大鼠骨骼肌肌质网序列非依赖性的DNA结合蛋白

目的 观察大鼠骨骼肌多上是否存在的非核ＤＮＡ结合蛋白。方法 应用差速离心及蔗糖密度梯度离心法分离大鼠骨骼肌肌质网膜蛋白,用＾３２Ｐ－标记的ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印记杂交。结果 在大鼠骨骼肌肌质网膜中存在的两种ＤＮＡ结合蛋白,相对分子质量分别是８３０００,５８０００,这２种蛋白质要与不同的线状双链ＤＮＡ,环状ＤＮＡ及单链ＤＮＡ结合,结论 大鼠骨骼肌肌质网膜中存在两种序列非依赖性ＤＮＡ结合     

蛋白印迹法人血清DNA结合蛋白的测定

利用蛋白印迹法(Western blot)原理建立了检测人血清DNA结合蛋白的一种较特异性方法,发现在成人血清中有7 种Lambda DNA结合蛋白,分子量为:90kDa、67kDa、43kDa、30kDa、24kDa、22kDa和17kDa。在婴儿血清中没有30kDa、24kDa和22kDa这3种LambdaDNA结合蛋白。在人的血清中有二种小牛胸腺DNA结合蛋白,分子量为:43kDa和17kDa。血清中有四种与正常成人血浆DNA结合的蛋白质,分子量分别为:67kDa、43kDa、30kDa和24kDa,其中30kDa的这种蛋白质与正常成人血浆DNA的结合力较弱,并在一些正常个体中未见到此带。     

质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca2+转运的影响

目的：观察ＤＮＡ与骨骼肌肌质网蛋白结合后对肌质网功能的影响。方法：应用差速离心分离大鼠骨骼肌肌质网,并用４５ＣａＣｌ２作为示踪剂,观察质粒ＤＮＡｐｃＤＮＡ３和ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ对肌质网钙转运功能的影响。结果：两种质粒均可明显增加肌质网Ｃａ２＋摄取,呈明显的量效关系,并且也可促进肌质网钙释放。结论：外源质粒ＤＮＡ可影响肌质网钙转运功能。     

抗辐射菌DNA结合蛋白的氨基酸序列分析

目的 对抗辐射菌Ｄ．ｒａｄｉｏｕｄｕｒａｎｓ的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）进行Ｎ－末端氨基酸（ＡＡ）序列分析,探讨其抗辐射分子学组成的我。方法 采用地高辛（ＤＩＧ）标记染色体ＤＮＡ作为探针,Ｓｏｕｔｈ－Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测ＤＢＰ,在Ｎ－端ＡＡ自动序列仪上分析ＡＡＹ邓列。结果 野生型抗辐射菌存有８种ＤＢＰ的特性蛋白（分子量分别为１２２、９３、３３、２９、１６、１５、１４和１２ｋｄ）;ＡＡ序列分析发现     

植物血凝素对大鼠周血淋巴细胞DNA结合蛋白的影响

应用原位杂交技术，对大鼠周血分离淋巴细胞以及植物血凝素（ＰＨＡ）刺激的转化淋巴细胞中的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）的变化，进行了研究。结果显示：①受ＰＨＡ刺激的淋巴细胞显示ＤＢＰ信号百分率显著升高；②受ＰＨＡ刺激的淋巴细胞核内显示ＤＢＰ信号的百分率著升高，且多为淋巴细胞；③细胞核外显示ＤＢＰ信号的淋巴细胞百分率在ＰＨＡ刺激后显著升高。提示：ＰＨＡ刺激对淋巴细胞核内、外ＤＢＰ的信号均有增高作用；ＤＢＰ可     

