反义c—myc,增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑细胞相关基因表达

目的 研究有效的防治血管术后狭窄的方法,以及应用反义ｃ－ｍｙｃ,增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法 设计并合成ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ正义,反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸,经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后,分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）,应用逆转录ＰＣＲ半定量测定及计算机图像分析的方法,春对ｃ－ｍｙｃ、ＰＣＮＡ基因表达的影响。结果 设计     

反义C—myc寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC—7721的生长抑制

针对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ第二外显子起始妈ＡＵＧ及下游４个密码子设计合成了反义、正义及锚配寡核苷酸（ＯＤＮｓ）、并对合成的ＯＤＮｓ进行 硫代磷酸化修饰。在人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１培养体系中，对反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现（１）与正义和错配ＯＤＮｓ相比较，反义Ｃ－ｍｙｃＯＤＮ有明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的作用；（２）该生长抑制作用随ＡＳＯＤＮ剂量增加而增     

C—myc在卵巢肿瘤的表达

用免疫组织化学方法检测４１例卵巢癌，１０例卵巢良性肿瘤及８例正常卵巢组织，结果显示，正常卵巢及卵巢良性肿瘤无一例检测出Ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的表达；Ｃ－ｍｙｃ在卵巢癌的阳性表达率为４３．９％，６０％出现在Ⅲ期以上，分化差的患者，用Ｃ－ｍｙｃ阳性表达的患者预示着差的预后。提示．Ｃ－ｍｙｃ阳性表达可作为预测预后的指标。     

鼻咽癌P^53,C—myc,EGFR基因表达的研究

目的：Ｐ＾５３，Ｃ－ｍｙｃ及ＥＧＦＲ基因在鼻咽癌（ＮＰＣ）的发生、发展中可起重要作用，基因的研究结果可能为ＮＰＣ的预防及诊疗提供科学的依据。方法：用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测了３０例ＮＰＣ组织、１０例无瘤鼻咽癌（ＮＰ）组织的Ｐ＾５３、Ｃｍｙｃ及ＥＧＦＲ基因的异常表达情况。结果：①三种基因在ＮＰＣ组织中均有较高水平的表达，Ｐ＾５３蛋白阳性率为８６．７％（２６／３０），Ｃ－ｍｙｃ和ＥＧＦＲ蛋白阳性率均为７０     

c-myc基因表达对移植静脉平滑肌细胞增殖的影响

检测不同时期移植静脉平滑肌中ｃ－ｍｙｃ基因表达情况,探讨基与移植静脉ＳＭＣ增殖的关系。方法建立大鼠自体静脉移植模型,分别于手术后３０分钟、２、６、４８小时,１、２、４周切取移植静脉,应用免疫组织化学及原位杂交方法观察不同时期移植血管ＳＭＣ中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、ｃ－ｍｙｃ基因表达情况。结果ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ于术后２、６小时明显升高,与３０分钟比较差异有非常显著意义（Ｐ〈０．０１）;ＰＣＮＡ,     

局部缓释秋水仙素抑制移植血管内膜增殖的研究

目的 :观察局部缓释秋水仙素 (colchicine ,COL)对移植血管内膜增生的抑制程度。方法 :采用大鼠自体静脉移植模型 ,外涂含不同浓度COL的Pluronic胶 ,于术后 14d处死取材 ,行HE ,Verhoeff弹力纤维染色、增殖细胞核抗原 (proliferatingcellularnuclearantigen ,PCNA)免疫组化染色 ,测量内膜厚度、内膜与中膜面积比、PCNA阳性细胞百分比 ,用流式细胞仪计数各期细胞百分比 ,观察不同浓度COL对内膜及平滑肌细胞增殖的抑制程度。结果 :血管移植术后 14d ,对照组的内膜厚度、内膜面积与中膜面积比 ,与高浓度组、中浓度组、低浓度组相比 ,差异显著(P <0 .0 5 )。PCNA阳性细胞数在各组之间相互比较 ,差异显著 (P <0 .0 5 )。流式细胞仪分析 ,从高浓度组、中浓度组、低浓度组到对照组 ,G0 G1、S期细胞所占比例逐渐减少 ,G2 M期细胞所占比例逐渐增多 (P <0 .0 5 )。结论 :局部缓释COL具有抑制移植血管内膜及平滑肌细胞增殖的作用。COL抑制血管内膜增殖作用与其剂量呈剂量—效应关系。COL可使平滑肌细胞停止在分裂中期 ,抑制其进入下一个增殖周期 ,从而抑制移植血管内膜及平滑肌细胞增殖的作用。     

