高糖诱导人肾间质成纤维细胞c-met的表达及黄芪对其的调节作用

目的：体外研究高糖对人肾脏间质成纤维细胞c-met表达的影响，并观察黄芪药物血清对其的调节作用。 方法：体外培养人肾脏间质成纤维细胞，按培养液不同分为正常对照组、高糖组和甘露醇组。于作用后6、12、24、48和96h，采用逆转录-聚合酶链反应方法检测c-met和转化生长因子βl（transforming growth factor-betal，TGF-β1）mRNA表达，蛋白印迹分析检测c-met蛋白的表达。制备含药血清，将成纤维细胞分高糖组、对照血清组和10％黄芪含药血清组，作用24h和48h后，检测c-met蛋白和mRNA表达情况。 结果：与正常对照组比较，高糖组细胞培养12h时c-metmRNA表达增加（P〈0．05），24h达高峰（P〈0．01），之后表达逐渐下降；高糖组细胞培养24h时，TGF-β1的表达开始增加（P〈0．05），96h达到高峰（P〈0．01）。与高糖组以及对照血清组比较，黄芪含药血清可使细胞c-met mRNA和蛋白表达增加（P〈0．01，P〈0．05）。 结论：高糖刺激早期诱导c-met表达，之后表达下降。黄芪可以通过诱导c-met表达延缓糖尿病肾病的进展。     

糖尿病心肌梗死大鼠TGF -β1和CTGF表达变化及HGF的干预作用

摘要目的：探讨糖尿病心肌梗死大鼠心肌TGF-β1和CTGF表达的变化以及肝细胞生长因子（HGF）对其影响。方法：6周龄Wistar大鼠90只随机分为5组：对照组、糖尿病假手术组、心肌梗死组、糖尿病心梗组和HGF治疗组．每组备18只。以高糖高脂饲料＋腹腔注射链尿佐菌素（STZ）诱导建立2型糖尿病大鼠模型后再建立急性心肌梗死（AMI）模型。糖尿病模型大鼠成模后次日,HGF治疗组每天皮下注射HGF,分别观察4周及8周,检测各组心肌组织TGF-β1、CTGF的mRNA及蛋白表达情况：：结果：对照组大鼠的TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白水平表达微弱;糖尿病心梗组4周后TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白水平表达明显升高（P〈0．05）,8周后表达进一步升高（P〈0．01）;给予HGF治疗4周后,可以部分降低TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白水平的表达（P〈0．05）;给予HGF治疗8周后,可以明显降低TGF-β1、CT-GFmRNA及蛋白水平的表达（P〈0．01）。结论：糖尿痛心肌梗死大鼠心肌TGF-β1、CTGF的表达明显增高．HGF治疗后能够降低TGF-β1、CTGF的表达,对糖尿病心肌梗死后心肌纤维化的发生有抑制作用。     

褪黑素对大鼠急性肾功能衰竭的保护作用及增强肝细胞生长因子的表达

目的探讨褪黑索（Mel）在甘油诱导的急性肾功能衰竭（ARF）大鼠模型中的作用及对肾组织局部肝细胞生长因子（HGF）及其受体（C—met）表达的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为3组：对照组（CTL组）双侧后腿肌肉注射生理盐水；模型组（ARF组）双侧后腿肌肉注射甘油；褪黑素组（Mel组）腹腔注射Mel后30min，双侧后腿肌肉注射甘油。分别在1、6、12、24、36、48、72、120h检测血尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、肾组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。观察肾组织形态学改变，并用免疫组织化学法检测HGF及C—met蛋白在肾脏的表达。结果与ARF组相比，Mel组肾功能（BUN、Cr）明显改善，肾组织匀浆SOD活性升高、MDA下降，肾小管上皮细胞HGF／C-met表达增强，差异均有显著性意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论褪黑素对ARF大鼠肾脏有保护作用，能够增强HGF及其受体C—met蛋白的表达，促进损伤的肾小管恢复。     

