重组人N末端脂多糖结合蛋白对脂多糖致伤小鼠保护作用的初步研究

目的　初步观察重组人N末端脂多糖结合蛋白 (tLBP)对细菌脂多糖 (LPS)致伤小鼠的保护效应。　方法　选用雄性昆明小鼠 70只 ,随机分为致伤组 1(2 1只 ) :腹腔内注射LPS 10 0ng;保护组 1(2 1只 ) :腹腔内注射 10 0ngLPS 40mgtLBP;对照组 (8只 ) :腹腔内注射等渗盐水。于注射后15、30min及 1、3、6、12、2 4h测定 3组动物血清丙氨酸转氨酶 (ALT)及肿瘤坏死因子α(TNF α)的含量 ,并观察其肝、肺组织的病理学改变。另设致伤组 2及保护组 2各 10只 ,分别腹腔内注射LPS 4 0 0ng及4 0 0ngLPS 40mgtLBP,观察伤后 2 4h内动物的死亡数。　结果　保护组 1与致伤组 1血清ALT含量分别于伤后 12、6h到达峰值 ,各为 (41.0 0± 4 .5 8)、(99.5 0± 6 2 .6 3)U L,前者的升高幅度显著低于后者 (P <0.0 1);两组血清TNF α含量均于伤后 3h到达峰值 ,各为 (35 .96± 7.33)、(42 .4 9± 4 .79)fmol ml,保护组 1的升高幅度低于致伤组 1。与致伤组 1比较 ,保护组 1肝细胞变性程度明显减轻 ,未见肝细胞散在坏死病变 ;肺组织充血有不同程度减轻 ,肺泡腔内、支气管内炎性渗出明显减弱。致伤组2伤后 2 4h死亡 9只 ,保护组 2死亡 3只。　结论　初步认为重组人tLBP具有一定的生物学活性 ,对LPS致伤小鼠具有一定保护作用。     

氯胺酮对颅脑损伤神经细胞凋亡SOD、MDA的影响

<正>1资料与方法1.1验动物健康SD(Sprague Dawley)大鼠70只。1.2实验方法1.2.1实验分组:SD大鼠63只,适应性喂养3 d后,随机分为7组。A组(假手术对照组);B组(颅脑损伤模型对照组,简称损伤对照组),再根据伤后时间段分为伤后6 h、24 h、72 h组;C组(颅脑损伤+氯胺酮干预组,简称氯胺酮治疗组),再根据伤后时间段分为伤后6 h、24 h、72 h组。     

TRPV4在右美托咪定改善机械通气致脑损伤小鼠认知功能降低中的作用

目的评价瞬时受体电位香草酸4(TRPV4)在右美托咪定改善机械通气致脑损伤小鼠认知功能降低中的作用。方法清洁级健康雄性C57BL6小鼠90只, 体质量20～25 g, 8～12周龄, 采用随机数字表法分为5组(n=18):对照组(C组)、机械通气组(V组)、HC-067047组(H组)、右美托咪定组(D组)和右美托咪定+GSK1016790A组(DG组)。C组不行机械通气, 自主呼吸空气6 h;V组机械通气6 h;H组机械通气3和6 h时分别脑室内注射TRPV4阻断剂HC-067047 10 mmol;D组和DG组机械通气前30 min腹腔注射右美托咪定50 μg/kg;DG组机械通气前60 min脑室内注射TRPV4激动剂GSK1016790A 5 μmol。每组随机取6只小鼠分别于机械通气前1 d、机械通气后3和7 d时行Morris水迷宫实验。机械通气后1 d, 每组随机处死6只小鼠取脑组织, 采用TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡情况, 计算凋亡指数。每组随机处死6只小鼠取海马组织, 采用Western blot法检测TRPV4、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)、p-Akt...     

