西罗莫司抑制急性髓系白血病细胞株Kasumi-1增殖的研究

目的探讨不同浓度西罗莫司对急性髓系白血病细胞株Kasumi-1增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法 MTT法检测西罗莫司对Kasumi-1细胞增殖的影响,流式细胞术检测西罗莫司对Kasumi-1细胞凋亡和细胞周期的变化,免疫荧光法观察西罗莫司处理前后Kasumi-1细胞核形态变化。结果不同浓度的西罗莫司均能抑制Kasumi-1细胞的增殖,促进其凋亡,并使细胞阻滞在G0/G1期。Kasumi-1细胞对西罗莫司表现为剂量依赖性,并在100 ng/mL左右达到最大效应。结论西罗莫司能够显著抑制Kasumi-1细胞增殖,并对凋亡起促进作用。     

姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的：探讨姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：取对数生长期人急性髓系白血病K562细胞,用MTT法测定细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法和Western blot分别检测Bax、BCL-2和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果：姜黄素10、20和40μmol/L组培养24 h和48 h细胞增殖抑制率均高于对照组（姜黄素0μmol/L）,且细胞增殖抑制率呈浓度-时间依赖性（r=0.879,r=0.914）。姜黄素10、20和40μmol/L组G0/G1细胞比例和细胞凋亡率均高于对照组,且呈药物浓度依赖性（r=0.856,r=0.782）。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax和Caspase-3 mRNA表达高于对照组,而BCL-2 mRNA表达低于对照组,且呈药物浓度依赖性（r=0.861,r=0.748,r=-0.817）。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax蛋白表达灰度值高于对照组,而BCL-2和Caspase-3蛋白表达灰度值低于对照组,且呈药物浓度依赖...     

白花蛇舌草总黄酮对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响

目的：探讨白花蛇舌草总黄酮（FOD）对鼻咽癌细胞株CNE1的增殖和凋亡的影响。方法：体外培养鼻咽癌细胞株CNE1,使用不同质量浓度的FOD作用24、48 h,分别使用CCK-8测定法检测细胞存活率,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡的情况。结果：FOD对鼻咽癌细胞株CNE1具有抑制增殖作用,24 h的半数抑制量（IC50）为（27.0±2.5）mg/L,48 h的IC50为（12.1±1.3）mg/L,在一定质量浓度范围内,呈剂量-效应关系和时间-效应关系。FOD可诱导CNE1细胞凋亡,存在剂量-效应关系和时间-效应关系。结论：FOD对鼻咽癌细胞株CNE1有显著的抑制增殖作用,作用机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

葛根总黄酮诱导人早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞凋亡的实验研究

本研究探讨葛根有效成分对恶性白血病可能的凋亡诱导作用及其分子机制。采用葛根总黄酮(flavonoids of puerarin,PR)处理人早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4,用MTT法检测细胞增殖抑制率;FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;实时定量PCR检测pml/rarα、bcl-2、survivin基因表达;Western blot检测JNK、p38MAPK、FasL及caspase相关酶的变化。结果发现,PR能明显抑制NB4细胞增殖,并诱导细胞凋亡。随着PR浓度的增加,pml/rarα、bcl-2及survivin基因在mRNA水平表达下调,JNK、FasL、caspase3及caspase8蛋白表达增加,与PR浓度呈正相关;PR联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)处理后上述作用更为明显。结论:PR诱导NB4细胞凋亡的机制可能与JNK相关信号分子的活化有关;PR联合ATO具有协同诱导NB4细胞凋亡的作用。     