小G蛋白Rac1在马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞损伤中的作用及意义

目的：探讨马兜铃酸（从）致肾小管上皮细胞损伤的机制及小G蛋白Racl在此过程中发挥的作用。方法：以溶剂作为对照组,从以浓度10μg／mL作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,培养24h后,WST-1法检测细胞增殖的抑制率;Hoechst33258染色观察细胞核的形态变化;细胞免疫荧光染色检测Ⅲ型胶原和Racl蛋白的表达;real—time RT—PCR检测TGF—D1mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Racl和TGF—β1含量,并分析两者相关性。结果：从可明显抑制NRK-52E细胞增殖,并诱导细胞凋亡。从以10μg／mL处理NRK-52E细胞24h后,TGF—β1 mRNA的表达明显升高（p〈0．05）,并且细胞外基质成分Ⅲ型胶原的表达明显增加（P〈0．05）。此外,从也可诱导小G蛋白Racl的表达（P〈0．05）。相关分析显示,AA诱导NRK-52E细胞损伤过程中,Racl的表达量与TGF—β1的分泌水平呈现明显正相关（r=0．967,P〈0．01）。结论：从诱导肾小管上皮细胞出现纤维化样改变,同时伴有Racl蛋白的高表达;Racl及其介导的信号通路可能被TGF-β1的高表达所活化,进而参与从所致的胶原累积过程。     

肝细胞生长因子对高糖及结缔组织生长因子培养的肾小管上皮细胞纤维化的影响

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）对高糖及结缔组织生长因子（CTGF）诱导肾小管上皮细胞（HKC）纤维化的影响.方法：体外培养HKC,分别在高糖及CTGF环境下加入不同浓度人重组肝细胞生长因子（rhHGF）,以RT-PCR检测转化生长因子β1（TGF-β1）、CTGF、以及纤维化指标Ⅳ型胶原（COL4A1）、纤连蛋白（FN）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等的基因表达.结果：高糖及CTGF刺激下,细胞因子和纤维化指标表达均不同程度增加,其中,CTGF作用下,COL4A1表达明显低于高糖组（P＜0.01）.高糖及CTGF环境下加入rhHGF后,纤维化指标显著降低（P＜0.01）,其中高糖＋rhHGF组,CTGF表达减少,TGF-β1表达无明显改变（P＞0.05）.结论：HGF可通过抑制TGF-β下游因子CTGF的表达,发挥抗肾小管上皮细胞纤维化作用,但CTGF并不是其惟一的阻断途径.     

肌醇加氧酶在糖尿病肾病发病机制中的作用

[目的]研究高糖环境下大鼠肾近曲小管上皮细胞肌醇加氧酶（myoinositol oxygenase,MIOX）的表达及糖尿病肾病大鼠体内肌醇耗竭的机制。[方法]体外培养大鼠近曲肾小管上皮细胞株（NRK-52E）,将其分为正常对照组（NG）、高糖组（HG）和渗透浓度对照组（MG）,并分别于12、24、48、72h应用RT—PCR法检测MIOX的mRNA表达,免疫荧光细胞化学法检测其蛋白的表达。[结果]HG组MIOXmNA与蛋白表达水平在12h出现升高,二者分别在24h与48h达高峰。NG组的MIOXmRNA及蛋白表达水平各时间点差异无显著性意义（P〉0．05）;与NG组和MG组相比,HG组MIOX的mRNA及蛋白表达均明显升高（P〈0．01）。MG组明显高于NG组（P〈0．05）。[结论]高糖能促进大鼠肾近曲小管上皮细胞肌醇加氧酶（MIOX）的表达,并可能通过MIOX的形成增加介导肌醇的耗竭,提示MIOX参与了糖尿病肾病的发生发展。     

