微小RNA在结肠慢传输型便秘病变组织中的差异表达

目的 观察微小RNA(miRNA)在结肠慢传输型便秘(STC)病变结肠组织和正常结肠组织中的差异表达.方法 收集6例STC病变结肠组织和正常结肠组织标本,应用miRNA芯片检测miRNA在STC病变结肠组织和正常结肠组织中的表达.结果 5种miRNA在STC病变结肠组织正常结肠组织中的表达差异有统计学意义(P＜0.05).与正常结肠组织比较,miR-20b、miR-27b、miR-30b、miR-128及miR-129-3p在STC结肠组织中表达下调,统计学组间差异倍数均在1.2倍以上,其中miR-128及miR-129-3p下调明显,统计学组间差异倍数大于2倍.结论 部分miRNA在STC结肠组织和正常结肠组织中存在差异表达,可能参与了STC发生的分子机制.     

膀胱癌组织中miRNA-720、miRNA-191差异表达的意义

目的 探讨miRNA-720、miRNA-191在膀胱癌中差异表达的意义。方法 取手术切除的24例新鲜膀胱癌组织（T1~4）及12例前列腺增生患者膀胱组织保存于液氮中,Trizol试剂提取总RNA,NanoDrop 2000及变性琼脂糖凝胶电泳进行RNA检测,用标记酶Hy3TM荧光基团标记RNA的探针和miRCURYTM芯片杂交,GenePix 4000B芯片扫描仪及GenePix pro V6.0进行图像采集和数据分析,对差异表达的miRNA进行检测,实时定量逆转录PCR（qRT-PCR）对部分差异表达的miRNA进行验证。结果 与正常膀胱黏膜组织比较,非浸润性膀胱癌组织中有77个miRNA表达增加,72个表达降低;浸润性膀胱癌组织中有42个miRNA表达增加,104个表达降低。qRT-PCR检测证实miRNA-720和miRNA-191的表达水平与基因芯片结果一致。结论 非浸润性和浸润性膀胱癌组织中miRNA的差异表达普遍存在,miRNA-720可以作为膀胱癌检测的一个组织标志物,而miRNA-191在浸润性膀胱癌中的表达水平较非浸润性膀胱癌低（P〈0.05）,可作为膀胱癌是否浸润肌层的一个组织标志物。     

Preliminary study of microRNA expression profiles in human pancreatic cancer

目的:探讨微小RNA(miRNA)在人胰腺癌中的表达谱,为进一步研究miRNA在胰腺癌发生发展中的分子机制奠定基础。方法:利用miRNA芯片技术比较胰腺癌组织和癌旁正常胰腺组织的miRNA表达差异;挑选其中两个差异表达的miRNA运用荧光定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)验证。结果:与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中表达上调超过1.5倍的miRNA有15个,表达下调超过1.5倍的miRNA有11个;qRT-PCR检测8例胰腺癌组织和相应癌旁正常胰腺组织中miR-10b的相对表达量分别为0.0743±0.0222和0.0287±0.0129;miR-21相对表达量分别为0.3062±0.1117和0.0240±0.0137(均P<0.05),与miRNA芯片结果相符合。结论:miRNA芯片筛选出的26种差异表达的miRNA可能与胰腺癌的发生发展相关,其各自在胰腺癌中的作用值得进一步研究。     

应用液相芯片分析肝细胞癌及癌旁组织小分子RNA表达谱差异

目的运用液相芯片技术研究肝细胞癌（HCC）及毗邻癌旁组织中小分子RNA（miRNA）表达谱差异。方法常规抽提20例HCC及对照癌旁组织中总RNA，采用含有114种miRNA的液相芯片及配套的Luminex 100检测系统进行miRNA差异表达谱分析；选取部分筛选出的差异表达miRNA，以半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot分析其相对应的靶mRNA和目的蛋白表达状况。结果HCC的miRNA表达谱中差异表达miRNA共有28个，其中上调6个，下调22个，20例标本中共存性差异表达miRNA有9个（上调2个，下调7个，P〈0．01）；选取表达明显上调的miR-222作为进一步研究对象，半定量RT—PCR和Western blot分别证实其调节的靶目标-结缔组织生长因子（CTGF）在mRNA水平HCC和癌旁组织中差异无统计学意义。而蛋白质水平在HCC中表达明显下降。结论液相芯片筛选差异表达miRNA为HCC发病机制和诊断治疗的研究提供了新的思路；miR-18可能通过转录后基因沉默机制抑制CTGF mRNA翻译，从而促进HCC浸润转移。     

miR-490-5p和miR-363作为结直肠癌诊断标记的研究

目的筛查可作为结直肠癌诊断标记的微小RNA（miRNA）。方法采用实时荧光定量PCR分析miRNA在结直肠癌患者肿瘤和瘤旁组织之间的表达谱．运用非配对t检验的方法,筛查出表达水平具有统计学差异的miRNA。并通过受试者特征曲线（ROC）分析miR-363和miR-490．5p作为诊断标记筛查结直肠癌患者的特异性和敏感性。结果在男性和女性样本中分别发现73和42个表达具有显著性差异的miRNA。而33个miRNA同时在男、女样本中都具有显著性的异常表达,其中10个miRNA的异常表达水平超过5倍,这10个miRNA在男女混合样本中同样具有显著性的异常表达。结论男、女结直肠癌患者中的部分miRNA的表达水平具有显著差异：miR-363和miR-490-5p具有作为结直肠癌的临床筛查指标的潜能。     

