利用发光自显影技术快速筛选结核杆菌的利福平耐药性

目的 利用发光自显影技术建立一种快速、简便的结核分支杆菌利福平耐药性筛选方法。方法 利用重组的分支杆菌噬菌体可在活菌内增殖的原理，来检测结核杆菌在含利福平液体培养基中的生长状况；采用发光自显影方法检测发光强度并确定活菌数，对43份结核杆菌样本进行快速检测，并与L－J培养基检测结果进行对比。结果 发光自显影方法与L－J培养法相比，阳性率和真阴性率分别为95．7％、90％，最佳检测的细菌浓度为10^7-10^8CFU/ml，最佳药敏试验的利福平浓度为1mg/ml，利福平与结核分支杆菌孵育48小时后即可进行发光自显影分析。结论 生物发光方法可用于快速筛选结核分支杆菌的利福平耐药性，是一种简单、快速、灵敏、实用的利福平药敏筛选方法。     

结核分枝杆菌接种菌量对异烟肼和利福平药敏试验的影响

目的比较接种不同菌量结核分枝杆菌（MTB）绝对浓度法药物敏感性（药敏）与比例法药敏的差异程度,为MTB药敏检测准确性提供参考。方法选择临界敏感或临界耐药MTB菌株53株,用比浊法制作MTB菌悬液,10倍梯度稀释,10^-4、10^-510^-6mg/ml菌悬液0.1 ml接种于改良L-J培养基上作活菌计数,10^-2、10^-3mg/ml菌悬液0.1 ml接种于含INH、RFP改良L-J培养基上作绝对浓度法药敏,10^-3、10^-5mg/ml菌悬液0.1 ml接种于含INH、RFP改良L-J培养基上作比例法药敏。结果MTB活菌计数值多在5×1065×10⁷CFU/ml。10^-2、10^-3mg/ml菌悬液绝对浓度法药敏一致率INH、RFP分别达98.1%、100.0%;绝对浓度法与比例法药敏符合率INH、RFP均达90.6%100.0%。结论不同菌量MTB绝对浓度法药敏结果与比例法药敏结果比较一致性好,在常规药敏检测中不会影响结果的准确性。     

DNA序列分析与PCR-SSCP分析结核分支杆菌利福平敏感性的比较

目的　了解DNA序列分析与PCR-SSCP法分析利福平敏感性的价值。方法 应用DNA序列分析与PCR-SSCP法检测利福平敏感的结核分支杆菌临床分离株 25株、耐药株 41株的利福平耐药相关基因rpoB基因核心区域的突变情况。 结果 25株利福平敏感株DNA序列分析未检测到rpoB基因突变,41株耐利福平株中 38株发生突变,突变率为 92.7% (38/41);25株利福平敏感的结核分支杆菌菌株PCR-SSCP带型与对照H₃₇R_v株相同,41株耐利福平结核分支杆菌菌株中38株SSCP带型不同于对照株,提示有突变存在。与DNA序列分析相比,PCR-SSCP检测准确率为 93.9% (62/66),敏感度为 92.1% (35/38);特异度是 96.4% (27/28)。结论 DNA序列分析对判断结核分支杆菌耐利福平非常有价值;PCR-SSCP可用于利福平耐药结核分支杆菌的初步筛选。     

聚合酶链反应-增强化学发光法快速检测结核杆菌的研究

目的　建立聚合酶链反应 -增强化学发光法 (polymerase chain reaction-enhanced chemilumine cence ,PCR-ECL)快速高灵敏度和高特异性检测结核杆菌的方法。方法 以结核分支杆菌、牛分支杆菌特异性抗原Pab基因的419bp片段为靶序列,PCR体系经优化,直接酶标法标记探针 ,增强化学发光检测(ECL)进行分子杂交。结果 PCR体系对结核分支杆菌、牛分支杆菌、卡介苗的扩增为阳性,PCR体系灵敏度为5fgDNA分子。ECL体系灵敏度为0.5pgDNA分子。采用模拟痰样,可检至10个以下结核杆菌。结论 建立了结核杆菌的PCR-ECL快速检测方法,整个过程可在一天半内完成。     