阿魏酸钠对高糖诱导肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的观察阿魏酸钠（sodiumferulate,SF）对高糖培养的人近端肾小管上皮细胞（humanproximaltubularepithelialcells,HKC）增殖和凋亡的影响。方法选用对数期生长的肾小管上皮细胞,分为对照组、高糖组、高糖加阿魏酸钠组。四甲基偶氮唑盐（microculturetetrazolium,MTT）法观察细胞增殖能力的变化,测定细胞培养液中的乳酸脱氢酶（1actatedehydrogenase,LDH）的含量以判断细胞损伤情况,Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡。结果与对照组比较,高糖组MTT吸光度值（OD值）随培养时间延长明显降低,而高糖加阿魏酸钠组OD值与高糖组比较有明显升高（P〈O．05）。随培养时间的延长,高糖组培养基中LDH水平明显升高,在12h和24h分别为（17．55±2．45）和（28．72±3．11）U／L,而高糖加阿魏酸钠组12h和24hLDH水平降至（11．84±2．18）和（19．984-3．67）U／L,和同时间点高糖组比较均有明显降低（P〈0．05）。高糖处理组培养液中的丙二醛（malondiadehycle,MDA）水平较对照组明显增加（P〈0．01）,超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）活性明显降低（P〈0．01）,阿魏酸钠组培养液中MDA水平明显降低（P〈0．01）,SOD活性明显增加（P〈0．05,P〈0．01）。Hoechst33258荧光染色显示,对照组和高糖加阿魏酸钠组仅见个别凋亡形态细胞,高糖组典型凋亡形态细胞明显增多,细胞凋亡率为34．17％,显著高于正常对照组（5．20％）和高糖加阿魏酸钠组（7．39％,P〈0．01）。结论高糖培养可诱导人近端肾小管上皮细胞的损伤和凋亡,并抑制其增殖。阿魏酸钠对人肾小管上皮细胞系（humankidneycell,HKC）的保护作用可能是通过抑制HKC的损伤和凋亡,以及提高增殖能力实现的。     

抗增殖蛋白抑制转化生长因子-β1诱导的肾脏成纤维细胞增殖和表型改变

目的 研究抗增殖蛋白（prohibitin,PHB）在肾间质纤维化发生中的作用。方法（1）检测48例原发性肾小球肾炎患儿肾组织中PHB蛋白表达,并比较其与肾小管间质损伤程度的相关性。（2）观察PHB在大鼠肾脏成纤维细胞（NRK-49F）中亚细胞定位,以Western印迹和RT-PCR测定NRK-49F受到转化生长因子B1（TGF-β1）刺激后PHB表达的变化。（3）构建PHB表达质粒并转染,观察PHB对NRK-49F细胞周期以及表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白质和mRNA的影响。结果 （1）PHB蛋白主要表达于肾间质细胞和肾小管上皮细胞的胞质,随肾小管间质损伤程度加重而逐渐减弱（组间比较,均P〈0．01）,PHB表达量与肾小管间质损伤程度显著负相关（r=-0．802,P〈0．01）。（2）激光共焦显微镜下见PHB主要分布于NRK49F的细胞质,细胞核亦有较弱表达。TGF-β1刺激后PHB蛋白和mRNA表达均下调,呈现时间和剂量依赖关系（组间比较,P〈0．01）。（3）成功构建PHB真核表达质粒,转染48h细胞中PHB蛋白量升高约2．54倍（与未转染组比较,P〈0．01）。（4）转染PHB基因明显抑制TGF—β1所诱导的细胞增殖,使更多的细胞处于G0／G1期（与TGF-β1组比较,P〈0．01）,而对未受刺激的细胞无影响（P〉0．05）。（5）转染PHB基因明显抑制TGF—β1所诱导的α-SMA蛋白质和mRNA表达（与TGF-β1组比较,P〈0．01）,而对α-SMA基础表达无影响（与TGF-β1组比较,P〉0．05）。结论 PHB在肾组织中的表达水平可以反映肾小管间质损伤程度．外源性PHB显著抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖和表型改变。     

