一氧化氮对骨肉瘤细胞体外跨膜侵袭能力的影响

OBJECTIVE: To study the effect of nitric oxide on the in vitro invasiveness of human osteosarcoma cell line (OS-732). METHODS: In vitro cultured OS-732 cell suspensions containing different concentrations of sodium nitroprusside (SNP) or PBS (control group) were used to assess the in vitro invasiveness of the tumor cells utilizing Boyden's chamber assay. The tumor cells growing across the filter membrane were counted by means of HE staining and compared between the groups. RESULTS: With the increase of SNP concentration in the cell suspension, the number of tumor cells growing across the membrane tended to decrease. With the exception of the cell suspension containing 500 micromol/L SNP that had a cell number across the membrane significantly different from those of any other groups, significant difference was not observed between any adjacent groups. Between the groups with SNP concentrations that did not come adjacent, however, significant differences were noted. CONCLUSION: Nitric oxide can depress the invasiveness of OS-732 cells across the membrane in vitro.     

外源性一氧化氮对精子运动能力的影响

目的 :探讨一氧化氮 (NO)对精子运动能力影响的机制 .方法 :采用NO供体硝普钠 (sodiumnitroprusside,SNP)与上游法获得优质精子共同体外孵育 ,在超高倍显微镜下观察不同时间和不同浓度对精子运动能力的影响 .用MTT法测定NO对精子细胞呼吸链的作用 .结果 :NO在低浓度下(SNP 5 0～ 1 0 0nmol·L -1 )明显促进精子运动 ,在中浓度下(SNP 1 5 0～ 2 0 0nmol·L -1 )对精子运动能力影响极微 ,高浓度下 (SNP >2 0 0nmol·L -1 )则对精子运动有显著的抑制作用 ,随孵育时间的延长 ,精子活率呈进行性下降趋势 .随SNP浓度的升高 ,精子细胞呼吸链活性进行性下降 .结论 :NO对精子运动能力的影响具有双重性和浓度依赖效应 ,对避孕及男性不育症的治疗有重要的参考价值     

一氧化氮对精子膜功能完整性的影响

目的 :研究一氧化氮 (NO)对人精子膜功能完整性的影响 .方法 :采用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐 (NO-3 ) ;伊红Y水试验检测精子膜功能完整性 .用考马斯亮蓝 (CBB)G2 5 0染色法检测顶体完整率 ,用NO供体硝普钠 (SNP)与精子共同体外作用后涂片染色 ,在显微镜下分析顶体反应率 .结果 :生育组精液NO含量 (4 0 .8± 1 .5 )nmol·L-1 ,精子膜功能完整率 :B E型和为 (6 4± 4 ) % ,精子头部未着色(73± 1 0 ) %和精子顶体完整率 (91± 6 ) % ,与不育组 (78.5±1 .6 )nmol·L-1 ,(4 4± 1 1 ) %、(5 9± 1 6 ) %和 (71± 1 0 ) %呈非常显著性差异 (P <0 .0 1 ) .NO对精子顶体反应率在低浓度为(80± 4 ) % ,中浓度为 (76± 3) % ,高浓度为 (2 5± 4 ) % .结论 :NO对精子膜功能具有两重性 ,在低浓度时有保护作用 ,而在高浓度时对精子膜有毒害损伤作用 .其机制可能是低浓度NO与活性氧迅速结合 ,减少脂质过氧化反应 ,保护了精子膜的损伤 ,高浓度NO与活性氧结合后 ,过量的NO作用于精子膜的不饱和脂肪酸 ,增加了精子膜脂质过氧化反应而损害精子膜功能     

外源性一氧化氮对神经干细胞分化的促进作用

目的：探讨外源性一氧化氮(ectogenesis nitric oxide,NO)对培养状态下神经干细胞分化的影响．方法：用含EGF的条件培养基原代培养小鼠神经干细胞,在第5日时,实验组加入硝普钠(sodium nitroprussides NP)作为NO的体外供体,对照组不加SNP．24h后都换成含血清的培养基．比较两组细胞的分化情况．结果：在含血清培养基中培养24h后,两组细胞均发生分化,但实验组经SNP作用后,细胞分化速度较对照组明显加快,突起较长．结论：NO能促进神经干细胞的分化,并能促进细胞分化后轴突的发育．     