聚合酶链反应-单链构象多态性技术检测耐多药结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL突变的研究

目的　应用PCRSSCP技术快速检测耐INH,RFP,SM结核分支杆菌分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变,评价其在检测结核分支杆菌耐药性方面的价值。方法 32株耐INH、RFP、SM结核分支杆菌临床分离株及25株结核分支杆菌敏感分离株用PCRSSCP方法分别检测,rpoB、KatG、rpsL基因突变。结果 32株耐多药结核分支杆菌分离株中,rpoB、KatG、rpsL PCR扩增产物PCR-SSCP分别有28株(87.5%)rpoB基因,19株(59.3%)KatG基因和23株(71.9%)rpsL基因电泳条带与结核分支杆菌标准株H₃₇Rv电泳条带相比有明显差异,而25株结核分支杆菌敏感株的PCR-SSCP条带与结核分支杆菌H₃₇Rv相似,特异性为100%。结论 PCR-SSCP方法敏感、特异,可快速检测结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL耐药基因突变,有利于耐多药结核分支杆菌耐药性的快速检测。     

RT-LAMP与LAMP法检测结核分枝杆菌的效果比较

目的 比较RT-LAMP、LAMP、L-J法检测MTB的效果,为结核病的快速诊断提供依据。方法 用常见的非结核分枝杆菌与其他常见的呼吸道感染病菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌)检测特异性,并用酶切实验对结核分枝杆菌特异性产物进行酶切鉴定;用RT-LAMP、LAMP、L-J法检测100名结核病患者和22名来自无结核病患者痰标本中的结核分枝杆菌测试灵敏性;对浓度为1 ng/μL H37Rv标准株进行对倍比稀释用于RT-LAMP极限检测实验。结果 RT-LAMP、LAMP、L-J方法的阳性率分别为100%,92%和88%;RT-LAMP和L-J, RT-LAMP和LAMP差异均有统计学意义;RT-LAMP的灵敏度比LAMP高10倍;RT-LAMP不仅可以识别活菌,并且能够重复检测MTB的单一拷贝。结论 RT-LAMP检测效果优于LAMP及L-J,适于基层医院结核病诊断的推广和应用。     

利用重组分支杆菌噬菌体快速筛选耐利福平结核分支杆菌

目的：采用基因工程技术构建的可表达荧光素酶的结核分支杆菌噬菌体进行结核分支杆菌利福平药敏试验研究,建立一种特异、灵敏、快速的利福平药敏试验方法。方法采用生物发光方法分别检测重组分支杆菌噬菌体对不同细菌在不同浓度利福平培养其中的发光水平,并与罗氏培养基进行药敏药比较。结果在不同细菌中,噬菌体均特异地对分支杆菌有发光反应,分支杆菌的养基进行药敏试验比较。结果在不同细菌中,噬菌体均特异对对分支杆菌有发光     

BACTEC系统对依赖利福平结核分支杆菌生长与耐药性的分析

目的　探讨依赖利福平结核分支杆菌 (依R菌)在BACTEC系统中的生长特征,以便用该系统鉴定依R菌。方法 选取L -J法初步鉴定的依R菌,制成菌液 (10^-4mg/ml)分别以0.1ml接种于含不同利福平 (R)浓度 (1～384μg/ml)的7H-12液体培养基中培养,用BACTEC法测定不同实验瓶生长指数 (GI),判断耐药性,并对培养物称重及进行形态 (抗酸染色)观察。结果 (1)耐药性,依R菌在R1～96μg/ml10个浓度中均耐药,R192μg ml临界,384μg/ml敏感。 (2)菌体重量,R6、8、10、12、24μg/ml各瓶细菌重量 (分别为87、125、116、104、65mg)明显高于对照瓶 (35mg),重量比为1.9～3.6,平均2.9,其余各耐药瓶与对照瓶无明显差别。 (3)培养物涂片抗酸染色,可见各R瓶内结核分支杆菌菌体比对照瓶粗大、染色质深、染色颗粒明显,以R8μg/ml瓶最为典型。 结论 依R菌在含R(6～24μg/ml)环境中生长旺盛,在无R环境中生长不良。     

