转化生长因子 β1 在大鼠睾丸及附睾中的表达研究

目的 通过研究转化生长因子（TGFβ1）在大鼠睾丸、附睾中的表达特征,探讨其在男性生殖系统中的作用.方法 用免疫组化SP法检测TGFβ1蛋白在青春期SD大鼠睾丸、附睾中的表达与定位.结果 TGFβ1在大鼠睾丸和附睾中都有特征性表达.TGFβ1蛋白在睾丸内表达于生精细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞胞质及顶体;附睾中表达于主细胞胞质内,附睾上皮亮细胞、晕细胞和基细胞中均为阴性.结论 大鼠睾丸、附睾中TGFβ1蛋白的特征性表达提示,它们可由不同生精上皮细胞、间质细胞和附睾主细胞产生,可能以自分泌或旁分泌的形式作用于生殖细胞或间质细胞,直接或间接地影响精子的发生、发育和成熟过程,并与精子的活动和受精能力有关.     

慢性铝暴露对小鼠精子质量及睾丸细胞焦亡的影响

目的 研究铝暴露对小鼠精子质量及睾丸细胞焦亡的影响。方法 将12只成熟雄性c57bl/6j小鼠分为两组：对照组(n=6)、铝模型组(n=6),对照组用蒸馏水灌胃，铝模型组采用10 mg/(kg·d) AlCl₃灌胃，8周后，获取小鼠睾丸组织、附睾组织及附睾精子。对附睾精子进行精子质量分析，对睾丸及附睾HE染色进行病理检测；运用PCR、免疫组化检测睾丸组织细胞焦亡关键基因的mRNA和蛋白表达。结果 与对照组相比，铝暴露的小鼠睾丸重量、附睾重量、精子活力、精子数量均显著下降(P<0.01),精子畸形率显著增加(P<0.01)。睾丸形态学观察结果显示，铝暴露小鼠睾丸生精小管中细胞排列紊乱，生精小管的面积和直径减小，管内精子减少。PCR及免疫组化结果显示，铝暴露小鼠睾丸组织中焦亡关键基因Nlrp3、Caspase-1、Gsdmd和IL-1b的mRNA及蛋白表达均上调(P<0.01)。结论 铝暴露可降低小鼠的精子质量，促进睾丸细胞焦亡，从而损伤雄性生殖系统。     

蒺藜皂苷对热损伤小鼠睾丸钠泵表达的影响

目的 探讨蒺藜皂苷对热损伤小鼠睾丸钠泵表达的影响.方法 雄性小鼠30只,随机分为对照组、模型组和给药组,每组10只.建立睾丸热损伤模型,蒺藜皂苷灌胃(300 mg/kg,1t/d,8w).一半小鼠取附睾精子进行精子参数检测;一半小鼠心脏灌流固定,进行免疫组织化学染色检测睾丸组织钠泵的表达.结果 模型组与对照组比较,精子密度、活力、活率均显著下降,畸形率明显升高;生精细胞数目减少、排列紊乱;睾丸组织钠泵表达降低.给药组与模型组比较,精子密度、活力、活率升高,畸形率下降;生精细胞数目增多、排列紧密;睾丸组织钠泵表达升高.结论 蒺藜皂苷能够通过调节钠泵表达对小鼠热损伤生殖功能的保护作用.     

HSP90β在小鼠生殖系统中的表达及调控

目的研究热休克蛋白90β（HSP90β）在小鼠睾丸、附睾、精子中的表达及调控机制。方法从mRNA和蛋白水平上对
HSP90β在小鼠睾丸和附睾组织细胞中及精子上表达及定位进行分析,同时对其基因在雄性生殖中的表达调控进行初步探索。结
果HSP90β mRNA在小鼠附睾中的表达量比在睾丸中高。在小鼠精子中定位于顶体部位。其基因在去势小鼠的附睾中表达降
低,补充睾酮后又恢复正常,在发育中小鼠的睾丸、附睾中表达也有变化。结论HSP90β在小鼠精子形成及受精中可能发挥重要
作用;其在去势小鼠附睾中和在出生后不同阶段小鼠睾丸、附睾中的表达模式,说明其基因表达受激素调控和发育调控的影响。
     