探讨肝细胞生长因子和尿激酶型纤溶酶原激活剂在卵巢癌中的表达及意义

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）和尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌生物学行为之间的关系。方法应用免疫组化SP法检测HGF和uPA在正常卵巢组织、良性肿瘤和卵巢癌中的表达。结果（1）HGF和uPA在卵巢癌中的表达水平显著高于正常卵巢组织和良性肿瘤（P〈0．05）,良性肿瘤和正常卵巢组织表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。②HGF和uPA的表达随卵巢癌的临床分期、组织分级（恶性程度）的增加,表达水平均相应增加（P〈0．05）;淋巴结转移组HGF和uPA的表达水平均显著高于无淋巴结转移组（P〈0．05）。结论①HGF高表达可能与卵巢癌细胞的恶性增殖及浸润转移有关。②uPA的高表达可能与卵巢癌的浸润转移有关     

肝细胞生长因子与糖尿病肾病的关系

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）在糖尿病肾病发生、发展中的作用。方法检测正常对照组、单纯糖尿病组、微量白蛋白尿组和蛋白尿组受检者的空腹血糖、糖化血红蛋白（HbA1c）、尿蛋白、尿微量白蛋白和血清HGF水平，并分析HGF与HbA1c尿蛋白、尿微量白蛋白的关系。结果单纯糖尿病组、微量白蛋白尿组和蛋白尿组空腹血糖、HbA1c水平与正常对照组比较，差别均有统计学意义（P〈0．05）。蛋白尿组尿蛋白水平与其他3组比较，差别均有统计学意义（P〈0．05）。微量白蛋白尿组和蛋白尿组患者尿微量白蛋白和血清HGF水平与正常对照组、单纯糖尿病组比较，差别均有统计学意义（P〈0．05）。血清HGF水平与尿微量白蛋白及HbA1c呈正相关（P〈0．01）。结论HGF与糖尿痛肾病的发生、发展有关．检测血清HGF水平可能有助干旱期诊断和评估糖尿病肾病。     

肝细胞生长因子在子宫内膜异位症的表达及其与血管内皮生长因子的关系

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)在子宫内膜异位症(内异症)发生发展过程中的作用及HGF与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法应用免疫组织化学技术检测33例异位子宫内膜组织和10例正常子宫内膜组织中的HGF和VEGF的表达及微血管密度(MVD)。结果异位内膜HGF表达的平均光度值为0.264±0.026,正常内膜HGF表达为0.219±0.017,两者比较有显著性差异(P<0.05);异位内膜中HGF的表达与VEGF表达呈正相关(r=0.408,P<0.05)。结论HGF在异位内膜的血管生成中具有重要作用;HGF和VEGF在子宫内膜异位症的发生发展中发挥协同作用。     

重组肝细胞生长因子质粒的构建及其在成骨细胞中的表达

目的 构建人肝细胞生长因子(hHGF)真核表达质粒,探讨重组质粒对体外培养胎兔成骨细胞增殖分化的影响,为转基因治疗骨科疾病提供实验基础.方法 RT-PCR扩增人肝脏中hHGF全长cDNA片段,克隆入pcDNA3.1( )真核表达载体中,用脂质体法将pcDNA3.1( )-hHGF质粒转染成骨细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,用免疫荧光染色检测hHGF基因在成骨细胞内的表达;MTT法和FCM检测pcDNA3.1( )-hHGF转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;采用RT-PCR和ELISA方法检测hHGF在成骨细胞中的表达.NPP法检测碱性磷酸酶合成情况.结果 成功构建hHGF真核表达质粒,免疫组化和RT-PCR检测显示转染成骨细胞后细胞内hHGF mRNA呈现高水平表达;MTT法和FCM检测显示重组质粒转染后能促进成骨细胞的增殖,S期细胞比例增多;ELISA法检测到hHGF在细胞中有分泌性表达.转染重组质粒的成骨细胞合成碱性磷酸酶能力显著提高.结论 成骨细胞经基因转染后可以表达hHGF,外源性hHGF基因能够刺激成骨细胞增殖、分化及成骨活性.     