RNA干扰对急性髓系白血病AML1-ETO融合基因表达的抑制作用

目的 应用RNA干扰技术抑制Kasumi-1细胞AML1-ETO融合基因的表达,研究随后出现的细胞增殖和细胞周期变化.方法 体外化学合成针对AML1-ETO融合基因的小干扰RNA(siRNA),并用电穿孔方法将AML1-ETO siRNA转染Kasumi-1细胞,以非特异性的siRNA转染细胞作阴性对照;电转带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的载体,流式细胞术检测其绿色荧光以确定电转效率;荧光染料实时定量PCR及Western blot检测AML1-ETO siRNA的抑制效应;并应用CCK-8实验法检测细胞增殖率;采用碘化丙锭(PI)法测定细胞周期DNA含量.结果 电转增强EGFP的转染效率可达44.5%;电转AML1-ETO siRNA可以有效抑制AML1-ETO融合基因在mRNA和蛋白水平的表达;电转AML1-ETO siRNA 72 h后细胞增殖率[(47.90±0.02)%]低于对照组[(66.90±0.08)%](P<0.05);PI染色显示AML1-ETO siRNA转染细胞72 h后,G1期细胞比例为38.3%,对照组为31.6%,而处于G2/M期细胞分别为1.8%和2.4%.结论 化学合成的特异性siRNA能抑制AML1-ETO融合基因的表达,siRNA介导的AML1-ETo融合蛋白表达减少阻滞Kasnmi-1细胞在G1期,进而抑制细胞增殖.     

Ph染色体阳性的成人急性髓系白血病

尽管Ｐｈ染色体可作为慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）的特异性标志,但Ｐｈ染色体除见于ＣＭＬ外尚可见于急性白血病、骨髓增生异常综合征、淋巴瘤和骨髓瘤等其他疾病［１］。近年来,我院共发现Ｐｈ染色体阳性成人急性髓系白血病（ＡＭＬ）７例,现报告如下。病例和方法１病...     

紫杉醇对SHI-1细胞株增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的观察紫杉醇体外抑制人白血病细胞SHI-1细胞的增殖活性及诱导细胞分化和凋亡的作用,并探讨其凋亡机制。方法以不同质量浓度（5、0．5、0．05、0．005mg／L）的紫杉醇与SHI-1细胞在体外共同培养,分别作用0、12、24、36、48h,通过细胞计数、台盼蓝染色、细胞形态学、DNA含量测定、AnnexinV／PI、细胞线粒体跨膜电位（△φm）等分析细胞的凋亡。结果紫杉醇能促进SHI-1细胞的凋亡;0．05mg,／L紫杉醇处理对SHI-1细胞株增殖抑制及诱导凋亡作用最为显著。结论紫杉醇能抑制SHI-1细胞增殖活性,诱导细胞分化,促进细胞凋亡,使SHI-1细胞停留在G2／M期。     

葛根总黄酮体外诱导Kasumi-1细胞凋亡及其分子机制

目的 探讨葛根总黄酮(puerariae radix flavones,PRF)对人急性髓系白血病细胞系Kasumi-1细胞凋亡的影响,并对其可能的分子机制进行初步研究.方法 以不同浓度PRF作用Kasumi-1细胞48 h,瑞氏染色及Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡变化,FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率,实时定量PCR技术检测AMLl -ETO融合基因表达,Western blot法检测Bcl-2、Bim及Caspase相关酶的变化.结果 PRF能有效诱导Kasumi-1细胞凋亡.以50、200及500 μg/ml的PRF分别处理细胞,其早期凋亡率依次为(14.1±0.8)％、(17.7±1.3)％及(32.4±1.4)％,较空白对照组[(7.8±0.7)％]明显增加(P＜0.05),作用呈浓度依赖性;抗凋亡蛋白Bcl-2相对表达量依次为0.85±0.05、0.62±0.07及0.43±0.05,呈下调趋势(P＜0.01);而促凋亡蛋白Bim相对表达量分别为0.21±0.06、0.39±0.04及0.75 +0.05,Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.92±0.04、1.21±0.07及1.33±0.04,Caspase-9蛋白相对表达量分别为0.35±0.05、0.53±0.03及0.69±0.07,均呈上调趋势(P＜0.01).Caspase-8蛋白表达量及AML1 -ETO融合基因表达量则无明显改变.结论 一定浓度PRF诱导Kasumi-1细胞凋亡可能与下调细胞Bcl-2、上调Bim及活化Caspase相关酶有关,与AML1 -ETO融合基因无明显相关性.     

