散发性肝外胆管癌中RASSF1A基因启动子甲基化状态的研究

目的　检测肝外胆管癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化及各CpG位点甲基化发生率。方法　采用甲基化特异性聚合酶链反应 (MS PCR)和半巢式PCR对RASSF1A基因启动子区域进行扩增 ,并对扩增产物克隆测序。结果　在全部 48例肝外胆管癌组织中 ,RASSF1A基因启动子区域存在CpG位点甲基化现象的共 2 8例 ,16个CpG位点甲基化平均发生率为 42 .45 % ,明显高于对照组 (χ2 =11.77,P <0 .0 1)。结论　RASSF1A基因启动子区域CpG岛甲基化是RASSF1A失活的主要机制 ,在肝外胆管癌的发生过程中发挥重要作用。     

RASSF1A在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨押癌基因RASSF1A在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌发生、发展的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测48例胰腺癌组织及癌旁正常组织RASSFA mRNA的表达水平.结果 癌旁正常组织RASSF1A mRNA的表达量高于高分化腺癌组织RASSF1A的表达量,差异有统计学意义(P<0.05).高分化腺癌组织RASSF1A mRNA的表达量高于中低分化腺癌组织,差异有统计学意义(P<0.01).TNM分期Ⅲ期RASSF1A mRNA的表达量低于Ⅰ、Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05).RASSF1A mRNA表达与性别、年龄,肿瘤发生部位无明显关系(P>0.05).结论 RASSF1A表达缺失或低下在胰腺癌的发生、发展中起重要的作用.     

5-Aza-CdR调控胃癌细胞系RASSF1A基因表达及对细胞生长的抑制作用

目的观察去甲基化制剂5-Aza-CdR对体外培养的胃癌细胞SGC7901RASSF1A基因的去甲基化和表达调控及生长抑制作用。方法5-Aza-CdR处理SGC7901细胞后,应用MTT法、流式细胞术、AnnexinV．FITC染色法检测细胞增殖活性、细胞周期分布及细胞凋亡率;应用MSP、RT-PCR及Westem印迹法检测RASSF1A基因的甲基化状态、mRNA及蛋白表达。结果5-Aza-CdR处理后,胃癌细胞SGC7901生长受到抑制（P〈0．05）,细胞周期呈现G1期阻滞,细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。RASSF1A基因在SGC7901中呈异常甲基化状态,在mRNA及蛋白水平表达阴性：5-Aza-CdR处理后RASSF1A基因呈去甲基化状态,在mRNA及蛋白水平重新表达。结论去甲基化制剂5-Aza-CdR调控胃癌细胞SGC7901RASSF1A基因去甲基化及重新表达．对SGC7901细胞具有生长抑制作用。     

膀胱移行细胞癌患者RASSF1A蛋白表达和启动子区甲基化的研究

目的:探讨RASSFlA(RAS association domain family1A)蛋白表达水平与启动子甲基化的关系.方法:应用免疫印迹技术(western-blot)检测10例正常膀胱组织和23例膀胱移行细胞癌(Badder transitional cell carcinoma,BTCC)组织中RASSFlA蛋白表达水平;用甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)方法检测正常膀胱组织,BTCC组织中RASSF1A基因启动子CPG岛甲基化状态.结果:RASSF1A蛋白在正常膀胱组织中全部表达,在BTCC组织中表达率为30.4%(7/23),二组间表达差异有统计学意义(P＜0.05),但各肿瘤分期、病理分级间的表达差异无统计学意义(P＞0.05).在正常膀胱组织中,RASSF1A基因启动子未发生甲基化;在BTCC组织中,RASSF1A基因启动子甲基化频率为60.9%(14/23),二组间表达差异有统计学意义(P＜0.05).在14份启动子异常甲基化的BTCC标本中,13份同时伴有RASSFIA蛋白表达缺失或下调,两者存在明显相关性(P＜0.05).结论:RASSFlA基因启动子在BTCC组织中发生异常甲基化,使RASSF1A蛋白表达缺失,推测RASSFIA基因启动子CPG岛异常甲基化导致RASSF1A基因失活从而引起肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关.     

原发性肝癌RASSF1A基因启动子区甲基化及其临床意义

目的 探讨原发性肝癌中RASSF1A基因启动子的甲基化水平及其与临床病理特征的关系.方法 采用MSP测定100例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、6株肝癌细胞株及10例正常肝组织RASSF1A基因甲基化状态,分析甲基化与肝癌临床病理特征的关系.采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理肝癌细胞株,用RT-PCR检测RASSF1A的重新表达情况.结果 100例肝癌组织中有69例(69％)存在RASSF1A基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有15例(15％),6株肝癌细胞株有4株(4/6)发生甲基化,而正常肝组织中无RASSF1A基因甲基化存在,RASSF1A基因异常甲基化在3种组织中的发生率差异有统计学意义(x2=67.75,P＜0.001).RASSF1A基因启动子甲基化与患者乙肝表面抗原及组织分化存在一定相关性.发生甲基化的4株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理后,全部重新恢复表达.结论 原发性肝癌存在RASSF1A基因CpG岛异常甲基化,并与患者乙肝表面抗原及组织分化密切相关.经甲基化抑制剂处理的肝癌细胞株又重新恢复表达,推测CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一.     

