上皮细胞钠离子通道ENaC及其基因研究现状

人类上皮细胞钠离子通道（hENaC）由α、β、γ3个亚单位组成,分别由CNN1A、SCNN1B、SCNN1G基因所编码。ENaC负责钠离子的限速重吸收,对于维持钠的自身平衡、细胞外液量和血压起重要作用。功能获得性ENaC基因突变可引起一种罕见的遗传性高血压——Liddle综合征;而功能丧失性ENaC基因突变可引起一种遗传性低血压——假性低醛固酮血症;原发性高血压是受遗传因素和环境因素共同影响的复杂性疾病,由于ENaC的维持钠的自身平衡和血压的重要作用,因此ENaC基因作为原发性高血压的候选基因而备受关注。     

人类上皮细胞钠通道基因变异和高血压关系的研究现状

人类上皮细胞钠通道（hENaC）属于非电压依赖性钠通道,对钠的重吸收起限速作用,同时对水钠平衡、血容量、血压起到重要的调节作用。hENaC编码基因的突变可导致遗传性高血压疾病（Liddle’s综合症）,目前已有研究证实hENaC编码基因多态性与原发性高血压相关,故hENaC基因作为原发性高血压的侯选基因倍受研究者的关注。     

Ⅱ型肺上皮细胞钠通道的研究进展

Ⅱ型肺上皮细胞膜上的阳离子通道主要是阿米诺利敏感性钠通道 ,它可表达α rENaC ,β rENaC和γ rENaC三个亚基。这些离子通道至少可以分为钙激活的钠离子选择性通道和钙不敏感的高度钠离子选择性通道 ,对阿米诺利具有高度的亲和性。通道的表达和活动受激素、氧分压和一些内源性物质等因素的影响。钠通道的正常功能活动对肺的正常功能活动具有重要作用。     

上皮钠通道在相关呼吸系统疾病中的研究进展

<正>上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENa C)是一种非电压依赖性的离子通道,是上皮细胞主要的Na⁺转运通道之一,属于ENa C/退化蛋白(degenerin)超家族^[1-2]。ENa C对阿米洛利敏感,主要分布于人体肺部^[3]、肾脏^[4]、结肠、生殖道^[5]及中枢神经系统^[6]等多种组织的上皮细胞,能够控制Na⁺进入上皮细胞,对稳定细胞内Na⁺浓度及维持细胞渗透平衡具有重要作用^[7]。细胞内外液体渗透平衡是维持细胞正常生理功能的基础,这种平衡取决于细胞内外的相对渗透压和膜的渗透性^[8],而人体细胞内液和细胞外液的渗     

电压门控钠通道α亚单位的研究

电压门控钠通道是可兴奋细胞产生电兴奋的基础结构,其α亚单位为基本功能单位,可单独发挥作用。在人类已有9个α亚单位被成功克隆。对钠通道α亚单位的基本结构与分类、选择性剪切、基因克隆与突变、钠通道与肿瘤发生的关系以及神经母细胞瘤钠通道的研究进行阐述。     

一个中国人Liddle综合征家系的SCNN1G基因新突变及其临床特征

目的 分析2个Liddle综合征家系上皮细胞钠通道编码基因SCNN1B及SCNN1G的基因突变.方法 收集2个临床诊断为Liddle综合征的家系,抽取先证者及其家系成员外周血基因组DNA,PCR扩增上皮细胞钠通道β亚单位编码基因SCNN1B和γ亚单位编码基因SCNN1G第13外显子,产物直接DNA测序进行基因突变检测.结果 例1 SCNN1B基因第13外显子的扩增片段经双向测序显示第564密码子存在CGA-TGA(R-X)杂合无义突变,其家系成员均未发现这一基因突变;例2 SCNN1G基因第567密码子存在CAG-TAG(Q-X)杂合无义突变,2个家系成员携带此突变基因,这一突变位点尚未在国内外报道过,50名无关正常人中未发现此突变基因.结论 对临床诊断的Liddle综合征患者及其亲属,进行基因突变检测有助于确定诊断及早期筛查出家系中的其他患者.编码人类肾小管上皮细胞钠通道γ亚单位基因SCNN1G第13外显子第567密码子CAG-TAG(Q-X)杂合无义突变可能会导致Liddle综合征.     

