流式细胞仪检测肾病综合征患儿血小板活化程度

近年来,越来越多的研究表明,血小板在肾小球疾病的发生及发展中起重要作用。我们采用流式细胞术,以单克隆抗体为分子探针,检测了３８例肾病综合征（ＮＳ）患儿血小板α颗粒膜蛋白（ＣＤ６２Ｐ）、溶酶体膜蛋白（ＣＤ６３）及凝血酶敏感蛋白（ＴＳＰ）的表达水平,以探讨ＮＳ患儿血小板活化程度及其临床意义。对象：原发性肾病综合征患儿共３８例,其诊断均符合１９８１年全国小儿肾小球疾病科研协作组关于ＮＳ诊断标准的修订方案,其中男２５例,女１３例,年龄１．５岁～１２岁,病程１周～６年。单纯性肾病（ＳＮＳ）２６例,肾炎性…     

流式细胞术检测儿童急性白血病血小板活化功能的研究

建立微量全血血小板活化功能流式细胞术 (FCM)检测方法 ,探讨儿童急性白血病 (AL)不同阶段血小板活化状态及活化功能的变化。利用FCM检测微量全血中血小板活化特异性单克隆抗体CD62P、PAC 1在AL初论未治 ( 2 1例 )、诱导缓解后(CR1、14例 )、及持续完全缓解 (CCR) 2年以上 ( 6例 )患儿血小板表面表达百分比和ADP激活后表达变化 ,并以 16例外科畸形择期手术前患儿作为对照组。结果 ,AL初诊未治和CR1时ADP激活前后血小板CD62P表达均高于对照组 (P <0 0 5 ) ,AL初诊未治ADP激活后血小板PAC 1表达低于对照组 (P <0 0 5 ) ,CCR 2年以上者ADP激活后血小板CD62P 表达高于对照组 (P <0 0 5 )。结果表明 :AL初诊未治时体内血小板活化增强 ,ADP激活后血小板活化功能降低 ;AL缓解后ADP激后ADP激活后血小板活化功能恢复 ,但体内血小板活化状态仍高于对照组 ,CCR 2年以上者ADP激活后血小板活化功能增强。提示血小板功能异常在AL初诊未治时出血的发生中起一定作用。AL时伴有血小板功能异常 ,化疗后血小板活化功能有所恢复。本研究为AL时血小板功能的研究开辟了一种可靠简捷的方法。     

流式细胞术检测过敏性紫癜患儿血小板活化状态的研究

为了探讨过敏性紫癜患儿血小板活化程度及其临床意义；采用流式细胞术以单克隆抗体为分子探针，检测了30例过敏性紫癜患儿血小板a-颗粒膜蛋白（CD62P），溶酶体完整膜蛋白（CD63），CD31，CD41及凝血酶敏感蛋白（TSP）的表达水平。结果：过敏性紫癜患儿急性期CD62P，CD63，CD31及TSP表达水平明显高于缓解期和对照组，差异有显著意义，CD41表达水平无明显改变，差异无显著意义；紫癜性肾炎患儿CD62P，CD63，及CD41表达水平与未合并肾脏损害的过敏性紫癜患儿比较差异无显著意义。而CD31及TSP表达水平比较差异有显著意义。提示血小板活化是过敏性紫癜发生和发展的一个重要环节，用流式细胞术检测血小板活化标志，可判断过敏性紫癜患儿血小板活化程度及其高凝状态，并可作为监测病情，估计预后及指导治疗的指标。     

肾病综合征血小板聚集功能多项指标检测

本文检测２６例肾病综合征（ＮＳ）小儿在患病初期血小板聚集功能多项指标，同时检测１５例健康小儿作为正常对照。结果显示５分钟末的聚集量［ＰＡＧ（５）］、最大聚集量［ＰＡＧ（ｍ）］明显增高，解聚率（Ｉ）明显降低，达到最大聚集波时间（Ｔｍ）明显延长。说明ＮＳ时血小板聚集性增强，解聚率降低，本文提示；血小板聚集性增强在ＮＳ的血栓形成中起一定作用。     

