分化抗原gp42表达对B细胞株增殖和血清撤除致死的影响

目的　研究分化抗原gp4 2表达对 3D5B细胞株功能的影响。方法　以生长曲线检测细胞的增殖 ,碘化丙啶 (PI)染色 ,DNA流式细胞仪分析细胞周期 ,Annexin Ⅴ PI染色检测细胞死亡 ,间接免疫荧光染色流式细胞仪分析CD分子的表达 ,用Fluo 3AM作探针激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2 + 浓度的变化。结果　分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞生长明显加速 (P <0 .0 0 1) ,从S期进入G2 M期的比率明显增加。对血清撤除所致的死亡发生抵抗。分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞间的粘附消失 ,CD11c的表达明显减弱。在McAb 5D4的刺激下 ,3D5细胞胞内的Ca2 + 浓度随时间逐步增高。结论　分化抗原gp4 2表达抑制致使 3D5细胞生长加速 ,细胞间粘附消失。分化抗原gp4 2是一个信号传导分子。     

分化抗原5C5在人免疫细胞的表达

目的　明确 5C5蛋白为分化抗原 ,检测其在人免疫细胞的表达 ,以及它的信号传导作用。方法　用 5C5蛋白免疫小鼠 ,制备抗 5C5蛋白的单抗。用反义技术制备 5C5蛋白表达抑制的 3D5细胞。用免疫荧光染色和Western印迹确定 5C5单抗的特异性。用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定其分化抗原的性质。用双色免疫荧光染色流式细胞术检测 5C5分化抗原在多种人免疫细胞的表达。用Fura 3 AM试剂作探针 ,用激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2 + 浓度的变化。结果　制备了抗 5C5蛋白的特异性单抗。用 5C5单抗作探针 ,从 3D5细胞膜免疫沉淀到 1条相对分子质量 (Mr)为 19× 10 3的蛋白带 ,并在活 3D5细胞见阳性免疫荧光染色。 5C5分化抗原在人周围血CD19+ 、CD14 + 、CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率分别为 (33.4 7± 7.9) %、(86 .13± 6 .7) %、(15 .79± 7.1) %、(18.11±12 .77) %和 (11.76± 7.4 7) % ,在人免疫细胞株的表达率分别为 5 8.0 % (Nalm6 )、72 .7% (3D5 )、5 3.6 %(BJAB)、6 1.0 % (Daudi)、6 .9% (SKW6 )、6 .3% (Jurkat)、5 .8% (Peer)、2 1.3% (K5 6 2 )和 39.1% (U937)。3D5细胞在 5C5单抗刺激下 ,胞内Ca2 + 浓度逐渐增高 ,可达 2倍左右 ,对照小鼠Ig则无此作用。结论5C5蛋白为一个分化抗原 ,在人周     

分化抗原6A8在B淋巴细胞膜和胞浆中的表达

采用间接免疫荧光染色、流式细胞仪、激光扫描共聚焦显微镜、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｒｎ ｂｌｏｔ分析研究分化抗原６Ａ８在人淋巴细胞的表达。流式细胞仪分析显示，单抗６Ａ８与所检测的Ｂ细胞株３Ｄ５、ＣＥＳＳ和Ｄａｕｄｉ有反应，与人组织细胞瘤细胞株Ｕ９３７也有反应，与慢性髓性白血症细胞株Ｋ５６２及所检测的Ｔ细胞株Ｊｕｒｋａｔ和Ｐｅｅｒ不反应。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测支持上述现象，３Ｄ５和     

人分化抗原5C5在原核细胞的表达

为了确证5C5cDNA是全长cDNA并制备抗5C5分化抗原不同表位的功能性单抗,进而研究5C5分化抗原的结构与功能,用Northern-blot检测5C5mRNA在人各种组织的表达,并构建了重组表达质粒pGEX-5X-3-5C5全长和pGEX-5X-3-5C5 N端与pGEX-5X-3-5C5 C端。结果表明：所有检测的组织中均只有一个5C5 mRNA转录本,其大小与5C5 cDNA长度一致,表明所分离到的908bp 5C5cDNA是个全长cDNA。重组表达质粒pGEX-5X-3-5C5 N端与pGEX-5X-3-5C5 C端在大肠杆菌DH5α表达出了可溶性融合蛋白GST-5C5 N端与GST-5C5 C端,分子量各为36kD和35kD。     

