圆二色和等温滴定微量热技术研究人血清白蛋白与锌离子的结合机制

目的：体外利用圆二色和等温滴定微量热技术获得人血清白蛋白（HSA）与锌离子（Zn²⁺）相互作用的二级结构信息与热力学参数,认识Zn²⁺与HSA之间的相互作用机制,为探索并发挥微量元素在人体内的作用潜力提供科学依据。方法：采用圆二色技术和等温滴定微量热技术;HSA浓度设置为由低到高的梯度,分别为0.025 mmol·L^-1、0.05 mmol·L^-1、0.1 mmol·L^-1、0.2 mmol·L^-1,Zn²⁺浓度5 mmol·L^-1。结果：圆二色检测到不同浓度的HSA与Zn²⁺相互作用后二级结构发生变化,由低到高浓度的HSA与Zn²⁺结合后α-螺旋含量随之降低,当HSA浓度为0.2 mmol·L^-1时α-螺旋含量表现特殊;进而所进行的等温滴定微量热实验获得一整套有关分子相互作用的热力学信息,包括结合常数（Kb）、反应的化学计量数（N）、熵（ΔS）和焓（ΔH）,发现当ZnSO₄（mmol·L^-1）?HSA（mmol·L^-1）=5?0.2时,有两类结合位点。不同浓度的HSA分别与Zn²⁺结合,表现出不同构象变化,特别当HSA浓度达到0.2 mmol·L^-1时,α-螺旋含量急剧降低,蛋白质疏水性减弱,肽链伸展。在进一步的等温滴定微量热实验中,发现ZnSO₄（mmol·L^-1）?HSA（mmol·L^-1）=5?0.2的条件下,ZnSO₄-HSA有两类结合位点,即吸热位点和放热位点。结论：揭示HSA上的吸热结合位点对Zn²⁺有高特异性,但非结合优先性。这一结果为Zn²⁺在未来成为打开HSA上吸热位点的“钥匙”提供可行性依据。     

阿夫唑嗪的示波极谱法测定及其电化学行为

 目的 研究阿夫唑嗪(alfuzosin,简称AFZ)的电化学行为和电极反应机制,拟定测定AFZ的单扫示波极谱法。方法 采用单扫示波极谱3法、循环伏安法进行研究。结果 在0.01 mol·L^-1 KH₂PO₄K₂HPO₄(pH7.05)底液中,AFZ在汞电极上有一灵敏的导数还原峰,峰电位Ep=-1.60V(vs.SCE),峰高与AFZ的浓度在1.0×10^-7～9.0×10^-6范围内呈线性关系(r＝0.997 9),检出限为3.0×10^-8 mol·L^-1。该法应用于片剂中AFZ含量的测定,得到满意结果。结论 实验表明,该体系属两电子还原的不可逆吸附过程。     

补锌、钙口服液中乳酸钙和葡萄糖酸锌含量的同时测定

 目的：研究补锌、钙口服液中葡萄糖酸锌和乳酸钙含量的测定。方法：以EDTA掩蔽Zn²⁺，间接高锰酸钾法测定钙的含量；在聚山梨酯-80存在下，以抗坏血酸为辅助配位体，于pH 4.4醋酸-醋酸钠缓冲溶液中，Zn²⁺与Meso-四-(4-甲基,3-磺基苯基)卟啉进行显色反应，应用分光光度法测定Zn²⁺。结果：高锰酸钾滴定法测定Ca²⁺得到精确结果，其S=0.03，RSD%=0.4；四元络合体系在pH4.2～5.5范围内对测锌具有较高灵敏度，最大吸收波长430 nm处的表观摩尔吸光系数为5.5×105 L·mol^-1·cm^-1。Zn(Ⅱ)浓度在0～0.18 μg·ml^-1范围内遵守比耳定律。结论：应用本法直接测定口服液中葡萄糖酸锌含量，不经分离，结果满意。     

原子吸收光谱法测定人工肾透析液的含量

 目的：直接测定人工肾透析液中Na⁺,K⁺,Casup>2+,Mgsup>2+的含量。方法：采用原子吸收光谱法(AAS)，同时加入10g·L^-1CsCl和10g·L^-1La(NO3)3消除K⁺,Na⁺，Casup>2+,Mgsup>2+共存时的增感效应。结果：方法回收率分别为(102.1±1.60)%(Na+)，(101.0±1.32)%(K⁺)，(99.8±1.78)%(Casup>2+)，(100.5±1.21)%(Mgsup>2+)。结论：该测定方法简单、快速，结果准确可靠。     

