人血管内皮生长因子-C基因的体外重组和表达

目的体外重组人血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因,检验其在细胞中的表达。方法以RT-PCR法从人真皮成纤维细胞中克隆VEGF-C基因功能片断的cDNA,制备pcDNA3.1( )-VEGF-C质粒载体,通过Fugene 6介导转染人成纤维细胞及COS7细胞。RT-PCR及免疫组化法检测VEGF-C基因表达情况。结果从成纤维细胞中克隆得到1 053 bp的VEGF-C基因cDNA,碱基序列与已知的人VEGF-C基因cDNA完全一致。重组pcDNA3.1( )-VEGF-C质粒所携带的目的基因VEGF-C在细胞中有强表达。结论成功重组了一个pcDNA3.1( )-人VEGF-C质粒,为进一步研究淋巴水肿的基因治疗提供了物质基础。     

人血管内皮生长因子-C基因的体外重组和表达

目的体外重组人血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因,检验其在细胞中的表达.方法以RT-PCR法从人真皮成纤维细胞中克隆VEGF-C基因功能片断的cDNA,制备pcDNA3.1(+)-VEGF-C质粒载体,通过Fugene 6介导转染人成纤维细胞及COS7细胞.RT-PCR及免疫组化法检测VEGF-C基因表达情况.结果从成纤维细胞中克隆得到1 053 bp的VEGF-C基因cDNA,碱基序列与已知的人VEGF-C基因cDNA完全一致.重组pcDNA3.1(+)-VEGF-C质粒所携带的目的基因VEGF-C在细胞中有强表达.结论成功重组了一个pcDNA3.1(+)-人VEGF-C质粒,为进一步研究淋巴水肿的基因治疗提供了物质基础.     

大鼠血管内皮生长因子shRNA表达质粒的构建及鉴定

目的:构建大鼠血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,为利用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)从转录后水平抑制角膜新生血管的研究做准备.方法:用DNA重组技术根据大鼠VEGF mRNA序列设计并合成3条shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆进入载体pSihncer2.0 U6中,进行酶切鉴定和测序.结果:酶切证明构建的shRNA序列已插入载体,经测序证明与设计的相同,获得大鼠VEGF shRNA表达质粒.结论:成功构建了3条大鼠VEGF shRNA真核表达质粒,为靶向VEGF的RNAi抑制角膜新生血管奠定了基础.     

血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在乳腺癌的发生及判断预后方面的意义。方法 应用Ｓ－Ｐ免疫组化染色法检测ＶＥＧＦ在乳腺良恶性病变中的表达。结果 乳腺癌ＶＥＧＦ表达阳性率（７２．５％）高于乳腺良性病变（２／８）,二者间差异具有显著性（Ｐ〈０．０５）。４０例乳腺癌中,淋巴结转移组ＶＥＧＦ阳性表达（１９／２１）高于淋巴结转移组（１２／１９）,二者差异具有显著性（Ｐ〈０．０５）。结论 ＶＥＧＦ在乳腺癌     

人血管内皮生长因子的克隆表达及活性鉴定

[目的]克隆人血管内皮生长因子165基因,并测定蛋白质的表达及鉴定其活性。[方法]用PCR法从人心脏cDNA文库中钓取目的基因VEGF165,插入质粒PCU19中并测序鉴定,构建真核表达重组质粒AdtrackCMV-VEGF165转染293细胞,用RNA斑点杂交和Western blot方法检测VEGF165基因表达,并通过Miles试验检测VEGF156蛋白活性。[结果]PCR产物为582bp,测序结果表明其序列正确,在RNA和蛋白水平检测到VEGF165基因表达,VEGF165蛋白相对分子质量为22ku,具有生物学活性。[结论]成功地克隆了有表达生物学活性的VEGF165基因。     

人血管内皮生长因子基因的克隆及真核表达质粒的构建

目的：克隆人血管内皮生长因子基因VEGF165片段。构建pcDNA3／VEGF165真核表达质粒。方法：采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人肝癌细胞株SMMC-7721中扩增出血管内皮生长因子VEGF165基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3真核表达载体上,构建成pcDNA3／VEGF165重组质粒,分别用PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定。结果：经PCR扩增、酶切电泳分析和DNA测序证实,本实验构建的重组质粒目的基因片段为人VEGF165cDNA。结论：本实验成功地克隆了VEGF165基因并构建了其真核表达质粒。为进一步研究用VEGF基因转染的方法来恢复或增强放疗后组织的血管生成能力奠定了基础。     

血管内皮生长因子基因重组腺病毒载体的构建

目的 :构建携带人血管内皮生长因子基因的重组腺病毒载体。方法 :将人源性的 VEGF1 6 5c DNA正向插入到穿梭质粒 p HCMVSP1A的 CMV启动子之下 ,构建重组质粒 ,通过脂质体与 p JM17共转染 2 93细胞 ,经同源重组获得携带人 VEGF1 6 5基因的重组腺病毒 ,通过 PCR扩增法鉴定所构建的腺病毒 ,扩增、纯化并测定滴度。结果 :人VEGF1 6 5c DNA成功地正向插入到 p HCMVSP1A载体中 ,以重组病毒基因组 DNA为模板 ,同时扩增出 5 76 bp的VEGF1 6 5c DNA基因片段和 86 0 bp的腺病毒骨架基因片段 ,证实了所构建病毒的正确性 ,病毒滴度为 2 .5× 10 9pfu/ m l。结论 :成功构建了表达人 VEGF1 6 5基因重组腺病毒载体 ,使 VEGF基因的高效转染成为可能     