血管紧张素Ⅱ1型受体在急性肺损伤小鼠肺核因子κB和激活蛋白1活化中的作用

目的 了解血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体在LPS诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺脏NF-κB和激活蛋白1(AP-1)活化中的作用.方法 应用随机数字表法将88只BALB/c小鼠分为对照组8只、LPS组40只、LPS+AT1受体拮抗剂ZD7155组40只.3组小鼠均行气管穿刺.LPS+ZD7155组小鼠腹腔注射ZD7155(10 mg/kg),对照组和LPS组小鼠腹腔注射等体积生理盐水.30 min后,将1 mg/mL LPS分别滴入LPS组和LPS+ZD7155组小鼠气管中(2 mg/kg),对照组小鼠以等体积生理盐水替代LPS经气管滴入.于滴注LPS后1、3、6、12、24 h,留取LPS组和LPS+ZD7155组小鼠肺组织标本;对照组小鼠于滴注后24 h取肺组织标本.采用蛋白质印迹法检测肺组织AT1受体的表达,用凝胶电泳迁移率变化分析法检测肺组织NF-κB和AP-1活性.对各实验结果进行单因素方差分析.结果 LPS组小鼠各时相点肺组织AT1受体蛋白相对表达量较对照组(0.69±0.28)明显升高(F=9.356,P值均小于0.01),6 h时达高峰(3.44±0.90);LPS+ZD7155组各时相点均低于LPS组(F=9.356,P值均小于0.01).LPS组小鼠各时相点肺组织NF-κB活性较对照组(5.47±0.08)显著升高(P=26.443,P值均小于0.05),3 h时达高峰(52.33±3.25);LPS+ZD7155组各时相点肺组织NF-κB活性均明显低于LPS组(F=26.443,P值均小于0.05).LPS组小鼠各时相点肺组织AP-1活性较对照组(2.5±0.4)显著升高(F=34.685,P值均小于0.05),其中6 h时达高峰(73.3±9.5),LPS+ZD7155组各时相点肺组织AP-1活性均明显低于LPS组(F=34.685,P值均小于0.05).结论 AT1受体通过激活NF-κB和AP-1,参与LPS诱导的AL1发生.     

髓系细胞触发受体1慢病毒载体对脆弱拟杆菌脓毒症小鼠促炎因子表达的影响

目的 了解髓系细胞触发受体1(TREM-1)基因重组慢病毒短发夹RNA(vshRNA)载体对脆弱拟杆菌脓毒症小鼠促炎因子表达及小鼠存活率的影响.方法 (1)构建TREM-1 vshRNA载体.经实验确定脓毒症小鼠模型制作条件:腹腔注射2.5×10<9CFU/mL灭活脆弱拟杆菌0.5 mL,刺激12 h.(2)115只小鼠按随机数字表法分为健康对照组(3只)和脓毒症模型组、绿色荧光蛋白(GFP)干扰组、TREM-1干扰组、TREM-1半量干扰组.后4组每组28只,先分别经尾静脉注射等渗盐水、GFP vshRNA、TREM-1 vshRNA 2×108TU、TREM-1 vshRNA 1×108TU;1 h后,将该4组小鼠制成脓毒症模型,健康对照组注射等体积等渗盐水.12 h后处死5组小鼠(每组3只),取血检测血浆TNF-α、IL-1β和IL-6含量;取肝组织标本检测TREM-1 mRNA及其蛋白的表达水平.后4组小鼠每组所余25只用于观察腹腔注射后72 h的存活率.(3)另建立脓毒症小鼠模型125只,其中100只分别于腹腔注射后1、2、4、6 h尾静脉注射TREM-1 vshRNA 2×108TU(每时相点25只),余下25只尾静脉注射等渗盐水为对照组.计算尾静脉注射后72 h小鼠存活率.结果 (1)与脓毒症模型组比较.TREM-1干扰组、TREM-1半量干扰组小鼠血浆TNF-α、IL-1β、IL-6含量均下降(P<0.05),以TREM-1干扰组下降最明显.GFP干扰组中各促炎因子含量与脓毒症模型组接近(P>0.05).(2)与GFP干扰组比较,TREM-1干扰组及其半量干扰组小鼠肝组织TREM-1 mRNA表达均明显下调(P<0.01),以TREM-1干扰组尤为明显(P<0.05).各组小鼠TREM-1蛋白表达情况与此一致.(3)脓毒症模型组、GFP干扰组小鼠腹腔注射后72 h存活率均为16%.TREM-1干扰组及其半量干扰组分别为76%和44%(P<0.05或P<0.01).(4)另建立的125只脓毒症小鼠模型中,对照组及腹腔注射后1、2、4、6 h组其尾静脉注射后72 h存活率分别为16%、72%、56%、40%、16%,其中1、2、4 h组明显高于对照组(P<0.05或P<0.01).结论 运用TREM-1 vshRNA干扰技术,可有效降低脆弱拟杆菌脓毒症小鼠肝组织TREM-1表达水平,抑制炎性反应,提高小鼠存活率.     