老年急性髓系白血病

老年急性髓系白血病（AML）是AML重要组成部分,占全部AML的50％以上。老年AML与年轻患者存在明显不同,具有独自的一些特征,而这些特征往往与不良预后有关。老年AML的治疗主要包括：①支持治疗;②传统的强烈化疗;③低剂量诱导化疗（如小剂量阿糖胞苷,LD-AraC）;④非骨髓抑制性药物;⑤临床试验（尤其是一些新药的试用）;⑥干细胞移植等。但整体疗效较差,多数报道完全缓解（CR）率在50％左右,长生存率在10％左右。本期杂志介绍了老年AML的生物学特点和化疗现状、NCCN关于老年AML治疗的指南,本刊编者希望读者阅后获得益处。     

重组人血小板生成素对急性髓系白血病细胞株增殖及凋亡的影响

目的:探索重组人血小板生成素(rhTPO)对急性髓系白血病(AML)细胞株增殖和凋亡的影响.方法:采用CCK-8法检测AML细胞株(Kasumi-1、Skno-1、HEL、HL-60、THP-1)经不同浓度rhTPO(0、50、100 ng/ml)作用不同时间(24、48、72 h)后的细胞增殖率;Annexin V/...     

大鼠gp130反义寡核苷酸阻断rhIL-6对大鼠急性髓系白血病细胞系R2体外增殖的抑制效应

IL 6受体 (IL 6R) β链是分子量为 130kD的膜结合糖蛋白 (gp130 ) ,它是介导IL 6生物效应的信号转导子。我们的实验已经证实了重组人IL 6 (rhIL 6 )可作用于大鼠急性髓系白血病细胞系R2 ,rhIL 6与R2细胞表达的hIL 6R结合并与大鼠 gp130缔合而转导IL 6的信号 ,产生其生物效应。本文在体外液体培养中试验观察到 ,大鼠 gp130的反义寡核苷酸片段被摄入R2细胞后 ,对rhIL 6生物效应产生明显的影响。我们的研究结果表明 ,所合成的大鼠gp130反义寡核苷酸片段在细胞体外液体培养中可部分阻断rhIL 6对R2细胞的增殖抑制效应 ,在最适的终浓度 ,其阻断率可达 (45± 7) %。     

痰热清注射液对急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞系生物学活性的抑制作用及其机制

本研究探讨痰热清注射液体外对人急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞系生物学活性的影响及其作用机制。将痰热清注射液倍比稀释成1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512,共9个浓度组,处理增殖期Molt4细胞,镜下观察不同时间点各浓度组细胞生长情况;应用CCK-8法检测细胞增殖能力,绘制生长曲线,计算抑制率和半数抑制浓度(IC50);分别采用PI染色法和PI/Annexin V双染法,通过流式细胞术检测Molt4细胞周期及凋亡的变化;采用实时定量PCR方法分析痰热清注射液处理Molt4细胞后凋亡相关基因caspase-3和bcl-2的表达量变化。结果表明:痰热清注射液对Molt4细胞增殖具有抑制作用,1:2至1:16稀释浓度的细胞毒性大,细胞基本死亡;抑制作用呈剂量依赖性,IC50为1:142稀释浓度。痰热清注射液1:32浓度处理72小时Molt4细胞处于S期的数量明显减少(p<0.05),凋亡细胞比例明显增加(p<0.05);同时,caspase3表达升高和bcl-2表达明显减低(p<0.05)。结论:痰热清注射液可抑制Molt4细胞系增殖、促进其凋亡,其机制可能是通过减少S期细胞,下调bcl-2基因和上调caspase3基因而实现。     