早期胃癌特征性miRNA筛选

目的检测早期胃癌组织中微小RNA（miRNA）表达谱,筛选出早期胃癌的特征性miRNA。方法应用中通量基因芯片技术来检测5例早期胃癌组织及其癌旁组织标本中miRNA的表达。结果相对于癌旁组织,早期胃癌组织中共有36个miRNA表达下调,如miR-9．1、miR-103、miR-141等;12个miRNA表达上调,如miR．196a、miR．142．3p、miR-25等。结论在早期胃癌组织中表达异常的miRNA可能与胃癌发生发展有着一定的相关性。     

骨肉瘤miRNA基因的差异性表达

目的 筛查骨肉瘤miRNA(微小RNA)基因,建立骨肉瘤miRNA基因表达谱,分析明显上调或理调的基因.方法 提取7例骨肉瘤组织和正常骨组织的RNA,利用丹麦Exiqon公司的micm RNA芯片对其进行分析.结果 筛查出骨肉瘤中上调的基因有28个,下调的基因有26个;其中上调大于2.5倍的miRNA基因有5个:miR-381、miR-18a、miR-586、miRPlus_42780、miR-377*,表达差异最大的为miR-586,5倍;其中下调大于2.5倍的miRNAA基因有9个:miR-126、miR-146a、miR-16、miR-191、miR-142-5p、miR-106b、miR-144、miR-26b、miR-20a,其中miR-144基因下调最为明显为39倍.结论 建立了骨肉瘤的miRNA基凶表达谱,miR-586、miR-144基因为骨肉瘤表达最特异的基因.     

结直肠癌肝脏转移相关微小RNA224的研究

目的研究结直肠癌肝脏转移微小RNA（microRNA,miRNA）表达的差异以及相关特性。方法收集2009年4月至2010年11月期间首都医科大学附属复兴医院的10例伴或不伴肝脏转移的结直肠癌患者的肿瘤组织标本,应用miRNA芯片方法对2组样本的miRNA表达差异情况进行研究,并通过实时定量PCR对miRNA的芯片表达差异进行验证。结果芯片结果筛选出6种结直肠癌肝脏转移组较非转移组表达失调的miRNA（上调的miR-224、miR-1236和miR-622,下调的miR-155、miR-342-5p和miR-363）,选取显著上调（即差异信号值大于500）的miR-224进行实时定量PCR验证,结果与芯片实验结果相一致。结论 miR-224可能通过调节其靶基因而在结直肠癌肝脏转移中起重要作用,miR-224可能成为未来结直肠癌生物标记或治疗方法的一个研究方向。     

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞微小RNA的差异表达

目的 探讨强直性脊柱炎患者和健康对照组外周血单个核细胞已知微小RNA(miRNA)差异表达.方法 分别构建10例强直性脊柱炎患者和9例健康对照组外周血单个核细胞小RNA文库,并运用新一代高通量Solexa测序技术,进行外周血单个核细胞已知miRNA的检测;运用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)进一步验证部分差异miRNA表达.结果 在强直性脊柱炎患者与对照组中小RNA文库中,共获得小RNA总量分别是7511 859和10 178 958,比对上基因组部分小RNA分别是6052911 (80.58％)和8 476 243(83.27％);已知miRNA分别是267和231个,通过miRNA差异性分析,129个上调miRNA和28个下调miRNA,其表达水平差异有统计学意义(P＜0.05);FQ-PCR进一步验证了let-7b-3p、miR-146a-5p、miR-155-5p、let-7g-5p和miR-323a-5p差异表达水平与Solexa测序结果相似趋势.结论 强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞miRNA的差异表达,可能与强直性脊柱炎发病密切相关.     