PIAS调控PPARγ的SUMO化修饰在小鼠内毒素性急性肺损伤内源性保护机制中的作用

目的评价小泛素相关修饰物(SUMO) E3连接酶(PIAS)调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的SUMO化修饰在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)内源性保护机制中的作用。方法实验Ⅰ清洁级野生型雄性C57BL/6小鼠24只, 6～8周龄, 体质量18～22 g, 采用随机数字表法分为4组(n=6):对照组(C组)、ALI组、ALI+ PPARγ诱导剂TZD组(ALI+T组)、ALI+TZD+SUMO化抑制剂漆树酸组(ALI+T+A组)。尾静脉注射LPS 15 mg/kg制备内毒素性ALI模型。ALI+T+A组注射LPS前1 h时腹腔注射漆树酸5 mg/kg;ALI+T组和ALI+T+A组注射LPS前30 min时腹腔注射TZD 50 mg/kg。给予LPS 12 h后处死小鼠取肺组织, 测定湿重/干重(W/D)比值, 光镜下观察病理学结果, 并行肺损伤评分;分别采用Western blot法和PCR法测定PIAS1、PIAS2、PIAS3和PIASy及其mRNA的表达。实验Ⅱ 体外培养的小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)采用随机数字表法分为4组(n=5):对照组(C组)、LPS...     

细胞自噬在七氟醚致老年小鼠海马区神经元细胞凋亡中的保护作用

目的探讨细胞自噬在七氟醚致老年小鼠海马区神经元细胞凋亡中的作用机制。方法 18月龄BL/C57小鼠16只, 按随机数字表法分为两组(每组8只):七氟醚组和对照组。七氟醚组吸入47.5%空气+2.5%七氟醚+50%氧气3 h, 对照组吸入50%空气+50%氧气3 h。建模后24 h进行新物体识别实验, 随后断头取海马组织, 尼氏染色检测海马神经元细胞凋亡情况, Western blot法检测海马神经元细胞自噬相关蛋白[微管关联蛋白(microtubule-associated protein, LC)3Ⅱ/LC3Ⅰ、Becline-1、p62蛋白]水平。另取18月龄BL/C57小鼠18只, 按随机数字表法分为3组(每组6只):七氟醚+3-甲基腺嘌呤组(M组, 吸入麻醉前2 h经腹腔注射3-甲基腺嘌呤)、七氟醚+雷帕霉素组(R组, 吸入麻醉前24 h和2 h经腹腔注射雷帕霉素)、七氟醚+生理盐水组(N组, 吸入麻醉前2 h经腹腔注射生理盐水100 μl)。经腹腔注药及七氟醚处理后, 尼氏染色检测海马神经元细胞凋亡情况, Western blot法检测海马神经元细胞自噬相关蛋白(LC3Ⅱ/L...     

