谷氨酰胺对COPD患者外周血单个核细胞中p38MAPK、IL-8及IL-17影响的临床研究

目的通过观察谷氨酰胺（Gln）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者外周血单个核细胞（PBMC）中p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）活性、IL-8及IL-17表达的影响,探讨Gln在COPD患者治疗中的抗炎作用机制。方法将32例住院COPD急性加重期（AECOPD）患者设为AECOPD组,经治疗后转为稳定期（SCOPD）再设为SCOPD组。收集两组患者的PBMC,再平均分为加Gln干预的Gln组和不加Gln干预的空白对照组,另选择16例健康体检者为健康对照组。采用RT-PCR法检测各组PBMC中p38MAPK、IL-8及IL-17的表达水平。结果（1）AECOPD和SCOPD的空白对照组中p38MAPK、IL-8及IL-17的表达均高于健康对照组（均P＜0.05）,且急性期增高更加显著。（2）AECOPD的Gln组中p38MAPK、IL-8及IL-17的表达低于AECOPD空白对照组（均P＜0.01）;SCOPD的Gln组中p38MAPK、IL-8及IL-17的表达低于SCOPD空白对照组（均P＜0.05）。结论Gln可抑制COPD患者炎症细胞中p38MAPK的活化并下调IL-8、IL-17的表达水平。     

p38MAPK基因诱导胶质瘤细胞凋亡

目的 研究p38MAPK基因转染大鼠胶质瘤细胞系C6后对其生物学特性的影响。方法 利用脂质体介导法将p38MAPK基因导入大鼠胶质瘤细胞系C6中,用免疫细胞化学染色检测其在细胞转染前后的表达情况,用HE染色、流式细胞仪等方法研究其对细胞形态、粘着状况和生长周期的影响。结果 转染pCMV5-P38MAPK质粒组p38MAPK蛋白表达阳性,细胞形态发生变化,贴壁性降低,出现大量凋亡细胞。结论 转染p38MAPK基因可诱导胶质瘤细胞凋亡。     

大鼠正常血糖脑缺血及高血糖脑缺血时p38MAPK的表达

目的探讨p38MAPK与脑缺血及高血糖脑缺血损害的关系。方法实验大鼠随机分为3组:(1)高血糖脑缺血组(简称高血糖组,20只),于脑缺血术前30min尾静脉注射25%葡萄糖(4g/kg);(2)正常血糖脑缺血组(简称正常血糖组,20只),于脑缺血术前30min尾静脉注射等量18%D-甘露醇;(3)手术非缺血性对照组(10只)。采用双侧颈动脉结扎和放血法在高血糖组和正常血糖组制造全脑缺血模型,通过免疫组织化学技术与Western blot免疫印迹技术对比检测缺血30min,再灌注1、3、6h各时间点脑组织p38MAPK表达。结果对照组海马CAI区、CAIII区,未见p38MAPK阳性神经元;免疫组化在CAI区和CAIII区,在缺血30min,再灌注13、、6 h不同时间点高血糖组阳性细胞数与正常血糖组比较差异无统计学意义(P>0.05);Western blot检测可见正常血糖组和高血糖组脑缺血30min,再灌注1、36、h时激活的p38MAPK蛋白明显增加,高血糖组灰度比值(分别为7.25±1.91、8.64±2.41、9.58±2.98、12.00±3.01)与正常血糖组(分别为6.68±1.51、7.92±1.75、8.34±2.00、9.02±2.27)比较,p38MAPK差异无统计学意义(P>0.05)。结论脑缺血再灌注时p38MAPK被激活,参与缺血性损伤的发生,但高血糖并不能明显增加p38MAPK的总量,故在高血糖加重脑缺血性损伤中p38MAPK可能不发挥主要作用。     

p38MAPK对大鼠肾小球系膜细胞表达COX-2的调控

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)和环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的关系,从而研究p38MAPK和COX-2在糖尿病肾病中的作用机制.方法:分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物孵育大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1;先以p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞系HBZY-1,再给予上述4种因素孵育细胞系HBZY-1,观察细胞系HBZY-1、p38MAPK和COX-2的表达.结果:高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物均可独立激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,COX-2表达也明显增加;SB203580预处理后,COX-2表达被显著抑制.结论:p38MAPK调控COX-2的表达,表明p38MAPK是COX-2的上游激酶之一,p38MAPK和COX-2在糖尿病肾病的发生发展过程中起重要作用.     