长链非编码RNA GAS8-AS1与微小RNA 135b在肝细胞癌中的表达及临床意义

背景和目的：大量研究表明,长链非编码RNA (lncRNA)与微小RNA (miRNA)及其靶基因之间内源性竞争的调控模式与恶性肿瘤的发生发展密切相关。笔者团队前期通过软件预测发现,lncRNA GAS8-AS1和miR-135b之间存在结合位点,但两者在肝细胞癌（HCC）中是否存在竞争关系及其作用尚不清楚。因此,本研究探讨lncRNA GAS8-AS1和miR-135b在HCC组织中的表达及其临床意义。方法：收集2017年2月—2019年2月在青海大学附属医院行手术切除的110例HCC患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR检测lncRNA GAS8-AS1和miR-135b的表达,分析两者与患者临床病理特征及预后的关系。结果：lncRNA GAS8-AS1在HCC组织中的表达明显低于癌旁组织,而miR-135b在HCC组织中的表达明显高于癌旁组织（均P<0.05）。两者的表达水平均与HCC患者的Edmondson分期、TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况有关（均P<0.05）。lncRNA GAS8-AS1低表达患者与miR-135b高表达患者的3年总生存率分别明...     

miRNA-21、miRNA-135b、miRNA-141在结肠癌中的表达及其意义

目的：探讨miRNA-21、miRNA-135b和miRNA-141在结肠癌中的表达及其意义。 方法：用荧光实时定量PCR检测3种miRNA在结肠癌组织与癌旁正常结肠黏膜组织中的表达,以及在结肠癌患者和健康对照人群血浆中的表达。分析3种miRNA与结肠癌患者临床病理因素的关系。 结果：3种miRNA的表达水平在结肠癌组织中均高于癌旁正常肠黏膜组织、在结肠癌患者血浆中均明显高于健康对照人群（均P<0.05）;miRNA-21的表达水平与肿瘤分期及浸润深度有关,miRNA-135b的表达水平与肿瘤的分期及淋巴结转移有关,miRNA-141的表达水平与肿瘤的分期、浸润深度及淋巴结转移有关（均P<0.05）;miRNA-21在结肠癌组织和患者血浆中的表达水平无明显相关性（r=0.459,P=0.072）,miRNA-135b、miRNA-141在结肠癌组织和患者血浆中的表达水平成正相关（r=0.686,P=0.042;r=0.742,P=0.026）。 结论：miRNA-21、miRNA-135b和miRNA-141在结肠癌患者中表达上调,均可能与结肠癌的发生发展密切相关,且均可能为潜在的肿瘤标记物以及治疗靶点。     

microRNA-203在膀胱癌中的表达及功能研究

目的:验证microRNA-203在膀胱癌组织中的表达水平,并观察microRNA-203对膀胱癌细胞T24增殖和转移能力的影响。方法:选取膀胱癌组织和正常组织各20例,通过实时定量PCR分析microRNA-203的表达。通过转染上调microRNA-203在T24细胞中的表达,并通过PCR验证转染效率。再进一步通过CCK-8法检测microRNA-203上调后细胞增殖能力的变化。采用Annexin V-PI双染法观察microRNA-203对膀胱癌细胞凋亡的影响,采用transwell法观察microRNA-203对膀胱癌细胞转移能力的影响。结果:与正常组织相比,膀胱癌组织的microRNA-203表达明显降低(P0,.05)。上调T24细胞microRNA-203表达后,与对照组相比,细胞增殖能力明显减弱,并且可观察到有凋亡现象发生。进一步的transwell法可观察到microRNA-203可明显抑制T24细胞侵袭。结论:microRNA-203在膀胱癌的发生发展过程中发挥着明显的抑癌作用。     

MicroRNA-377 knockdown suppresses high glucose-induced proliferation and inflammation in human mesangial cells

Objective To investigate the effect and potential mechanism of microRNA (miRNA)-377 on high glucose-induced proliferation and inflammation in human mesangial cells. Methods Cells were randomly divided into six groups: control group (5.5 mmol/L glucose), high glucose group (30.0 mmol/L glucose), negtive miRNA inhibitor transfection+high glucose group, negtive miRNA mimic transfection+high glucose group, miRNA-377 inhibitor transfection+high glucose group (miR-377i+high glucose group), miRNA-377 mimic transfection+high glucose group (miR-377m+high glucose group). miRNA-377 expression was detected by real-time PCR. Cell proliferation and cell cycle were detected by BrdU assay and flow cytometry, respectively. The release of tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin (IL)-18, IL-6 and macrophages chemotaxis protein-1 (MCP-1) were evaluated by ELISA. The activations of NF-κB pathway, including the expressions of phosporylated (p)-IκBα, p-P65 and nuclear P65, were measured by Western blotting. Results Compared with those in control group, in high glucose group cell viability, miRNA-377 expression and cell proliferation rate increased (all P＜0.05), proportions of S phase cell and G2/M phase cell in cell cycle increased (all P＜0.05), the levels of TNF-α, IL-18, IL-6 and MCP-1 were higher (all P＜0.05), as well as the expressions of p-IκBα/IκBα, p-P65/P65 and nuclear P65 were increased (all P＜0.05). Compared with high glucose group, cell proliferation rate was restrained (P＜0.05), proportions of S phase cell and G2/M phase cell in cell cycle was descreased (all P＜0.05), the levels of TNF-α, IL-18, IL-6 and MCP-1 were lower (all P＜0.05), as well as the expressions of p-IκBα/IκBα, p-P65/P65 and nuclear P65 were reduced (all P＜0.05) in miR-377i+high glucose group. However, miR-377m+high glucose group presented opposite results (all P＜0.05). Conclusions miRNA-377 knockdown can partially suppress high glucose-induced human mesangial cell proliferation and cell cycle transition, and restrain inflammatory molecules release. Its mechanism may be related to the inhibition of NF-κB pathway.     