生精相关基因Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达和定位研究

目的：应用小鼠Znf230多克隆抗血清,对Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达及定位进行研究。方法：用RT-PCR分析、Western blot检测、免疫组织化学和免疫荧光染色方法研究Znf230在小鼠不同发育阶段睾丸组织及精子中的表达及亚细胞定位情况。结果：小鼠从出生到成年的发育过程中,Znf230的表达水平基本上是稳定的。小鼠出生6 d和12 d时,该蛋白在精原细胞核中表达,从出生18 d到精子发育成熟这个阶段,该蛋白转移到圆形精子细胞、延长精子细胞和精子中表达,具体定位于顶体区域和精子的尾部。结论：Znf230可能在小鼠生精过程中起着重要的作用。     

竹节参总皂苷减轻高脂饮食诱导的小鼠睾丸支持细胞连接功能损伤

目的 探究竹节参总皂苷（TSPJ）对高脂饮食诱导的小鼠睾丸支持细胞功能损伤的保护作用及机制。方法 将40只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常饮食组、高脂饮食组、TSPJ低剂量（25 mg/kg）组和TSPJ高剂量（75 mg/kg）组,10只/组。正常饮食组给予普通饲料喂养,其余组均给予高脂饲料喂养,TSPJ连续灌胃给药5月,小鼠称重处死,取出睾丸和附睾组织称重并计算其指数;取附睾组织进行精液分析;HE染色观察小鼠睾丸组织形态变化,测量统计生精上皮厚度与生精小管直径;Western blot检测睾丸支持细胞紧密连接功能蛋白ZO-1、Occludin和Claudin11以及外质特化功能蛋白N-cadherin、E-cadherin和β-catenin的表达水平;免疫荧光法检测睾丸组织中ZO-1和β-catenin蛋白定位及表达;免疫荧光双标法检测睾丸支持细胞中LC3B、p-AKT和p-mTOR表达变化。结果 与高脂饮食组相比,TSPJ能明显减轻高脂饮食小鼠体质量（P<0.001）,增加睾丸和附睾指数（P<0.05,P<0.01）,提高精子浓度与精子活率（P<0....     

一氧化氮合酶在大鼠睾丸及附睾中的表达和定位

目的：了解一氧化氮合酶（NOS）在睾丸及附睾中的分布。方法：运用免疫组织化学ABC法观察2种NOS（nNOS,iNOS,eNOS）在性成熟大鼠睾丸、附睾中的分布。结果：①nNOS免疫反应阳性见于睾丸间质细胞、睾丸间质血管壁平滑肌细胞、附睾脂肪垫细胞;②iNOS免疫反应阳性见于睾丸间质细胞、管周类肌细胞、精原细胞、精母细胞、支持细胞、输出小管上皮细胞、附睾输出小管上皮细胞、腔内精子;③eNOS免疫反应阳性见于睾丸间质细胞、附睾脂肪垫细胞。结论：NOS广泛表达于睾丸及附睾组织细胞中,推测其参与了包括精子发生和精子成熟的生殖活动多个过程。     

精原干细胞体内转染途径建立rsP3111转基因小鼠的可行性研究

目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以Xholl和BdmHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer—N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer—N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer—N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer—N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表选为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。     

在小鼠着床前胚胎中c-myc的表达

目的: 观察小鼠着床前胚胎细胞中c-myc基因的表达, 了解其对早期胚胎发育可能影响的作用. 方法: 采用原位杂交及免疫组织化学ABC法,分别检测小鼠着床前胚胎细胞中c-myc mRNA及c-myc蛋白. 结果: 在小鼠2细胞、4细胞、6细胞、8细胞和囊胚期胚细胞中均检测到原癌基因c-myc转录产物的表达,c-myc mRNA分布于胚细胞的胞质和胞核. 免疫组织化学方法也发现,2细胞至囊胚期胚胎细胞的 c-myc蛋白均呈免疫反应阳性, 阳性物质分布于胞质和胞核中, 胚胎透明带则呈阴性反应. 结论: 小鼠早期胚胎有c-myc基因表达,c-myc基因对小鼠着床前胚胎发育可能起重要调节作用.     