血小板自身抗体的流式细胞术检测与意义

目前血小板自身抗体的测定方法较为复杂,同时需要较多的血量,因此给儿科临床应用带来一定困难。本文拟应用流式细胞术建立一种简便、快捷、敏感的检测血小板相关抗体的方法。应用荧光素化的羊抗人Ｆ(ａｂ)２段ＩｇＧ抗体结合血小板表面的抗体,应用荧光素化的羊抗鼠ＩｇＧ抗体作为阴性对照。即以直接法测定血小板表面结合的ＩｇＧ。应用流式细胞术测定血小板的平均荧光强度。血小板荧光强度(ＭＦＩ)反映血小板表面ＰＡＩｇＧ的水平。测定正常人和特发性血小板减少性紫癜患儿的血小板平均荧光强度。结果显示:正常对照组的血小板平均荧光强度(ＭＦＩ)为２３．６７±９．１０(道数)。３１例ＩＴＰ组的ＭＦＩ为１０３．６３±３１．４１(道数)。ＩＴＰ病人的血小板荧光阳性率为９０%。治疗有效的病人,随血小板计数的上升,血小板荧光强度逐渐下降。因此,流式细胞术测定血小板抗体是一种快速、简便灵敏的ＰＡＩｇＧ检测方法,可用于免疫性血小板减少性紫癜的辅助诊断和疗效观察。     

小儿肾病综合征抗人活化血小板单克隆抗体SZ51的变化

有关应用活化血小板单克隆抗体(单抗)监测肾病综合征(NS)的高凝状态,国内报道不多,本文应用抗人活化血小板单抗SZ-51对22例NS发作期、缓解期、完全缓解期及复发期血中活化血小板活性的变化进行了观察,现报道如下。方法与结果一、对象所有病例均为1984年4月～1991年12月在木院住院及肾脏专科门诊的患儿共24例。均符合1979年儿科肾脏疾病科研协作组所制定的     

儿童特发性血小板减少性紫癜血小板功能研究

目的研究儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)血小板体内活化状态及体外活化功能,探讨血小板在ITP发病机制中的作用。方法流式细胞术(FCM)检测体内和体外5’-二磷酸腺苷(ADP)刺激后血小板表面活化分子GPIIb/IIIa和CD62P分子的表达,同时检测CD62P阳性血小板该分子的平均荧光强度(MCF)。结果ITP组与对照组体内活化血小板百分比有显著性差异(P=0.0001),ITP组显著低于对照组;两组CD62P分子的MCF无显著性差异。体外刺激血小板活化后,两组活化血小板百分比有显著性差异(P=0.0077),ITP组低于对照组;两组CD62P分子的MCF有显著性差异(P=0.0059),ITP组低于对照组。结论ITP患儿体内血小板处于低活化状态,提示其出血原因不仅是血小板数量减少,同时存在血小板功能减低,低活化的原因很可能是血小板自身功能障碍。     

肾病综合征甲状腺功能的研究

目的　探讨肾病综合征 (NS)患儿发作期和缓解期的甲状腺功能改变。方法　用放免法对 1 6例原发性NS在发作期和缓解期行血、尿T3、T4 、FT3、FT4 及血TSH水平测定。结果　发作期血清T3、T4 、FT3、FT4均低于正常 ,较缓解期及对照组显著下降 (P <0 .0 0 1 ) ,尿T3、T4 、FT3、FT4 较缓解期和对照组显著增多 (P <0 .0 0 0 1 )。结论　NS患儿发作期甲状腺功能低下 ,缓解后恢复正常 ,其主要原因可能是尿中大量蛋白丢失的结果     

Serum neopterin levels in children with primary nephrotic syndrome

AIM: To assess the changes that occurs in serum neopterin levels in children with primary nephrotic syndrome. METHODS: Serum neopterin levels were measured by ELISA in 38 children with active primary nephrotic syndrome (group I) and 17 children with primary nephrotic syndrome in remission (group II) and 20 healthy controls. All patients had normal creatinine clearance. Among group I, 28 patients were steroid-sensitive while 10 patients were steroid-resistant. RESULTS: Serum neopterin levels were significantly elevated in group I patients (median = 30, 7.2-43.2 nmol/l) compared with group II (median = 6, 2-10 nmol/l, P<0.001) and controls (median = 3.2, range: 0.4-1.8 nmol/l, P<0.001). Group II patients had similar neopterin levels compared with controls (P=0.71). There was a significant positive correlation between serum neopterin levels and the degree of proteinuria in group I patients (r = 0.4, P=0.01). No significant differences in serum neopterin levels were noted between steroid-sensitive and steroid-resistant patients (P=0.4). CONCLUSION: Serum neopterin could be used as a marker of the activity of primary nephrotic syndrome but it could not be used to differentiate between steroid-sensitive and steroid-resistant patients.     