肠道菌群异质性与脓毒症小鼠获得性肌无力的关系

目的评价肠道菌群异质性与脓毒症小鼠获得性肌无力的关系。方法 SPF级健康雄性C57BL/6小鼠80只, 体质量18～20 g, 6～8周龄。取小鼠40只, 采用腹腔注射LPS 10 mg/kg的方法制备脓毒症模型, 筛选脓毒症敏感型小鼠(建模后24 h内出现濒死状态甚至死亡)和脓毒症抵抗型小鼠(生存7 d并恢复活跃状态), 建模前收集小鼠粪便制备粪菌液。取小鼠40只, 采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)不予以任何处理;抗生素组(ABX组)灌胃复合抗生素1次/d, 连续5 d;抵抗组(Res组)灌胃复合抗生素5 d后, 灌胃脓毒症抵抗型小鼠粪菌液150 μl, 1次/d, 连续3 d, 随后腹腔注射LPS 15 mg/kg;敏感组(Sen组)灌胃复合抗生素5 d后, 灌胃脓毒症敏感型小鼠粪菌液3 d(方法同Res组), 随后腹腔注射LPS 15 mg/kg。脓毒症建模后24 h时进行脓毒症严重程度评分。于粪菌移植后以及脓毒症建模后24 h时测定四肢抓力。脓毒症建模后24 h时测定腓肠肌复合肌动作电位(CMAP), 随后取血液标本, 采用ELISA法测定血清IL-1、IL...     

SIRT1在内毒素性脑损伤小鼠线粒体功能障碍中的作用

目的评价海马沉默信息因子1(SIRT1)在内毒素性脑损伤小鼠线粒体功能障碍中的作用。方法清洁级雄性C57BL/6小鼠80只, 6～8周龄, 采用随机数字表法分为4组(n=20):对照组(C组)、内毒素性脑损伤组(LPS组)、内毒素性脑损伤+SIRT1抑制剂组(LPS+E组)和内毒素性脑损伤+SIRT1激动剂(LPS+S组)。静脉注射LPS 10 mg/kg制备小鼠内毒素性脑损伤模型。于注射LPS前72 h时, LPS+E组腹腔注射SIRT1抑制剂EX527 10 mg/kg, 其余3组腹腔注射等容量DMSO;于注射LPS前30 min时LPS+S组腹腔注射SIRT1激动剂SRT1720 100 mg/kg, 其余3组腹腔注射等容量DMSO。注射LPS 24 h时行新物体识别实验, 安乐处死小鼠, 取海马组织行尼氏染色, 光镜下观察病理学结果, 并计数海马CA1区正常神经元;采用分光光度法测定海马ATP含量和线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性, Jc-1染色法检测线粒体膜电位(MMP), 透射电镜观察神经元线粒体超微结构。结果与C组比较, LPS组、LPS+S组和LPS+E组新物体识...     

Apelin对大鼠坐骨神经切断后脊髓前角神经元凋亡的影响

我们通过建立大鼠坐骨神经切断缝合术后动物模型,观察Apelin对脊髓前角神经元凋亡的影响.一、材料与方法1.实验动物分组:实验一:取健康成年SD大鼠35只.随机分成两组:A组正常对照组5只;B组脊髓损伤组30只;分别于术后2、6、12、24、48、72 h取5只大鼠脊髓.实验二:取健康雌性成年SD大鼠48只,分为2组,实验组(A组):坐骨神经切断缝合后硅胶管内注射Apelin蛋白;对照组(B组).于术后4、8、24、72 h、7、14 d 6个时相点取材.     

蛋白酶体抑制剂PS-341对重症急性胰腺炎小鼠的治疗机制

目的:探讨蛋白酶体抑制剂PS-341对重症急性胰腺炎的治疗机制。方法:将144只小鼠用完全随机方法分成PS-341治疗组64只、模型组40只和对照组40只。PS-341治疗组在造模前0.5h腹腔注射PS-341(0.5mg/kg)0.2mL;模型组造模前0.5h腹腔注射50%DMSO0.2mL(生理盐水稀释);对照组腹腔注射生理盐水0.2mL。造模后8h将小鼠处死,用自动生化仪检测血清淀粉酶、CRP和LDH,ELISA法检测IL-1β和IL-6。结果:与模型组相比,PS-341治疗组的血淀粉酶、乳酸脱氢酶、C反应蛋白均明显降低(P0.05),PS-341治疗组血清中IL-1β和IL-6的表达水平较模型组下降(P0.05,P0.01),治疗组小鼠胰腺病理组织的炎细胞浸润及出血明显减少(P0.05)。结论:蛋白酶体抑制剂PS-341可降低SAP小鼠血清淀粉酶、CRP、LDH和IL-1β/6水平和炎细胞浸润及出血,对SAP有一定的治疗作用。     