淋巴细胞相关的分化抗原在人早期胚肝中表达的研究

应用单克隆抗体结合 APAAP 酶标记法,对6～11周的人早期胚肝中淋巴细胞相关的分化抗原和组织相容性抗原 HLA—DP 的表达进行研究的结果表明:在6～11周的胚肝中没有 CD7和 CD2抗原阳性细胞存在,提示早期胚肝中可能不存在 T 淋巴细胞的原位发生。B 淋巴细胞相关抗原的表达情况有所不同,其中 CD19、CD20、CD22显示为阴性;而 CD9、CD10、CD38抗原自6周胚肝中即有表达,表明这三种抗原的表达早于胚肝中前 B 细胞的出现.观察中发现 CD9~ 、CD10~ 和 CD38~ 细胞呈现多种不同大小和形态,这一结果提示这三类抗原可能是存在于多种造血祖细胞上的共同抗原。组织相容性抗原 HLA—DP 在6～11周的胚肝中也表现为阳性。对胚肝冰冻切片的标记研究显示 CD9~ 、CD10~ 、CD38~ 和 HIA—DP~ 细胞呈随机散在分布,8或10周之后分别有不同程度的增殖细胞群存在。     

HIV-1囊膜糖蛋白gp41三聚体结构域基因的表达及其单克隆抗体的制备

目的：表达HIV-1囊膜糖蛋白gp41三聚体结构域基因N51(L6)C46融合蛋白，并制备针对该融合蛋白的单克隆抗体(mAb)，为筛选抗HIV多肽及分析gp41表位的免疫原提供抗体工具。方法：在B121(DE3)中诱导表达NSl(L6)C46融合蛋白，经mAb NC-1鉴定后，采用小鼠腹股沟皮下NC膜免疫的方法免疫小鼠，并进行细胞融合、克隆化制备抗N51(L6)C46 mAb，用ELISA法初步鉴定其特异性位点。结果：获得了高表达的N51(L6)CA6融合蛋白，并能与识别特异性空间构象的mAb NC-1反应。用该融合蛋白免疫小鼠后，获得了6株抗N51(D5)C46的mAb，这6株mAb均特异识别兔抗N36(L6)C34抗体捕获的融合蛋白，但不与N36或C34多肽片段反应。结论：得到高效表达融合蛋白N51(L6)CA6，并呈现gp41核心结构空间构象。用此蛋白免疫小鼠得到6株特异结合gp41核心结构空间构象的单抗。     

gp130结合分子融合蛋白的表达,纯化及其mAb的制备

ｇｐ１３０结合分子（ＧＡＭ）是一种新发现的可与ｇｐ１３０胞浆内近膜区结合蛋白质，其在ｇｐ１３０信号传导中的作用尚待深入研究，我们在原核表达ＧＡＭ－ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｈｉｏ）融合蛋白的基础上，制备并纯化了抗Ｔｈｉｏ的多克隆抗体，将其与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，经亲和层析提纯该融全蛋白，以此为免疫原，通过杂交瘤技术获得了３株抗ＧＡＭｍＡｂ，其中两株为ＩｇＧ１，１株为ＩｇＧ２ａ，与Ｔｈｉｏ及空     

抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。     

HLA-Ⅱ类抗原在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

目的 检测人类白细胞分化抗原-Ⅱ(human leukocyte antigen-Ⅱ)HLA-Ⅱ类抗原在甲状腺乳头状癌组织中的表达,探讨其与甲状腺乳头状癌发病的关系,为进一步的预防及治疗奠定基础.方法 应用Western印迹和免疫组化SP法检测20例甲状腺乳头状癌组织及其癌旁正常甲状腺组织中HLA-Ⅱ类抗原的表达.结果 Western印迹和免疫组化结果均显示HLA-Ⅱ类抗原在甲状腺癌乳头状组织和正常甲状腺组织中都有表达,且Western印迹结果显示前者的表达高于后者,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 HLA-Ⅱ类抗原可能在甲状腺乳头状癌免疫逃逸机制中发挥重要作用.     

