腺病毒介导的HSV—tk基因治疗大鼠脑胶质瘤实验研究

目的：带有ＨＳＶ－ｔｋ基因的重组腺病毒（ＡｄＨＣＭＶ－ｔｋ）结合核苷类似物（ＮＡ）治疗大鼠Ｃ６脑胶质瘤。方法：用Ｘ－ｇａｌ染色测定ＡｄＨＣＭＶ－ｌａｃＺ转染大鼠Ｃ６胶质瘤细胞的效率。用ＡｄＨＣＭＶ－ｔｋ／ＡＣＶ、ＧＣＶ离体及活体治疗大鼠Ｃ６胶质瘤。结果：ＡｄＨＣＭＶ－ｌａｃＺ感染Ｃ６细胞效率达１００％，ＡｄＨＣＭＶ－ｔｋ感染Ｃ６细胞，在病毒感染复数为１０００时，ＧＣＶ和ＡＣＶ半致死剂量分别为３μｇ／ｍｌ和２０μｇ／ｍｌ，Ａｄ－ＨＣＭＶ－ｔｋ／ＡＣＶ治疗大鼠Ｃ６胶质瘤模型，大鼠生存期超过９０天，而对照组分别为１７．０±１．６天（生理盐水组）、１４．５±１．３天（ＡｄＨＣＭＶ－ｌａｃＺ组），Ｐ＜０．００１。结论：重组腺病毒对靶细胞感染效率可达１００％，ＡｄＨＣＭＶ－ｔｋ用ＧＣＶ的杀伤Ｃ６胶质瘤细胞比ＡＣＶ强，而ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ用腺病毒介导治疗大鼠脑肿瘤疗效显著。     

脑肿瘤的基因治疗进展

脑肿瘤的基因治疗是向肿瘤细胞引入外源性基因，以纠正或补偿其基因缺陷，或通过增强宿主细胞对肿瘤的杀伤能力和机体的防御机制，或使肿瘤细胞产生对某些药物的敏感性来治疗肿瘤的一类方法。1药敏基因治疗1．1HSV-tk／GCVHSV－tk／GCV系统治疗脑肿瘤是研究得最广泛最深入的一种方法，已逐步用于临床实验研究[1，2]。HSV-tk能催化核着类药物如阿昔洛韦（Acyclovir，ACV），丙氧鸟苷（Gan－ciclovir，GCV）等底物磷酸化，磷酸化的GCV能抑制细胞DNA聚合酶，或作为三磷酸脱氧胸音（dTIP）的竞争性抑制物整合到合成中的DNA中去，…     

反转录病毒介导的HSV-tk基因治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究

目的：进行Ｃ６大鼠脑胶质瘤的基因治疗实验研究。方法：采用反转录病毒介导的基因转移和ＡＣＶ体内治疗方法进行研究。结果：构建了带有ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ＧＩＮａＴＫ，应用脂质体转移方法将ＧＩＮａＴＫ导入反转录病毒包装细胞ＰＡ３１７，成为产病毒细胞ＰＡ３１７ＴＫ，用带有ＨＳＶ－ｔｋ基因的复制缺陷型反转录病毒感染Ｃ６细胞，命名为Ｃ６ＴＫ细胞，对ＧＣＶ和ＡＣＶ的敏感性分别高于亲本４５０倍和１０倍；成功地建立了大鼠脑胶质瘤模型，并证实转染细胞Ｃ６ＴＫ的成瘤效应未改变，存活期约为１５天；而经ＡＣＶ治疗后，含有Ｃ６ＴＫ细胞的肿瘤生长明显被抑制，大鼠生存期延长为５７．８±８．０７天，尤其是采用ＰＡ３１７ＴＫ细胞混和治疗组和原位治疗组，肿瘤基本消失，大鼠生存期显著延长，混和治疗组存活１２０天以上，原位治疗组存活至７１．４±３６．１天。ｔ检验，Ｐ值均小于０．００１。结论：ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统基因治疗大鼠脑胶质瘤疗效显著。     

人原代胶质瘤细胞自杀基因治疗体外研究

目的：应用原代培养的胶质瘤细胞作不研究对象,观察ＡＣＶ对转染了ＨＳＶ－ｔｋ基因的肿瘤细胞的杀伤作用。方法：表达单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ｔｋ）重组逆转录病毒载体ＳＴＫ,经包装细胞ＰＡ３１７包装成重组逆转录病毒,ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒滴度,用此病毒感染原代培养的人胶质瘤细胞,以Ｇ４１８选择后获得ＴＫ＋肿瘤细胞。ＭＴＴ法及活细胞动态观察ＡＣＶ对转基因细胞的毒性作用。结果：ＡＣＶ对ｔｋ＋胶质瘤细胞     

