犬颅脑损伤后早期细胞内钙离子与c—Fos表达的变化

目的：探讨犬颅脑枪弹伤后细胞内Ca^2+与c-Fos表达变化的规律。方法：实验于2002-03解放军第四军医大学西京医院实验外科地下靶道进行。以德国小口径步枪子弹致伤犬颅脑贯通伤模型为对象，采用免疫组化法检测脑组织及伤后不同时间弹道挫伤区中c-fos基因的表达。制备脑组织的活细胞悬液进行原代培养；应用特异性Ca^2+荧光指示剂Fluo-3／AM标记，在激光扫描共聚焦显微镜下检测伤后不同时间弹道挫伤区细胞内Ca^2+分布情况。结果：弹道挫伤区神经元中c-fos基因表达于伤后30min开始增加(P&;lt;0．05)，2h达到高峰(32．4&;#177;2．4，P&;lt;0．01)，6h逐渐下降。培养得到了贴壁的犬颅脑火器伤后的脑组织活细胞。并观察到伤后30min细胞内Ca^2+开始升高(P&;lt;0．05)，持续升高到伤后6h以上(269．9&;#177;2．5)。结论：神经元中Fos表达是由Leao播散性抑制所致。播散性抑制可将细胞外Ca^2+转移至细胞内，造成细胞外Ca^2+浓度下降，引起皮质神经元去极化，Ca^2+内流及神经元去极化均可引起c-Fos表达。     

亚低温条件下局部脑神经元c-fos蛋白表达变化

目的:研究颅脑枪弹伤常温下及全身亚低温治疗后脑神经元c-fos蛋白表达的变化。方法:18只杂种犬,随机分为常温组(正常犬温为38.5～39.5℃),亚低温组(31.5～32.5℃)。以德国小口径步枪子弹致伤犬颅脑贯通伤(penetratingcraniocerebralinjury,PCI)模型为对象,采用免疫组化法检测两组脑组织伤后30min,2,3h弹道挫伤区,震荡区及脑干神经元中fos蛋白的表达。结果:全身亚低温治疗3h组弹道挫伤区、震荡区及脑干神经元中fos蛋白阳性数分别为(15.5±1.6),(21.6±2.1),(6.7±1.8)个,较常温对应组弹道挫伤区,震荡区及脑干神经元中fos蛋白阳性数分别为(21.6±5.4),(32.2±1.7),(11.2±1.8)个显著减少(P<0.01)。结论:颅脑枪弹伤后全身亚低温治疗能够抑制脑神经元c-fos蛋白的表达。     

亚低温条件下局部脑神经元c-fos蛋白表达变化

目的：研究颅脑枪弹伤常温下及全身亚低温治疗后脑神经元c-fos蛋白表达的变化。方法：18只杂种犬，随机分为常温组(正常犬温为38．5～39．5℃)，亚低温组（31．5～32．5℃)。以德国小口径步枪子弹致伤犬颅脑贯通伤(penetrating craniocerebral injury，PCI)模型为对象，采用免疫组化法检测两组脑组织伤后30min，2，3h弹道挫伤区，震荡区及脑干神经元中fos蛋白的表达。结果：全身亚低温治疗3h组弹道挫伤区、震荡区及脑干神经元中fos蛋白阳性数分别为(15．5&;#177;1．6)，(21．6&;#177;2．1)，(6．7&;#177;1．8)个，较常温对应组弹道挫伤区，震荡区及脑干神经元中fos蛋白阳性数分别为（21．6&;#177;5．4)，(32．2&;#177;1．7)，(11．2&;#177;1．8)个显著减少（P&;lt;0．01)。结论：颅脑枪弹伤后全身亚低温治疗能够抑制脑神经元c-fos蛋白的表达。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞内钙的影响