肾脏小管上皮细胞ATP敏感性钾通道研究进展

肾脏是钾代谢、维持钾平衡的主要器官，而且对内外环境的变化特别敏感。ATP敏感性钾通道(KATP)通过细胞代谢和生物电活动相偶联，在许多组织发挥重要的生理和病理生理学功能。     

自然种群淡色库蚊钠通道基因全长的克隆及序列分析

本研究采用反转录多聚酶链式反应（ RT-PCR）的方法对野外采集的河北种群淡色库蚊的钠离子通道基因进行了克隆和序列分析。得到的克隆序列与GenBank中公布的序列能够吻合,说明成功克隆出淡色库蚊的钠通道基因全长,为抗性突变的研究奠定了基础。本研究在淡色库蚊钠通道基因上发现了多处氨基酸突变（A32T、 T336A、 S342P、 K535E、 L1035F、 N1595S和F1982L）和7处可变剪接。其中,包括经典的抗性突变L1014F （ L1035F）。但这些突变和可变剪接与蚊虫抗性的关系有待进一步研究。     

PI3K/SGK1信号通路上调小鼠肺上皮钠通道表达的研究

目的:探讨磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/血清-糖皮质激素调节激酶1(SGK1)信号通路对小鼠肺上皮钠通道(ENaC)表达的影响.方法:24只健康成年C3H/HeN小鼠随机分为对照组、急性肺损伤(ALI)组、胰岛素组和PI3K siRNA组,每组6只.收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测量肺泡液体清除率(AFC),免疫...     

防御素基因转导人气管上皮细胞的实验研究

采用脂质体转导法将人中性粒细胞防御素ＨＮＰ１ｃＤＮＡ重组真核表达质粒ｐＢａｂｅ－Ｎｅｏ－ＨＮＰ１导入无血清培养的人气管粘膜上皮细胞;制备ＨＮＰ多克隆抗血清,用免疫组化法检测防御素（Ｈｕｍａｎ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｐｅｐｔｉｄｅ－１,ＨＮＰ１）在气管上皮细胞的表达。结果表明：脂质体转导法可使ＨＮＰ１ｃＤＮＡ重组真核表达质粒ｐＢａｂｅ－Ｎｅｏ－ＨＮＰ１在人气管粘膜上皮细胞有效表达,免疫组化显示转导组     

SCN7A 基因单核苷酸多态性与原发性与原发性高血压的相关研究

目的　检测中国人电压调控钠通道 7型α亚单位基因 (sodium channel,voltage- gated,type ,alpha polypeptide,SCN7A)调控区和编码区的单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphisms,SNPs) ,并探讨其与上海汉族人群原发性高血压的关系。　方法　采用直接测序法检测基因启动子、编码区和部分内含子的序列 ,以确定中国人群中 SCN7A基因 SNPs的位置及类型。采用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性及直接测序法 ,对上海汉族 96例原发性高血压患者和 96名正常血压对照者进行 SNP检测和关联研究。对所发现的 P<0 .0 5的 SNP位点 ,进一步扩大样本 (病例、对照组各 2 88例 )加以验证。结果　在 13132 bp的测序长度中 ,共发现 32个 SNP,包括启动子区 7个 ,编码区 10个 (其中改变氨基酸编码的 6个 ) ,3′非编码区 1个 ,内含子区 14个 ,其中 30个为新发现的 SNP。关联研究结果显示 SNP0 2 1在病例和对照组中的分布差异存在显著性 (P <0 .0 1) ,该 SNP多态可改变氨基酸的编码序列。　结论SCN7A基因变异可能与上海汉族人群原发性高血压相关。     