胸苷激酶基因治疗人脑胶质瘤SHG44的研究

构建了含有ｐｇｋ启动子驱动的ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ｐＬＮＴＫ，并成功地转移至人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞。体内实验证实，ＡＣＶ可抑制ＳＨＧＬＮＴＫ的肿瘤形成，并可抑制ＳＨＧＬＮＴＫ肿瘤的生长。原位基因转移治疗ＳＨＧ４４肿瘤效果明显。提示其可作为脑肿瘤治疗的一种新方法。     

胸苷激酶基因治疗人多形性胶质母细胞瘤BT325并诱导BT325和…

了解转单纯疱疹病毒胸苷激基因前后胶质瘤细胞对更昔洛韦的药物敏感性；钙通道阻滞剂尼莫地平是否增强ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因治疗的肿瘤杀伤作用，以及该治疗方法能否诱导胶质瘤细胞凋亡。方法：用带有ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因的重组逆转录病毒载体，转染人多形性胶质母细胞瘤株ＢＴ３２５。     

腺病毒介导HSV-tk和反义IGF-1联合基因治疗鼠脑胶质瘤

目的　研究腺病毒介导 Ｈ Ｓ Ｖｔｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统和反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 联合基因治疗大鼠脑胶质瘤,并对其机制作初步分析。方法　利用腺病毒为载体观察联合 Ｈ Ｓ Ｖｔｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 和反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 离体杀伤 Ｃ６细胞的效果, 并在大鼠脑内接种 Ｃ６ 细胞第８ 天进行 Ｈ Ｓ Ｖｔｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 和反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 的原位治疗, 观察大鼠生存期变化。结果　 Ｇ Ｃ Ｖ 对转染反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 基因和ｔｋ 基因的 Ｃ６ 细胞较转染ｔｋ 基因的 Ｃ６ 细胞敏感。联合应用 Ｈ Ｓ Ｖｔｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统和反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 原位治疗脑肿瘤比单用任何一种治疗方法效果明显, 免疫组化发现联合基因治疗组肿瘤有大量 Ｃ Ｄ＋４ 、 Ｃ Ｄ＋８ 淋巴细胞浸润。结论　反义 Ｉ Ｇ Ｆ１ 基因可增强 Ｈ Ｓ Ｖｔｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 杀伤肿瘤的作用。     

胸苷激酶基因治疗人多形性胶质母细胞瘤BT325并诱导BT325和9L肿瘤细胞的凋亡

目的：了解转单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ＴＫ）前后胶质瘤细胞对更昔洛韦（ＧＣＶ）的药物敏感性；钙通道阻滞剂尼莫地平是否增强ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因治疗的肿瘤杀伤作用，以及该治疗方法能否诱导胶质瘤细胞凋亡。方法：用带有ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因的重组逆转录病毒载体，转染人多形性胶质母细胞瘤株ＢＴ３２５。用ＭＴＴ法测定ＧＣＶ对转染ＨＳＶ－ＴＫ基因ＢＴ３２５瘤细胞的杀伤作用。结果：０．１ｕｇ／ｍｌ的ＧＣＶ对转ＨＳＶ－ＴＫ基因的ＢＴ３２５瘤细胞有杀伤作用，加入尼莫地平后，０．０１ｕｇ／ｍｌ的ＧＣＶ即有杀伤作用。同时发现该治疗方法可以引起胶质瘤细胞的凋亡。结论：ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ基因治疗对胶质瘤有很强的杀伤作用，并可以引起肿瘤细胞的凋亡；尼莫地平有协同作用，这可能使尼莫地平做为一种增敏剂在脑肿瘤该治疗中使用。     

脑胶质瘤基因治疗现状和展望

脑胶质瘤基因治疗现状和展望惠国桢自从１９９２年，美国ＮＩＨ批准第一个运用反转录病毒介导ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ系统治疗脑胶质瘤的临床方案，全球掀起了肿瘤基因治疗的热潮。据Ｍａｒｃｅｌ统计，截止１９９６年底，世界上已有２３２项基因治疗临床试验方案获批准进行...     