尼莫地平对血管性痴呆大鼠海马CAMP反应元件结合蛋白、转录因子CCAAT增强子结合蛋白DNA结合活性的影响

目的 观察尼莫地平对血管性痴呆大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)的DNA结合活性的影响,探讨其治疗血管性痴呆的机制.方法 66只SD大鼠随机分为模型组,假手术组和尼莫地平组,每组22只,采用4血管法制备大鼠血管性痴呆模型,分别给予生理盐水(8 ml·kg-1·d1)、尼莫地平(20mg·kg4 ·d-1)灌胃,用HE染色法观察海马CA1区神经元形态变化.水迷宫法检测大鼠学习和记忆能力,凝胶电泳迁移率改变分析法( EMSA)测定海马组织CREB和C/EBP的DNA结合活性.结果 水迷宫检测:尼莫地平组大鼠学习记忆能力[逃逸潜伏期(26.63±1.31)s,跨越平台次数(7.25±0.92)次]较模型组[逃逸潜伏期(41.25±1.83)s,跨越平台次数(5.33±0.64))次]强,差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色:模型组大鼠海马CA1区部分神经元正常结构消失,胞核区域浓染,出现凝固性坏死及细胞脱失,尼莫地平组大鼠海马CA1区神经元排列较模型组病理改变减轻,细胞结构完整;尼莫地平组海马CA1区正常神经细胞数目(43.19±2.87)较模型组(16.33±1.09)增加,差异有统计学意义(P＜0.05).EMSA:尼莫地平组CREB和C/EBP的DNA结合活性[分别为(369.75±13.22),(428.25±17.69)]较模型组[分别为(142.25±27.86),(97.00±5.88)]均升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 尼莫地平改善血管性痴呆大鼠海马神经元损伤和学习功能下降,可能与提高CREB和C/EBP的DNA结合活性有关.     

植物血凝素对大鼠周血淋巴细胞DNA结合蛋白的影响

应用原位杂交技术,对大鼠周血分离淋巴细胞以及植物血凝素（ＰＨＡ）刺激的转化淋巴细胞中的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）的变化,进行了研究。结果显示：①受ＰＨＡ刺激的淋巴细胞显示ＤＢＰ信号百分率显著升高;②受ＰＨＡ刺激的淋巴细胞核内显示ＤＢＰ信号的百分率显著升高,且多为淋巴母细胞;③细胞核外显示ＤＢＰ信号的淋巴细胞百分率在ＰＨＡ刺激后显著升高。提示：ＰＨＡ刺激对淋巴细胞核内、外ＤＢＰ的信号均有增高作用;ＤＢＰ可能参与淋巴细胞的母细胞转化以及细胞间遗传信息的传递。     

抗辐射菌DNA结合蛋白的氨基酸序列分析

目的　对抗辐射菌Ｄ．ｒａｄｉｏｕｄｕｒａｎｓ 的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ） 进行Ｎ－ 末端氨基酸（ＡＡ） 序列分析,探讨其抗辐射分子学组成的特性。方法　采用地高辛（ＤＩＧ） 标记染色体ＤＮＡ 作为探针,ＳｏｕｔｈＷｅｓｔｅｒｎ 印迹法检测ＤＢＰ,在Ｎ－ 端ＡＡ 自动序列仪上分析ＡＡ序列。结果　野生型抗辐射菌存有８ 种ＤＢＰ的特性蛋白（分子量分别为１２２、９３、３３、２９、１６、１５、１４ 和１２ｋｄ）;ＡＡ 序列分析发现其中９３ｋｄ 和３３ｋｄ 可能为新的蛋白质;两种新ＤＢＰ 的表达水平随不同培养基和培养时间而变化。结论　抗辐射菌的ＤＢＰ,尤其是９３ｋｄ 和３３ｋｄ 的ＤＢＰ与其辐射耐受性可能有密切关系     

质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca^2＋转运的影响

目的：观察ＤＮＡ与骨骼肌肌质网蛋白结合后对肌质网功能的影响。方法：应用差速离心分离大鼠骨骼肌肌质网,并用＾４５ＣａＣｌ２作为示踪剂,观察质粒ＤＮＡ ｐｃＤＮＡ３和ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ对肌质网钙转运功能的影响。结果：两种质粒均可明显增加肌质网Ｃａ＾２＋摄取,呈明显的量效关系,并且也促进肌质网钙释放。结论：外源质粒ＤＮＡ可影响肌质网钙转运功能。     

质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca2+-ATPase活性及ryanodine受体结合反应的影响

