抗人肝癌细胞单克隆抗体的研制及鉴定

利用杂交瘤技术,以人肝癌细胞株HC_(108)免疫Balb/c小鼠,4周后取其脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经细胞抗原ELISA和间接酶桥法筛选,获得一株能稳定分泌抗人肝癌单克隆抗体的杂交瘤株,其染色体众数为96～110个,DNA指数为3.0。此单抗为IgM型,轻链为k链。免疫组化证实此单抗与2例胚胎肝脏组织、胚胎结肠组织呈现较弱的阳性反应;除与3例宫颈癌细胞有很弱的着色反应外,与5例肝癌组织和肝癌细胞株均呈明确的阳性反应,而与其他肿瘤细胞,胚胎组织,正常成人肝脏、心脏、肾脏、肺脏、结肠、胰腺等均未见反应。琼脂糖免疫双扩散和单抗吸收试验证实此肿瘤抗原与甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(Ferritin)、癌糖蛋白(CA_(19-9))无免疫相关性。免疫酶电镜染色显示此肝癌相关抗原定位于细胞膜,Western Blot显示其分子量为38kD。是一株特异性良好,阳性反应率较高的抗人肝癌单克隆抗体。     

抗人AFP单克隆抗体酶联免疫检测法的建立及其应用

报道用抗人甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(McAb)标记辣根过氧化物酶(HRP),以纯化之免抗人AFP多克隆抗体包被徽孔条板,建立用于检测血清中AFP的酶联免疫法。结果表明:该方法具有特异、敏感(10ng/ml)、重复性好(变异系数<10％)和简便等优点。在204例临床血清标本的检测中,本方法与放射免疫法(RIA)的结果相符合。     

抗人IgM单克隆抗体的制备及其特征研究

以人IgM作为抗原免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤技术获得5株分泌抗人IgM单抗的杂交瘤细胞株.通过酶联免疫吸附试验、免疫双向扩散试验证明:该组单抗仅与人IgM起反应,而不与其他各类免疫球蛋白反应。间接免疫荧光试验证明:该组单抗测得不同人群外周血淋巴细胞阳性数与用抗B细胞单抗和直接免疫荧光法测得的结果接近.免疫转印试验证明抗体作用的分子量为50～70kd(dalten法定单位为u,换算系数0.9921,下同).提示为IgM.本文还对单抗应用价值进行了讨论。     

绿芦笋对体外人肝癌细胞生长的影响

在体外培养人肝癌细胞（ＢＥＬ－７４０２）过程中，加入自制的绿芦笋原汁和绿芦笋乙醇提取液，同时选用５－氟脲嘧啶和三尖杉酯碱作为阳性药物，观察对细胞生长的抑制作用。每天每组取３瓶细胞进行活细胞计数，连续１０ｄ并绘制生长曲线，结果表明，低浓度的绿芦笋原汁和绿芦笋乙醇提取液（２０ｍｇ／ｍｌ）能显著抑制肝癌细胞的生长。     

康莱特注射液诱导Bel-7402人肝癌细胞分化的研究

目的探讨康莱特（KLT）注射液诱导Bel-7402人肝癌细胞分化作用,为肝癌的分化治疗提供可借鉴的资料。方法选用反映肝细胞恶变的甲胎蛋白（AFP）的分泌量、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）和醛缩酶（ALD）,反映肝癌细胞分化的酶学指标酪氨酸-α-酮戊二酸转氨酶（TAT）,鸟氨酸氨基甲酰转移酶（OCT）和碱性磷酸酶（ALP）作为观察肝癌细胞恶性表型逆转的指标。结果 Bel-7402人肝癌细胞经10μl/ml康莱特注射液处理后,AFP分泌量明显低于对照组,γ-GT和ALD活力也明显低于对照组;相反,OCT、TAT和ALP的活力则明显高于对照组,差异均具有显著性（P〈0.05）和（P〈0.01）。结论证明康莱特注射液是体外培养Bel-7402人肝癌细胞有效的分化诱导剂。     

肝癌内分泌分化的免疫组织化学研究

本文应用嗜银染色和免疫组织化学方法对３４例原发性肝癌（肝细胞肝癌２８例，胆管细胞型肝癌６例）组织及癌旁组织中的内分泌细胞进行了研究；结果显示：内分泌细胞阳性率为１１．７６％（肝细胞肝癌３例，胆管细胞型肝癌１例）；在癌旁组织中也发现两例异位胃泌素阳性细胞。本文结果提示：①肝癌组织中存在内分泌细胞的分化；②癌旁组织中发现异位胃泌素阳性细胞的表达。     

不同化疗药物对人肝癌耐药细胞BEL-7404/ADM端粒酶活性抑制的研究

目的:观察几种常用化疗药物对人肝癌耐药细胞BEL-7404/ADM端粒酶活性的影响.方法:利用端粒重复扩增实验(TRAP)结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,测定BEL-7404/ADM耐药细胞经过多种化疗药物[顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)、长春新碱(VCR)]不同浓度和时间作用后端粒酶活性的变化.结果:当各种药物高浓度处理细胞24 h后再去除药物,DDP对端粒酶的活性完全抑制,MMC有部分抑制,ADM和VCR无抑制作用;低浓度药物处理细胞3 d,其结果同高浓度相似.结论:高浓度DDP和MMCC在短时间内或低浓度长时间作用对人肝癌耐药细胞BEL-7404/ADM端粒酶活性有显著抑制作用,抑制作用可能与药物的作用浓度和时间有关.     