雷帕霉素对急性髓系白血病细胞系HL-60和HL-60/VCR生长的抑制作用

为了探讨mTOR抑制剂雷帕霉素对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia;AML）细胞的增殖和药物敏感性的影响。以AML细胞株HL-60和多药耐药HL-60/VCR细胞系为研究对象,采用MTT法测定生长曲线和流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测P糖蛋白（P-glycoprotein,Pgp）的表达。结果显示：与空白对照组细胞比较,雷帕霉素能抑制HL-60和HL-60/VCR细胞生长增殖（p〈0.05）,且随着浓度升高,增殖抑制率逐渐增高,24-72小时的细胞增殖抑制率随着时间的延长而有所增高（p〈0.05）,同时可阻滞细胞从G1期到S期的细胞周期转换。雷帕霉素抑制HL-60/VCR细胞的Pgp蛋白的表达。与柔红霉素单独应用相比,雷帕霉素50nmol/L、100nmol/L与柔红霉素联合应用使HL-60和HL-60/VCR细胞增殖抑制率明显增高（p〈0.05）,尤其是当先加雷帕霉素,而24小时后再加柔红霉素时。结论：mTOR抑制剂雷帕霉素对HL-60和多药耐药的HL-60/VCR细胞的生长均有抑制作用,除伴G0/G1期阻滞外,还增加细胞对柔红霉素的敏感性,这为临床难治性AML治疗提供新的治疗手段。     

重组人红细胞生成素促进体外培养的人骨髓间充质干细胞增殖

为了观察重组人红细胞生成素（rhEPO）对人骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖活性的影响，抽取健康志愿者的骨髓液，贴壁培养获取第3代细胞，通过细胞形态特征、细胞表面抗原及诱导分化的方法进行MSCs鉴定；取经过鉴定的第3代MSC（P3-MSC）加入不同浓度rhEPO（0．5、1、5、10、50U／ml）后培养，应用细胞计数法及MTT法检测细胞增殖，用流式细胞术（FCM）分析细胞周期。结果发现：骨髓贴壁培养获取的第3代细胞同时表达CD105和CD90，不表达CD34和CD45，并可被诱导分化为脂肪、骨及软骨细胞，被鉴定为MSC。MTT结果显示EPO处理组的光密度值（OD）均高于对照组（P〈0．05）；50U／ml浓度EPO组作用最显著，细胞计数法获得的结果与其一致。FCM细胞周期分析表明，rhEPO能明显降低G0／G1期细胞比例，并提高S＋G2／M期细胞比例，与对照组相比，差异均具有显著统计学意义（P〈0．01）。结论：EPO能促进体外培养的人骨髓MSCs增殖，该效应与EPO调节其进入细胞增殖周期有关。     

胞壁酰二肽对儿童急性白血病骨髓树突状细胞体外扩增的影响

本研究旨在探讨胞壁酰二肽（muramyl dipeptide,MDP）对急性白血病儿童骨髓树突状细胞（DC）体外扩增及成熟的影响。采用Ficoll—Hypaque法分离急性白血病患儿骨髓单个核细胞。实验分为4组：对照组DC以含10％FCS的RPMI 1640培养液培养;实验1组：DC单独应用胞壁酰二肽;培养实验2组：DC用rhGM—CSF＋rhIL-4＋rhTNF—α培养;实验3组：DC用rhGM—CSF＋mIL-4＋rhTNF-α＋MDP培养,分别诱导培养DC。每日光学显微镜下观察细胞生长情况及细胞形态,培养8天后,计数各组细胞数量,并应用流式细胞术检测各组细胞免疫表型。结果表明：①实验各组均得到一定数量典型的DC,对照组DC数（0．85±0．23）×10^5／L,而实验1组、实验2组、实验3组DC数分别为（2．31±0．24）、（3．26±0．37）及（4．16±0．34）×10^5／L,均明显高于对照组（P均〈0．01）;实验1组DC数低于2组及3组（P均〈0．01）;实验3组DC数明显高于2组（P〈0．01）。②对照组、实验1组、实验2组及实验3组的札A—DR细胞比例分别为19．98±3．74、37．24±4．32、58．81±2．08、77．48±5．57,实验1组明显高于对照组（P〈0．01）,而低于实验2组、实验3组（p均〈0．01）;实验3组明显高于2组（P〈0．01）。对照组、实验1组、实验2组及实验3组的CD1a细胞比例分别为11．46±2．43、28．71±6．64、46．92±4．78、57．03±3．07,实验1组明显高于对照组（P〈0．01）,而低于实验2组、实验3组（P均〈0．01）;实验3组明显高于2组（t=3．98,P〈0．01）。对照组、实验1组、实验2组及实验3组的CD83细胞比例分别为（13．05±5．70）％、（36．32±5．61）％、（54．95±7．83）％、（75．70±6．67）％,实验1组明显高于对照组（P〈0．01）,而低于实验2组、实验3组（P均〈0．01）;实验3组明显高于2组（P〈0．01）。结论：MDP不仅对急性白血病患儿骨髓DC有扩增作用,而且能促进其成熟,并能协同细胞因子促进DC增殖和成熟,但MDP促进DC增殖的能力弱于其与细胞因子的联合作用。     