低浓度臭氧对小鼠生长发育的影响

目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以Xholl和BdmHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer—N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer—N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer—N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer—N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表选为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。     

附睾蛋白RhoA参与人精子顶体反应

目的:研究RhoA在男性生殖系统中的表达和功能.方法:采用RT-PCR来检测RhoA的mRNA表达,Western blot和免疫组化用来检测RhoA蛋白在人睾丸,附睾及成熟精子中的表达.免疫荧光用来观察这个蛋白在人精子上的定位.豌豆凝集素(PSA)染色用来确定精子顶体反应率.结果:只能在附睾中检测到RhoA的mRNA,而RhoA蛋白不仅在附睾上皮中表达,在人精子上也有表达.它位于人精子的顶体和尾部,并且随着顶体反应转移到精子的赤道部及顶体后区.同时特异的RhoA抗体能够显著地抑制精子发生顶体反应(P<0.01).结论:结果表明RhoA可能是在附睾成熟过程中带到人精子质膜表面,从而使精子获得发生顶体反应的能力.     

90d Exposure to Nonylphenol has Adverse Effects on the Spermatogenesis and Sperm Maturation of Adult Male Rats

This study was conducted to elucidate the reproductive effect of NP on testis,epididymis and epididymal sperm in vivo.Adult male SpragueDawley rats were gavaged with NP at 0,40,100,or 250 mg/kg body weight（bw） on alternate days for 90 d.The results showed that oral administration of NP may damage the structure and function of testis,induce apoptosis and oxidative stress in epididymis or even have cytotoxic effects on epididymal sperm.     

雷公藤多甙及其单体T4对大鼠精子发生影响的初步观察

雷公藤多甙(GTW)抗生育作用部位主要在睾丸内,可致圆形精子细胞向长形精子转变过程受阻,附睾中出现大量头部异常的精子,精子头尾分离和贮积大量不活动精子。从雷公藤多甙分离的有效抗生育单体T_4,抗生育剂量为GTW的1/200,主要作用于附睾精子,对睾丸形态结构及精子形态的影响不明显。提示T_4作用部位较理想。     

性成熟期前后睾丸及附睾碱性磷酸酶分布的观察

目的：探讨睾丸、附睾精子发生、发育和分化过程中碱性磷酸酶的分布规律,以期为男性生殖理论及抗生精药物的研究提供科学依据。方法：取不同鼠龄雄性小白鼠睾丸、附睾恒冷箱切片,碱性磷酸酶钙钴法染色。结果：３周、４周小鼠睾丸生精小管周组织中碱性磷酸酶反应产物基本接近于成熟期小鼠。８周小鼠其碱性磷酸酶反应产物已达成年水平。３周小鼠附睾处碱性磷酸酶均呈阴性反应,４周小鼠仅在附睾头部分附睾管上皮细胞游离缘呈碱性磷酸酶阳性反应,８周小鼠附睾头处附睾管上皮细胞游离缘碱性磷酸酶呈强阳性反应。附睾体、尾处碱性磷酸酶呈阴性反应。结论：性成熟期前睾丸生精小管周组织中碱性磷酸酶反应已接近成熟期水平。附睾中碱性磷酸酶分布有明显的阶段性,不仅与性成熟有关,还与附睾内精子密集程度有一定关系     

室内装修挥发性污染物对雄性小鼠生殖功能和精子凋亡的影响

目的：模拟室内装修主要挥发性物质的污染环境,探讨室内装修主要挥发性污染物甲醛、苯系物及氨对雄性小鼠生殖功能的影响。方法：选取雄性ICR小鼠20只,随机平均分为实验组和对照组,实验组小鼠进行甲醛（60 mg·m^-3）、二甲苯（50 mg·m^-3）和氨（40 mg·m^-3）经呼吸道混配静式染毒,同时对照组小鼠放入空气填充的静式染毒柜中。每天固定时间称量小鼠体质量并记录,连续染毒35d。染毒期间每天观察小鼠行为学变化。收集小鼠附睾尾部精子并计数,检测精子密度及活力;采用Diff-Quick染色法染色,计算精子畸形率;采用流式细胞术（FCM）检测小鼠附睾尾部精子凋亡率;采用Western blotting法检测小鼠睾丸组织中细胞凋亡相关因子Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平。结果：染毒28d后,实验组小鼠体质量与对照组比较明显降低（P<0.01）;染毒35d后,实验组小鼠精子浓度、活力及精子畸形率与对照组比较均明显下降（P<0.01）;与对照组比较,实验组小鼠精子凋亡率明显升高（P<0.01）。实验组与对照组小鼠睾丸组织中Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：室内装修主要污染物能够明显影响雄鼠附睾中精子质量。     