艾司氯胺酮对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响及其与线粒体应激的关系

目的评价艾司氯胺酮对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响及其与线粒体应激的关系。方法实验Ⅰ SPF级雄性C57BL/6小鼠18只, 8～12周龄, 体质量28～30 g, 采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)和艾司氯胺酮+脑缺血再灌注组(E+IR组)。采用大脑中动脉栓塞1 h, 再灌注24 h的方法制备脑缺血再灌注损伤模型;E组造模前20 min腹腔注射艾司氯胺酮10 mg/kg。采用Zea Longa评分及平衡木实验(Feeney评分)评估小鼠神经功能;TTC染色法测定脑梗死体积。实验Ⅱ将原代皮层神经元采用随机数字表法分为3组(n=42):对照组(C组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)和艾司氯胺酮+OGD/R组(E+OGD/R组)。采用氧糖剥夺1 h, 复氧复糖24 h的方法制备OGD/R模型。E+OGD/R组加入25 μmol/L艾司氯胺酮处理40 min后制备模型。采用CCK-8法检测神经元活力, 透射电镜下观察神经元超微结构, 检测ROS、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)和MDA的水平, JC-1试剂盒检测线粒体膜电位, TUNEL染色法...     

小肠缺血再灌注损伤恢复期骨形成蛋白-4促进肠黏膜屏障恢复的实验研究

目的探讨在小肠缺血再灌注(I/R)损伤恢复期时小肠上皮细胞中骨形成蛋白-4(BMP4)促进肠黏膜屏障功能恢复的机制。方法 28只6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠,采取随机数字表法随机抽取24只小鼠用于I/R操作,余下4只小鼠进行假手术(SO)操作。I/R后分别于6、12、24、48 h时随机抽取4只小鼠处死用于观察小鼠小肠黏膜的形态学变化并检测其空肠上皮细胞中BMP4 mRNA表达的变化,另外8只小鼠分配用于肠黏膜损伤恢复期(根据预实验结果,选择I/R后24 h时作为观察时间点)的实验观察。对I/R后恢复期即I/R后24 h时的小鼠腹腔内分别注射浓度为30 ng/(m L·kg)的重组人BMP4蛋白(I/R-24 h-BMP4组)和生理盐水(I/R-24 h-NS组),对不注射任何液体的小鼠作为对照组(I/R-24 h-空白组),采用随机数字表法每组随机分配4只小鼠,然后检测各组小鼠空肠黏膜组织跨膜电阻抗(TER)的变化,同时采用Western blot法检测各组小鼠小肠上皮细胞中BMP4蛋白、紧密连接蛋白(occludin、ZO-1)、Notch信号通路蛋白(Notch1、Jagged1)及磷酸化Smad6蛋白(p-Smad6)的蛋白表达变化。结果在小鼠小肠I/R后24 h时,小肠黏膜绒毛上皮层损伤明显减轻、水肿减轻、肠绒毛少部分断裂、脱落。与SO小鼠比较,I/R后6、12、24、48 h时空肠上皮细胞中BMP4 mRNA表达呈逐渐增高趋势。小鼠I/R损伤后恢复期即I/R后24 h时发现,给予外源性BMP4蛋白刺激后,I/R-24 h-BMP4组空肠黏膜组织中TER值、BMP4、occludin、ZO-1、Notch1、Jagged1、p-Smad6蛋白表达均较I/R-24 h-NS组和I/R-24 h-空白组升高。结论从本研究初步研究结果看,在小肠I/R损伤后恢复期,空肠黏膜屏障通透性增大、BMP4表达增加,其可能是通过激活Notch信号通路(Notch1、Jagged1)和Smad经典信号通路(p-Smad6)与促进紧密连接蛋白(occludin和ZO-1)表达增加来促进肠黏膜屏障功能的恢复,从而减轻肠黏膜屏障功能损伤。     