泰国葛组织培养和快速繁殖体系优化研究

目的：研究泰国葛的组织培养与快速繁殖技术。方法：以嫩枝为外植体，通过调整基本培养基、生长调节剂种类和配比、以及向培养基中添加特殊化合物，以期选择出适合的诱导、继代增殖和生根培养基配方。结果：MS+IBA 0.05 mg·L^-1+BA 0.5 mg·L^-1利于诱导出芽，可用于初代培养；MS+IBA 0.02 mg·L^-1+BA 0.2 mg·L^-1和MS+BA 0.1 mg·L^-1可用于增殖和继代培养，25 d繁殖系数3.0；1/2 MS+IBA 0.1 mg·L^-1+IAA 0.2 mg·L^-1+C(特殊化合物)10 mg·L^-1适于诱导生根获得再生植株，生根率76.9%。生根苗春、夏季移栽，成活率81.0%。结论：本方法可用于泰国葛种苗的快速繁殖。     

反相高效液相色谱法测定血清中来氟米特活性代谢物A771726的浓度

 目的：建立反相高效液相测定人血清中来氟米特（leflunomide,Lef）活性代谢物A₇₇₁₇₂₆浓度的方法。方法：采用VP-ODS C₁₈柱,0.01 mmol·L^-1醋酸盐缓冲液(pH4.6)-乙腈(67∶33)为流动相,紫外检测波长为288 nm,流速1.0 mL·min^-1,血清样品用乙酸乙酯提取。结果：A₇₇₁₇₂₆在血清中得到很好的分离,没有明显的干扰峰,出峰时间为6.4 min。线性范围0.39～50 mg·L^-1（r=0.9996）,最低检测限为0.098 mg·L^-1,血清中日内和日间RSD均小于7%,回收率为89.4%～95.3%。结论：本法简便灵敏,符合生物制品分析要求。     

金荞麦饮片液相色谱含量测定及指纹图谱研究

目的：研究金荞麦饮片高效液相色谱指纹图谱及含量测定方法。方法：采用高效液相色谱-电化学检测法,Diamonsil C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱；流动相为甲醇-0.1 mol·L^-1磷酸盐缓冲液(pH 2.5)；流速1.0 mL·min^-1；柱温35 ℃；参比电极为ISAAC(in-situ Ag/AgCl)；工作电极为玻碳电极；辅助电极为铂电极。结果：建立了金荞麦饮片高效液相色谱图谱,发现了6个色谱峰为共有峰,其中4个分别为没食子酸,原儿茶酸,原儿茶醛和表儿茶素的色谱峰。原儿茶酸的质量分数为0.004%～0.05%,原儿茶醛的质量分数为0.003%～0.015%。结论：该方法可用于金荞麦饮片质量控制。     

高效液相色谱法测定人血清、脑脊液和胰液中利奈唑胺浓度

 目的 建立同时测定人血清、脑脊液、胰液中利奈唑胺药物浓度的HPLC测定方法。方法 以利培酮为内标物,在0.1 mol·L^-1NaOH碱性条件下甲基叔丁基醚-正丙醇=90∶10(V/V)液液提取,Shima-pack CLC-ODS-C₁₈(6.0 mm×150 mm,5 μm)色谱柱分离,流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲溶液(0.02 mol·L^-1KH₂PO₄,H₃PO₄调pH 3.5)=20∶16∶64(V/V/V),流速1.0 mL·min^-1,柱温35 ℃,检测波长254 nm条件下测定。结果 血清中利奈唑胺在0.25~40.0 mg·L^-1内线性良好(r=0.999 9),3个浓度质控样本(0.8、8.0、25.0 mg·L^-1)的批内、批间变异(RSD)分别为1.64%~2.38%(n=5)、4.53%~6.34%(n=5),方法学和提取回收率分别为93.781%~97.393%(n=5)、72.318%~73.442%(n=5);脑脊液中在0.1~20.0 mg·L^-1内线性良好(r=0.999 3),3个浓度质控样本(0.2、2.0、15.0 mg·L^-1)的批内、批间变异(RSD)分别为3.84%~4.83%(n=5)、6.04%~8.16%(n=5),方法学和提取回收率分别为106.910%~110.971%(n=5)、73.226%~80.603%(n=5);胰液中在0.1~20.0 mg·L^-1内线性良好(r=0.999 4),3个浓度质控样本(0.2、2.0、15.0 mg·L^-1)的批内、批间变异(RSD)分别为2.96%~5.30%(n=5)、4.68%~6.40%(n=5),方法学和提取回收率分别为97.178%~105.072%(n=5)、73.333%~76.010%(n=5)。内标提取回收率＞87%。结论 本方法灵敏度高,准确性好,简便快捷,应用液液提取处理样本去除更多杂峰干扰,更广泛适用于临床,尤其适用于合并用药患者生物标本中利奈唑胺药物浓度的测定。     