儿童原发性肾病综合征并发血栓栓塞危险因素分析

目的探讨儿童原发性肾病综合征并发血栓栓塞的危险因素。方法回顾分析238例原发性肾病综合征患儿的临床资料,根据有无发生血栓栓塞分为栓塞组和非栓塞组,进行单因素及logistic回归分析。结果 238例患儿中,32例并发血栓栓塞,发生率为13.44%。单因素分析显示,栓塞组和非栓塞组之间,感染、利尿剂使用、水肿程度、白细胞计数、IgG、补体C3、总蛋白、白蛋白、尿素氮、血浆纤维蛋白原、D-二聚体、抗凝血酶Ⅲ、24 h尿蛋白定量的差异有统计学意义(P0.05);多因素分析显示,D-二聚体和24 h尿蛋白定量是儿童原发性肾病综合征并发血栓栓塞的独立危险因素。结论 D-二聚体浓度增高和24 h尿蛋白定量高是儿童原发性肾病综合征并发血栓栓塞的危险因素。     

儿童原发性肾病综合征尿蛋白质组样品预处理方法的研究

目的：优化儿童原发性肾病综合征尿蛋白质组样品的预处理方法。方法：取原发性肾病综合征儿童尿液,采用称量、SDS-PAGE及双向电泳（2-DE）等方法比较不同pH、冷丙酮沉淀不同时间等条件下所得到的蛋白质,优化蛋白提取的条件。结果：pH 2.7条件下所得到的蛋白种类最多;冷丙酮沉淀0.5 h获得的蛋白量明显少于1 h及2 h的蛋白量（P<0.05）,而冷丙酮沉淀 1 h 和2 h获得的蛋白量没有显著性差异。pH 2.7条件下冷丙酮沉淀1 h为样品预处理的最佳条件,可获得满意的2-DE分离效果。结论：pH 2.7条件下,冷丙酮沉淀1 h为尿蛋白质组样品预处理的最佳条件。     

P300在肾病综合征糖皮质激素耐药中的作用

目的观察原发性肾病综合征(PNS)激素敏感与激素耐药组P300表达的差异,探讨P300在肾病综合征糖皮质激素耐药中的作用,为揭示PNS激素耐药发生机制提供理论依据。方法采用免疫组化法检测正常对照组肾组织及40例PNS患儿(激素敏感组20例,激素耐药组20例)肾活检组织中P300表达差异。结果正常肾组织仅偶见肾小管上皮细胞P300呈阳性表达;PNS患儿肾组织均存在不同程度P300表达,主要分布于肾小管上皮细胞,肾小球系膜区表达微弱或未表达,其他肾固有细胞未见P300表达;激素敏感组肾小管上皮细胞P300表达较激素耐药组明显增多(P<0.01),P300表达密集部位的肾小管形态正常,结构完整;肾小管上皮细胞P300阳性表达与肾小管间质病理积分呈负相关(P<0.01)。结论P300蛋白主要通过肾小管上皮细胞促进GC效应发挥;PNS患儿肾小管上皮细胞P300表达下降,可能是导致GC耐药及增加GC对肾小管上皮细胞损伤的机制之一。     

GRβ在原发性肾病综合征患儿糖皮质激素耐药中的作用

目的　研究原发性肾病综合征患儿PBMCsGRβ表达水平与肾组织中原位GRβ表达水平的关系及其在PNS患儿糖皮质激素耐药中的作用。方法　40例原发性肾病综合征患儿分成激素敏感组与激素耐药组,每组各 20例,应用免疫组织化学技术,对其肾活检组织与PBMCs中GRα、GRβ进行检测,应用半定量评分法对各组肾病患儿肾小球与肾小管间质病理改变进行半定量分析。结果　激素耐药组肾小球病理积分与肾小管病理积分高于激素敏感组 (P均 <0.01);激素敏感组与激素耐药组原发性肾病综合征患儿肾活检组织GRα与PBMCs中GRα表达低于正常对照组 (P均 <0.01);激素敏感组与激素耐药组原发性肾病综合征患儿肾活检组织GRβ与PBMCs中GRβ表达高于正常对照组(P均<0.01);中度损害组肾活检组织与PBMCsGRβ表达高于轻度损害组,重度损害组高于中度损害组(P均<0.01);相关分析表明:原发性肾病综合征患儿PBMCs和肾固有细胞GRβ表达明显正相关(r=0. 651; P<0.01), PBMCs和肾固有细胞中GRβ表达与肾脏病理积分正相关(r=0.579, 0.623,P均<0.01)。结论　原发性肾病综合征患儿肾局部、PBMCs中GRβ过表达与PNS患儿糖皮质激素耐药发生有关,与PBMCs和肾局部GRα数目的多少无关,过表达的GRβ可能是通过拮抗GRα的活性影响激素效应的发挥。     

