人类解旋酶样转录因子过表达促进辐射诱导的A549细胞凋亡

目的 探讨人类解旋酶样转录因子(HLTF)对辐射诱导细胞凋亡的影响及其机制。方法 将空质粒和带FLAG标签的HLTF表达质粒分别转染人肺癌细胞A549,⁶⁰Co γ射线照射观察细胞凋亡变化。用Western blot 检测HLTF在细胞核和胞质内水平的变化及线粒体细胞色素C的释放。结果 HLTF转染可促进γ射线诱导的细胞凋亡,凋亡率为(32.2±2.1)%,高于空载体转染组(11.4±2.3)%和Mock转染组(11.1±1.8)%(F=101.85,P<0.01)。辐射后HLTF在胞质内的表达水平显著提高。HLTF转染组胞质内细胞色素C的水平亦显著提高。结论 HLTF可促进辐射损伤诱导的细胞凋亡, 其部分机制可能是通过提高核质转位以及影响线粒体细胞色素C的释放来实现的。     

辐射损伤对HRAD17基因转染不同类型细胞的影响

目的 探讨HRAD17在DNA辐射损伤修复及辐射诱导的凋亡中的作用。方法 利用基因转染技术，对小鼠成纤维细胞NIH3T3和人宫颈癌HeLa细胞均分别转染pDOR-neo载体，pDOR-HRAD17s（正义）和pDOR-HRAD17a（反义）质粒，G418筛选获得阳性克隆。转染后各组细胞去血清培养48h同步化后给予。Co7射线10Gy照射，吸收剂量率为2．54Gy／min，加入完全培养基继续培养，并于0、6、12、14、36和48h收集固定细胞，碘化丙啶（PI）避光染色后，流式细胞仪检测细胞DNA量。结果 在辐射损伤后，转染正义HRAD17的成纤维细胞主要发生G1／S期阻滞，转染正义HRAD17的肿瘤细胞主要发生G2/M期阻滞；转染正义HRADl7的细胞凋亡比例降低，转染反义HRAD17的细胞凋亡比例升高。结论 HRAD17同时参与细胞周期G1／S和G2/M期阻滞，并抑制辐射损伤诱导的细胞凋亡。     

顺铂诱导肺腺癌A549细胞线粒体基因组及凋亡相关基因的差异表达

目的　探讨顺铂诱导肺腺癌A5 4 9细胞线粒体基因组及核凋亡相关基因的差异表达情况。方法　实验组A5 4 9细胞给予0 5 μg/ml顺铂作用 2 0h,同时设立空白对照组 ,用人线粒体基因组寡核苷酸芯片检测 2 6个靶基因的差异表达。用流式细胞技术分析细胞凋亡比例。结果　实验组A5 4 9细胞的细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ(CoxⅠ)、12SrRNA以及半胱氨酸转运RNA(tRNA Cys)、天冬酰胺转运RNA(tRNA Asn)基因表达显著上调 ,促凋亡基因bax和另外 3个编码多肽基因、4个tRNA基因表达也有一定程度上调。实验组A5 4 9细胞凋亡率为 8 5 %± 0 78% ,显著高于对照组的 1 3%± 0 5 6 % (n=5 ,P <0 0 5 )。结论　顺铂诱导能使残存的A5 4 9细胞mtDNA编码的部分基因表达增强 ,并可能通过对bax基因表达的上调促进细胞凋亡。     

X射线诱导细胞凋亡的机制

细胞凋亡是在基因凋控下的细胞主动死亡过程。X射线作为一种电离辐射，其诱导细胞凋亡的机制目前仍未完全明了，可能存在着与P53、Cty-c、AIF、Bcl-2、Caspase酶等物质密切相关的传导系统。随着对此机制认识的不断深入，必能更好地指导临床对肿瘤等疾病的治疗。     