HSV-tk基因/GCV系统治疗鼠脑胶质瘤实验研究

探索ＨＳＶ－ｔｋ基因／ＧＣＶ系统对大鼠脑胶质瘤的体内外治疗效果。方法：用ＰＡ３１７细胞包装ＳＴＫ质粒,形成产病毒细胞ＰＡ３１７ｔｋ,产生假逆转录病毒颗粒,ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒滴度。９６孔培养板接种２４孔Ｃ６细胞,２４孔Ｃ６ｔｋ＾＋细胞,４８小时后换入含ＧＣＶ的培养液,ＧＣＶ浓度按０、０．２５ｕｇ／ｍｌ、０．５ｕｇ／ｍｌ、０．７５ｕｇ／ｍｌ、１ｕｇ／ｍｌ、５ｕｇ／ｍｌ、１０ｕｇ／ｍｌ、１００ｕｇ     

TNF—α／Vp16系统对胶质瘤基因治疗的实验研究

目的 在体外水平（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）建立对胶质瘤有杀伤作用的ＴＮＦ－α基因／Ｖｐ１６系统,研究该系统的有效性及可行性。方法 用逆转录病毒载体将ＴＮＦ－α基因转染人胶质瘤细胞株ＳＨＧ－４４,经生长抑制试验,比较转ＴＮＦ－α基因前后ＳＨＧ－４４细胞对Ｖｐ１６的敏感性。结果 生长抑制试验表明,转染ＴＮＦ－α基因后的ＳＨＧ－４４细胞对Ｖｐ１６的敏感性是转基因前细胞的１０倍（Ｐ〈０．０１）,ＩＣ５０为０．８     

神经节苷脂对NIDDM神经病变患者Na^＋—K^＋—ATP酶和NCV的…

本文应用神经节苷脂（ＧＡ）治疗非胰岛素依赖糖尿病（ＮＩＤＤＭ）神经病变患者，发现ＧＡ明显增加ＮＩＤＤＭ神经病变患者红细胞膜Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性，神经传导速度（ＮＣＶ）呈不同程度改善。结果提示：在ＮＩＤＤＭ神经病变治疗方面，ＧＡ可能具有重要的应用价值。     

腺病毒介导反义IGF-1抑制鼠胶质瘤细胞增殖的实验研究

目的重组腺病毒反义ＩＧＦ－１基因（ＡｄＨＣＭＶ－ＩＧＦ－１Ａ）治疗大鼠Ｃ６胶质瘤。方法体外克隆反义ＩＧＦ－１３００ｂＰ基因片段重组入腺病毒,经扩增纯化,测定滴度,体外体内感染Ｃ６胶质瘤细胞,观察ＩＧＦ－１的表达及肿瘤大小、生存期变化。结果重组腺病毒反义ＩＧＦ－１滴度６．５×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ,反义ＩＧＦ－１基因序列正确,体外Ｃ６－Ａｄ－ＩＧＦ－１Ａ的ＩＧＦ－１表达降低,Ａｄ－ＩＣＦ－１Ａ治疗皮下Ｃ６肿瘤细胞接种组,肿瘤完全消失。与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０１）,Ａｄ－ＩＧＦ－１Ａ治疗脑内Ｃ６肿瘤细胞接种组,大鼠生存期超过９０天,而对照组分别为１６．５±１．４天（Ａｄ－ｌａｃｚ组）、１５．７±１．６天（生理盐水组）,Ｐ＜０．００１。结论重组腺病毒反义ＩＧＦ－１可抑制Ｃ６细胞ＩＧＦ－１的表达,ＡｄＨＣＭＶ－ＩＧＦ－１Ａ治疗大鼠Ｃ６胶质瘤效果显著。     

转基因自主多巴胺细胞的实验研究(论著摘要)

共转导多巴胺合成所必需酶与辅酶基因,使被转导细胞成为自主多巴胺细胞。１　材料和方法　ｐＴＨ、ｐＧＣＨ、ｐＡＡＤＣ分别为含酪氨酸羟化酶（ＴＨ）、三磷酸鸟苷环水解酶Ｉ（ＧＣＨ）、芳香族氨基酸脱羧酶（ＡＡＤＣ）基因的腺伴随病毒（ＡＡＶ）载体质粒。以磷酸钙共沉积法转染载体质粒、辅助质粒与腺病毒质粒于２９３包装细胞,所获ＡＡＶ载体颗粒滴度约１０１１～１０１２／ｍＬ。共转导２９３细胞分：（１）ＡＡＶ－ＴＨ单转导组;（２）ＡＡＶ－ＴＨ／ＡＡＶ－ＧＣＨ共转导组;（３）ＡＡＶ－ＴＨ／ＡＡＶ－ＧＣＨ／ＡＡＶ－ＡＡＤ…     