锌对精子受一氧化氮损害的保护作用

目的：探讨锌对人类精子受外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)损伤的保护性作用．方法：利用相差显微镜及单细胞凝胶电泳分析锌对SNP影响精子运动能力、精子细胞头尾连接及精子细胞DNA链断裂的保护性．结果：SNP对精子运动能力有明显的抑制作用，精子彗星细胞百分率显增加，精子头尾连接稳定百分率降低，而锌离子能提高精子的运动功能，防止精子细胞DNA链的断裂和精子头尾连接的解离．结论：锌对NO损伤精子有一定的保护作用，其机制可能与精子核染色质部位的巯基有关，对男性不育症的治疗有重要价值．     

外源性一氧化氮对小鼠神经干细胞增殖的抑制作用

目的: 探讨外源性一氧化氮(NO)对小鼠神经干细胞(NSC)增殖的抑制作用. 方法: 用含表皮生长因子(EGF)的条件培养基原代培养NSC,在培养基中加入不同浓度的硝普钠(SNP)作为NO的体外供体. 24 h后用Griess还原法检测细胞上清液中NO的释放量;取一半细胞进行MTT试验,另一半细胞换成无SNP的条件培养基继续培养24 h,再行MTT试验. 另取经SNP抑制24 h后的NSC进行血清诱导分化试验和免疫组化试验检测其NOS表达. 结果: 24 h后细胞上清液中NO释放量随SNP浓度的增高而增加;MTT试验反映经SNP作用后的NSC活细胞数较对照组明显减少(P<0.01);经SNP作用后的NSC在解除抑制后仍能保持旺盛的增殖能力并能被诱导分化为神经细胞样细胞,这些NSC表达nNOS和eNOS,而不表达iNOS. 结论: 外源性NO对培养状态下的小鼠NSC有抑制作用.     

硝普钠治疗难治性心衰及其对血浆一氧化氮,内皮素—1的影响

为探讨硝普钠治疗难治性心衰后血浆一氧化氮（ＮＯ）及内皮素－１（ＥＴ－１）的变化。在综合治疗的基础上加用硝普钠治疗难治性心衰５８例，应用分光光度法及放免法测定治疗前后血浆ＮＯ及ＥＴ－１的变化。结果：与治疗前相比，有效组血浆ＮＯ水平明显升高，ＥＴ－１明显下降；无效组ＮＯ、ＥＴ－１无明显变化；心功能明显改善总有效率８７．９３％。结果提示：ＮＯ、ＥＴ－１是观察心衰治疗效果的重要指标之一。     

硝普钠对培养的猪主动脉平滑肌细胞增殖的影响

内皮细胞损伤和血管平滑肌细胞增殖在动脉粥样硬化发生发展过程中起关键作用，本工作用离体冠动脉实验证明硝普钠呈剂量依赖性松弛冠状动脉，且与内皮去除与否无关，用噻唑蓝比色法观察到硝普钠也能剂量依赖性抑制主动脉平滑肌细胞增殖，结果表明，ＮＯ对平滑肌细胞增殖具有调节作用，提示在临床上对于动脉粥样硬化及冠心病病人，长期使用硝普钠等与ＮＯ合成及释放有关的硝基化合物不仅可以缓解冠状动脉痉挛，而且还可抑制平滑肌细胞     

侧脑室微量注射硝普钠对大鼠痛阈的影响

实验采用辐射热作为伤害性刺激，以浅麻状态下大鼠甩尾潜伏期为痛阈指标，观察了侧脑室微量注射硝普钠及注射硝普钠与血红蛋白混合液对大鼠痛阈的影响。结果表明，选用１ｍｇ／ｍｌ硝普钠，注入后即刻甩尾潜伏期有明显缩短，２ｍｉｎ达高峰（３６．２％，Ｐ〈０．０５）；以硝普钠与血红蛋白的混合液注入，甩尾潜伏期无显著变化。提示：硝普钠在高位中枢对伤害性刺激有易化作用，其作用是通过一氧化氮实现的。     