p38 MAPK介导炎症在糖尿病肾病中作用研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病最严重的慢性并发症之一,是导致慢性肾衰的主要病因,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)是MAPK信号通路中重要的信号转导分子,是细胞信号传递的交汇点或共同通路,p38 MAPK信号转导通路可通过调节炎性因子的表达,活化环腺苷酸反应原件结合蛋白等转录因子,加重肾脏的炎症和纤维化进程,从而加速糖尿病肾病进程,以p38MAPK为治疗靶点研制出来的p38 MAPK抑制剂有望成为治疗DN的新型药物制剂。     

急性胰腺炎患者外周血单个核细胞p38 MAPK信号通路的变化

目的： 探讨急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)丝裂原活化蛋白激酶p38（p38 MAPK）信号水平的变化及其与疾病严重程度的关系。方法： 收集轻型胰腺炎（mild acute pancreatitis,MAP）组29例及重症胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）组23例, 健康对照组21例。荧光实时定量PCR检测患者PBMC p38 MAPK基因表达水平,蛋白质印迹法检测PBMC p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK（P-p38 MAPK）的水平。统计处理用单因素方差分析（One-Way Anova）和LSD法。结果： p38 MAPK基因表达水平,SAP组较对照组升高了11.7%（P＜0.05）,但MAP组与对照组比较差异无统计学意义;p38 MAPK总蛋白量SAP组较对照组增加了18.7% （P＜0.05）,但MAP组与对照组相比较差异无统计学意义;磷酸化p38 MAPK水平SAP 组较对照组和MAP组分别提高了444.4%（P＜0.01）和44.1%（P＜0.05）,MAP组较对照组增加了27.8%（P＜0.05）。结论： p38 MAPK磷酸化水平在AP患者PBMC中显著升高,并与AP严重程度呈正相关;AP患者PBMC p38 MAPK基因表达水平和蛋白水平变化较小。     

HCMV感染对人神经胶质瘤U251细胞p38MAPK活性的影响

人巨细胞病毒(HCMV)在人群中的感染非常普遍。随着器官移植的广泛开展、艾滋病的传播以及耐药病毒株的出现,对HCMV致病、致畸机制的研究越来越受到重视。MAPK是细胞内的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,它介导的信号转导通路是生物信号引起核反应的重要通路,参与细胞生长、分化、凋亡等多种生理过程,并在细胞恶性转化等病理过程     

p38MAPK在成骨细胞中的表达及其机制的研究进展

目前,国内外对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达进行的大量研究表明,p38MAPK参与了成骨细胞分化及增殖的过程,并在其中起着重要作用。相关研究主要涉及p38MAPK在细胞受到应力刺激时的表达及作用机制等,目的在于对p38MAPK在成骨细胞的分化及增值过程中的表达及作用机制更加深入的研究,以进一步证实其对骨折的愈合是否可提供临床参考价值。     

p38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制剂SB203580对溃疡性结肠炎大鼠血清IL-6和IL-1β的影响

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂SB203580对溃疡性结肠炎大鼠血清IL-6和IL-1β的影响,探讨p38MAPK在溃疡性结肠炎中的可能作用。方法 45只健康SD大鼠随机均分为正常对照组、模型组、SB203580组。采用三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠溃疡性结肠炎模型,免疫组织化学方法检测大鼠肠组织活化转录因子2(p-ATF2)表达,ELISA法检测大鼠血清白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)表达水平,并观察肠道大体形态和组织学改变;同时分析p-ATF2水平与IL-6及IL-1β含量的关系。结果与正常对照组相比,模型组大鼠肠组织p-ATF2水平、血清IL-6及IL-1β含量显著增高(P<0.05),SB203580组p-ATF2表达与血清IL-6、IL-1β水平均明显低于结肠炎模型组(P<0.05),p-ATF2水平与IL-6及IL-1β含量呈正相关(P<0.05)。结论 p38MAPK抑制剂SB203580通过下调p-ATF2活性及IL-6、IL-1β表达,对TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠起保护作用。     