黄蜂毒素1对内毒素/脂多糖所致小鼠急性肝损伤的影响

目的 了解黄蜂毒素1(MP-1)对LPS所致小鼠急性肝损伤的影响,探讨其作用机制.方法 将104只BALB/c小鼠按随机数字表法分为健康对照组(8只,不作任何处理)、LPS组(48只,尾静脉注射LPS 5 mg/kg)和MP-1组(48只,尾静脉注射LPS 5 mg/kg和MP-1 3 mg/kg).后2组小鼠于注射后2、6、12、24、48、72 h处死,每组每时相点8只,采集血和肝组织标本.动态比浊法鲎试验检测2组小鼠各时相点血浆LPS水平,酶联免疫吸附测定法检测血浆TNF-α和IL-6水平,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,实时荧光定量RT-PCR检测肝组织Toll样受体4(TLR4)、TNF-α和IL-6 mRNA表达,观察注射药物后各时相点肝组织病理变化.另取健康对照组小鼠相同样本进行以上检测.结果 与健康对照组比较,LPS组小鼠血浆LPS和TNF-α水平在注射药物后2 h迅速升高,各为(18 320.50±2782.50)EU/mL和(988±130)ng/L,此后逐渐下降,72 h降至(1.80±0.80)EU/mL和(150±44)ng/L,接近健康对照组水平;IL-6、ALT和AST逐渐升高,12 h达峰值,随后下降,72 h接近健康对照组水平;LPS组小鼠肝组织TLR4、TNF-α和IL-6mRNA表达也在注射后明显增强,12～48 h时肝组织炎性反应性病理改变最为显著.与LPS组比较,MP-1组小鼠LPS、细胞因子和转氨酶水平在注射后不同程度地降低(P<0.05或P<0.01),肝组织相关基因表达受到抑制(P<0.05或P<0.01),病理改变较轻.结论 MP-1可能通过中和LPS,减少其诱导的炎性介质合成与释放,进而减轻小鼠肝组织的损伤.     

腹腔巨噬细胞Sirt3表达在右美托咪定抑制脓毒症小鼠炎症反应中的作用

目的评价腹腔巨噬细胞NAD依赖性蛋白脱乙酰酶3(Sirt3)表达在右美托咪定抑制脓毒症小鼠炎症反应中的作用。方法 SPF级健康雄性C57BL6小鼠64只, 7周龄, 体重约20 g。采用随机数字表法分为4组(n=16):假手术组(S组)、脓毒症组(Sep组)、右美托咪定组(DEX组)和右美托咪定+Sirt3抑制剂3-TYP组(TYP组)。采用盲肠结扎穿孔的方法制备小鼠脓毒症模型, DEX组于制备模型前1 h时腹腔注射生理盐水0.25 ml, 30 min后腹腔注射右美托咪定50 μg/kg(生理盐水稀释至0.25 ml);TYP组于制备模型前1 h时腹腔注射3-TYP 5 mg/kg(生理盐水稀释至0.25 ml), 30 min后腹腔注射右美托咪定50 μg/kg。S组和Sep组于制备模型前1 h和30 min分别腹腔注射等量生理盐水。S组仅进行开腹、取出盲肠操作, 不结扎穿孔。于术后24 h时腹腔灌洗, 提取腹腔巨噬细胞贴壁培养, 采用qRT-PCR法检测巨噬细胞Sirt3、IL-1β和TNF-α mRNA表达, Western blot法检测Sirt3的表达, ELISA法测定腹...     