纤支镜灌洗液的结核分支杆菌快速培养对不典型肺结核的诊断价值

目的　评价纤维支气管镜(以下简称纤支镜)支气管肺泡灌洗液(BALF)的结核分支杆菌快速培养对不典型肺结核的诊断价值。方法 选无痰或痰菌阴性的不典型肺结核患者49例行纤支镜检查,进行活检、刷检、BALF经BBLMGIT分支杆菌快速培养查结核杆菌。结果 49例经纤支镜刷检、BALF快速培养结核分支杆菌检出率分别是67.4%、83.7%,其中15例经纤支镜肺活检,10例病理证实为结核肉芽肿,检出率为66.7%。结论 纤支镜对无痰或痰菌阴性下BALF行结核分支杆菌快培对不典型肺结核具有较高的诊断价值,快速,阳性率较高。根据镜下所见采用不同的取材方法可望提高诊断率。     

噬菌体生物扩增法与改良罗氏比例法在结核杆菌药敏检测中的比较

目的　采用噬菌体生物扩增法 (PhaB法)与传统比例法对结核分枝杆菌临床株进行利福平、异烟肼药物敏感试验,建立一种快速、敏感、特异、价廉的结核杆菌药敏试验方法。方法 分别采用噬菌体生物扩增法和改良罗氏比例法检测 52株结核分枝杆菌临床株对利福平、异烟肼的敏感性,将二者结果进行比较。结果 比例法检测结果为利福平耐药株的 34株中,噬菌体生物扩增法检测结果为 32株耐药,2株敏感 ;18株敏感株中噬菌体方法检测结果为 17株敏感,1株耐药。噬菌体方法检测结核菌对利福平的灵敏度为 94.1%(32/34),特异度为 94.4%(17/18),符合率为 94.2%(49/52)。比例法检测为异烟肼耐药的 38株菌中,噬菌体方法检测 35株耐药,3株敏感;14株异烟肼敏感株中,噬菌体方法检测 11株敏感,3株耐药。噬菌体方法检测异烟肼敏感性的灵敏度为 92.1%(35/38),特异度为 78.6%(11/14),符合率为 88.5%(46/52)。结论 用噬菌体生物扩增法可快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平的敏感性,灵敏度高,与WHO推荐使用的比例法符合率高,可在 48h得到结果。异烟肼耐药性检测用噬菌体方法的特异度不如利福平,有待进一步探讨其原因。     

γ-干扰素对免疫低下小鼠结核分支杆菌感染的影响

目的　观察、评价γ干扰素(IFNγ)对免疫功能低下小鼠结核分支杆菌感染的影响和疗效。方法 将DBA/2小鼠90只按免疫功能正常和免疫功能低下2种状态分别制成小鼠结核分支杆菌感染模型。随机分组给予IFNγ或IFNγ单克隆抗体治疗,检测肺组织菌落计数,观察治疗后生存率。结果 免疫正常组小鼠无死亡,第2周、第4周菌落数分别为(51.5±17.5)×10³cfu/mL、(106.3±41.0)×10³cfu/mL。免疫低下组8只死亡,菌落数分别为(163.7±61.7)×10³cfu/mL、(768.3±206.5)×10³cfu/mL,免疫低下+IFNγ组3只死亡,菌落数分别为(54.2±21.3)×10³cfu/mL、(212.7±80.7)×10³cfu/mL,免疫低下组与免疫低下+IFNγ组比较有显著性差异。免疫正常小鼠给予IFNγ抗体后肺组织菌落数增多,与对照组比较有显著性差异。结论 IFNγ增强宿主免疫功能,对结核分支杆菌感染小鼠产生保护效应,适用于免疫功能低下宿主合并结核感染的辅助治疗。     