补骨脂素的植物雌激素作用及其机制探讨

目的:利用雌激素受体(ER)α,β阳性T47D细胞和子宫内膜癌Ishikawa细胞观察补骨脂素的雌激素样作用,并探讨其可能的作用机制。方法:以1×10^-8mol.L^-1雌二醇(E₂)为阳性对照药,利用MTT细胞增殖试验观察1×10^-5~1×10^-9mol.L^-1补骨脂素对T47D增殖的影响,同时观察1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖的影响;以半定量RT-PCR法检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对T47D细胞雌激素效应基因PR mRNA表达情况的影响;并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780为工具药进行干预。同时,通过流式细胞术检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素引起T47D细胞ER-α,ER-β含量的变化。结果:1×10^-5~1×10^-7mol.L^-1补骨脂素能够显著促进T47D细胞增殖;1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖也有显著的促进作用;RT-PCR结果显示:1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素可使T47D细胞PR mRNA表达显著增加,表现出雌激素样作用,而且以上效应可被ICI 182,780拮抗。1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素还可诱导T47D细胞ER-α,ER-β表达明显增加。结论:补骨脂素具有植物雌激素作用,并且其作用是通过ER途径介导的。     

问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg2+-ATPase,Ca2+-ATPase抑制作用的动力学研究

问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg²⁺-ATPase,Ca²⁺-ATPase有显著的抑制作用,对Mg²⁺-ATPase的抑制机制分别为竞争性抑制(Mg²⁺,Ki=4.93×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=1.06×10^-4mol/L),对Ca²⁺-ATPase的抑制机制分别为混合型抑制(Ca²⁺,Ki=5.07×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=3.27×10-4mol/L)。     

微波消解火焰-原子吸收光谱法测定药用辅料 硬脂酸镁中痕量铅、镍、镉

目的:建立火焰原子吸收光谱法测定药用辅料硬脂酸镁中痕量铅、镍、镉的含量。方法:药用辅料硬脂酸镁经微波消解或经湿法消解后,采用火焰-原子吸收光谱法测定痕量铅、镍、镉,并同时考察这两种样品处理方法对测定结果的影响。结果:微波消解法对样品测定结果优于湿法消解;镉0.42～1.12 mg·L-1,镍3.80～4.06 mg·L-1,铅5.07～10.31 mg·L-1。在选定分析条件下,镉、镍、铅检出限分别为0.001 2,0.002 9,0.003 4 mg·L,1,RSD分别为0.2%,2.9%,2.7%,回收率分别为为109.18%,101.30%,99.69%。结论:本法具有操作简单、灵敏度高、重复性好等优点,能满足痕量铅、镍、镉的测定要求,为药用辅料硬脂酸镁的质量控制提供依据。     

LC-MS/MS同时测定人血浆中阿莫西林-氨溴索浓度及其药动学研究

 目的建立LC-MS/MS同时测定人血浆中阿莫西林/氨溴索浓度。方法以Lichrospher C₁₈(4.6mm×150mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇溶液(含0.2%甲酸)和水溶液(含0.2%甲酸),采用梯度洗脱进行分析,流速为1.0mL·min^-1,柱温为30℃。血浆样品经甲醇沉淀后进样,采用多反应监测(MRM)方式对样品进行测定。结果血浆中阿莫西林线性范围为5～20000μg·L^-1,氨溴索线性范围为1～200μg·L^-1;批间和批内精密度RSD均小于9%;方法的准确度为(100±7)%;最低定量限浓度(LLOQ)阿莫西林为5μg·L^-1,氨溴索为1μg·L^-1。结论本试验建立了同时测定阿莫西林和氨溴索浓度的方法,该方法灵敏、准确、简便、快速,适用于阿莫西林/氨溴索人体药动学研究。     