长链非编码RNA肿瘤抑制因子对阿霉素诱导的A549细胞凋亡的影响

目的 探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)对阿霉素（doxorubicin,DOX）诱导的肺癌细胞系A549细胞凋亡的影响。方法 采用高通量lncRNAs基因芯片技术,筛选出2 μmol/L的DOX处理组中差异表达的lncRNAs,同时通过实时荧光定量PCR技术进行复筛,得到差异表达最显著的lncRNA,lnc-ZMYM6-2-1,我们命名为lncRNA肿瘤抑制因子（tumor inhibitory factor,TIF）。进一步比较19对肺癌组织和癌旁组织样本中lncRNA TIF的表达差异。通过MitoTracker线粒体染色法检测lncRNA TIF对细胞线粒体分裂与融合的影响,通过流式细胞仪检测lncRNA TIF对细胞凋亡的影响。结果 ①通过基因芯片与实时荧光定量PCR检测发现,与不做处理的对照组相比,DOX处理组中lncRNA TIF表达显著上调（n=3;t=6.4,P<0.01）;②与癌旁组织比较lncRNA TIF在肺癌组织样本中低表达（n=19;t=18.5,P<0.01）;③敲低lncRNA TIF能够抑制DOX引起的线粒体分裂和细胞凋亡。结论 化疗药物DOX能够诱导lncRNA TIF的表达进而诱导细胞凋亡,其机制可能通过促进线粒体分裂来促进细胞凋亡。     

(32)P-磷酸铬体外诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡

目的观察^32P-磷酸铬(^32P胶体)体外诱导人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞周期变化和发生细胞凋亡的现象，建立剂量-效应和时间-效应关系。方法将^32P胶体加入A549细胞培养体系进行内照射，初始放射性浓度分别为0，93，180，278，370和463MBq／L，采用Giemsa染色、透射电镜、末端原位标记(TUNEL)等方法进行凋亡细胞的形态学、超微病理、生化特征检测，应用流式细胞术定量检测细胞周期变化和细胞凋亡率。结果A549细胞受照射后S期 G2-M期细胞比率在96h以内呈上升趋势，之后逐渐下降。A54g细胞受照射后72h左右出现兴奋性表现，96h起各受照组均检出凋亡，各剂量组在照射后120h达到凋亡高峰。结论在较低剂量范围内，^32P胶体内照射可以体外诱导人NSCLC A54g发生72h以后的迟发相凋亡，细胞凋亡率与内照射初始放射性浓度呈正相关。     

X射线诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的适应性反应及相关miRNA筛选的研究

目的 研究X射线辐射诱导非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞凋亡的适应性反应,并筛选适应性反应相关的微RNA（miRNA）。 方法 将NSCLC A549细胞分为6组,包括 50 mGy+20 Gy、200 mGy+20 Gy、20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组及对照组（0 Gy）,前2组细胞分别用50、200 mGy初始剂量进行照射,培养6 h后用20 Gy的效应剂量进行照射,20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组同时进行照射。培养24 h后使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。利用小RNA测序技术筛选差异表达miRNA,并对其靶基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路的功能富集分析。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对部分差异表达miRNA进行验证。2组间数据的比较采用Welch t检验。 结果 50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组的A549细胞早期凋亡率分别为（1.81±0.11）%和（2.17±0.19）%,低于20 Gy照射组的（4.54±0.23）%,且差异均有统计学意义（t=10.680、8.006,均P<0.01）。与20 Gy照射组相比,50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组共同差异表达趋势miRNA有1个上调（miR-3662）、15个下调（miR-185-3p、miR-1908-5p、miR-1307-5p、miR-182-3p、miR-92a-3p、miR-582-5p、miR-501-3p、miR-138-5P、miR-1260b、miR-484、miR-378d、miR-193b-3P、miR-127-3p、miR-1303及miR-654-5p）。GO富集分析结果显示,差异表达miRNA调控靶基因功能显著富集于细胞通讯调节、代谢过程的正向调节、代谢信号的调节、酶结合及催化活性等过程。KEGG富集分析结果显示,靶基因相关信号通路显著富集于溶酶体、丝裂原活化蛋白激酶、Ras和内吞作用等信号通路。qRT-PCR检测结果显示,miRNA表达情况与基因芯片结果趋势一致（10个miRNA表达水平得到验证）。 结论 X射线50、200 mGy照射剂量均能诱导NSCLC A549细胞凋亡的适应性反应,并筛选到一组共同差异表达的miRNA,可能在X射线辐射诱导细胞凋亡的适应性反应中发挥了重要作用,有可能成为调节电离辐射生物效应的潜在靶点。     