禁水致脱水对大鼠睾丸内精子输送影响的形态定量研究

目的:确定脱水是否影响睾丸产生的精子向附睾的输送。方法:把30只51～52天龄的雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成两组:1组既喂食(颗粒饲料)又喂水(对照组,n=18);另1组只喂食不喂水(实验组,n=12)。4～5 d后取一侧睾丸和附睾,制作甲基丙烯酸树脂包埋切片,观察并定量研究其组织学变化。结果:对照组分别有5.9%和14.2%的生精小管轮廓可见生精细胞排列疏松、长形精子细胞滞留,而实验组的这两个结果分别高达29.4%和53.5%。与对照组相比,实验组附睾头部和尾部的体积分别减少41%和26%,但附睾管内的细胞团(包含精子和未成熟生精细胞)的总体积没有减少,球形精子细胞的数量(半定量分析)甚至增加。结论:禁水致短期急性脱水并未影响睾丸内精子和未成熟生精细胞的输送,但可能损害了生精细胞与Sertoli细胞之间的连接,从而使精子释放障碍,生精细胞排列疏松并提前脱落。     

度他雄胺对大鼠附睾精子成熟和生育的影响

目的通过度他雄胺对大鼠附睾精子和生育的影响,探索调节雄性生育的睾丸后作用靶点。方法使用度他雄胺20和40 mg/(kg.d)大鼠灌胃给药,连续2周。给药结束后雄雌鼠按1∶2合笼,计算生殖指数;采用计算机辅助精子分析系统分析精子活力和形态;采用SYBR-14和PI双重荧光染色计算精子存活率;采用Elisa法测定大鼠睾酮(T)和双氢睾酮(DHT)血清浓度;采用HE染色法对各组睾丸、附睾进行组织学分析。结果度他雄胺低、高剂量组双氢睾酮浓度均显著下降,分别为0.54和0.28 nmol/L(P<0.01),精子活力明显降低,分别为39.0%和28.7%(P<0.01),畸形率分别增加为10.3%和15.6%(P<0.05),最后受孕率分别降为62.5%和38.4%。而睾酮水平和交配指数均无明显变化(P>0.05),睾丸和附睾亦无明显病理学改变。结论度他雄胺通过抑制DHT生成,影响附睾精子成熟而导致大鼠不育,为今后男性避孕和不育药物研发提供了新思路。     

合并应用甾体激素与低剂量棉酚对雄性大鼠的护一育效果 …

目的 论证甾体激素与低剂量棉酚组合用药的雄性抗生育作用的可行性作用机制。方法 用低剂量棉酚１２ｍｇ／ｋｇ（ｋｄ．ｄ）,甲基睾丸素２０ｍｇ（ｋｇ．ｄ）,炔璃００μｇ／（ｋｇ．ｄ）喂服Ｗｉｓｔａｒ大鼠６周,部分取工始合笼;继续用棉酚１２ｍｇ／（ｋｇ．ｄ）维持１２周,部分取材,余下大鼠停药,观察恢复情况。取材做大鼠睾丸精子计数,精子活动度,睾丸切片的形态学观察等。结果 用药６周大鼠的生精过程受到不完全抑     

睾丸或附睾精子ICSI治疗无精子症

目的 比较睾丸和附睾精子ICSI治疗无精子症的临床效果.方法 分别用睾丸或附睾来源的精子进行ICSI,对其受精率、优质胚胎率、胚胎种植率和临床妊娠率等指标进行评价.结果 睾丸精子的受精率明显低于附睾精子的受精率(P ＜0.001),两者的优质胚胎率、胚胎种植率和临床妊娠率差异无显著性(P＞0.05).结论 附睾精子较睾丸精子有更强的受精能力,但不影响治疗结局.