RASSF1A基因在胰腺癌组织中的表达及临床意义

探讨RASSF1A基因在胰腺癌组织中的表达及与其临床病理因素的关系。采用逆转录聚合酶链反应(RT2PCR)技术,检测56例胰腺癌组织及癌旁组织中RASSF1A基因的表达。癌旁组织RASSFlA的表达量高于胰腺癌组织,差异有统计学意义(P0.05)。癌旁组织中RASSF1A基因表达高于癌组织;高分化腺癌组织RASSF1A的表达量高于中低分化腺癌组织,差异均有统计学意义(P0.05)。RASSF1A基因丢失与胰腺癌的发生、发展及较差的生物学特性相关。     

膀胱癌和肾癌组织中RASSF1A基因的甲基化改变

目的研究RASSF1A基因启动子的甲基化状态及在膀胱癌和肾癌发生中的作用。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测45例手术切除的膀胱癌组织和相应癌旁正常组织标本、9例电切膀胱癌组织、3例非肿瘤患者正常膀胱组织、12例肾癌组织和相应癌旁正常组织标本中RASSF1A基因的甲基化情况。结果膀胱癌组织中RASSF1A基因异常甲基化55.6%(30/54),其中手术切除组57.8%(26/45),电切癌组织异常甲基化4例,癌旁正常组织基因异常甲基化1例;肾癌组织中基因异常甲基化66.7%(8/12),相应癌旁正常组织中未发现基因甲基化。3例正常膀胱组织标本中未发现基因异常甲基化。膀胱癌组织中RASSF1A基因甲基化率有随组织分期升高的趋势,但与临床病理参数间无明显相关性。结论膀胱癌和肾癌组织中RASSF1A基因启动子高度甲基化,表明该基因甲基化可能与2种肿瘤的发生相关。     

RASSF1A基因在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤抑制基因RASSF1A在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤的生物学行为之间的关系。方法用RT-RCR方法检测a）骨肉瘤MG-63细胞中RASSF1A基因的表达;b）30例骨肉瘤组织、10例骨软骨瘤组织及10例正常骨组织中RASSF1A基因的表达。结果a）骨肉瘤MG-63细胞中未发现RASSF1A基因表达;b）30例骨肉瘤组织中RASSF1A基因缺失率为43.33%,对照组骨软骨瘤中表达率为100%,正常骨组织中表达率为100%。RASSF1A基因的表达与肿瘤的Enneking分期及是否发生远处转移相关（P〈0.05）,而与患者的年龄、性别、肿瘤的部位及大小、Price组织学分级及是否侵犯软组织无关（P〉0.05）。结论RASSF1A基因可能在骨肉瘤的发生发展中起重要作用,有可能为骨肉瘤的基因治疗提供新的靶点。     

RASSF1A基因在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的观察人肝癌组织RASSF1A的表达情况。方法应用半定量反转录聚合酶联反应技术检测62例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中RASSF1A的表达情况。结果69．4％（43/62）的肝癌组织中RASSF1A表达缺失，而癌旁组织中仅30．6％（19／62）该基因表达缺失，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论中晚期肝癌中RASSF1A表达处于失活状态，其可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现、早期诊断以及预后的判断。     

miR-124a基因甲基化状态在人胃癌组织中的作用

目的探讨人胃癌组织中hsa-miR-124a基因启动子区的DNA甲基化状态与Rb和CDK6蛋白表达及临床病理因素的关系。方法用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测手术切除的30例胃癌及相应癌旁组织的hsa-miR-124aDNA甲基化状态：采用免疫组织化学染色研究Rb和CDK6蛋白在胃癌组织中的表达情况。结果胃癌组织中hsa-miR-124a总体甲基化率为73．3％（22／30）,明显高于癌旁组织的10．0％（3／30）（P〈0．05）,其甲基化状态与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、侵犯程度等临床病理因素有关（P〈0．01）。hsa-miR-124a甲基化与Rb蛋白和CDK6蛋白表达之间呈正相关（P〈0．05）。结论胃癌组织中hsa-miR-124a处于高甲基化状态,这种高甲基化可能通过增强Rh及CDK6蛋白的表达来促进胃癌的恶性增殖。     