艾司氯胺酮对小鼠抗抑郁作用的机制与海马GABAB受体的关系

目的评价艾司氯胺酮对小鼠抗抑郁作用的机制与海马γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)的关系。方法雄性C57BL/6J(B6)小鼠54只, 8周龄, 体质量25～30 g, 取40只小鼠采用慢性社会挫败应激法建立抑郁模型, 造模后第11天时采用社交回避实验筛选出26只抑郁易感小鼠, 采用随机数字表法分为2组(n=13):抑郁易感组(Sus组)和抑郁易感+艾司氯胺酮组(Sus+S-ket组);剩余的14只小鼠作为对照组(C组)。造模后第12天开始, Sus+S-ket组连续3 d每天腹腔注射艾司氯胺酮10 mg/kg, C组和Sus组连续3 d每天腹腔注射等容量生理盐水。最后一次腹腔注射后1 h时行旷场实验, 记录运动总距离;旷场实验结束后1 d时行强迫游泳实验, 记录不动时间;强迫游泳实验结束后1 d时行糖水偏好实验, 计算糖水消耗比例。行为学测试结束后1 h时深麻醉下处死小鼠, 取海马组织, 采用Western blot法检测GABABR1、GABABR2、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、磷...     

Sirt1在急性炎症状态下糖尿病小鼠肾损伤中的作用

目的 探究Sirt1在急性炎症状态下糖尿病小鼠肾损伤中的作用及分子机制。方法选择SPF级C57BL/6J雄性小鼠40只,8周龄,体重20～25 g。采用随机数字表法将小鼠分为五组：对照组(C组)、糖尿病组(D组)、脂多糖(LPS)+糖尿病组(L组)、LPS+糖尿病+Sirt1阻断剂EX527组(E组)和LPS+糖尿病+Sirt1激动剂银杏黄酮苷元组(G组),每组8只。糖尿病小鼠模型制备成功后,L组腹腔注射LPS 10 mg/kg; E组在糖尿病小鼠给予LPS处理前1 h腹腔注射EX527 5 mg/kg(溶于DMSO 0.2 ml);G组在糖尿病小鼠给予LPS处理前1 h腹腔注射银杏黄酮苷元200 mg/kg(溶于DMSO 0.2 ml);C组和D组在相同时点腹腔注射2%DMSO 0.15 ml。收集24 h尿液测定24h尿量和24 h尿蛋白浓度,眼球取血检测血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)浓度。取肾组织后采用ELISA法检测IL-1β、IL-18浓度,硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量,铁离子抗氧化能力法检测总抗氧能力(T-AOC),qPCR和Western blot法检测Si...     

缬沙坦预先给药对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)阻断剂缬沙坦预先给药对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法36只雄性C57BL/6J小鼠随机分为两组,每组18只,处理组(V组)将缬沙坦溶于2.5%NaHCO3 100μl,以微量注射泵2 mg·kg-1·d-1泵入腹腔至实验结束,对照组(C组)仅予2.5% NaHCO3 100μl在相同时间以相同速率泵注。给药第10天以线栓法建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血1 h后拔出线栓,再灌注23 h。以激光多普勒血流探测仪测定缺血前10 min、缺血即刻、缺血10、30、50 min、再灌注10、30、60 min时的局部脑血流。在应用缬沙坦前即刻、缺血前10 min、再灌注10min用尾袖法测量平均动脉压。再灌注23 h后行神经功能损害评分。处死小鼠后,测定脑梗塞灶面积和脑含水量。结果两组小鼠3个时点的平均动脉压比较差异无统计学意义(P>0.05)。与C 组比较,V组脑梗塞灶面积减小,死亡率降低,神经功能损害评分降低,脑含水量减少,再灌注后V组梗塞灶中央区和半暗区局部脑血流升高(P<0.05)。结论预先应用AT1受体阻断剂缬沙坦可改善局部脑血流,减轻小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。     