黑龙江省五常市结核分枝杆菌基因型及传播特征

目的 根据黑龙江省结核分枝杆菌差异区域105(RD105)缺失基因检测与北京基因型菌株的相关性分析,了解黑龙江省五常市结核分枝杆菌基因型特征及传播特征,为该地区控制结核病提供有效的工具。方法 对黑龙江省五常市结核病防治(简称“结防”)所登记并培养阳性的121例肺结核患者的结核分枝杆菌分离株,采用比例法药敏试验检测其耐药性,用RD105缺失基因检测和7个位点可变数目串联重复序列(variable number of tandem repeats,VNTR)进行分子分型, 计算耐药率、Hunter-Gaston指数(Hunter-Gaston Index,HGI)、成簇率,分析结核分枝杆菌DNA多态性及北京基因型菌株与耐药的相关性。结果 在黑龙江省五常市121株结核分枝杆菌菌株中,通过RD105缺失基因检测,其结果显示有101株为北京基因型菌株,占83.5 %.(101/121),其余20株为非北京基因型菌株,占16.5%(20/121)。121株菌株对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素的耐药率分别为5.8%(7/121)、3.3% (4/121) 、 5.0%(6/121)、15.7%(19/121);其中北京基因型菌株对上述药物的耐药率分别为5.0%(5/101)、3.0% (3/101)、5.9%(6/101)、17.8%(18/101),非北京基因型菌株对上述药物的耐药率分别为10.0%(2/20)、 5.0% (1/20) 、 5.0%(1/20)、未检出对乙胺丁醇耐药0.0%(0/20)。两者比较差异无统计学意义(χ ²=1.090,P=0.296)。121株菌株中耐多药率为2.5%(3/121),其中2株为北京家族基因型,1株为非北京基因型;北京基因型和非北京基因型耐多药率分别为2.0%(2/101)和5.0%(1/20),两者比较差异无统计学意义(χ ²=0.531,P=0.460)。进一步使用7位点VNTR分型技术检测,结果显示121株菌株可分为17个基因簇和64个独立的基因型;每个簇包括2~14株临床分离株,最大的簇由14株结核分枝杆菌菌株构成,所占比较高为11.6%(14/121);121株结核分枝杆菌菌株中成簇菌株57株,成簇率为 47.1%(57/121)。近期感染率最小估计值为33.1%(40/121)。7位点VNTR检测结果表现出高度多态性,各位点的HGI值为0.513~0.786;经聚类分析,121株结核分枝杆菌菌株可分为3个大的基因群(Ⅰ群、Ⅱ群、Ⅲ群),81个基因型。分别为:Ⅰ群占14.9%(18/121),含15 个基因型;Ⅱ群占76.9%(93/121),含59个基因型,Ⅲ群占8.2%(10/121),含7个基因型。结论 北京基因型为黑龙江省五常市主要流行株,且该地区的结核分枝杆菌呈明显的基因多态性。耐药菌株中北京基因型菌株所占比率较高,要加强对耐药优势菌群的监测和防控。     

2017年绍兴地区106株非结核分枝杆菌菌种鉴定结果分析

目的 分析绍兴地区非结核分枝杆菌(NTM)的流行情况,为NTM诊疗提供科学依据。方法 对绍兴地区2017年临床分离的972株分枝杆菌,采用结核分枝杆菌抗原检测胶体金法进行结核分枝杆菌复合群和NTM的初步菌种鉴定,结果106株为NTM,占分枝杆菌培养阳性菌株的10.91%(106/972),对初步鉴定为NTM的菌株应用 DNA微阵列芯片法进行NTM菌种鉴定。结果 106株NTM菌株经DNA微阵列芯片法鉴定,共有14个菌种,其中菌株数量前3位的菌种为:胞内分枝杆菌[55株(51.89%)]、鸟分枝杆菌[19株(17.92%)]、堪萨斯分枝杆菌[13株(12.26%)]。其余分别为:龟-脓肿分枝杆菌[4株(3.77%)]、瘰疬分枝杆菌[3株(2.83%)]、戈登分枝杆菌[3株(2.83%)]、土分枝杆菌[2株(1.89%)]、其他[7株(6.60%)]。结论 2017 年绍兴地区NTM 临床分离率占分枝杆菌培养阳性菌株的10.91%;NTM种类多,以胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌为主要流行菌种。     