鱼肝油对急性期脑梗塞患者血清维生素A和细胞免疫水平的？…

目的 探讨鱼肝油对急性期脑梗塞患者血清维生素Ａ（ＶＡ）和细胞免疫水平的影响及他们之间的关系性。方法 用荧光分光光度法和碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶桥联酶标法（ＡＰＡＡＰ），测定血清ＶＡ和周围血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５。结果 治疗后血清ＶＡ水平较治疗前明显提高（Ｐ〈０．００１），ＣＤ３、ＣＤ４及ＣＤ４／ＣＤ８有提高趋势，治疗前后血清ＶＡ含量与ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８均呈显著正相关（Ｐ〈     

免疫应答期间脑内多巴胺代谢的变化

应用高效液相色谱－电化学检测法（ＨＰＬＣ－ＥＣＤ）测定大鼠用绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）免疫后第２－７天期间，下丘脑，海马和脑干中多巴胺（ＤＡ）及代谢产物高香草酸（ＨＶＡ）的含量，结果表明，下丘脑中ＤＡ含量，在免疫后第３－４天明显升高，第５天明显降低，ＨＶＡ含量在免疫后第２－５天显著地增加，以第４天增加最多，海马中ＤＡ含量在免疫后第５－７天明显减少，而ＨＶＡ含量在此期间显著增加，均以第６天变化最大，脑干     

血小板源生长因子旁分泌效应与胶质瘤间质血管反应性增 …

目的 探讨胶质瘤细胞血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）ＢＢ表达水平与肿瘤间质血管（ＳＢＶ）增生的关系。方法 用原位杂交、免疫组和ＨＥ染色观察了７３例人胶质瘤。结果 ７３例中,仅８例（１１％）有少许ＳＢＶ表达ＰＤＧＦＢ ｍＲＮＡ,ＳＢＶ的ＰＤＧＦα受体、β受体和酷氨酸磷酸化蛋白（Ｐ－Ｔｙｒ）的阳性率分别为９５．９％、３４．３％和６１．６％,四者间均有显著性差异（Ｐ〈０．００５）。６２例（８４．９％）的肿瘤     

拉莫三嗪治疗难治性癫痫药物配伍的临床探讨

方法：对４０例难治性癫痫（１．Ｅ．），根据原用抗癫痫药（ＡＥＤｓ）的不同分为三组，开放性观察３～２８（１２．７±７．８）月。比较拉莫三嗪（ＬＴＧ）与不同ＡＥＤｓ配伍的效果，与安全性及ＬＴＧ常用维持剂量。有两个亚组（共１７例）均用过两种治疗方案，将这两个亚组加用ＬＴＧ的不同配伍用药法进行上述统计学比较。结果：ＬＴＧ与丙戊酸盐（ＶＰＡ）配合获得较好效果，且ＬＴＧ用量少，副作用并不比其它ＡＥＤｓ多，对部分性与继发全面性发作均有较好效果，尤其是对Ｌｅｎｎｏｘ－Ｇａｓ－ｔａｕｔ综合征有较满意的疗效。结论：ＬＴＧ系广谱ＡＥＤ，在ＩＥ的治疗中，与ＶＰＡ配伍系较满意的选择之一。     

764－3对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的防治

７６４－３是从丹参中提取的一种单体，对缺血性脑损伤有保护作用。本工作用大鼠蛛网膜下腔出血（ＳＡＨ）模型进一步观察ＳＡＨ后脑血管痉挛（ＣＶＳ）引起突触体功能、脑组织中丙二醛（ＭＤＡ）超氧歧化酶（ＳＯＤ）的变化以及７６４－３的影响。发现ＳＡＨ后突触体钙摄取明显增加，脑组织中ＭＤＡ浓度升高，皮层局部脑血流（ｒ－ＣＢＦ）下降。７６４－３可以抑制突触体的钙摄取和降低脑组织中ＭＤＡ，改善ｒ－ＣＢＦ，使之在ＳＡＨ８０分钟后趋于恢复，７６４－３对ＣＶＳ引起的脑损伤有保护作用。     

腺病毒介导的白介素12对恶性脑肿瘤的基因治疗

目的 构建表达鼠白介素12（IL－12）基因的重组腺病毒（Ad/IL-12),并测试对小鼠GL－26脑胶质瘤的实验治疗。方法 将IL－12的P^35和P^40的两个亚单位基因分别插入腺病毒的E1和E3区,构建Ad/IL-12。结果 肿瘤内注射Ad/IL-12显著地延长了动物的生存时间,有30％的动物生存期超过了6个月。离体脾脏细胞CTL分析没有检测出T淋巴细胞溶解活性,而从肿瘤内收集的T淋巴细胞却没有强烈的杀伤活性。结论 局部表达IL－12是一个很有潜力的治疗脑胶质瘤的手段,这种治疗效果源于肿瘤特异性克隆T淋巴细胞的肿瘤内浸润。