p38MAPK gene transfection induced the apoptosis of rat glioma cells C6

Thephosphorylationanddephosphorylationofproteinisoneofthemostimportantmechanismsofcellularsignaltransduction.Theconjugationofphos-phoricacidresiduesandspecificaminoacidresiduesofproteiniscatalyzedbyproteinkinases.Seriesofproteinkinasesandtheirphosphorylationmakeupthecascadereactionofsignaltransduction.Mitogen-activatedproteinkinase(MAPK)signalpathwayisahotpointinrecentyears.Ithasbeenidentifiedthat4signalpathwaysareineukaryoticcells:extracellularsignal-regulatedproteinkinase(ERK)，c-JunN-te…     

p38MAPK基因RNAi慢病毒载体的构建及在MC3T3-E1细胞的表达

目的 构建小鼠p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,观察其对MC3T3-E1成骨细胞p38MAPK表达及细胞凋亡的影响.方法 设计并合成3对互补的针对小鼠p38MAPK mRNA的oligoDNA片段,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ酶切后的载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.重组质粒与慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装产生慢病毒,流式细胞仪检测病毒滴度,p38MAPK-shRNA慢病毒载体转染体外培养MC3T3-E1细胞,荧光定量PCR 检测MC3T3-E1细胞p38MAPK mRNA表达,进行p38MAPK干扰有效靶点的筛选.22.2 mol/L葡萄糖刺激培养MC3T3-E1细胞7 d,Western blot检测MC3T3-E1细胞p38MAPK蛋白的表达,流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡.结果 酶切和测序均证实各重组质粒核苷酸序列插入正确,所得质粒分别命名为p38MAPK-shRNA1、p38MAPK-shRNA2、p38MAPK-shRNA3,流式细胞仪测定病毒滴度分别为2.4×108、2.8×108、2.5×108 TU/ml. p38MAPK-shRNA转染MC3T3-E1细胞效率达到74%以上,RT-PCR检测结果显示,各p38MAPK-shRNA转染组MC3T3-E1细胞p38MAPK mRNA表达较正常对照组分别下降了78.8%、84.3%和60.2%(P<0.01),其中以p38MAPK-shRNA2的干扰效率最高.Western blot检测结果显示,与正常对照组相比,高糖组、空载体转染组MC3T3-E1细胞p-p38MAPK蛋白表达明显增加(P<0.01).p38MAPK-shRNA慢病毒转染组MC3T3-E1细胞p-p38MAPK蛋白表达水平较高糖组明显下调(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率显著增加(P<0.01);p38MAPK-shRNA慢病毒转染组以及p38MAPK信号转导阻断剂组较高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率明显减少(P<0.05,P<0.01).结论 成功构建了靶向p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,其能有效抑制MC3T3-E1细胞p38MAPK基因表达,减少高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡.     

mda-7/IL-24和p53治疗神经胶质瘤的机制及临床应用进展

目前新兴的基因疗法对神经胶质瘤的治疗相比传统疗法而言越来越受到重视。在临床应用抑癌基因mda-7/IL-24和p53治疗神经胶质瘤已经显示出积极的疗效。两者抑癌的机制复杂且尚未完全清楚,其中既有不同又有联系。本文就mda-7和p53治疗神经胶质瘤的机制和临床应用进展作一比较综述。     

p38MAPK和TNF-α mRNA在冠心病患者冬眠心肌中的表达和意义

目的探讨冬眠心肌细胞内p38MAPK、TNF-α mRNA的变化和意义。方法10例行冠状动脉搭桥术的冠心病患者，术前1周内用多巴酚丁胺超声负荷试验结合多普勒组织成像确定冬眠心肌及正常心肌的位置，搭桥术中根据检测结果进行取材（分别取正常心肌和冬眠心肌），并经电镜证实。Western-blot法检测p38MAPK蛋白表达情况，原位杂交法检测TNF-α mRNA的活性。结果冬眠心肌细胞内p38MAPK、TNF-α mRNA的表达较正常细胞高；冬眠心肌p38MAPK与TNF-α mRNA表达相关（r=0．849，P〈0．05）。结论慢性缺血缺氧时，心肌细胞内p38MAPK、TNF-α mRNA表达增加。TNF-α mRNA促进p38MAPK的活化，p38MAPK、TNF-α是冬眠心肌形成的重要分子生物学因子。     