基因启动区异常甲基化导致肝癌中RASSF1A基因外失活的研究

目的观察肝癌组织中的抑癌基因RASSF1A的表达情况和由于启动区异常甲基化导致其基因外失活的状况，并分析DNA异常甲基化与肝癌临床相关因素之间的关系。方法利用RT—PCR和MS-PCR的方法，结合DNA测序和Taq I酶切消化法，分析了24例肝癌标本、4株肝癌细胞株（SMMC7721、HepG2、BEL7402和BEL7703）中RASSF1A基因的表达情况，以及其基因启动区异常甲基化的情况。采用甲基化抑制剂5＇-Aza—CdR处理肝癌细胞株，观察RASSF1A重新表达的情况。结果66．7％的肝癌组织未表达RASSF1A；4株肝癌细胞株中仅SMMC7721检测到RASSF1A的表达。83．3％的肝癌组织及4株肝癌细胞株都发生了异常甲基化，而正常肝组织和正常肝细胞株（L02）中却未发现甲基化。甲基化与肝硬化、乙肝表面抗原、肿瘤分化程度及血管浸润和远处转移有相关性。原来RASSF1A表达失活的3株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5＇-Aza—CdR处理后，又重新恢复了表达。结论基因转录启动区的异常甲基化是导致肝癌中RASSF1A表达失活的主要原因。检测RASSF1A启动区异常甲基化可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现和早期诊断，以及预后的判断。     

RASSF1A基因在肺癌中的表达及其意义

目的 观察人肺癌组织中RASSF1A的表达.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测56例进展期肺癌患者肺癌组织及其癌旁组织中RASSF1A的表达.结果 38例肺癌患者的癌组织中有RASS1A基因表达的缺失或失活,占67.85%(38/56);而仅18例肺癌患者的癌旁组织中有RASS1A基因表达的缺失或失活,占32.14%(18/56);两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 进展期肺癌患者中存在RASSF1A基因表达的缺失或失活,它可作为肺癌的早期诊断和预后判断的参考指标.     

SENP1和HER-2在胃癌组织中的表达及意义

目的：探讨胃癌组织中去类泛素化蛋白酶1（SENPl）的表达与临床病理因素的关系,及其与人表皮生长因子受体-2（HER-2）的表达间的相互关系。方法：采用免疫组织化学染色EnVision方法以兔抗人SENPl抗体和鼠抗人HER-2抗体为一抗,检测100例胃癌组织（胃癌组）和50例胃良性病变组织（对照组）中SENPl和HER-2蛋白的表达。结果：SENPl蛋白在胃癌组织中的阳性率为75％（75／100）,对照组阳性率为36％（18／50）,二者差异有统计学意义（P〈0．01）;SENP1的表达与胃癌的淋巴结转移、浸润深度、肿瘤分化程度和临床分期有关（P〈O．05）。HER-2蛋白在胃癌组织中的阳性率为45％（45／100）,对照组阳性率为38％（19／50）,二者差异有统计学意义（P〈0．01）;HER-2的表达与胃癌的淋巴结转移、浸润深度和临床分期有关（P〈0．05）。SENP1蛋白和HER-2蛋白的表达呈正相关（r=O．208,P〈O05）。结论：SENP1、HER-2在胃癌组织中存在着过度表达,它们参与了胃癌的演进;SENP1调节HER-2的表达,在胃癌发生发展中发挥重要作用;SENP1、HER-2的过度表达与胃癌的发生发展有关,可能成为预测胃癌侵袭、转移及预后的重要指标。     

Ras相关区域家族1A基因异常甲基化在前列腺癌中的研究进展

Ras相关区域家族1A(RASSF1A)是从3p21.3区域克隆出来的新型候选抑癌基因。启动子区域CpG岛的异常甲基化可以导致RASSF1A失活,对包括前列腺癌在内多种实体瘤的发生、发展中起着重要作用。对大量临床标本中RASSF1A基因异常甲基化及其与相应病例临床特点之间的关系分析表明,RASSF1A甲基化检测有望成为前列腺癌早期诊断和预后判断的重要辅助手段,而丰富的实验研究则提示甲基化抑制剂有望成为前列腺癌治疗的新手段。     

NORE1B、RASSF1A mRNA在肝细胞癌中的表达及其相关性

目的 探讨肝细胞癌(HCC)组织中NORE1B、RASSF1A的转录表达及其临床意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析41例HCC及对应癌旁组织中NORE1B、RASSF1AmRNA的表达情况,以及与临床病理特征的关系,并探讨两者表达的相关性.结果 NORE1B mR-NA在HCC中的缺失率为63.4%,癌旁组织中为34.1%(P<0.01).RASSF1A mRNA在HCC中的缺失率为75.6%,癌旁组织中为39.0%(P<0.05).两者的差异表达与乙肝、肝硬化以及Edmondson分级均存在相关性(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小、术前肝功能Child-Push分级和血清AFP检测值均无显著相关.NORE1B与RASSF1A mRNA在HCC中的表达呈正相关性(P<0.05).结论 NOBE1B与RASSF1A在HCC的发生发展中可能存在协同作用.