肾上腺嗜铬细胞瘤C-mycmRNA及蛋白表达的临床意义

目的 :探讨癌基因C myc及其表达产物在肾上腺良性及恶性嗜铬细胞瘤发生中的作用。方法 :应用核酸分子原位杂交及免疫组织化学方法检测 2 9例良性肾上腺嗜铬细胞瘤及 7例恶性肾上腺嗜铬细胞瘤中C myc基因及其产物表达情况。结果 :原位杂交结果显示 :C mycmRNA在良性肾上腺嗜铬细胞瘤中表达率为 2 7.5 % (8 2 9) ,而在恶性肾上腺嗜铬细胞瘤中为 71.4(5 7) (P <0 .0 5 ) ;免疫组化结果显示 :C myc蛋白表达率分别为 31.0 % (9 2 9)和 71.4% (5 7) (P <0 .0 5 ) ;结论 :在肾上腺嗜铬细胞瘤的发生过程中 ,C myc基因可能对该肿瘤的恶性变起重要作用 ;C myc基因产物的检测对鉴别良、恶性肾上腺嗜铬细胞瘤有一定意义。     

洛沙坦对兔静脉移植物内膜增生的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂洛沙坦对静脉移植物内膜增生的影响。方法 新西兰大白兔20只,随机分为治疗组和对照组。术后治疗组即给予洛沙坦纯粉25mg/(kg·d),对照组常规喂养,共4周。术前及处死动物前分别测定基础血压和治疗后血压;术后4周测定新生内膜面积、内膜中膜比。结果 治疗组新生内膜面积(0.51±0.05)mm~2较对照组(1.02±0.10)mm~2明显减少,P<0.01。治疗前后血压无显著变化。结论洛沙坦对静脉移植物内膜增生有明显的抑制作用。     

C-myc基因过度表达与妊娠滋养细胞疾病预后关系的探讨

采用核酸分子杂交技术，以地高辛dig－11－dUTP标记的C－myc基因探针与54例妊娠滋养细胞疾病（GTD）石蜡包埋组织（其中葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌各18例）进行原位杂交，定性、半定量地测定了C－myc基因在GTD组织中的表达，结果提示：C－myc基因随着GTD病变的发展，其表达呈逐渐增高的趋势：C－myc基因与恶性滋养细胞肿瘤的临床分期及预后有关，即临床分期越晚，C－myc阳性表达率越高；年龄≥40岁、病程＞1年、前次妊娠为非葡萄胎、恶性程度高及有转移组的患者，其C－myc阳性表达率增高。     