血管内皮生长因子在胃癌中的表达及其意义

血管内皮生长因子在胃癌中的表达及其意义陶厚权秦兰芳林言箴尹浩然研究表明［１］，由肿瘤细胞分泌和激活的某些内皮生长因子如碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）、血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）等在肿瘤新生血管形成中有重要作用。其...     

大鼠颌下腺血管内皮生长因子cDNA的转移及表达

目的 探讨以颌下腺为靶器官，进行血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗后，涎液中VEGF含量变化。方法 构建了VEGF基因表达的真核细胞表达载体，以阳离子脂质体为介质，向大鼠颌下腺转染外源性的VEGF基因，应用RT—PCR技术观察VEGF基因的表达，ELISA方法检测涎液中VEGF的含量变化。结果 转pBKCMV-VEGFl2l基因后第1天，大鼠颌下腺内VEGF的表达及涎液中VEGF的含量即开始增高，术后2～3d达到高峰，之后逐渐下降，但高水平表达持续5d左右，与同期对照组相比，二者差别明显。结论 以颌下腺为靶器官，阳离子脂质体为载体进行VEGF基因转染，可使外源基因在颌下腺内稳定持续表达，改变了涎液中细胞因子的含量，为临床上促进口内伤口的愈合提供了新的途径和依据。     

脑缺血及高压氧治疗中血管内皮生长因子mRNA表达的研究

目的 从基因水平研究高压氧(HBO)治疗对VEGFmRNA表达的影响.方法 77只小鼠随机分为单纯缺血再灌注组、缺血再灌注 高压氧治疗组、假手术组.夹闭小鼠双侧颈总动脉,建立脑缺血再灌注动物模型.用RTPCR方法检测各组织VEGF164 mRNA的表达.结果 正常海马组织存在VEGF164 mRNA的表达.缺血再灌注3 h时海马组织VEGF164 mRNA的表达与对照组相比表达升高(P＜0.05);48 h达高峰(P＜0.05);72 h表达下降(P＜0.05).但在高压氧治疗后VEGF164 mRNA的表达均低于相同时间点的缺血再灌注组(P＜0.05);72h表达升高(P＜0.05).结论 HBO可通过增加VEGF164 mRNA的表达,诱导缺血半暗带及周边缺血脑组织血管生成,改善脑缺血缺氧.     

血管内皮生长因子在脊髓损伤后的表达及其意义

目的　研究大鼠SCI后VEGF在脊髓神经细胞的表达情况。方法　SD大鼠 32只随机分为椎板切除组和脊髓损伤组 ,采用Allen法从背侧致伤T10脊髓 ,于术后 8h ,1,2 ,3d ,1,2 ,3周切取脊髓 ,S -P法免疫组化染色 ,观察VECGF的分布 ,对神经细胞的阳性表达率进行定量分析。结果　对照组脊髓中 ,无VEGP的表达 ,SCI后 8h出现VEGF强表达 ,1～ 3d达到高峰 ,并持续 1周。 2 ,3周后 ,VEGF表达率大幅度下降 (P<0 .0 1) ,前角大运动神经元较其他神经细胞阳性表达率明显增高 (P <0 .0 1) ,背侧白质中胶质细胞较灰质和腹侧白质胶质细胞阳性表达率高 (P <0 .0 1)。结论　大鼠SCI早期 ,脊髓损伤区周围神经细胞可见不同程度VEGF表达     

血管内皮生长因子在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

①目的了解血管内皮生长因子(VEGF)在宫颈癌组织中的表达及其临床意义.②方法应用LSAB免疫组织化学技术,检测42例宫颈癌及13例正常宫颈组织标本中VEGF的表达.③结果宫颈癌组织中VEGF的阳性表达率为54.8%(23/42),而正常宫颈组织中VEGF均为阴性表达;肿瘤直径≥4cm或间质浸润≥1/2的宫颈癌病人VEGF阳性表达率明显高于肿瘤直径＜4cm或间质浸润＜1/2者(X2＝4.52、4.00,P＜0.05).有宫颈旁浸润或盆腔淋巴结转移者VEGF的阳性表达率显著高于无宫颈旁浸润和淋巴结转移者(X2＝4.48、7.27,P＜0.05).④结论 VEGF表达与宫颈癌的局部浸润和转移有关,可作为判断宫颈癌生物学行为的指标之一.     

