抑制ERCC1基因对肺癌细胞顺铂敏感性的影响

目的 探讨RNA干扰切除修复交叉互补基因(ERCC)1对肺腺癌细胞A549顺铂敏感性的影响.方法 体外设计合成针对ERCC1基因的小干扰RNA(siRNA).转染肺腺癌细胞A549,应用RT-PCR、Western印迹和免疫细胞化学方法检测转染后ERCC1基因mRNA和蛋白的改变,应用四唑盐比色(MTT)法检测干扰ERCC1基因后A549细胞对顺铂敏感性的变化.结果 转染针对ERCC1基因的siRNA后24、48、72 h,A549细胞ERCC1基因mRNA和蛋白水平显著下降;关闭ERCC1基因后,A549细胞对顺铂的敏感性增加3.07倍.结论 RNA干扰ERCC1基因能增加肺腺癌A549细胞对顺铂的敏感性.     

参慈胶囊影响人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内多药耐药DNA损伤修复的研究

目的探讨参慈胶囊对人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内多药耐药的影响。方法将40只C57BL/6小鼠接种人肺腺癌A549/DDP细胞悬液建立实体瘤模型，随机分为参慈胶囊组、参慈胶囊+顺铂组、顺铂组、对照组。对照组予等量生理盐水，其余各组荷瘤小鼠均用药21d，采用FQ-PCR技术检测人肺腺癌A549/DDP肺癌组织ERCC1mRNA、RRM1mRNA、hMLH1mRNA、BRCA1mRNA的表达情况。结果参慈胶囊能够降低ERCC1、RRM1、BRCA1基因的表达，且能够增加hMLH1mRNA基因的表达。结论通过多基因调节以改善人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药状态，可能是参慈胶囊逆转肺癌多药耐药的途径之一。     

X射线对肺腺癌细胞粘附分子及其相关生物学特性的影响

目的:探讨X射线对肺腺癌细胞粘附分子及其相关生物学特性的影响.方法:不同剂量X射线照射肺腺癌细胞A549,MTT法检测细胞增殖抑制;免疫细胞化学法蛋白水平检测细胞中E-cadherin及其连环蛋白β-catenin的表达;Transwell小室检测细胞的侵袭力.结果:X射线对A549细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性;照射后E-cadherin和β-catenin蛋白的表达均显著高于对照组(P<0.05),其变化趋势是随照射剂量增加表达逐渐增加;Transwell小室结果表明随着照射剂量的增加.细胞侵袭力逐渐降低(P<0.05).结论:X射线上调A549细胞上粘附分子E-cadherin和β-catenin在细胞中的表达,增加细胞间的粘附力,降低肿瘤细胞的侵袭力,这可能是X射线抑制肺腺癌细胞转移的作用机制之一.     

磁性纳米四氧化三铁协同顺铂作用于肺癌A549细胞的初步研究

目的: 检测磁性纳米四氧化三铁(Nano-Fe3O4)联合顺铂(DDP)作用于人源肺腺癌细胞A549后相关凋亡抑制基因、耐药蛋白的表达,研究其增强化疗敏感度的机制.方法: 用MTT法检测Nano-Fe3O4聚合DDP对A549细胞增殖凋亡的影响;流式细胞术分析凋亡细胞比例;RT-PCR检测抗凋亡基因bcl-2、survivin、ERCC1表达水平变化;蛋白印迹法分析耐药蛋白MRP及其表达率.结果: 25 μg·ml-1 Nano-Fe3O4能有效增强DDP的细胞毒作用,提高A549的凋亡率;与单独用药组相比,Nano-Fe3O4联合DDP组的抗凋亡基因bcl-2、ERCC1和耐药蛋白MRP表达下调,差异具有统计学意义(P＜0.05);survivin基因表达未见明显改变.结论: Nano-Fe3O4联合DDP可通过下调抗凋亡基因bcl-2、ERCC1及耐药蛋白MRP的表达,增强化疗药物敏感度.     

Bcl2-siRNA提高人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂敏感性的研究

目的 探讨Bcl2-siRNA 对人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 对顺铂敏感性的影响.方法 在人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA,48h 后加入不同浓度(0、3、6、9、12、15μg/ml) 新鲜配置的顺铂溶液,药物作用48h后,用CCK-8 法检测细胞生长抑制率.荧光实时定量PCR(Real time RT-PCR) 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2mRNA 的变化,Western Blot 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2 蛋白的变化.结果 在A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA 后,细胞Bcl-2 mRNA 降低92.6%(P<0.05),Bcl-2 蛋白表达也明显降低,同时细胞对顺铂的敏感性增加57.8%(P<0.05).结论 Bcl2-siRNA 能降低A549/DDP 中Bcl-2 mRNA 及蛋白的表达,增加A549/DDP 对顺铂的敏感性.     