αENaC基因T663A多态性与新疆哈萨克族原发性高血压的相关性

目的 研究αENaC基因T663A多态件与新疆哈萨克族原发性高血压的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法 对新疆哈萨克族257例原发性高血压患者(PH组)和259例血压正常者(NT组)进行T663A多态性检测,分析2组间基因型和等位基因的频率分布,并采用Logistic多元回归法分析该基因多态性与原发性高血压的相关性.结果 新疆哈萨克族αENaC基因T663A位点基因型分布在PH组及NT组中均符合Hardy-Weinberg平衡.PH组基因型分布AA:16.34%(42/257),AG:49.03%(126/257),GG:34.63%(89/257),等位基因频率分布A:40.86%(210/514),G:59.14%(304/514);NT组AA分布15.06%(39/259),AG:51.35%(133/259),GG:33.59%(87/259),等位基因A:40.73%(211/518),G:59.27%(307/518),2组间差异均无统计学意义(P>0.05).不同基因型个体之间血压值的比较差异无统计学意义(P>0.05).分别按性别、体质量指数、年龄进行分层后,3种基因型频率在2组中的分布差异无统计学意义(P>0.05).Logistic回归分析结果 显示,T663A多态性与原发性高血压的发生不相关(P>0.05).结论 αENaC基因T663A多态性与新疆哈萨克族原发性高血压不相关.     

皮质发育障碍大鼠海马神经元钠通道功能的变化

目的： 探讨钠离子通道功能的改变在大脑皮质发育障碍性癫痫形成中的作用。方法：采用给孕鼠腹腔注射卡莫司汀的方法制作子代广泛型皮质发育障碍模型。急性分离大鼠海马CA1区神经元，运用全细胞膜片钳技术记录电压依赖性钠电流，并将模型组与对照组进行比较。结果：皮质发育障碍模型组CA1区神经元钠电流激活的电压依赖性向超极化方向偏移，失活的电压依赖性向去极化方向偏移，窗口钠电流较对照组明显增大（P<0.05）。模型组失活后的恢复时间常数较对照组明显缩短（P<0.05）。结论：电压依赖性钠通道功能的改变可能与皮质发育障碍癫痫易感性增高有关。     

TRPC1在TGF-β1诱导支气管上皮细胞间充质转化中的作用

目的:探究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)间充质转化(EMT)中的作用。方法:以16HBE细胞株为研究对象,免疫荧光、RT-PCR和Western blotting检测16HBE细胞EMT过程中TRPC1 mRNA和蛋白的表达;Western blotting检测TRPC1阻断剂和siRNA干扰对16HBE细胞EMT的影响。结果:(1)TGF-β1刺激后细胞形态明显改变,E-钙黏蛋白表达减少(P0.01),而α-SMA蛋白表达增加(P0.05)。(2)TRPC1广泛存在于16HBE细胞,且TGF-β1刺激后TRPC1 mRNA和蛋白的表达增加(P0.05)。(3)与TGF-β1组相比,阻断剂和TGF-β1共同作用组或siRNA和TGF-β1共同作用组细胞形态改变受抑制,E-钙黏蛋白和α-SMA蛋白表达受抑制(P0.05)。结论:TGF-β1诱导16HBE细胞发生EMT,其机制可能与其上调16HBE细胞TRPC1有关。     

人α—防御素HNP1基因在气管上皮细胞传染的表达研究

目的 探讨人α－防御素ＨＮＰ１基因在气管上皮细胞转染表达的可行性。方法 采用脂质体转染法将ＨＮＰ１ ｃＤＮＡ重组真核表达质粒ｐＢａｂｅ－Ｎｅｏ－ＨＮＰ１导入无血清培养的人、兔气管粘膜上皮细胞，利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法及免疫组化法，分别在核酸水平及蛋白质水平检测ＨＮＰ１的表达。结果 用ＲＴ－ＰＣＲ在人和兔的转染的上皮细胞总ＲＮＡ提取物中均扩增出１条３１９ｂｐ的ＤＮＡ片段，与ＨＮＰ１ｃ     