一氧化氮神经递质与阴茎勃起关系的临床研究

探索ＮＯ与阴茎勃起机制的相互关系。方法自１９９６年６月至１９９７年１２月,选取３５例勃起功能障碍患者,采用硝普钠进行阴茎海绵体内注射,分别测定注射前后阴茎外形性状,超声血流动力学变化,阴茎血液ＮＯ含量及血气分析,并选择罂粟碱／酚妥拉明进行对照。     

骨肉瘤患者手术前后血中一氧化氮的变化及意义

目的通过检测骨肉瘤手术前后患者血中一氧化氮（ＮＯ）的含量变化,研究ＮＯ与肿瘤手术治疗之间的关系。方 法用分光光度比色法（Ｇｒｉｅｓｓ法）分别检测骨肉瘤患者手术前后血中ＮＯ含量,正常对照组选用普通献血者的血液,结 果经统计学处理。结果术前血中ＮＯ含量（２３．４±１４．６）μｍｏｌ／Ｌ与术后（３４．１±１６、３）μｍｏｌ／Ｌ比较差异明显（Ｐ＜０．０５）,与 正常对照（４９．５±８．８） μｍｏｌ／Ｌ相比差异非常明显（Ｐ０．０１）,术后与正常对照组相比亦存在明显差异（Ｐ＜０．０５）。结论骨肉 瘤患者术后血中ＮＯ含量较术前明显提高,但仍未达到正常水平,一定程度上反映了肿瘤患者手术前后免疫功能状态 的改变,对判断肿瘤的预后和进一步选择治疗具有一定的指导价值。     

骨肉瘤患者外周血单个核细胞IL-6和NO的测定

从 32例骨肉瘤患者和 2 0例健康志愿者的外周血中分离出单个核细胞 ,经脂多糖诱生培养 48h ,收集上清液 ,用酶联免疫吸附法测定IL 6的含量 ,用镀铜镉还原法测定NO的含量。结果发现 :骨肉瘤组IL 6和NO水平明显高于对照组 (P <0 .0 1)。骨肉瘤患者IL 6与NO水平呈正相关 (r =0 .6 5 2 ,P <0 .0 1)。提示骨肉瘤患者外周血单个核细胞处于激活状态可产生高水平的IL 6及NO ;可能与骨肉瘤的发病机制有关。     

骨肉瘤iNOS过度表达与血管生成及预后的关系

目的 探讨骨肉瘤中诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的表达及其与血管生成和预后的关系。方法 应用免疫组化方法检测８０例骨肉瘤标本ｉＮＯＳ的表达,ＦⅧ－ＲＡ和ＣＤ３１免疫组化染色显示肿瘤内微血管密度。结果 ８０例骨肉瘤中５２例ｉＮＯＳ阳性（６５％）,肿瘤细胞境质中的巨噬细胞和部分血管内皮细胞均为阳性。ｉＮＯＳ阳性表达和肿瘤内微血管密度（ＭＶＤ）显著正相关,而且ｉＮＯＳ阳性组病人生成率显著低于ｉＮＯＳ阴性     

一氧化氮诱导对肝细胞内环境稳定的影响

目的研究肝细胞诱导性一氧化氮(NO)及外源性NO对肝细胞内环境稳定的影响。方法用内毒素及细胞因子诱导培养大鼠肝细胞内源性NO及应用外源NO供体硝普钠(SNP)与原代肝细胞作用,观察肝细胞丙二醛(MDA)、还原型谷胱苷肽(GSH)及细胞内游离钙的变化规律。结果内毒素+细胞因子作用肝细胞24h后,肝细胞MDA增高7.97倍及GSH降低57.9%,一氧化氮合酶(NOS)竞争性抑制剂NG-甲基-L-精氨酸使肝细胞MDA及GSH分别逆转43.5%和98.4%。异搏定显著抑制内源性NO合成及相关氧应激,A23187的作用不显著,而氯丙嗪和α-生育酚并不导致内毒素+细胞因子诱导肝细胞释放的NO下降。SNP作用肝细胞表现为可逆性增强氧化态,但外源NO显著抑制K+去极化及肝细胞生长素诱导动员的肝细胞游离钙瞬增。结论在内毒素及细胞因子导致肝细胞代谢和功能应激反应中,诱导NO、独立介导脂质过氧化和抗氧化能力下降,可能具有起始关键作用;NO抑制肝细胞内游离钙动员,可能通过负反馈调节与蛋白激酶C相关的NOS诱导而作为一种重要的肝细胞内伺服调控机制。     