髓样细胞核分化抗原在强直性脊柱炎病人的表达

目的 通过比较强直性脊柱炎(AS)患者和健康志愿者的基因表达谱，寻找与AS相关的新基因并探讨其在病因和发病机制中的意义。方法 用含588个基因的cDNA微阵列，检测AS和健康志愿者的外周血单个核细胞的基因表达语，初步筛选出在AS中差异表达的基因，为了进一步验证cDNA微阵列差异表达基因结果，扩大各组病例数，再用RT-PCR技术同时检测、对比健康志愿者和AS患者外周血单个核细胞(PBMC)、关节液单个核细胞(SFMC)和关节滑膜细胞这些差异表达基因的变化。结果 和健康志愿者组的PBMC比较，AS病人骨髓样细胞核分化抗原(MNDA)、迁移抑制因子相关蛋白8(MRP8)和MRP14、粘附分子ICAM-1和integrin β1表达明显增高，其中MNDA和MRP8的变化相关系数为0．793。在AS的SFMC和关节滑膜细胞中，MNDA表达也显著增高(与健康志愿者组PBMC比较，P值分别为0．038和0．027)；MNDA区别AS和健康志愿者的统计学鉴别准确率达1。AS病人在接受抗TNF-α单克隆抗体治疗3个月后，MNDA在关节滑膜细胞的表达水平显著下降(P＝0．018)。结论 MNDA是AS发病过程中一个重要的并与单核／巨噬细胞致炎密切相关的免疫因子，其可能成为一种用于AS的诊断、治疗监控指标。     

编码人分化抗原5C5全长cDNA的克隆及功能初探

目的 编码５Ｃ５分化抗原全长ｃＤＮＡ的克隆及功能探索。方法 构建人活化Ｂ细胞株３Ｄ５细胞的λｇｔ１１ ｃＤＮＡ文库，以核苷酸杂交法从ｃＤＮＡ文库中筛选阳性克隆、作核苷酸序列分析，编码蛋白质氨基酸序列的亲疏水分析，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ测５Ｃ５ ｍＲＮＡ转录本长度，用ＲＴ－ＰＣＲ检测５Ｃ５ ｍＲＮＡ在不同细胞株的表达，观察单抗５Ｃ５－Ｇ１对３Ｄ５细胞增殖的影响。结果 从人活化Ｂ细胞株３Ｄ５的λｇ     

一个新的人B细胞活化抗原—5C5

用活化人B细胞株3D5细胞免疫小鼠和作为筛选的靶细胞,我们建立了产生单克隆抗体5C5的杂交瘤细胞株。此单抗识别的抗原5C5在25μg/ml anti-μ刺激的B细胞,于第10小时开始表达,亦即于G_1期开始表达。5C5细胞百分率随培养时间而增多。在PWM诱导下.外周血单一核细胞中5C5~ 细胞随培养时间而增加,至第3～4天达最高峰,然后减少,至第7天降至本底水平。5C5~ 细胞在不能为BCDF诱导分化至免疫球蛋白分泌细胞(ISC)的B细胞株3D5,Raji和Daudi阳性,但在能为BCDF诱导分化至ISC的CESS和SKW6细胞却不表达。这均表明5C5抗原表达于B细胞活化的早期和中期,但在B细胞终末分化阶段消失。在休止期B细胞、休止期T细胞、PHA激活的T细胞、单核细胞和中性粒细胞,以及在所检测的T细胞株和髓细胞株,5C5抗原均为阴性。~(125)I标记后用单抗5C5免疫沉淀提取的抗原,在还原与非还原条件下电泳,均只有分子量为52000的一条带,表明5C5是一个单链细胞表面蛋白。鉴于5C5抗原的分子量与文献中已报道的B细胞活化抗原分子量不同,以及5C5在细胞株表达的特点,它可能是一个新的人B细胞活化抗原。     

Expression of human minor histocompatibility antigen on cultured kidney cells

Incompatibility of human minor histocompatibility (hmH) antigens can induce rejection of grafts in organ transplantation and graft-versus-host reactions in bone marrow transplantation. In spite of their importance in clinical transplantation, hmH antigens are not well studied. Previous studies have demonstrated the expression of hmH antigens on Tand B cells, hematopoietic progenitor cells and keratinocytes. We have for the first time demonstrated the expression of hmH antigens on cultured kidney cells using HLA-B35-restricted, hmH antigen-specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) clones, which were previously established from a patient who rejected two kidneys from HLA-identical sisters. The CTL clones could not kill cultured kidney cells. Since cultured kidney cells expressed very low levels of HLA class I antigens it was thought that their failure to be killed by the CTL clones was due to lack of expression of HLA-B35 antigens. After induction of class I antigens on cultured kidney cells by interferon-y (IFN-γ), the IFN-γ-treated cultured kidney cells were killed by the CTL clones. Furthermore, we isolated hmH antigens as peptides from cultured kidney cells after treatment with IFN-γ. These results indicate that cultured kidney cells express hmH antigens when HLA class I antigen is induced by IFN-γ and hmH antigens on cultured kidney cells are recognized by T cells as peptides presented by HLA-B35 molecules.     