血清促肝细胞生长素的检测与意义

目的 :建立人血清中促肝细胞生长素 ( HGF)的免疫学检测方法 ,研究肝病患者血清中HGF水平的变化及其临床意义。　 方法 :自人胎肝匀浆中提取、纯化 HGF,免疫家兔制备抗血清 ,建立双抗体夹心法的 HGF测定技术。　 结果 :纯化的 HGF于 SDS- PAGE呈单一条带 ,分子量1750 0。正常人血清中 HGF水平为 2 8～ 140 μg/ L。各型肝病患者和 SL E患者血清中 HGF都有不同程度的升高。　 结论 :动态观察肝病患者血清中 HGF水平 ,有指示肝脏损害严重程度和判断预后的价值     

肝细胞生长因子在人肝细胞中的表达及对肝细胞损伤的保护作用

目的　构建肝细胞生长因子 (HGF)真核细胞表达载体 ,并观察其在人正常肝细胞中的表达以及对细胞增殖和抗损伤能力的影响。方法　利用基因重组技术将HGF与绿色荧光蛋白 (GFP)融合并构建真核表达质粒 ,通过脂质体介导法 ,导入正常人肝细胞系中。用荧光显微镜以及免疫组织化学方法观察HGF表达情况。采用 [3 H] TdR掺入DNA法、PCNA免疫组织化学观察肝细胞DNA合成 ,了解肝细胞增殖能力的变化。用CCl4造成急性肝细胞损伤 ,通过测定细胞存活率、细胞内丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、K+ 的漏出量了解肝细胞的抗损伤能力。结果　酶切鉴定证实HGF片断已克隆到pEGFP N3 的BamHⅠ和SalⅠ位点之间 ,在转染人正常肝细胞后 ,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达 ,用免疫组化方法进一步证实了HGF蛋白在细胞中的表达。 [3 H] T转导HGF的肝细胞的DNA合成明显增加 (转染 96h后 ,[3 H] TdR掺入量为对照组的 7倍 )。PCNA免疫组化结果显示转导HGF的肝细胞阳性率明显增加 ,肝细胞增殖活性增加。转导HGF的肝细胞抗CCl4损伤的能力明显增强 ,肝细胞存活率显著提高 (83%与 6 1% ,P <0 0 5 ) ,细胞内丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、K+ 的漏出显著降低 (分别为 35 16U·L-1与 6 5 31U·L-1,P <0 0 1,5 5 9mmol/L与 6 0 2mmol/L ,P     

急性肺损伤患者肺泡灌洗液及血清中角细胞生长因子和肝细胞生长因子水平变化的意义

目的探讨急性肺损伤(ALI)患者支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清中肝细胞生长因子(HGF)和角细胞生长因子(KGF)水平变化的临床意义。方法选择30例ALI患者,其中轻中度损伤16例(A组),重度损伤14例(B组),另选择健康非吸烟的自愿献血者10名作为血清对照组(C组),10名BALF检查无异常的就诊者作为BALF对照组(D组),用ELISA法检测30例ALI患者血清及BALF中HGF和KGF的水平。结果A、B、D3组患者的BALF及血清中HGF、KGF水平比较差异均有统计学意义(P<0.05),B组患者BALF中KGF、HGF水平与A组比较差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组患者BALF中HGF和KGF水平与存活组比较差异有统计学意义(P<0.05),死亡组患者血清中HGF和KGF水平与存活组比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。BALF中HGF和KGF水平与肺损伤系数呈正相关(P<0.01)。结论多种炎症细胞及递质参与ALI的病理过程,HGF和KGF在ALI的发生、发展中起重要的作用。BALF及血清中HGF和KGF可作为ALI病情监测和预后判定的参考指标。     