原发性肾病综合征的诊断和治疗

一、定义肾病综合征(NS)是一组由多种病因引起的肾小球基底膜通透性增加,导致大量蛋白从尿中丢失的一组临床症侯群。现多数学者认为NS的发病是免疫学发病机制。本病临床特点是严重水肿、大量蛋白尿、低清蛋白血症、高脂血症。常并血液高凝状态甚至可形成血栓,且易并感染。二、临床和病理分型(一)临床分型:根据2 0 0 0年11月珠海会议的讨论[1] ,对小儿肾小球疾病临床分类、诊断和治疗作修订。原发性NS分为以下2种临床类型:1.单纯性NS :符合四大临床特点(高度水肿、大量蛋白尿、低清蛋白血症、高胆固醇血症) ,即被称为“三高一低”。(1)高…     

糖皮质激素对肾病综合征患儿成骨细胞功能的影响

目的　糖皮质激素是治疗肾病综合征的首选药物。但糖皮质激素可抑制成骨细胞功能,导致骨质疏松。该研究通过检测成骨细胞不同分化阶段的生化指标:I型前胶原羧基端前肽(PICP)、骨钙素(BGP)和总碱性磷酸酶(AKP),探讨糖皮质激素对肾病综合征(NS)患儿成骨细胞功能的影响。方法　测定正常对照组(n=30),未治NS患儿(n=30)和激素治疗后NS患儿(每日泼尼松2mg/kg治疗4 ~8周,n=30)血清PICP、BGP及AKP水平。结果　未治NS患儿血清PICP165 ±56μg/L,BGP15 ±9ng/L水平明显低于正常对照组205 ±81μg/L, 19 ±12ng/L(均P<0. 05),而血清总AKP198 ±71U/L与正常对照组202 ±46U/L比较差异无显著性。激素治疗后NS患儿血清PICP85 ±56μg/L、BGP8±5ng/L、AKP104 ±59 U/L均明显低于未治NS患儿(P<0. 01)。结论　NS患儿本身存在骨合成障碍,大剂量糖皮质激素治疗可进一步抑制NS患儿的成骨细胞合成功能。     

原发性肾病综合征患儿539例病理类型及随访

目的 分析原发性肾病综合征（PNS）患儿的病理类型、治疗及随访情况。方法 纳入2005年1月至2009年12月在湖南省儿童医院肾内科住院的诊断为PNS,进行肾脏病理学检查且随访时间≥6个月的患儿,根据年龄分为<2岁组、～5岁组、～10岁组和>10岁组,对不同年龄组肾脏病理类型、对糖皮质激素的反应、转归及随访资料进行分析。结果 共纳入539例PNS患儿,男性402例,女性137例,男女比例为2.9∶1;＜2岁组159例（29.5%）,~5岁组269例（499%）,~10岁组84例（15.6%）,＞10岁组27例（5.0%）（P＜001）。①微小病变274例（50.8%）,局灶节段性肾小球硬化79例（14.6%）,系膜增生性肾小球肾炎173例（32.1%）,膜增生性肾小球肾炎6例（1.1%）,膜性肾病4例（074%）,增生硬化性肾小球肾炎2例（0.37%）,脂蛋白肾病1例（0.18%）。不同年龄组间肾脏病理类型的分布差异有统计学意义（P＜005）。②对糖皮质激素敏感和依赖的PNS患儿以微小病变为主（分别为62.4%和69.6%）,对糖皮质激素耐药的PNS患儿以系膜增生性肾小球肾炎为主（48.4%）。③539例中239例完全缓解,75例部分缓解,61例无效,158例症状控制,尿蛋白（-）,但仍在服用泼尼松。6例患儿分别因对糖皮质激素耐药,病情不能缓解,合并严重感染或进展至终末期肾病放弃治疗而死亡。结论 儿童PNS的发病高峰年龄、肾脏病理类型以及对糖皮质激素耐药的发生率可能已发生改变,并且在不同年龄患儿间存在差异。