶链反应（PCR）分析骨及软组织肿瘤患者110例肿瘤标本,3个肿瘤细胞系PTEN基因第4-9外显子有无纯合性缺失。应用单链构象多态性分析（SSCP）及基因测序技术观察有无基因突变。对照为瘤旁正常组织。结果：PTEN基因第4-9外显子经扩增后均有产物,无基因纯合性缺失改变。SSCP分析未发现变异带,无基因突变。但外显子8表现出两种不同带型,该基因存在多态性,6例肿瘤在内含子8距拼接部32bp处存在两种不同碱基,基因型为g/t。结论：在DNA水平肿瘤抑癌基因PTEN在骨及软组织肿瘤的发生中不起作用;该基因在国人中存在多态性。     

家族性帕金森病Parkin基因外显子缺失突变

目的: 研究Parkin基因外显子缺失突变与中国家族性帕金森病(PD)发病的关系,探讨Parkin基因缺失突变在家族性PD发病机制中的作用及与临床特点、手术疗效之间的关系.方法: 家族性PD患者36例为研究对象,正常人20例作为对照,提取外周血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的DNA片段,琼脂糖凝胶电泳检测Parkin基因外显子4,6,7,10缺失情况,观察外显子的缺失分布及缺失率,并结合PD患者的手术疗效分析.结果: 家族性PD患者36例有10例外显子缺失突变,其中外显子4缺失8例,6和7缺失各1例,缺失突变率为27.8%,外显子10未发现异常,对照组中无缺失突变;有外显子缺失突变患者的手术疗效较好.结论: Parkin基因外显子4,6,7缺失突变是我国家族性PD的致病原因之一,PD患者的手术效果与Parkin基因外显子缺失突变与否有关.     

人肝细胞癌中PTEN基因的DNA杂交及突变分析

目的　研究人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因缺失及第５、第８外显子突变。方法　应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因限制性片段长度多态性和纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失。应用聚合酶链单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）检查ＰＴＥＮ基因的第５、第８外显子的突变。结果　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果显示,所有３４例肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因未见限制性片段长度多态性或纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失。ＰＣＲＳＳＣＰ检测发现,２例肝细胞癌第５外显子ＰＣＲ产物均显示１条额外电泳迁移带,突变率为５．９％（２／３４）。另２例肝细胞癌第８外显子ＰＣＲ产物呈现额外电泳迁移带,突变率为５．９％（２／３４）,合计突变率为１１．８％（４／３４）。结论　所检３４例人肝细胞癌中ＰＴＥＮ基因未见纯合性缺失、半合性缺失、片段缺失,但存在突变。     

A different spectrum of DMD gene mutations in local Chinese patients with Duchenne/Becker muscular dystrophy

Background Duchenne muscular dystrophy （DMD） and Becker muscular dystrophy （BMD） are X-linked recessive, allelic disorders. This study was conducted to look into the spectrum of DMD gene mutations in Hong Kong Chinese patients with Duchenne or Becker muscular dystrophy （DMD/BMD）, and to study genotype-phenotype correlation.     

葡萄糖脑苷脂酶基因多态性与帕金森病的相关性研究

目的研究中国山东人群帕金森病患者的葡萄糖脑苷脂酶（Glucocerebrosidase,GBA）基因N370s、V394L和L444P突变位点多态性,探讨GBA基因突变与帕金森病的相关性。方法应用PCR产物直接DNA4序法对60例帕金森病患者及60例正常对照组的9、10号外显子进行检测,然后进行测序对比分析。结果测序结果显示帕金森病患者和正常对照组的GBA基因外显子9和外显子10核苷酸序列完全一致,未发现突变点。结论该研究不支持GBA基因N370S、V394L和L444P突变位点是中国山东人群帕金森病的危险因素。