应用硝酸盐还原试验快速检测结核分枝杆菌药物敏感性

目的评价硝酸盐还原试验(Nitrate Reducrase Assay,NRA)方法检测结核分枝杆菌分离株的药物敏感性的应用价值。方法通过应用NRA方法和绝对浓度法同时检测了492株结核分枝杆菌临床分离株和30株质控菌株对INH、RFP、SM、EMB的药物敏感性,以牛结核分枝杆菌标准株、结核分枝杆菌标准菌株H37Rv做阴阳性对照。并随机选择62株菌株进行重复试验。结果与绝对浓度法比较,NRA检测对INH、RFP、SM、EMB的耐药性的敏感性分别为91.6%、96.5%、92.2%、90.7%;特异性分别为96.0%、98.2%、97.3%、97.3%;一致率分别为95.0%、97.9%、96.2%、96.7%。重复试验符合率为100%。结论NRA是一种成本低、操作简单、快速、与绝对浓度法有较高一致率的药敏试验方法,具有良好的临床应用前景。     

肺结核病原体和易感因素及结核分枝杆菌优势耐药谱分析

目的 了解县镇地区肺结核流行现状及其易感因素、结核分枝杆菌耐药谱和优势耐药组合模式方法 采用罗氏培养基和PNB/TCH生长试验,对杭州市周边7个县镇临床诊断为肺结核的2 840例初治和712例复治患者抗酸染色阳性痰标本进行分枝杆菌分离培养和菌种鉴定。采用浓度比例法,检测3 152株结核分枝杆菌对链霉素(SM)、异烟肼(INH)、利福平(RIF)、乙胺丁醇(EMB)、氧氟沙星(OFX)和卡那霉素(KM)的敏感性。采用统计学方法分析结核分枝杆菌优势耐药模式以及肺结核易感因素结果 3 552株分枝杆菌中,88.7%(3 152/3 552)为结核分枝杆菌,11.3%(400/3 552)为非结核分枝杆菌,复治患者非结核分枝杆菌感染率(23.7%)显著高于初治患者(8.1%)(χ²=138.67,P<0.05)。3 152株结核分枝杆菌对6种抗结核药物总耐药率为25.1%,对一线抗结核药物耐药、耐多药和广泛耐药率分别为15.9%、4.6%和0.2%,其中SM(χ²=50.40, P<0.05)和INH耐药率较高(χ²=47.81, P<0.05)。结核分枝杆菌有35种耐药谱,优势耐药组合模式分别为INH+SM(χ²=19.19,P<0.05)、INH+RFP+SM(χ²=24.85,P<0.05)和IHN+RFP+SM+EMB(χ²=20.11,P<0.05)。来自复治患者的结核分枝杆菌总耐药、一线抗结核药物耐药、耐多药和广泛耐药率(38.3%、36.1%、14.0%和0.9%)均显著高于初治患者(22.3%、19.3%、2.7%和0.04%)(P<0.05)。本地户籍60岁以上男性农民肺结核发病率显著较高(χ²=1 435.29,P<0.05)结论 本县镇地区肺结核疫情防控形势依然严峻,老年男性农民是肺结核易感人群,复治肺结核患者非结核分枝杆菌感染率以及结核分枝杆菌耐药性显著高于初治肺结核患者,提示县镇地区肺结核患者抗结核药物规范化治疗有待加强。     