目的:观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞内钙的影响及纳洛酮的保护作用。方法:实验于2003年在军事医学科学院神经生物学研究室进行。取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为3组:①正常对照组:细胞置于36℃,含体积分数为0.9的空气、体积分数为0.1的CO2的培养箱内培养30h。②缺氧组:细胞移至4000cm3的恒温(36℃)密闭容器内,连续充以无氧气体(体积分数为0.9氮气、体积分数为0.1的CO2),在缺氧条件下培养6h后改在常氧下继续培养24h。③纳洛酮组:在缺氧前24h在培养液中加入1μmol/L的纳洛酮,其他处理同缺氧组。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞内钙。结果:3组在缺氧前神经元细胞内钙差别不显著(P>0.05)。培养6h后缺氧组和纳洛酮组神经元细胞内钙明显高于正常对照组(7.94±0.13,6.68±0.33,3.39±0.36,P<0.01),且缺氧组高于纳洛酮组(P<0.01)。缺氧6h及再复氧24h纳洛酮组细胞内钙仍明显低于缺氧组(8.67±0.61,11.59±1.34,P<0.01),但两组均高于正常对照组(3.48±0.28,P<0.01)。结论:缺氧6h复氧24h时神经元细胞内钙显著升高,证实犤Ca2+犦i水平和神经细胞的缺氧损害密切相关,且恢复氧供并不能纠正犤Ca2+犦i异常。应用纳洛酮后,在缺氧条件下和缺氧后复氧期间的犤Ca2+犦i升高幅度较缺氧组明显减小,说明纳洛酮对缺氧的神经元犤Ca2+犦i具有一定的稳定作用,可以减轻神经元犤Ca2+犦i的升高,进而对神经元细胞起到保护作用。     

犬颅脑枪弹伤后弹道脑组织内Mg2+和水含量变化的实验观测

从近年的世界局部战争的统计资料来看 ,颅脑火器伤患者的病死率、致残率仍居高不下 ,救治难度有逐步上升的趋势 〔1 4〕。 Mg2 对颅脑损伤后脑组织的保护作用日益受到重视。我们采用已建立的德国小口径步枪弹直接射入造成犬颅脑贯通伤 (PCI)模型〔5〕 ,观测脑水肿的发生与弹道震荡区、挫伤区脑组织内Mg2 含量变化之间的关系 ,从一个方面探讨火器伤性脑水肿的发生机制。1　材料和方法1.1　动物模型建立与分组 :健康杂种犬16只 ,体质量 (18.5± 1.3) kg,雌雄不限 ,随机分为正常对照组和颅脑枪弹伤后 30 m in、2 h及 6 h组 (n=4 )。以德国…     