反应停对人肺腺癌亲代及耐顺铂细胞系碱性成纤维细胞生长因子表达影响

目的 探讨反应停对亲代与耐顺铂人肺腺癌细胞系A549^DDP碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及克服肺腺癌顺铂耐药的作用。方法 采用逆转录-PCR和免疫细胞化学方法分别检测反应停处理前、后A543与A549^DDP细胞bFGF mRNA与蛋白表达水平。结果 治疗浓度(6μg／ml)反应停处理A549与A549^DDP细胞后bFGF mRNA表达水平较处理前显降低，蛋白表达显减弱，蛋白表达与其相应mRNA表达呈显正相关；不同浓度反应停处理后第5 d，A549与A549^DDP细胞bFGF mRNA表达水平存在显性差异，蛋白表达均为阴性。结论 反应停呈剂量依赖性显下调A549与A549^DDP细胞bFGF mRNA表达，可能通过激活细胞凋亡途径而降低耐药。     

CTR1和ATP7B在人肺腺癌细胞A549的表达及其与顺铂耐药的关系

目的  探讨人肺腺癌细胞株A549和肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP对顺铂的耐药机制。方法  利用噻唑蓝法检测顺铂对A549/DDP及其亲代细胞株的细胞毒作用和生长曲线的影响,探讨A549/DDP细胞株凋亡敏感性的变化规律。采用Western blot检测该细胞株铜离子转运蛋白1（CTR1）、铜离子转运磷酸化ATP酶（ATP7B）及聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）剪切蛋白表达,分析A549细胞对顺铂耐药与CTR1、ATP7B及PARP剪切蛋白表达量的相关性。结果  A549/DDP较其亲代细胞株对顺铂引起的细胞毒性和凋亡敏感性下降;较其亲代细胞株A549/DDP中ATP7B表达增加,CTR1表达降低。结论  人肺腺癌细胞株A549对顺铂耐药的产生与细胞凋亡敏感性降低有关,且细胞内ATP7B表达增加,CTR1表达降低,或可作为细胞对顺铂的增敏靶点。

     

Pirh2 shRNA增强肺腺癌细胞A549对顺铂敏感性的研究

目的 观察短发夹状RNA沉默泛素连接酶pirh2(P53 induced RING-H2 protein)基因表达后,肺腺癌细胞A549对顺铂敏感性及肺耐药蛋白(lung resistance-related protein, LRP)表达的变化.方法 构建靶向pirh2基因的短发夹状RNA(psiRNA-Pirh2)及阴性对照RNA(psiRNA-Con),并转染A549细胞,实时定量PCR和免疫印迹法检测A549细胞中pirh2基因和蛋白的表达变化.设立顺铂组(5 μg/ml)、psiRNA-Pirh2转染组和顺铂(5 μg/ml) psiRNA-Pirh2组,CCK-8法检测A549细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法检测肺耐药蛋白的表达,以正常A549细胞为对照.结果 psiRNA-Pirh2特异性抑制了A549细胞pirh2 mRNA和蛋白质的表达(均P＜0.05).顺铂及psiRNA-Pirh2组A549细胞增殖能力分别为正常对照组的(46.82± 6.14)%和(37.45±6.83)%,均P＜0.05,但均高于二者联合组[(28.24±6.49)%],且联合组细胞凋亡率最高,达(19.8±5.1)%,S期细胞最少,为(15.5±1.6)%(P＜0.05).顺铂处理组A549细胞LRP表达较正常对照组增强(P＜0.05),但联用psiRNA-Pirh2后,LRP蛋白水平有所下降(P＜0.05).结论 靶向pirh2的shRNA可特异性降低A549细胞中pirh2的表达,抑制A549细胞增殖,使其阻滞在G2/M期,诱导凋亡,下调肺耐药蛋白的表达并增强其对顺铂的化疗敏感性.     

CA916798基因通过PI3K/AKT/mTOR通路参与顺铂耐药的机制分析

摘要：目的观察阻断PI3K/AKT/mTOR通路对人肺腺癌细胞A549 及多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798 基因
mRNA表达的影响。方法以雷帕霉素、LY294002分别作用于人肺腺癌细胞A549和多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP,检测
顺铂作用后细胞生长及增殖情况,RT-PCR 检测CA916798 基因mRNA表达水平。结果以雷帕霉素和LY294002 分别阻断
A549、A549/CDDP细胞的PI3K/AKT/mTOR通路后,细胞对于顺铂的耐药性均显著下降（P<0.05）,CA916798基因的表达均显
著下调（P<0.05）。结论CA916798基因位于PI3K/AKT/mTOR通路下游,可能是CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制之一。
     

人金属硫蛋白1H基因对肺腺癌细胞A549耐药性的影响

目的：探讨金属硫蛋白1H（metallothionein 1H,MT1H）基因对人肺腺癌A549细胞耐药性的影响．方法：构建真核表达载体pcDNA3．1（-）-MT1H,利用脂质体介导将其转染肺腺癌A549细胞,G418筛选阳性克隆．分别以RT—PCR和Western方法检测MTIH mRNA和蛋白表达情况,MTT法检测细胞对顺铂的药物敏感性;流式细胞仪（FCM）检测顺铂诱导细胞凋亡率．结果：转染pcDNA3．1（-）-MT1H的细胞,其MT1H mRNA和蛋白表达水平显著高于亲本细胞及转染空载体细胞,细胞对顺铂药物敏感性明显下降,顺铂诱导的凋亡率明显降低．结论：MT1H能促进A549细胞耐药,可能和降低顺铂诱导细胞凋亡有关．