胃癌组织血管内皮生长因子的表达及临床意义

用抗VEGF单抗SLAB免疫组化法研究胃癌手术标本血管由皮生长因子（VEGF）的表达。结果41例中，总阳性率56．1％。淋巴转移阳性组高于阴性组（P＜0．05），浆膜侵犯组高于未侵犯组（P＜0．05），且按TNM分期，VEGF阳性率有逐级增高的趋势。说明VEGF可能与胃癌浸润与转移密切相关。术后抗血管形成治疗对患者有益。     

非小细胞肺癌中血管内皮生长因子表达的研究

目的　研究非小细胞肺癌 (NSCLC)的发生、发展、预后与血管内皮生长因子 (VEGF)表达之间的关系。　方法　 97例NSCLC手术标本行VEGFmRNA逆转录 ,PCR扩增 ,电泳检测。　结果　VEGF表达总阳性率为 66.0 % ,腺癌 (3 4例 ) ,鳞癌 (5 1例 )和鳞腺癌 (1 2例 )间的阳性率差异无显著统计学意义 (χ2 =0 .5 ,P >0 .0 5 ) ;TNM分期与VEGF表达有关 ,Ⅰ期患者的VEGF阳性率低 ,Ⅲ期患者较高(χ2 =2 2 .78,P <0 .0 1 ) ;淋巴结转移与VEGFmRNA表达密切相关 (χ2 =40 .9,P <0 .0 1 ) ;VEGF表达阳性者生存率明显减低。　结论　VEGF的表达与NSCLC的进展密切相关 ;VEGF表达阳性者容易发生淋巴结转移 ,手术后易复发 ,预后较差。     

构建人血管内皮生长因子cDNA逆转录病毒表达质粒

目的 :构建人血管内皮生长因子 ( VEGF) c DNA逆转录病毒表达质粒。方法 :采用 PCR方法从 pc DNA- VEGF165质粒中扩增 VEGF165基因 ,在序列两端分别引入 Eco R 和 Bam H 限制性内切酶识别位点 ,并克隆到逆转录病毒表达载体 p LXSN质粒中。结果 :酶切鉴定、PCR扩增以及DNA序列分析表明已经将 VEGF165基因全长序列克隆到逆转录病毒表达载体 p LXSN质粒中 ,获得了 p LXSN- VEGF165重组质粒。结论 :成功地构建了人 VEGF c DNA逆转录病毒表达质粒 ,为进一步临床应用 VEGF c DNA转基因治疗奠定了基础     

鼻息肉组织中肝细胞生长因子及血管内皮生长因子的表达

目的:检测鼻息肉组织中肝细胞生长因子(HGF)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法:采用免疫组织化学方法分别检测30例鼻息肉标本和20例正常下鼻甲黏膜标本中HGF与VEGF的表达.结果:鼻息肉组织中可见大量嗜酸性粒细胞浸润.鼻息肉组织中HGF和VEGF蛋白的阳性表达率分别为83.3%和76.7%,均高于正常对照组(30.0%和10.0%,P<0.05),且在鼻息肉血管内皮细胞及间质浸润的炎症细胞中2者的表达呈正相关(r=0.630,P<0.05;r=0.514,P<0.05).结论:鼻息肉组织中HGF和VEGF的表达增强,提示2者可能协同参与鼻息肉的形成.     

内皮抑素及血管内皮生长因子在脑膜瘤中的表达及意义

目的:探讨内皮抑素及血管内皮生长因子在脑膜瘤中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学方法检测52例脑膜瘤和5例正常脑膜组织中内皮抑素(ES)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达。结果:脑膜瘤组织中ES与VEGF的阳性表达率为77%和79%,两者表达具有相关性。结论:内皮抑素和VEGF含量的变化可能与脑膜瘤的发生、发展密切相关。     

抗人血管内皮生长因子单链抗体的构建和表达及其活性鉴定

目的 对能与人血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）特异结合,并对体内有抑瘤活性的单克隆抗体（Ｅ１１）进行基因工程改造,构建小分子的单链抗体（ＳｃＦｖ）,为临床应用奠定基础。方法 通过逆转录及多聚酶链式反应,扩增并克隆Ｅ１１的可变区基因片段。用一编码亲水肽接头的ＤＮＡ片段将Ｅ１１轻、重链可变区基因连接,克建表达载体ＰＥＴ－１５ＹＶ,并导入大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行表达。表达产物经变性及复性后,用免疫组     

人血管内皮细胞生长因子165基因真核表达载体的构建及其在大肠杆菌的表达

目的　获得人血管内皮生长因子 (hVEGF165)cDNA ,构建真核表达载体 ,并研究其在大肠杆菌中的表达情况。方法　采用PCR方法 ,从HL6 0细胞中扩增出hVEGF165cDNA ,将其克隆至 pcDNA3 真核表达载体上 ,构建成为 pCD hVEGF165重组质粒。将重组质粒转染感受态的大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达 ,用Westernblot检测表达产物。结果　经酶切鉴定及基因测序证实hVEGF165cDNA基因克隆成功 ,并建立了高效表达的 pCD hVEGF165重组质粒。Westernblot检测表明 ,组建了具有高效表达hVEGF165的大肠杆菌菌株。结论　成功地克隆和表达出了hVEGF165基因 ,为进一步建立VEGF转基因动物模型 ,研究其在视网膜新生血管性疾病中的应用奠定了基础