氧化苦参碱对豚鼠心室肌细胞膜钠通道的影响

目的：研究氧化苦参碱(Oxy)对豚鼠心室肌细胞膜钠通道电流的影响，探讨Oxy在离子通道水平的作用机制。 方法: 用急性酶解法分离豚鼠心室肌细胞，应用膜片钳全细胞记录技术，观察不同浓度的Oxy对钠通道的影响。 结果: 用Oxy 1、10、100、1 000 μmol/L可浓度依赖性地抑制钠电流。在100 μmol/L时，给药后电流密度抑制约40％（P<0.01），可使心肌细胞钠电流－电压曲线上移，但激活电位、峰电位及反转电位无改变；Oxy使失活曲线向负电位方向变化，并使灭活后恢复过程延迟；对激活曲线无明显影响。 结论: Oxy可通过浓度依赖性和电压依赖性地抑制心肌细胞膜钠通道电流。     

口腔粘膜上皮细胞基因组DNA的制备及其在HLAⅡ类基…

本文介绍一种用特制的尼龙刷采集口腔粘膜上皮细胞用以制备基因组ＤＮＡ的方法。初步试验结果显示用此方法每次可获得６～１０μｇ基因组ＤＮＡ，完全能满足全套ＨＬＡⅡ类基因（ＤＲＢ１、ＤＱＡ１、ＤＱＢ１、ＤＰＡ１和ＤＰＢ１）分型的需要。ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因分型（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法）实例结果表明，以此方法获得的ＤＮＡ用于基因分型的效果与从外周血制备的ＤＮＡ相同。与常规方法相比，本方法具有简便、快速和经济的优     

大蒜素对心室肌细胞膜钠通道电流的影响

目的: 研究大蒜素对心室肌细胞膜钠通道电流(I_Na)的影响,探讨大蒜素在离子通道水平的药理作用机制。方法: 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,应用膜片钳全细胞记录技术,观察不同浓度的大蒜素对钠通道的影响。结果: (1)快钠通道电流:大蒜素对豚鼠心室肌细胞I_Na呈电压依赖性和浓度依赖的抑制作用。(2)大蒜素对I_Na电流密度-电压关系(I-V)曲线的影响:给药前I_Na电流密度在膜电位-40 mV达到最大峰值为(-13.41±6.95)pA/pF;在500 μmol/L灌流法给药后,电流密度最大峰值为(-8.53±3.70)pA/pF,给药后电流密度减少约48%。给药前后电流密度变化有显著差异(P<0.01)。(3)大蒜素对I_Na激活-失活曲线的影响:在大蒜素500 μmol/L灌流法给药后,激活曲线显示给药前后半数激活电压为(-44.72±15.61) mV vs (-45.66±17.86)mV,斜率因子为-2.7±0.8 vs -2.2±0.7,给药前后变化无显著差异。失活曲线显示大蒜素使失活曲线向负电位方向变化,差异显著;半数失活电压为(-88.61±9.60) mV vs(-103.03±8.90) mV(P<0.01),斜率因子为-7.85±0.88 vs -7.55±2.75(P>0.05)。结论: 大蒜素可浓度依赖性和电压依赖性地抑制心肌细胞膜钠通道电流;给药后I-V曲线上移,显著减少电流密度;其对失活曲线有明显影响,提示大蒜素主要作用于钠通道的失活态。     

初级感觉神经元钠通道与慢性病关系研究进展

钠通道广泛分布在可兴奋细胞中 ,是细胞机能的分子基础之一。利用神经分子生物学技术克隆出来的钠通道 ,主要为电压门控通道 ,多数对钠通道选择性拮抗剂河豚毒素(ＴＴＸ)较敏感。现将初级感觉神经元上钠通道的种类及其与慢性病的关系研究进展介绍如下。1　初级感觉神经元有多种钠通道表达初级感觉神经元主要指背根神经节 (ＤＲＧ)神经元和三叉神经节神经元 ,也包括伤害性感受神经元 ,是痛觉通路的起点。近 10年 ,已从哺乳类动物克隆出来 12种电压门控钠通道 ,其中有 8种钠通道基因在神经系统中表达。在初级感觉神经元上有几种钠通道表达 ,哪…