慢性肾脏病血清HGF水平及临床意义

目的了解肝细胞生长因子（HGF）在慢性肾脏病（CKD）中的变化，探讨HGF在CKD中的作用及临床意义。方法收集CKD患者80例，其中CKDⅠ期16例、CKDⅡ期24例、CKDⅢ期15例、CKDⅣ期13例、CKDⅤ期12例，以及20例健康人群血清，应用ELISA方法检测血清中HGF的含量。结果在健康组、CKDⅠ期～Ⅴ期之间比较，各组之间HGF值有显著性差异（P=0．011），其中CKDⅤ期的HGF值最高，CKDⅠ期～Ⅳ期的HGF值也高于正常，但无显著性差异（P〉0．05）；HGF与尿素氮、肌酐、血、尿β2-微球蛋白呈中度正相关（P〈0．01）；与肾小球滤过率呈中度负相关（P〈0．01）。结论CKD患者HGF值增高，且与肾脏疾病的严重程度相关。     

肝细胞生长因子与冠心病的临床研究

目的:探讨肝细胞生长因子与冠心病之间的关系。方法:通过ELISA酶免自动分析系统测定冠心病患者稳定型心绞痛(SA)组30例、不稳定型心绞痛(UA)组32例、急性心肌梗死(AMI)组36例入院后1d、3d、7d和14d血肝细胞生长因子值与对照组进行比较。结果:SA组患者HGF无明显变化。SA组患者各时间点HGF均高于对照组。UA、AMI组患者HGF在7d达高峰值,且各时间点HGF均高于SA组。入院后7d AMI组HGF高于UA组患者。结论:肝细胞生长因子在冠心病患者表达升高,可能与冠脉受损和心肌缺血程度相关。     

血管内皮生长因子和肝细胞生长因子在烟雾病发病机制中的作用

目的探讨烟雾病患者血清血管内皮生长因子（VEGF）和肝细胞生长因子（HGF）的水平、临床意义及在烟雾病发病机制中的作用。方法采用双抗体酶联免疫吸附法（ELISA）测定20例烟雾病患者和20例健康对照血清VEGF和HGF的水平。结果烟雾病患者血清VEGF和HGF水平明显高于正常对照组,两组比较差异均具有显著性意义（P〈0．01）。结论VEGF和HGF在烟雾病的发生、发展过程中有重要作用。     

康复新液对大鼠实验性结肠炎 EGF，HGF 表达的影响

目的：探讨康复新液对葡聚糖硫酸钠（ DSS）诱导的大鼠溃疡性结肠炎的疗效及其对表皮生长因子（ EGF）、肝细胞生长因子（ HGF）表达的影响。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组、模型对照组、柳氮磺胺吡啶（ SASP）治疗组和康复新液治疗组。观察大鼠的腹泻、便血等症状,用免疫组化法检测EGF,HGF表达。结果与模型对照组相比,SASP治疗组和康复新液治疗组大鼠的症状和结肠黏膜组织学损伤显著改善（P＜0．05）。与模型对照组和SASP治疗组相比,康复新液治疗组EGF,HGF表达增高（P＜0．05）。结论康复新液可以改善DSS诱导的急性大鼠结肠炎腹泻、便血等症状,减轻结肠炎性损伤,康复新液促进EGF及HGF表达可能是其作用机制之一。     

肝细胞生长因子和胰岛素样生长因子-1在妊高征胎盘中的表达及意义

妊娠高血压综合征(PIH)是常见的严重危害母婴健康的妊娠并发症,目前其发病机制尚不明确。近年,许多学者提出胎盘或滋养细胞缺血与PIH发病关系密切。肝细胞生长因子(HGF)及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)被认为与滋养细胞的增殖或侵蚀有关。该文就HGF及IGF-1的生物学特性,与正常妊娠的关系及其在PIH发生、发展中的作用进行综述。