HPLC-MS/MS快速同时测定全血中3种免疫抑制剂的浓度

 目的建立液质联用(HPLC-MS/MS)法同时测定人全血中环孢素A、他克莫司、西罗莫司的方法。方法采用Symmetry C₁₈色谱柱(2.1 mm×150 mm,5μm),流动相:10 mmol·L^-1醋酸铵-0.1%甲酸溶液和0.1%甲酸甲醇溶液为90∶10,流速0.25 mL·min^-1,采用多反应监测进行定量。结果环孢素A在人全血中50～1 500μg·L^-1内线性良好,他克莫司、西罗莫司在人全血中1～30μg·L^-1内线性良好,相对回收率在98.67%～103.56%之间,日内及日间精密度(RSD%)均小于10%。结论本方法能满足同时测定人全血中环孢素A、他克莫司、西罗莫司的要求,用于临床血药浓度的监测。     

碳糊电极阳极吸附伏安法测定中成药及保健品中的槲皮素

目的:建立碳糊电极(CPE)阳极吸附伏安法测定中成药及保健品中槲皮素的方法.方法:用石墨粉-液体石蜡(4∶1)制备CPE,在HAc-NaAc(pH 3.6)缓冲液中,槲皮素在0.401 V(vs.Ag-AgCl)产生一灵敏的吸附氧化峰.结果:槲皮素浓度在3.13×10-7～1.0×10-5mol·L-1与峰电流呈良好的线性关系(r=0.996 0),检出限为2.1×10-8mol·L-1,应用该法测定中成药及保健品中的槲皮素取得了较好的结果.结论:该法准确可靠、经济实用,可用于槲皮素的测定.     

GC-MSn同时测定小鼠血浆中冰片和尼莫地平质量浓度

 目的建立测定小鼠血浆中冰片和尼莫地平的气相色谱-质谱(GC-MSn)定量分析方法。分析两药合用后尼莫地平在小鼠体内的药动学变化。方法血浆样品经乙酸乙酯提取,采用选择性离子抽提和二级MS/MS质谱分别监测冰片和尼莫地平的血药浓度。结果本法可同时测定血浆中2种相对分子质量差异较大的药物质量浓度,冰片在0.01～10 mg·L^-1,尼莫地平在0.01～0.5 mg·L^-1内,峰面积与其质量浓度呈良好的线性关系。最低检测限分别为5.0,2.5 mg·L^-1,日内RSD分别为4.6%～6.7%,2.5%～5.2%;日间RSD分别为2.3%～9.9%,5.1%～6.6%(n=5)。结论该方法灵敏,简便,准确,适用于冰片和尼莫地平配伍应用的药动学研究。尼莫地平加冰片合用的动力学研究表明,冰片可以改变尼莫地平在体内的分布过程。     

HPLC-MS/MS研究国产磷酸奥司他韦胶囊在健康人体的生物等效性

 目的 建立测定血浆中国产磷酸奥司他韦胶囊（商品名：军科奥韦胶囊）活性代谢产物浓度的LC-MS/MS方法,研究军科奥韦胶囊在中国健康男性志愿者的主要药动学参数以及与参比制剂的生物等效性。方法 采用2制剂双周期交叉试验设计,24名受试者分别单剂量口服受试制剂军科奥韦胶囊和达菲参比制剂,用LC-MS/MS测定其活性代谢产物的含量,所得参数经BAPP2.0软件计算药动学参数并考察生物等效性。结果 口服参比制剂及受试制剂后,其活性代谢产物的ρ_max分别为（625.17±147.76）和（633.57±115.28）μg·L^-1;t_max分别为（4.5±1.0）和（4.5±1.2）h;t_1/2分别为（8.13±1.13）和（7.79±0.89）h;MRT分别为（12.09±1.38）和（11.95±1.03）h; AUC_0-τ分别为（7 247.02±1 720.33）和（7 506.16±1 454.36）μg·h·L^-1;AUC_0-∞分别为（7 428.75±1 793.94）和（7 659.99±1 477.83）μg·h·L^-1;受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为（105.8±17.7）%。结论 利用方差分析及双单侧t检验分别对受试和参比制剂进行生物等效性评价,军科奥韦胶囊和已上市的达菲胶囊制剂具有生物等效性。     