左旋精氨酸对静脉移植保护作用的综合研究

目的:观察左旋精氨酸(L-Arg)对自体移植静脉内膜增生的影响,探讨其作用机制.方法:(1)动物实验:60只新西兰兔,随机分为左旋精氨酸实验组、生理盐水对照组.所有动物术日建立自体静脉旁路移植模型:于术后1、2、4、6周及8周取材,统计学分析各组间差异.(2)临床试验部分:将33例欲行非体外循环冠脉搭桥手术的患者随机分成两组,对照组给予常规血管保存液处理血管桥,观察组给予含L-Arg的血管保存液处理血管桥.结果:(1)移植4周后,各组静脉均有内膜及中膜较正常颈静脉明显增厚表现,左旋精氨酸组内膜及中膜增厚较对照组轻.两组静脉桥的管腔狭窄程度进行比较存在明显差异.(2)两组手术成功率无显著性差异(P＞0.05).观察组术后细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)、内皮素-1(ET-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平均较术前有明显降低(P＜0.05),且与对照组比较有统计学意义(P＜0.05).结论:(1)兔静泳移植至股动脉后内膜及中膜增厚.(2)左旋精氨酸联合降脂药物能抑制移植静脉内膜及中膜增生,减少静泳桥狭窄.(3)含有左旋精氨酸的血管保护液可一定程度上改善血管内皮细胞的功能,从而延缓血管硬化,并有效控制病情进展.     

原位杂交法检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc基因mRNA表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤细胞癌基因N-ras、C-myc mRNA水平的影响.方法:应用地高辛标记探针原位杂交技术,检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞中癌基因N-ras、C-myc mRNA丰度的影响.结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中mRNA表达量均显著低于模型组(P＜0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:树舌多糖GF可通过调节N-ras、C-myc基因mRNA的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

砷剂诱导人胃癌细胞株凋亡及对C-myc基因作用的研究

目的研究砷剂（As2O3）对人胃癌细胞的诱导凋亡作用及对C-myc基因表达的影响。方法选用人胃癌BGC-823细胞株,运用体外细胞培养法、MTT法、流式细胞术检测As2O3对人胃癌的诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测C-mycmRNA的表达。结果As2O3对人胃癌BGC-823细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系。不同浓度的As2O3均可诱导凋亡。1．0μmol／L、3．0μmol／L的As2O3可下调C-myc的表达。结论As203具有抗肿瘤作用,主要是通过诱导细胞凋亡实现。其机制与下调C-myc表达有密切关系。     

胃癌组织中eIF4E、C—myc及CyclinD1的表达及临床意义

目的 研究胃癌组织中真核细胞起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)、C-myc及Cyclin D1蛋白的表达以及与胃癌临床病理的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测91例胃癌组织和30例正常胃黏膜组织中eIF4E、C-myc及Cyclin D1的表达情况,并结合其临床病理资料进行综合分析.结果 与正常胃组织相比,eIF4E、C-myc及Cyclin D1蛋白在胃癌组织中均呈现高表达(P＜0.01).eIF4E、C-myc及Cyclin D1的阳性表达率与患者的年龄、性别以及肿瘤分化程度均无明显相关性(P＞0.05),而与肿瘤的浸润深度、淋巴转移及临床分期有关(P＜0.05).eIF4E与C-myc,eIF4E与Cyclin D1的表达呈正相关(r=0.824,r=0.780,P＜0.01).结论 eIF4E、C-myc 及 Cyclin D1的表达与胃癌的侵袭、转移密切相关,eIF4E表达与C-myc及Cyclin D1显著相关.     

三七总皂甙对血管平滑肌细胞凋亡及C-myc基因表达的影响

目的观察PNS对体外培养的VSMC凋亡及C-myc基因表达的影响。方法体外培养兔胸主动脉血管平滑肌细胞,在培养基中加入不同浓度的PNS,采用流式细胞仪检测和电镜观察细胞凋亡率,细胞免疫组化方法检测C-myc蛋白。结果PNS组细胞凋亡率明显增加,电镜下呈典型细胞凋亡形态学改变。该组C-myc蛋白的表达也增加。结论PNS可诱导VSMC的凋亡,促进C-myc基因的表达可能是其作用环节。     

反义mTOR基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响

目的:观察反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组转染纳米粒子包载的反义mTOR基因,空载体组转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于术后3、7、14、28d取材,常规HE、弹力纤维VG染色,RT-PCR、免疫组织化学染色、Western blot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中mTOR蛋白产物表达较其他组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生程度在术后7、14、28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生,促进VSMC的凋亡。