原发性肝癌患者尿甲胎蛋白的测定

本文用放射免疫分析(RIA)法对40例原发性肝癌(PLC)患者及20名对照者尿中甲胎蛋白(AFP)进行检测。发现PLC患者尿中确有AFP,与血清AFP符合率达90％,而对照的20名中,血清及尿中AFP均阴性,为PLC的防治研究工作提供了一种简便易行的新方法。     

肝癌疫苗激活的TIL细胞对原发性肝癌患者的NK细胞活性的影响及意义

目的：探讨经肝癌疫苗激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TIL)对原发性肝癌患者NK细胞活性的影响。方法：使用冷冻方法制成肝癌疫苗，用于激活TIL细胞。对26例原发性肝癌患者使用经肝癌疫苗激活的TIL细胞治疗，检测其治疗前后．NK细胞活性的变化，并与对照组相比较。结果：应用肝癌疫苗激活的TIL细胞的患者，其NK细胞活性明显提高。结论：应用肝癌疫苗激活的TIL细胞，能明显地提高原发性肝癌患者的NK细胞活性。     

肝癌瘤苗激活的TIL对原发性肝癌患者免疫功能的影响

目的：探讨经肝癌瘤苗激活的TIL对原发性肝癌（下称肝癌）患者免疫功能的影响。方法：使用冷冻方法制成肝癌瘤苗，用于激活TIL。并钭经肝癌瘤苗激活的TIL用于26例肝癌患者的治疗，检测治疗前后其CD3、CD4、CD8、CD4／CD8比值，并与对照组相比较。结果：应用经肝癌瘤苗激活的TIL治疗的肝癌患者，其CD3、CD4、CD8、CD4／CD8比值明显升高，CD8则明显下降，经与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01）。结论：应用经肝癌瘤苗激活的TIL治疗肝癌患者，能明显提高肝癌患者的免疫功能。     

肝癌病人戊型肝炎病毒感染的检测报告

采用酶联免疫吸附试验检测８４例肝癌病人和８０例非肝癌病人血清中的戊型肝炎抗体，丙型肝炎抗体和乙肝表面抗原，结果：两种人群相应抗体抗原的阳性率依次为：１０．７％，３０．０％，０．１％和５．０％，５．０％，１０．０％，两组比较，相应阳性率的Ｐ值分别为为Ｐ〉０．０５，Ｐ〈０．０１，Ｐ〈０．０１，ＯＲ值为１．１．６．８。     

肝癌研究现状

进一步了解导致肝癌发生的机制 ,对肝癌临床诊治现状进行综合评述。     

苦杏仁甙对小鼠肝、肾细胞增生的影响

本文以苦杏仁甙4mg/20g 体重及7mg/20g 体重经皮下给予小鼠,给药6次后参入(~3H)胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR),经放射自显影计数肝细胞、枯否细胞、肾小管上皮细胞之标记细胞以及分裂期细胞,算出标记指数(LI)及分裂指数(MI))与对照组比较,肝细胞、枯否细胞之两个用药组与对照组间差异均为非常显著(P<0.01)本实验显示苦杏仁甙对小鼠肝细胞及枯否细胞增生有明显促进作用。     

大鼠肝癌组织中GD_3合成酶升高的特异性研究

作者改进了鞘糖脂糖基转移酶的检测方法，用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０Ｆｉｎｅ成功地分离了酶反应的同位素标记产物与底物。从而缩短了酶活性的测定时间，简化了操作步骤，并减少了同位素的污染机会。在此基础上系统检测了二乙基亚硝胺诱发肝癌大鼠及正常大鼠各脏器（肝、脾、肾、心、脑、肺、胃）ＧＤ３合成酶（ＣＭＰ－ＮｅｕＡｃ：ＧＭ３唾液酸转移酶；ＳＴ２）及目前报道的其他４种鞘糖脂唾液酸转移酶（ＳＴ１、３、４、５）的活性，企图从中选择一种ＳＴ２含量高、活性高的组织作为酶分离纯化的材料。结果表明，ＳＴ２在二乙基亚硝胺诱发肝癌大鼠肝癌组织中特异性升高，从而提示此组织可用作ＳＴ２分离纯化的最佳材料。     

PTEN基因在原发性肝细胞癌中的表达

目的 探讨PTEN基因变异在原发性肝细胞癌（HCC）发生发展中的作用。方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术,对30例肝癌组织、30例癌旁组织和16例正常肝组织细胞中PTEN基因的表达情况进行了检测和分析。结果 肝癌组织中PTEN基因表达水平明显低于癌旁组织和正常肝组织（F=6．785,q=4．269、4．549,P〈0．05）。低分化肝癌组织中PTEN基因表达水平显著低于高、中分化肝癌组织（t=3．266,P〈0．01）。结论 PTEN基因失活与肝癌发生密切相关;PTEN基因表达水平与HCC恶性程度有明显相关性,提示萁蛮异可以作为病人预后判断的指标．