人巨细胞病毒PP150蛋白C端多肽与gp52蛋白片段的融合表达

目的：将人巨细胞病毒PP150蛋白C端多肽与gp52蛋白片段融合,构建表达该融合蛋白的工程菌。方法：合成PP150蛋白C端25个氨基酸的基因片段,并选有细菌偏爱的密码子。用PCR方法扩增gp52蛋白基因片段。将这2个基因片段分别克隆至同一质粒pET28a( )内的NcoI/BamHI和BamHI/EcoRI位点,使两者串联在一起,并且翻译框架一致,可表达1个融合蛋白。将重组质粒转化大肠杆菌,用酶切及SDS－PAGE等方法筛选表达融合蛋白的工程菌。结果：构建成功了高效表达PP150C端多肽与pg52蛋白片段的融合蛋白工程菌,表达量为35％左右。初步纯化获得了表达的融合蛋白。结论:初步纯化的融合蛋白能与已知的抗gp52-IgM阳性血清和抗PP150－IgM阳性血清反应,说明融合蛋白C端的gp52蛋白保持较好的抗原性,融合蛋白N端的PP150C端多肽也显示有抗原性。     

用单抗5C5和5C5—G1筛选的613bp cDNA的核苷酸序列分析

用识别人活化Ｂ细胞分化抗原５Ｃ５的单克隆抗体５Ｃ５和５Ｃ５－Ｇ１的混合物从人扁桃体细胞λｇｔ１１ ｃＤＮＡ文库筛选到３个阳性克隆。其ｃＤＮＡ插入到质粒ｐＵＣ１８，经双链双脱氧测序法作核苷酸序列分析，知其中一个ｃＤＮＡ长６１３ｂｐ，另二个长４６７ｂｐ，后者与前者的前４６７ｂｐ完全重叠。６１３ｂｐ ｃＤＮＡ中有一个开放阅读框架，从１０３ｂｐ到４２９ｂｐ，共３２７ｂｐ。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析显示，此６     

Gp130分子的活化在树突状细胞分化和成熟中的意义

目的 :研究激发型抗gp130分子单抗B S12对树突状细胞 (DC)分化成熟和功能的影响。方法 :人外周血单核细胞在GM CSF和IL 4作用下分化为未成熟DC后 ,加入B S12单抗 ,观察它对DC表型、摄取抗原的能力以及DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞能力的影响 ;同时比较B S12和激发型抗CD4 0单抗 5C11对DC的作用。结果 :激发型抗gp130分子单抗B S12作用于未成熟DC ,可以上调DC上CD1a和共刺激分子CD80、CD86以及成熟DC的标志CD83分子的表达 ,下调CD14的表达 ,降低DC摄取抗原的能力 ,增强DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞的能力 ,但这些作用都稍弱于 5C11对DC的作用。结论 :未成熟DC上gp130分子的直接活化可以诱导DC的分化和功能成熟。     

gp130-linked signal transduction promotes the differentiation and maturation of dendritic cells

In order to explore the role of gp130-linked signal transduction in the differentiation and maturation of dendritic cells (DC), the mAb, B-S12, an agonist of gp130, was used for the activation of gp130 on DC. The effects of cytokines and of anti-gp130 mAb on the proliferation of DC, and their expression of IL-12 and CD80 (B7-1) by DC were evaluated. DC differentiating from peripheral blood mononuclear cells did not express the IL-6 receptor alpha chain, but expressed gp130. Anti-gp130 mAb promoted the proliferation of DC, induced by IL-4 and granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF), by up-regulating the GM-CSF receptor on DC. DC induced by gp130 mAb and cytokines expressed DC-derived CC chemokine, as measured by RT-PCR. Induced DC also stimulated strong proliferation of autologous T cells in mixed lymphocyte reaction since an up-regulated expression of IL-12 and CD80 (B7-1) was observed in DC activated by anti-gp130 mAb. Thus, gp130 signal transduction is important for the differentiation and maturation of DC.