兔心肌挫伤后心功能障碍及心肌细胞内Ca2+和线粒体ATP酶的变化

背景心肌挫伤后心功能障碍除与心脏因受暴力直接损害导致心肌收缩性降低外,是否还与心肌细胞内 Ca2+和线粒体 ATP酶的变化有关目前尚不得而知. 目的探讨心肌细胞内游离钙( [Ca2+ ]i)和心肌 ATP酶变化在心肌挫伤后心功能障碍发生机制中的意义. 设计随机对照的实验研究. 地点、材料和干预实验在解放军第三军医大学野战外科研究所完成.选取四川健康家兔 36只,雌雄不限,分在伤前,伤后 2, 4, 8, 12, 24 h组,每组 6只.经右颈总动脉插管至左心室.采用 BIM Ⅱ型生物撞击机致成心肌挫伤模型. 主要观察指标心肌挫伤前,伤后 2, 4, 8, 12, 24 h测定家兔左室收缩 /舒张功能、心肌细胞内 [Ca2+ ]i含量和心肌匀浆组织及线粒体 ATP酶活力. 结果左心室收缩 /舒张功能受到损害,代表左心室收缩功能的左室收缩末压( left ventricular end-systolic pressure, LVESP)、左室内压最大上升速率( the maximal rate of left intraventricular pressure changes, + dp/dtmax)、等容收缩压( isovolemec ventricular pressure, IP)、实测心肌最大收缩速度( the maximal physiological velocity, Vpm)在伤后 4～ 12 h内恢复至伤前水平( P >0.05);代表左心室舒张功能的舒张期左室内压下降时间常数 T、左室舒张末压( left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP)、左室内压最大下降速率( the maximal rate of left intraventricular pressure changes, - dp/dtmax)在伤后 24 h与伤前比较,差异有显著性意义( P< 0.05和 P< 0.01).伤前心肌细胞内 [Ca2+ ]i平均通道荧光为 (2.26± 0.16),伤后 2 h开始升高为 (2.63± 0.47)( P >0.05),伤后 8 h达最高峰为 (3.56± 0.33)( P< 0.01),此后开始下降,但伤后 24 h仍然显著高于伤前( P< 0.05).伤后 2 h心肌匀浆组织 ATPase活性均有不同程度的下降,其中伤后 4 h Ca2+-ATPase活性下降明显( P< 0.05),伤后 8 h Ca2+-ATPase 和 Na+-K+-ATPase活性降至最低(分别 P< 0.05和 P< 0.01),伤后 12 h上升与伤前无差别( P >0.05);伤后 Mg2+-ATPase活性较伤前也有所下降,但与伤前比较无明显差别( P >0.05).伤后 4 h心肌细胞线粒体 ATPase活性均明显下降( P< 0.05),此后上升,至伤后 24 与伤前无明显差别( P >0.05).相关分析表明 LVEDP和- dp/dtmax与心肌细胞内游离钙含量变化呈明显正相关(γ =0.792, 0.753, P< 0.01和 P< 0.05),与心肌组织 Na+-K+-ATPase活力改变呈明显负相关(γ =- 0.674,- 0.691, P< 0.05),与心肌组织 Ca2+-ATPase活力改变呈明显负相关(γ =- 0.613,- 0.642, P< 0.05),与心肌细胞线粒体 Na+-K+-ATPase活力改变呈明显负相关(γ =- 0.622,- 0.616, P< 0.05). 结论心肌挫伤后心脏功能降低,心肌细胞内 [Ca2+ ]i含量升高和 ATP酶活性下降可能是其原因之一.     

镁离子对实验性脑损伤大鼠的脑保护作用

目的:探讨镁离子(Mg2+)对创伤性脑损伤的脑保护作用及其机制。方法:SD大鼠60只,随机分为空白组、对照组和试验组,参照Feeny法将对照组和试验组大鼠建立脑损伤模型,空白组大鼠仅行开颅手术。试验组于伤后30min腹腔注射100g/L硫酸镁600mg/kg,对照组则给予腹腔注射蒸馏水1.5mL,空白组不做任何处理。每组大鼠再按伤后处理时间再分为4小组,分别于伤后2,4,8和16h测定神经功能障碍计分(neurologicalseverityscore,NSS),然后处死,取损伤区脑组织测定脑组织中Mg2+,Ca2+,兴奋性氨基酸(excitatoryaminoacid,EAA)及血清中神经元特异烯醇化酶(neuronspecificenolase,NSE)的含量。结果:对照组大鼠伤后2h脑组织中Mg2+下降至(63.45±4.65)mg/g,而Ca2+和EAA分别升高至(97.35±4.79)mg/g和(24.64±5.86)moL/g,伤后8hNSE及NSS分别升高至(121.97±11.34)mg/L和(15.80±3.72)分,与空白组比较,差异有显著性意义(F=4.83～6.64,P<0.05)。应用硫酸镁干预后,试验组大鼠伤后2h脑组织中Mg2+升高至(89.76±7.38)mg/g,而Ca2+和EAA分别降低至(72.86±3.56)mg/g和(16.75±6.82)mmoL/g,伤后8hNSE及NSS分别降低至(83.31±9.25)mg/L和(11.03±3.87)分,与对照组比较,差异有显著性意义(F=4.96～7.72,P<0.05)。结论:原发性脑损伤可致脑组织中Mg     