阻断p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞活性及c-myc蛋白表达的影响

目的：研究 p38MAPK对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）活性及 c-myc蛋白表达的影响,探讨影响酒精性肝纤维化的相关机制。方法用不同浓度的p38特异性阻断剂SB203580干预乙醛刺激的大鼠HSC,显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,SABC法检测 c-myc蛋白表达。结果（1）乙醛刺激后的 HSC体积增大,增殖迅速,但随着加入 SB203580的药物浓度增大,细胞增殖变缓,体积变小,变形的细胞增多。（2）p38阻断剂 SB203580可抑制乙醛刺激的 HSC增殖,且高药物浓度组抑制效果更明显。（3）随着阻断剂浓度增高,G0及 G1期细胞增加,S期细胞逐渐减少,同时 c-myc蛋白表达阳性率减少。结论阻断 p38MAPK通路活性能抑制乙醛刺激的大鼠 HSC增殖,可能与下调 c-myc蛋白表达,阻止细胞由 G0/G1期进入 S期的DNA合成有关。     

p38MAPK通路在健骨颗粒促成骨细胞早期分化中的作用

目的观察p38MAPK信号转导通路在健骨颗粒促进体外培养成骨细胞早期分化过程中的作用。方法采用酶消化法分离、培养SD大鼠成骨细胞,分4组进行干预:对照组(加入生理盐水血清)、阻断剂组(加入p38MAPK的阻断剂SB202190)、中药组(加入健骨颗粒含药血清)和中药加阻断剂组(加入健骨颗粒含药血清和SB202190),运用化学比色法检测上清液中碱性磷酸酶(AKP)活性及羟脯氨酸(HYP)含量,实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测成骨细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达。结果在AKP活性、HYP含量及ColⅠmRNA表达3项指标上,中药组>中药加阻断剂组>对照组>阻断剂组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外培养大鼠成骨细胞的早期分化与p38MAPK信号转导通路有关;健骨颗粒含药血清能促进成骨细胞的早期分化,但这一作用仅部分通过p38MAPK信号通路实现。     

Ad-IL-24抑制乳腺癌生长的体外实验研究

目的 研究腺病毒介导的IL-24基因(Ad-IL-24)表达对乳腺癌的生长抑制作用.方法 将扩增的Ad-IL-24腺病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用RT-PCR法、Westernblot法检测IL-24基因在肿瘤细胞中的转录和表达;MTT法和FCM检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制和凋亡率;半定量RT-PCR检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的凋亡相关基因Bax、Bcl-2及Survivin转录的影响;ELISA法检测VEGF、Ang-1的分泌水平.结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞增殖有明显抑制作用,并能引起细胞凋亡,其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值升高、Survivin降低有关;VEGF、Ang-1表达下降.结论 腺病毒介导的IL-24基因在体外可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长,诱导其凋亡,其机制可能与下调Survivin、VEGF、Ang-1,上调Bax的基因表达水平有关,该研究可为乳腺癌的基因治疗提供一定实验依据.     

p38MAPK通路在急性坏死性胰腺炎中的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内主要的信号转导系统之一。p38MAPK是MAPK家族中的重要成员,其介导的信号转导通路在炎性反应中具有重要作用。p38MAPK与急性坏死性胰腺炎关系密切,不仅参与了急性坏死性胰腺炎胰腺的局部损伤,还参与了胰外并发症的发生。本文对p38MAPK信号通路在炎症中的作用及其在急性坏死性胰腺炎中的研究进展予以综述,旨在为急性坏死性胰腺炎的治疗提供新的思路。