90Y-抗人成骨肉瘤单抗对人成骨肉瘤裸鼠移植模型的治疗观察

目的：观察90Y标记的抗人成骨肉瘤单克隆抗体(OSMcAb)对人成骨肉瘤裸鼠移植模型的放射免疫治疗作用。方法：采用EDTA淋洗法从90Y发生器上制备游离90Y,并用DTPA环酐法将90Y标记OSMcAb。标记单抗进行体外靶细胞结合实验以验证标记后单抗蛋白活性保持程度,应用自制的人成骨肉瘤细胞系HOS-8603接种裸鼠建立人成骨肉瘤的裸鼠移植模型,使用90Y-OSMcAb,对此模型进行导向治疗观察。结果：(1)EDTA淋洗法制备90Y纯度高,其相对含量可达99.997％;(2)单克隆抗体的90Y标记率达90％以上,抗体蛋白活性保持82.3％;(3)治疗结果表明治疗组肿瘤明显小于对照组,原肿瘤的指数生长规律遭到破坏,治疗组生存期明显长于对照组;(4)组织学切片显示治疗组肿瘤有广泛坏死,PcNA免疫组化显示治疗组肿瘤细胞增殖受到明显抑制。结论：经单抗特异导向的90Y在体内有很好的杀肿瘤效应,使用核素标记该单抗对骨肉瘤进行放射免疫实验治疗是成功的。     

M007介导的光动力疗法对人成骨肉瘤MG63细胞增殖的影响

目的观察新型光敏剂M007介导的光动力疗法(PDT)对体外培养人成骨肉瘤MG63细胞增殖能力的影响。方法取1mL含人成骨肉瘤MG63细胞1×106/mL的单细胞悬液加至培养皿中,分为实验组(M007-PDT组)、空白对照组(B组)、光照对照组(L组)和光敏剂对照组(M007组),按分组加入不同浓度M007(0,2,4,8,16μmol/L),分别用多光源红光光照系统或暗反应处理10min。采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色的流式细胞分析法,检测各组的细胞残存率及死亡方式;四甲基偶氮唑盐比色(MTT)实验和细胞集落形成实验评估不同组残存细胞的增殖能力。实验组和对照组同步进行,每组重复6次。结果 M007浓度为2～16μmol/L时,其介导的光动力疗法能使超过90%的MG63细胞以晚期凋亡/坏死,或成为裸核的方式被灭活,在4～16μmol/L时,维持残存率小于1%;2～8μmol/L M007-PDT组中的残存细胞生长曲线低平,其光吸收值未随培养时间延长而增加(P>0.05),并且不能形成细胞集落,但2μmol/L M007-PDT组偶见一次16个活细胞。结论 M007浓度大于4μmol/L后,其介导的光动力疗法能完全灭活人成骨肉瘤MG63细胞,该技术应用于肿瘤术野血液回收有着良好的前景。     

一氧化氮在奥美拉唑对大鼠胃粘膜保护中的作用

目的探讨一氧化氮(NO)在奥美拉唑对大鼠胃粘膜保护中的作用。方法在乙醇诱导大鼠胃粘膜损伤前,预先给予奥美拉唑、L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)、L-精氨酸、D-精氨酸静脉注射。测定胃粘膜血流量(GMBF)、胃液pH和胃粘膜NO2-/NO3-含量,并观察胃粘膜损伤指数(Ulcerindex,UI)、溃疡坏死组织和中性粒细胞浸润严重程度的变化。结果与模型损伤组比,奥美拉唑组大鼠UI明显降低(P<0.01),溃疡坏死组织和中性粒细胞浸润程度明显减轻(P<0.01)。预先用L-NAME处理后,奥美拉唑保护胃粘膜损伤作用明显减弱;L-NAME抑制作用可被L-精氨酸拮抗,而不被D-精氨酸拮抗。静脉注射奥美拉唑,可增加GMBF和胃粘膜NO2-/NO3-,L-NAME可逆转这种作用,但对奥美拉唑抑制酸分泌作用无明显影响。结论奥美拉唑对大鼠胃粘膜保护作用与NO有关,而与奥美拉唑抑制酸分泌作用无关。