细胞周期蛋白D3反义寡脱氧核苷酸对白血病细胞系CEM的生长抑制作用

为了研究细胞周期蛋白D3(cyclin D3)过度表达在白血病细胞增殖和白血病发生中所起的作用,选用过度表达cyclin D3的人T细胞白血病细胞系CEM,利用cyclin D3特异的反义寡脱氧核苷酸作用于CEM细胞,观察对CEM细胞生长的影响。经流式细胞术检测,cyclinD3的表达水平明显下降,同时CEM细胞生长明显受到抑制,G_0/G_1期细胞所占比例增大。实验结果说明cyclin D3过度表达在促进白血病细胞增殖中起着重要作用。     

富甘氨酸寡核苷酸抗白血病细胞增殖作用的研究

富甘氨酸寡核苷酸(G-rich oligonucleotides,GROs)是一类新型的磷酸二酯寡核苷酸,可以形成G-四聚体(G-quartet)结构,能诱导多种白血病细胞系的细胞周期停滞于S期,通过非反义途径发挥抑制生长作用。本研究旨在探讨GRO-26B对白血病细胞系的增殖抑制及对细胞周期和形态的影响,并探讨相关机制。采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术分析细胞周期改变;Western blot观察细胞周期调控相关蛋白的表达变化;光学倒置显微镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构改变。结果表明,实验药物GRO-26B对髓系白血病细胞系如U937、NB4等起作用,抑制细胞增殖,诱导细胞周期停滞于S期,进而导致细胞死亡。对淋巴细胞系如Jurkat、Nalm6的增殖抑制作用不明显,GRO-26B处理后可观察到细胞体积明显变大,部分细胞内可见大量空泡,部分晚期细胞皱缩,细胞核碎裂,逐渐死亡裂解。电子显微镜下超微结构变化更明显。GRO-26B处理的U937细胞周期蛋白B1表达下降(处理24小时即开始下降,72小时更加明显);CDC2表达增加。周期蛋白A、CDK2培养24小时表达无明显变化,72小时则不同程度升高。结论:GRO-26B明显抑制髓系白血病细胞系U937、NB4等的增殖,诱导细胞周期停滞于S期,细胞周期的停滞与细胞周期蛋白/细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)有关。     

三氧化二砷对慢性粒细胞白血病细胞系的作用

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)对两种慢性粒细胞白血病(CML)细胞系有无作用及作用机制。实验选用了两种不同的CML细胞系KU812和MEG—01及两种其它白血病细胞系U937和PL21，加入不同浓度的As2O3(0．2，2和10μmol/L)，在不同时间计数活细胞数，观察细胞形态，并以TUNEL法和DNA凝胶电泳检测细胞有无凋亡的发生；同时检测0．2μmol/L As2O3作用时细胞表面CD4，CD13，CD33，CD19，CD11b，CD14和CD7的变化，并通过RT—PCR检测细胞bcr—abl水平及caspase—3的变化。研究结果发现，不同浓度的As2O3对4种细胞系的作用不同，10μmol／L时4种细胞系均会发生细胞凋亡，2μmol／L时则仅CML细胞系KU812和MEG—01会产生凋亡，0．2μmol／L时4种细胞系均不发生凋亡。在培养24小时后，4种细胞系表面的CD34，CD13，CD33，CD19，CD11b，CD14和CD7等均无明显改变。RT—PcR检测bcr—abl的水平发现在2种CML细胞系中无明显改变，其caspase—3的活性较对照细胞均有所增加。结论：As203在较高浓度下可诱导4种白血病细胞系产生凋亡，在2μmol／L仅可诱导CML来源的两种细胞系产生凋亡，CML细胞系As203较其它两种细胞系敏感，其作用机制与caspase—3有关。