茶多酚诱导肝癌细胞凋亡

为进一步研究茶多酚诱导体外培养的肝癌细胞株HepG-II细胞发生凋亡的作用,采用MTT法、形态学观察、琼脂糖凝胶电泳和末端脱氧核苷酸转移标记法观察被茶多酚处理后的ＨepG－II细胞的形态学和生化等指标的变化。MTT法研究结果显示,当茶多酚浓度为250μg/ml时即时诱导HepG-II细胞凋亡,并与浓度呈正相关;当茶多酚浓度＞2000μg/ml时,抑制率增强的幅度明显减慢。透射电镜下观察到核染色质浓集呈块并可见凋亡小体;荧光染色在荧光显微镜下可见部分细胞核或细胞质内出现致密浓染的黄绿色块状和颗粒状荧光等凋亡细胞的形态学改变。琼脂糖凝胶电泳呈典型的DNA梯形图像。末端脱氧核苷酸转移标记法进一步证实茶多酚可诱导HepG-II细胞的凋亡。提示茶多酚可诱导体外培养的肝癌细胞株HepG-II细胞发生凋亡,具有抗肝癌的作用。     

凋亡素的克隆及诱导HeLa细胞凋亡

目的：克隆凋亡素（apoptin)的全长基因,在肿瘤细胞HeLa中表达并诱导其凋亡,方法：从CAV病毒基因组TK5803中通过PCR技术扩增凋亡素基因,直接克隆至真核表达载体pCDNA3.1/His/Topo,序列测定证实其正确性,并克隆至pCIneo真核表达载体构建重组表达载体,采用脂质体转染HeLa细胞,转染3d后Honchest33258染色并于荧光显微镜下观察细胞状态,结果与讨论：核酸序列分析证实所克隆的凋亡基因与文献报道的一致,将其成功克隆至真核表达载体,pCDNA3.1/his/Topo和pCIneo,构建了真重组质粒pCIneo-apoptin和pCDNA3.1/His/Topo-apoptin,转染Hela细胞3d后可见明显的细胞凋亡,而只转染空质粒的对照组则较少,表明凋亡素能够有效地诱导HeLa细胞凋亡,本研究为进一步研究凋亡素诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制打下了基础。     

Studies on radiation-induced apoptosis in G0 human lymphocytes

Purpose: To determine the relationships between the frequencies of radiation-induced chromosomal alterations and the extent of apoptosis in G₀ human lymphocytes.

Material and methods: G₀ human peripheral blood lymphocytes (HPBL) were X or γ-irradiated, in the presence or absence of the repair inhibitor cytosine arabinoside (Ara-C). Directly after irradiation, a part of the lymphocytes were stimulated to grow while the rest were stimulated 48 h after irradiation. These lymphocyte cultures were analysed for induction of chromosomal aberrations. A subset of lymphocytes was kept in G₀ and analysed for cell viability, apoptosis and p53 expression.

Results: The fraction of cells bearing dicentrics was reduced in lymphocytes stimulated to grow 48 h post irradiation as compared to lymphocytes stimulated immediately after irradiation. The decrease in the frequency of dicentrics correlated with the increase in the number of apoptotic cells. The operative apoptotic pathway in irradiated Go lymphocytes was dependent on the expression of p53.

Conclusions: The radiation-induced apoptotic response of G₀ lymphocytes is p53 dependent and increases with the time they are held in G₀. When mitogen was added 48 h after irradiation, cells with dicentrics were either preferentially eliminated or did not enter mitosis. Thus the radiation-induced damage can be underevaluated depending on the time between radiation exposure and the induction of proliferation. These results may have relevance for biodosimetry studies or for evaluations of the efficacy of radiotherapy which are based on the frequencies of chromosomal aberrations.     