CaM/CaMK-Ⅱ信号通路在小鼠炎性痛中的作用

目的探讨钙调蛋白/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaM/CaMK-Ⅱ)信号通路在C57BL6小鼠炎性痛中的作用。方法选取体重25~27g的雄性C57BL6小鼠60只,随机分为对照组(C组)、完全弗氏佐剂(CFA)组(F组)和KN-93+CFA组(KF组),每组20只。C组小鼠右侧后爪趾底注射生理盐水50μl,F组注射50μl CFA制备炎性痛模型,KF组注射CFA前30 min鞘内注射DMSO稀释的终浓度为10mmol/L的KN-93。分别于右侧后爪趾底注射前30min、注射后1h和4h测定小鼠热刺激缩足潜伏期(TWL);取小鼠脊髓组织,采用Western blot法检测p-CaMK-Ⅱ、pCREB、c-fos蛋白含量;RT-PCR法检测CaMK-Ⅱ、CREB、c-fos基因表达。结果注射后1h和4h,F和KF组TWL明显短于C组,但KF组明显长于F组(P0.05);F组和KF组脊髓组织pCaMK-Ⅱ、p-CREB及c-fos蛋白含量和基因表达量均明显高于C组,但KF组明显低于F组(P0.05)。结论 CaM/CaMK-Ⅱ信号通路参与小鼠炎性痛的发生与发展。     

脊髓背角ERK激活在大鼠神经病理性疼痛中的作用

目的探讨脊髓背角细胞外信号调节激酶(ERK)的激活在大鼠神经病理性疼痛诱发和维持中的作用。方法雄性SD大鼠,体重200～300 g。本研究分多剂量给药和单剂量给药两部分,均进行行为学实验和脊髓背角磷酸化ERK(p-ERK)表达检测。实验一48只鞘内置管大鼠随机分6组(n=8):假手术 生理盐水(NS)组(S组)、慢性压迫性损伤(CCI) NS组(C组)、CCI 5%二甲亚砜(DMSO)组(D组)、CCI 错义寡核苷酸10μg组(M组)、CCI U0126 5μg组(U组)、CCI 反义寡核苷酸组10μg组(A组)。鞘内给药后记录大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。实验二48只鞘内置管大鼠随机分3组(n=16),自CCI术前1 d至术后3 d分别注射NS(G1组)、U0126 5μg(G2组)或ERK反义寡核苷酸10μg(G3组),假手术大鼠4只为阴性对照组,检测脊髓p-ERK的表达。实验三CCI术后5 d大鼠40只随机分5组(n=8):CCI 5%DMSO组(D’组)、CCI U0126 0.2μg组(U0.2组)、CCI U0126 0.5μg组(U0.5组)、CCI U0126μg组(U1组)、CCI U0126 5μg组(U5组),假手术大鼠8只注射5%DMSO(S组)为阴性对照组,记录MWT和TWL;实验四另选CCI术后5 d大鼠20只为实验组,鞘内注射U0126 5μg,假手术5 d大鼠(阴性对照组)与CCI术后5 d大鼠(阳性对照组)各4只,鞘内注射5%DMSO 0.5 h后取材,检测脊髓p-ERK的表达。结果实验一与C组比较,U组与A组MWT和TWL升高,作用持续至术后13 d;实验二与G1组比较,G2组与G3组术后3、5 d胞浆p-ERK2表达以及术后3、5、10 d胞核p-ERK1与p-ERK2表达降低;实验三与D组比较,U0.5组给药后MWT和TWL升高,其作用分别持续至鞘内给药后6 h和2 h;与U0.2组比较,MWT:U0.5组鞘内给药后0.5、2、6 h、U1组给药后0.5、2、6、12 h、U5组鞘内给药后0.5、2、6、12、24 h升高,TWL:U1组鞘内给药后12 h、U5组鞘内给药后0.5、6、12、24 h升高;与U0.5组比较,U5组MWT鞘内给药后0.5、12、24 h和TWL鞘内给药后0.5、12 h升高;实验四与阴性对照组比较,实验组鞘内注射U0126 5μg后0.5 h胞浆与胞核p-ERK1和p-ERK2表达下降,与实验组0.5 h比较,实验组胞浆p-ERK1于6、12、24 h升高,胞核p-ERK1于2、6、12、24 h升高,胞浆与胞核p-ERK2于6、12、24 h均升高(P<0.05)。结论脊髓背角ERK激活参与了大鼠神经病理性疼痛的诱发和维持过程。