脑创伤后神经元细胞内游离钙的变化及其影响因素

目的研究液压冲击伤时体外培养的单个大鼠神经细胞内游离钙 ([Ca2+ ]i)的变化,探讨尼莫地平 D-2氨基戊酸 (D-2-amino-5-phosphonovaleric acid,D-AP-5)和亚低温对创伤后细胞内 [Ca2+ ]i的影响及其机制. 方法 以 Fluo-3/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用激光共聚焦显微镜测定液压冲击伤时体外培养的单个大鼠神经细胞内游离钙 ([Ca2+ ]i)的变化. 结果 液压冲击伤后脑皮质细胞内游离 Ca2+迅速升高, 24 h达高峰,随后逐渐下降, 48 h仍维持较高水平 [(411.29± 52.46),(396.53± 51.32) nmol/L],尼莫地平, D-AP-5于各时相关均降低细胞内 [Ca2+ ]i,其中 Nimodipine 10 h内应用最佳 [6 h( 98.65± 15.65) nmol/L], D-AP-5于 1～ 10 h应用较好而亚低温 30 min内显著降低细胞内 [Ca2+ ]i(t=13.74, P< 0.001),最佳时机在伤后 15 min内,伤后 1 h以上无效. 结论 创伤后神经元细胞内钙超载,尼莫地平、 D-AP-5和亚低温均降低细胞内 [Ca2+ ]i,但各自最佳时间窗不同,揭示对创伤后神经细胞 Ca2+超载应注意综合治疗,并选定各自作用最佳时间窗.     

大鼠脑挫裂伤后c-jun和c-fos基因快速反应的特点

背景:目前关于c-jun和c-fos基因表达的重要性已逐渐被人们认识,而关于脑挫伤后两种基因表达的特点报道较少。目的:探讨脑挫裂伤后c-jun和c-fos基因表达的特点。设计:随机对照实验研究。地点和材料:实验地点:原张家口医学院实验中心电镜室,成年Wistar大鼠45只,体质量200～310g。干预:将45只大鼠随机分为模型组、假手术组及正常对照组,正常组不做任何处理,假手术组开颅窗不进行打击,模型组大鼠以自由落体法复制脑挫伤模型,伤后30min,1,2,4,8,24,72h杀死大鼠取脑组织,石蜡切片,用PV6000免疫组织化学染色。主要观察指标:c-jun和c-fos基因蛋白表达的异同点。结果:正常对照组和假手术组c-fos无阳性表达,而c-jun呈弱阳性。模型组c-fos阳性神经元分布在伤灶周围区皮质1.0～2.0mm和同侧海马;c-jun阳性神经元在伤侧皮质和海马广泛分布,相邻脑片c-jun阳性细胞着色深,尤其在海马中c-jun阳性细胞密集而核深,72hc-fos基本上已无表达,而c-jun仍有较明显的阳性神经元。结论:脑挫伤后,同侧脑组织c-jun基因表达较c-fos更强烈、更广泛和表达时间更长。     

颅脑外伤后细胞凋亡与Fas抗原的表达

目的探讨颅脑外伤后细胞凋亡与Fas抗原表达的变化，为阐明损伤后神经元丢失的多种途径提供实验依据。方法建立大鼠自由落体脑创伤模型，采用免疫组化技术及细胞透射电镜观察形态学的方法，对伤后挫伤灶旁局部脑组织细胞凋亡和Fas抗原表达进行观察。结果在挫伤灶旁观察到细胞凋亡的发生，神经细胞呈现较为典型的凋亡超微结构变化，Fas蛋白表达在24h达到高峰，随后呈下降趋势。结论颅脑外伤后在局部组织可见细胞凋亡的发生，Fas蛋白表达参与了外伤后神经细胞凋亡的过程。