目的：观察质粒ＤＮＡ 对离体大鼠骨骼肌肌质网Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ 活性及ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体结合反应的影响。方法：参照Ｊｏｎｅｓ 等的方法比色测定肌质网Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ 活性;以３Ｈｒｙａｎｏｄｉｎｅ 作为配基,液闪测定肌质网Ｃａ２＋ 释放通道ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体与配体的结合。质粒ＤＮＡ 处理组预先将肌质网蛋白与质粒ＤＮＡ３７ ℃共同孵育３０ ｍｉｎ ,而后再测定肌质网Ｃａ２ ＋ＡＴＰａｓｅ 活性和ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 结合反应。结果：预先用１０、２０ 和３０ μｇ ｐｃＤＮＡ３ 及ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ处理后,肌质网Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ 活性分别较对照组升高４５％ （Ｐ＜ ０．０５） ,６８ ％（ Ｐ＜ ０．０１） 和１０９ ％ （ Ｐ＜ ０．０１） 及１０９ ％ ,１１８％ 和１４５％ （Ｐ值均小于０ ．０１） ;质粒ｐｃＤＮＡ３ 可明显降低ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体的亲和力,并使Ｂｍａｘ 增强。结论：质粒ＤＮＡ可能通过增强肌质网Ｃａ２ ＋ＡＴＰａｓｅ 的活性促进肌质网对Ｃａ２ ＋ 的摄入,通过影响ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体而调控肌质网Ｃａ２ ＋ 释放。     

无氧运动对大鼠骨骼肌肌浆网Na＋,K＋-ATP酶活性的影响

【目的】研究无氧运动对大鼠骨骼肌肌浆网Na＋,K＋-ATP酶活性的影响。【方法】参照BEDFORD TG标准,建立跑台运动训练及运动负荷大鼠运动模型。将16只大鼠随机分为两组：正常对照组（n=8）和无氧运动组（n=8）,训练周期为4周。超速离心法提取大鼠骨骼肌肌浆网,测定肌浆网Na＋,K＋-ATP酶的活性。【结果】无氧运动组Na＋,K＋-ATP酶的活性较正常对照组显著升高（P〈0.05）。【结论】实验结果表明,较短时间（4周）的无氧运动可保护骨骼肌肌浆网Na＋,K＋-ATP酶的活性。     

重组腺病毒介导的肌浆网钙ATP酶在大鼠心肌细胞的过表达

目的：为研究和评估SERCA2a在充血性心力衰竭的基因治疗中的价值和SERCA2a转基因对心力衰竭病生理的影响。方法：采用重组腺病毒AdEasy系统，构建了含SERCA2a cDNA的重组病毒载体rAd-trSER-CA2a。感染培养的乳鼠心肌细胞，以RTPCR和Western Blotting检测SERCA2a在心肌细胞中的表达。结果：经PCR法和Southern确定目的基因SERCA2a存在于rAd-trSERCA2a基因组中，且连续传代保持其遗传稳定性。感染组心肌细胞SERCA2a蛋白mRNA和蛋白含量分别为对照的4．6倍和1．5倍。结论：我们成功地构建了含SER-CA2a的重组腺病毒rAd-trSERCA2a，该病毒可有效介导SERCA2a在心肌细胞中的表达。     