电离辐射诱导G2期阻滞的机制

电离辐射损伤后,细胞通过若干关卡来调控细胞周期的进程,使细胞有时间进行DNA修复,确保染色体组的完整性和遗传稳定性,减少突变的发生。不同的电离辐射使不同细胞产生G1、G2和S期等不同时相的变化,但电离辐射后G2期阻滞的现象十分普遍。近年来,对G2期阻滞机制的研究多集中在Chk1、Chk2和p53上。     

细胞因子对小鼠脾单个核细胞Th17分化和IL-17分泌的影响

目的 研究外源性肿瘤坏死因子β(TGF-13)、白细胞介素(IL)-6和IL-23对小鼠脾单个核细胞Th17分化和IL-17分泌的影响,并初步探讨其在器官移植免疫中的调节机制.方法 用佛波酯(PMA)和离子霉素(Ion)刺激小鼠脾单个核细胞4h,将细胞因子与脾单个核细胞共培养72h,根据加入细胞因子的不同,将培养细胞分...     

The role of nucleophosmin/B23 in radiation-induced chromosomal instability in human lymphoblastoid cells of different p53 genotypes

Purpose:?To investigate the role of nucleophosmin (NPM/B23) in radiation-induced chromosomal instability and apoptosis in human lymphoblastoid cells with different protein 53 (p53) status.

Materials and methods:?Wild type (wt) p53 TK6 and mutant type (mt) p53 WTK1 with or without short hairpin RNA (shRNA)-mediated silencing of NPM, TK6 with or without short interfering RNA (siRNA)-mediated silencing of p53 (p53i and NEGi) were irradiated with 4 Gy gamma-rays. Six to 48?h after irradiation, the index of apoptosis, chromosome aberration, cell cycle distribution and the levels of total NPM and phosphorylated-threonine 199 (pThr¹⁹⁹) NPM proteins were measured. Cells in some dishes were treated with 10?μM Olomoucine (OLO) for 3?h before irradiation and remained in the medium after irradiation.

Results:?The rates of radiation-induced apoptosis in TK6 and TK6/NEGi were about 2-fold of those in WTK1 and TK6/p53i, while the frequencies of polyploidy in TK6 and TK6/NEGi were obviously lower than those in WTK1 and TK6/p53i. Moreover, after irradiation, pThr¹⁹⁹ NPM levels increased significantly in WTK1 and TK6/p53i, and slightly increased in TK6 and TK6/NEGi, indicating that the increased level of pThr¹⁹⁹ NPM was related to p53 status. When Thr¹⁹⁹ hyperphosphorylation of NPM was inhibited by OLO or when NPM was knocked down, we found that radiation-induced apoptosis was more pronounced and polyploidy formation was reduced as compared with negative control while the magnitude of these changes in TK6 was obviously higher than that in WTK1, indicating that NPM has an antagonistic interaction with wt p53.

Conclusions:?NPM/B23 plays an important role in protecting cells from radiation-induced apoptosis and increasing polyploidy formation via either a p53 or non-p53 pathway.     

Off-resonance proton T1p dispersion imaging of 17O-enriched tissue phantoms

Proton T_1p dispersion imaging is a recently described method for indirect detection of ¹⁷O. However, clinical implementation of this technique is hindered by the requirement for a high-amplitude spin-locking field (γB₁ > 1 kHz) that exceeds current limitations in specific absorption rate (SAR). Here, a strategy is offered for circumventing high SAR in T_1p dispersion imaging of ¹⁷O through the use of low-amplitude off-resonance spin-locking pulses (γB₁ < 300 Hz). Proton spin-lattice relaxation times in the off-resonance rotating frame were measured in H₂¹⁷O-enriched tissue phantoms. On- and off-resonance T_1p dispersion imaging was implemented at 2 T using a spin-locking preparatory pulse cluster appended to a standard spin-echo sequence. On- and off-resonance dispersion images exhibited similar ¹⁷O-based image contrast. Magnetization transfer effects did not depend on ¹⁷O concentration and had no effect on image contrast. In conclusion, off-resonance proton T_1p dispersion imaging shows promise as a safe, sensitive technique for generating ¹⁷O-based T_1p contrast without exceeding SAR limitations.     