广州市非结核分枝杆菌临床分离株菌种鉴定及药物敏感性试验结果分析

目的 对广州市非结核分枝杆菌(NTM)临床分离株进行菌种鉴定与药物敏感性试验(简称“药敏试验”),为临床诊断和治疗NTM病提供依据。方法从2016年广州市胸科医院行分枝杆菌分离培养的1250份标本中搜集培养阳性的717株临床分离株,采用水溶性对硝基苯甲酸(PNB)和噻吩-2-羧酸肼(TCH)对其进行培养,以鉴别MTB与NTM,通过多靶位基因聚合酶链反应 (PCR)测序,对PNB和TCH培养确定为NTM的菌株进一步行菌种鉴定,并采用最低抑菌浓度法(MIC)检测98株NTM对18种抗结核药物的耐药性。结果717株分枝杆菌中,检出106株NTM菌株,检出率为14.4%;其中103株传代成功,传代率为97.2%(103/106)。经NTM菌种鉴定,按照构成比高低依次为脓肿分枝杆菌[34.0%(35/103)]、胞内分枝杆菌[25.2%(26/103)]、马赛分枝杆菌[20.4%(21/103)]、鸟分枝杆菌[9.7%(10/103)]、堪萨斯分枝杆菌[5.8%(6/103)]、偶发分枝杆菌[1.9%(2/103)],以及1株缓黄分枝杆菌、1株猪分枝杆菌和1株阿加普尔分枝杆菌[均占0.9%(1/103)]。98株NTM菌株的药敏试验结果显示,敏感者前3位依次为阿米卡星[93.9%(92/98)]、克拉霉素[91.8%(90/98)]和阿奇霉素[71.4%(70/98)],耐药者前3位依次为利福平[89.8%(88/98)]、左氧氟沙星[83.7%(82/98)]和亚胺培南[77.6%(76/98)]。并且NTM不同菌种对部分药物的耐药性存在种间差异。结论广州市NTM的检出率高于我国其他地区,流行的菌种以脓肿分枝杆菌和胞内分枝杆菌为主;克拉霉素和阿米卡星是临床治疗NTM患者的优选抗生素,应重视对利福平和左氧氟沙星的耐药性。     

基因芯片技术在结核分枝杆菌耐药检测中的效果分析

目的 比较基因芯片和比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)在检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性中的应用效果。方法 选取2013年9月至2016年12月海南医学院第二附属医院598例涂阳肺结核住院患者的痰标本,具有传统药敏结果和基因芯片结果的484例患者纳入分析。采用基因芯片法检测rpoB、katG及inhA基因耐药突变位点及频率,以比例法药敏试验结果为金标准,比较两种方法的符合率。结果 基因芯片和比例法药敏试验检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性符合率为93.8%(454/484),对异烟肼的耐药性符合率为89.0%(431/484),对耐多药的符合率为95.5%(462/484)。118株检测到rpoB基因发生突变,优势突变位点为531,占56.8%(67/118);其次突变位点是526,占19.5%(23/118);516突变位点占12.7%(15/118)。97株检测到katG和inhA基因突变,最常见的突变位点是katG315,占82.5%(80/97),inhA均为-15突变类型,占14.4%(14/97)。结论 基因芯片法与比例法具有很好的一致性,可成为筛查结核分枝杆菌对利福平和异烟肼是否耐药的快速有效的方法。     

894株结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药情况分析

收集2016年1月至2018年3月吉林省9个市(州)894例肺结核患者痰标本中的结核分枝杆菌临床分离株进行分析。并采用比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)对全部结核分枝杆菌菌株进行利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(Sm)和乙胺丁醇(EMB)4种一线抗结核药物的药敏试验。结果显示,894株结核分枝杆菌对一线抗结核药物敏感者有546株(61.07%),对一线抗结核药物耐药者有348株(38.93%);其中初治患者的耐药率为36.30%(265/730),低于复治患者的耐药率(50.61%,83/164),差异有统计学意义(χ ²=11.53,P=0.001)。全部患者的总耐多药率为10.07%(90/894),复治患者耐多药率(20.73%,34/164)高于初治患者(7.67%,56/730),差异有统计学意义(χ ²=25.23,P=0.001)。全部患者对一线抗结核药物的耐药率顺位为Sm(25.95%,232/894)>INH(18.57%,166/894)>RFP(17.23%,154/894)>EMB(9.73%,87/894)。吉林省肺结核患者对一线抗结核药物耐药率较高,尤其是复治患者;耐药结核病防治形势依然严峻,需加强结核病的防控工作。     