HPLC测定注射用13种复合维生素中维生素H、叶酸及维生素B12含量

 目的建立应用高效液相色谱同时测定注射用水溶性维生素中的维生素H、叶酸及维生素B12含量的方法。方法采用Intersil(ODS-2)C₁₈(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱;以0.05mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH到3.0)-乙腈(10∶90)为流动相;流速为1mL·min^-1;检测波长为210nm;进样量为10μL;柱温为30℃。结果谱图中维生素H、叶酸和维生素B12检测限分别为0.50,1.10和0.82μg·L^-1;维生素H、叶酸和维生素B₁₂分别在9.49～14.23,96.74～145.1和0.746～1.118mg·L^-1内呈线性关系;平均回收率分别为100.96%(RSD=1.72%)、101.77%(RSD=0.14%)和101.27%(RSD=1.71%)。结论该方法简单、快速、灵敏度高、重复性好。     

HPLC测定人血清苯巴比妥、卡马西平、苯妥英钠浓度及其与FPIA法测定结果的比较

 目的建立能同时测定人血清苯巴比妥(PB)、卡马西平(CBZ)、苯妥英钠(PT)3种药物浓度的高效液相色谱(HPLC),并与常规荧光偏振免疫法(FPIA)测定结果进行相关性分析。方法以乙酸乙酯-二氯甲烷(4∶1)为提取溶剂,固定相Diamon-sil C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水(40∶60),紫外检测波长285 nm,流速1.0 mL·min^-1。收集癫痫患者服药后稳态谷浓度血样,分别用HPLC和FPIA法测定,考察2种方法的相关程度。结果PB,CBZ,PT的标准曲线范围分别为1.0～45.0,0.1～15.0,1.0～25.0 mg·L^-1,最低检测浓度分别为0.5,0.05,0.5 mg·L^-1,提取回收率分别为80.2%,78.2%,86.2%,日内和日间RSD均小于9%。PB、PT2种方法的测定值无统计学差异(P>0.05),但CBZ测定值FPIA法高于HPLC(P<0.01)。结论HPLC操作简单、灵敏、准确,适用于治疗药物监测;PB和PT2种测定方法有良好的相关性,CBZ不同测定方法,结果存在差异。     

玄参中4种主要活性成分的HPLC定量分析

 目的建立应用HPLC-UV同时测定玄参中4种主要活性成分——哈巴俄苷、肉桂酸、安格洛苷C和acteoside含量的方法。方法采用Hypersil BDS-C₁₈色谱柱(4.0 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈和1%醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长278 nm,柱温25℃。结果哈巴俄苷、肉桂酸、安格洛苷C和acteoside线性范围分别为15.12～302.4 mg·L^-1,7.72～154.4 mg·L^-1,24.84～496.8 mg·L^-1,6.64～132.8 mg·L^-1;平均回收率(n=5)分别为101.59%(RSD=2.40%),96.75%(1.32%),100.11%(3.95%),99.89%(2.08%)。结论本方法简单、快速、准确可靠,可作为玄参药材的质量控制方法。     

HPLC同时测定布洛伪麻颗粒剂中布洛芬和伪麻黄碱含量

 目的 建立同时测定布洛伪麻颗粒剂中布洛芬和盐酸伪麻黄碱含量的反相HPLC测定法。方法 以双氯芬酸为内标;色谱柱为Shim-pack CLC-DOS柱,流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(含0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾和0.01 mol·L^-1磷酸氢二钾)(64∶36),流速为1.0 ml·min^-1,定时程序控制检测波长(0～6 min为215 nm,6～10 min为260 nm);进样量20 μl。结果 布洛芬和盐酸伪麻黄碱分别在0.02～0.40 mg·ml^-1和3.0～60.0 μg·ml^-1范围内线性关系良好,相关系数分别为r=0.9997和r=0.9998。两组分的回收率分别介于98.02%～101.12%和97.71%～101.15%之间,日内和日间 RSD 均低于5%。结论 本法可同时测定布洛伪麻颗粒剂中布洛芬和盐酸伪麻黄碱的含量,而且简便、准确、快速,可用于多批样品的含量测定及质量控制。