miRNA-138与EZH2在肾透明细胞癌发生发展中作用机制的研究

目的:探讨miRNA-138及其调控靶基因EZH2在肾透明细胞癌(RCC)发生发展中的相关作用机制。方法:利用第二代大规模平行测序技术对10例RCC及对应癌旁组织进行全基因组测序,在肾癌组织中筛选出表达显著上调的miRNA-138;其次在人肾癌细胞株786-O、ACHN、Caki-1、769-P、os-rc-2及对照细胞人胚肾细胞293T中对miRNA-138进行转染,采用划痕实验检测miRNA-138对细胞株侵袭和迁移能力的影响;进而用多种预测软件预测靶基因,对预测的候选靶基因EZH2进行PCR验证。结果:发现miRNA-138在RCC中表达上调,并能够显著促进人肾癌细胞株786-O、ACHN的迁移;而其候选靶基因EZH2的表达在临床组织标本中显著上调;相应蛋白变化需要进一步验证。结论:EZH2表达在RCC中明显高于正常组织,提示EZH2可能是RCC一个敏感的生物学标志。推测miRNA-138与其靶基因EZH2可能参与肿瘤代谢和细胞凋亡等信号通路,在RCC的发生发展中发挥重要作用。     

牛磺酸上调基因1和微小RNA-145在胃癌中的表达关系研究

目的检测牛磺酸上调基因1（TUG1）和微小RNA-145（miR-145）在胃癌中的表达情况,探讨两者在胃癌发病中的作用及关系。 方法选取2016年2月至2017年2月于海南省肿瘤医院行根治性胃切除术的局部进展期胃癌患者110例,采用实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测胃癌组织和癌旁正常组织中TUG1、miR-145的相对表达量,分析TUG1、miR-145表达相关性及其与临床病理资料、术后生存的关系。 结果与正常组织相比,胃癌组织中TUG1的表达明显升高（P<0.05）,miR-145的表达明显降低（P<0.05）。胃癌组织中TUG1、miR-145的相对表达量呈明显负相关关系（P<0.05）。TUG1的表达水平与胃癌患者的淋巴结转移、肿瘤分化程度、临床分期有关（P<0.05）,miR-145的表达水平与胃癌患者的淋巴结转移、临床分期有关（P<0.05）。TUG1低表达的胃癌患者总生存率明显高于TUG1高表达者（P=0.010）,miR-145高表达胃癌患者总生存率明显高于miR-145低表达者（P<0.001）。 结论在胃癌组织中,TUG1明显高表达,miR-145明显低表达,且两者呈负相关关系,具有判断胃癌预后的价值。     

精浆微小核糖核酸研究进展

大量研究显示,人体液包括血清中含有大量稳定的miRNA,可作为多种疾病诊断的生物标志物。最新的一些研究发现,人精浆中也存在丰富而稳定的miRNA,精浆中一些特定miRNA的表达水平与其他体液差异显著,是潜在的法医学标志物。同时,男性不育患者精浆miRNA表达谱与正常人明显不同,一些特异变化的精浆miRNA与男性不育及精子发生障碍密切相关,可作为男性不育新的诊断标志物,而对特异变化精浆miRNA的研究则可为男性不育发生的分子机制研究提供一个新的方向。     

人精子表面蛋白P34H的基因克隆及其在睾丸和附睾中表达分析

目的 :克隆精子表面蛋白P34H基因的编码区 ,为进一步体外表达P34H蛋白做准备。　方法 :提取人附睾体部总RNA ,并以此为模板 ,进行反转录PCR获得编码P34H蛋白的基因片段。应用T/A克隆策略 ,将扩增的P34H基因编码区克隆入T载体 ,并通过双酶切和DNA测序进行鉴定。同时 ,以 β actin为内参照物 ,进行反转录PCR半定量分析 ,比较P34H在附睾头部、体部和尾部及睾丸组织中的表达量。　结果 :成功地克隆了P34H基因。将P34H的cDNA序列登录GenBank ,登录号为AF5 15 6 2 5。反转录PCR半定量分析表明P34H主要在附睾体部表达。　结论 :克隆的P34H基因可用于构建表达载体