P53在电离辐射诱导的细胞周期解耦联中的作用

目的 探讨p53基因在电离辐射(IR)诱导的MCF-7细胞周期解耦联中的作用。 方法 构建RNAi表达载体,经磷酸钙共沉淀法转染293T细胞形成病毒包装颗粒,感染MCF-7后采用Western blot检测P53蛋白的表达,建立p53基因沉默模型。将p53野生型(+ +)和沉默模型(- -)经电离辐射处理后,采用流式细胞术分别测定细胞周期并分析细胞多倍体的变化。结果 与p53^{+ +}组比较,p53^{- -}模型组G₀ G₁期细胞百分数减少,S期、G₂期增加(P<0.01),倍体分析表明二倍体数减少,四倍体、八倍体均增加(P<0.01)。在p53^{+ +}和p53^{- -}细胞中,与假照射组比较,4 Gy照射后G₀ G₁期、S期细胞百分数减少,而G₂期增多(P<0.01);倍体分析表明,照射后二倍体数减少,四倍体、八倍体均增加(P<0.01)。与p53^{+ +}+IR组比较,p53^{- -}+IR 组发生G₀ G₁期、S期细胞百分数减少,G₂+M期增多(P<0.01),二倍体数减少,四倍体增多(P<0.01),八倍体无明显差别。结论 电离辐射可以诱导细胞发生G₂期阻滞和细胞周期解耦联;P53在电离辐射诱导的MCF-7细胞G₂期阻滞中发挥作用,而在细胞周期解耦联中可能不发挥作用。     

60Coγ射线诱导的新生大鼠大脑皮质神经细胞凋亡

目的 采用电离辐射诱导的新生大鼠大脑皮质神经细胞损伤模型,探讨电离辐射诱导发育脑神经细胞死亡的特征和机制。方法 新生大鼠接受单次2.0 Gyγ射线照射后,采用DNA凝胶电泳、TUNEL和HE染色鉴定大脑皮质神经细胞死亡的类型和时程变化特点;应用免疫组织化学方法研究p53和iNOS在细胞死亡过程中的可能作用。结果 DNA凝胶电泳、TUNEL和HE染色表明,2.0 Gyγ射线照射可诱导新生大鼠大脑皮质神经细胞凋亡。大脑皮质各区域凋亡指数于照射后4 h开始增高,至12 h达到峰值;照射后相同时间点各皮质区域凋亡指数比较,新皮质最高,海马次之,旧皮质最低;P53和iNOS免疫阳性细胞计数定量结果显示,照射后相同时间点各皮质区域P53和iNOS免疫阳性细胞数差异无统计学意义。结论 2.0 Gyγ射线照射诱导了新生大鼠大脑皮质神经细胞凋亡;不同皮质区域的神经细胞对电离照射引起的损伤反应是相似的,但不同皮质区域的神经细胞凋亡存在差异。     

lyGDI在HeLa细胞中的表达与辐射增敏研究

目的将lyGDI和突变体D191yGDI转入到不含内源性lyGDI的HeLa细胞中，探讨其是否有凋亡信号转导功能，并分析lyGDI的导入表达能否增加辐射诱导HeLa凋亡的敏感性。方法用脂质体转染的方法将构建于pCDNA3．1HisA载体上全长的LyGDI和D191yGDI转入HeLa细胞，用Westem blot检测LyGDI的表达和Xpress标记物，同时，用细胞流式仪和Annexin V-FTTC双染色检测HeLa细胞瞬时转染诱导的细胞凋亡。用G418筛选稳定表达LyGDI的克隆，经12Gv的^60Coγ射线辐射处理，Western blot分析Caspase-3的活性及克隆形成试验来观察LyGDI的导入是否增加HeLa细胞的放射敏感性。结论IyGDI在HeLa细胞中的瞬时表达诱导了细胞的凋亡，LyGDI具有凋亡信号转导功能。其次，Western blot检测Caspase-3和克隆形成试验的结果表明LyGDI的导入增加了HeLa细胞辐射凋亡的敏感性。     

ZNF451通过调控53BP1/MDC1促进A549和HeLa细胞DNA损伤修复

目的:探究SUMO E3连接酶(zinc finger protein 451,ZNF451)介导非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞DNA损伤修复的功能及机制。方法:采用γ射线或依托泊苷处理A549细胞和HeLa细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,蛋白免疫印迹法检测蛋白表达量。DR-GFP质粒系统检测DNA损...