福建省耐多药结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的耐药水平与基因型特征分析

目的 了解福建省耐多药结核分枝杆菌(MDR-MTB)对吡嗪酰胺(PZA)的耐药水平及基因型分布情况,分析PZA耐药水平及基因型之间的关系。方法 收集2007—2008年和2010—2011年福建省耐药监测点共119株MDR-MTB临床分离株,采用WHO推荐的方法进行耐药性检测,应用间隔区寡核苷酸分型技术(Spoligotyping)进行基因分型,对分型结果上传至SpolDB4.0数据库,并进行聚类分析。结果 119株MDR-MTB菌株对PZA的耐药率为36.97%(44/119)。耐PZA菌株对链霉素(Sm)的耐药率为70.45%(31/44),高于PZA敏感菌株对Sm的耐药率[50.67%(38/75)],差异有统计学意义(χ ²=4.45,P=0.035);耐PZA菌株对乙胺丁醇(EMB)的耐药率为81.82%(36/44),高于PZA敏感菌株对EMB的耐药率[52.00%(39/75)],差异有统计学意义(χ ²=1.58,P=0.001)。北京基因型菌株占67.23%(80/119);非北京基因型菌株占32.77%(39/119),共有16个基因型(含8个新发现的基因型),其中常见的是H家族(含H和H3)和T家族(含T1、T2、T3和T5)。北京基因型菌株对PZA的耐药率(38.75%,31/80)与非北京基因型菌株对PZA的耐药率(33.33%,13/39)间差异无统计学意义(χ ²=0.33,P=0.566)。 结论 福建省耐多药结核病患者临床分离株对PZA耐药的问题应引起重视,对PZA耐药与对Sm和EMB耐药有关;MDR-MTB菌株主要为北京基因型,北京基因型与非北京基因型菌株对PZA的耐药率未见差异。     

MTB分泌蛋白抗原85B-早期分泌靶抗原6融合蛋白对结核性胸膜炎的辅助诊断价值

目的 研究MTB分泌蛋白抗原85B(Ag85B)-早期分泌靶抗原6(ESAT6)融合蛋白在结核性胸膜炎辅助诊断中的价值。方法 研究对象为2014年1月至2015年1月于河北省胸科医院住院的结核性胸膜炎(结核组)患者45例,非结核性胸膜炎(非结核组)患者26例,以及体检健康人群(健康组)25名。应用流式细胞仪分别检测结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合蛋白刺激前后结核组、非结核组外周血、胸腔积液及健康组外周血中γ干扰素(IFN-γ)的含量,采用免疫组织化学染色法检测结核组与非结核组患者组织(通过手术或穿刺活检获得的胸膜组织)中CD4 ⁺和CD8 ⁺细胞的表达水平。采用SPSS 13.0软件进行统计学处理,数据符合正态分布的组间比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 MTB Ag85B-ESAT6融合蛋白刺激前后,结核组外周血中IFN-γ的含量分别为(42.63±10.51)pg/ml和(401.90±72.54)pg/ml;非结核组分别为(38.97±7.08)pg/ml和(40.04±6.80)pg/ml;健康组分别为(39.61±7.28)pg/ml和(39.86±6.97)pg/ml。结核组胸腔积液中IFN-γ的含量分别为(411.91±41.56)pg/ml和(1342.67±167.96)pg/ml;非结核组分别为(47.99±11.49)pg/ml和(48.76±11.25)pg/ml。刺激前结核组胸腔积液中IFN-γ的含量明显高于非结核组,两组比较差异有统计学意义(t=55.194,P=0.000);刺激后结核组外周血单个核细胞产生的IFN-γ含量相对于刺激前及刺激后的其他两组比较,差异均有统计学意义(t=32.879、33.211和33.204,P值均为0.000);刺激后结核组与刺激前及非结核组刺激前后胸腔积液中IFN-γ的含量比较,差异均具有统计学意义(t=36.085、51.478和51.499,P值均为0.000)。免疫组织化学染色结果显示结核组与非结核组患者胸膜组织中的CD4 ⁺和CD8 ⁺积累光密度值(结核组:16349.91±2376.36和10525.77±1164.86;非结核组:1853.64±670.40和1327.15±175.55)差异均具有统计学意义(t=14.381和19.127,P值均为0.000)。 结论 结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合蛋白刺激外周血和胸腔积液后均明显提高结核特异性IFN-γ的含量,对结核性胸膜炎的辅助诊断有较高的临床应用价值。