大豆异黄酮对糖尿病大鼠心肌钙调控蛋白基因表达的影响

目的:探讨大豆异黄酮对糖尿病大鼠心肌细胞肌浆网钙调控蛋白基因表达的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照(NC)组、糖尿病对照(DC)组、大豆异黄酮治疗(ST)组和尼尔雌醇治疗(NT)组。后3组腹腔注射链脲佐菌素55 mg/kg制备糖尿病模型。第7周起,NC、DC组予0.5%羧甲基纤维素钠10 m.lkg-1.d-1,ST组予大豆异黄酮120 m l.kg-1.d-1,NT组予尼尔雌醇混悬液每周0.2 mg/kg灌胃2次。第12周末记录离体心室内压曲线并分析。取心室肌组织,应用RT-PCR技术测定钙调控蛋白的基因表达。结果:与NC组比,DC组大鼠左心室收缩压、平均压、室内压最大上升/下降速率降低(P<0.01);与DC组比,ST组、NT组以上指标均增高(P<0.01)。而左心室舒张末压,DC组明显高于NC组(P<0.01);ST组、NT组均低于DC组(P<0.01)。与NC组比,DC组大鼠心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA)、兰尼碱受体2型(RyR₂)、1,4,5三磷酸肌醇受体2型(IP₃R₂)mRNA表达降低,但受磷蛋白(PLB)mRNA表达增高(P<0.01)。与DC组比,ST组、NT组大鼠心肌SERCA、RyR₂、IP₃R₂mRNA表达增高,而PLB mRNA表达降低(P<0.01)。结论:大豆异黄酮可以改善糖尿病大鼠左心室功能,可能与其上调心肌SERCA、RyR₂、IP₃R₂mRNA的表达和下调PLB mRNA的表达有关。     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4和胰岛素信号传导蛋白的影响

目的：观察游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）和胰岛素信号传导蛋白Grb2及ERK2的影响。方法：分离、培养新生Sprague-Dawley大鼠骨骼肌细胞,分别与软脂酸（0．25mmol/L)或油酸（0．125mmol/L)孵育12、24、36h,提取蛋白后用Western印迹法检测GLUT4、Grb2和ERK2的蛋白水平;用斑点印迹杂交法检测骨骼肌细胞内GLUT4 RNA含量的变化。结果：经软脂酸和油酸孵育12、24、36h后,大鼠骨骼肌细胞GLUT4的蛋白和RNA水平均显著降低（P＜0．05）;同时,Grb2和ERK2的蛋白水平也明显下降（P＜0．05）。结论：游离脂肪酸可抑制GLUT4的基因及蛋白表达和降低胰岛素信号传导蛋白Grb2和ERK2的蛋白表达水平,这可能会影响胰岛素的信号传导作用和骨骼肌的葡萄糖摄取,引起骨骼肌的胰岛素抑抗。     

牛磺酸对大鼠肢体骨骼肌缺血再灌注后内质网应激反应的影响

目的：观察牛磺酸（Tau）预处理对大鼠肢体缺血再灌注（IR）后内质网应激反应的影响。方法：制作大鼠肢体IR损伤动物模型,将大鼠随机分成对照组、IR组和Tau组,测定各组骨骼肌组织湿/干（W/D）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、超氧化物歧化酶（SOD）含量,采用Western blot和实时聚合酶链反应法测定骨骼肌内质网应激（ERS）蛋白-葡萄糖调节蛋白94（GRP94）表达水平,分析牛磺酸对肢体IR损伤与ERS的关系。结果：与IR组比较,Tau组大鼠骨骼肌组织ROS、MDA、XOD和W/D均显著降低（P〈0.05,P〈0.01）,而SOD活性显著增加（P〈0.05）,GRP94在蛋白及mRNA水平表达下调。结论：牛磺酸对肢体IR损伤的保护作用与减轻骨骼肌ERS反应有关。     

肌浆网钙调节蛋白在心肌肥厚病理中的作用

目的 :探讨心肌肌浆网钙调节蛋白功能变化在高血压左心室肥厚病理中的作用。方法 :用自发性高血压大鼠 (SHR)制成左心室肥厚模型 ,以 [3 H]ryanodine为放射配基、p 硝基苯酰磷酸 (PNPP)为底物分别测定左心室肌浆网ryanodine受体密度及钙ATP酶活力的改变。结果 :(1)SHR左心室肥厚时 ,ryanodine受体Bmax值比对照组 (WKY组 )升高 (P <0 .0 1) ,亲和常数 (Kd)无变化 ;钙ATP酶活力下降 (P <0 .0 1)。 (2 )与SHR组相比 ,SHR培哚普利治疗组ryanodine受体Bmax下降 (P <0 .0 5 ) ,钙ATP酶活力上升 (P <0 .0 5 )。结论 :高血压左心室肥厚与血管紧张素Ⅱ介导的肌浆网钙调节蛋白功能变化密切相关