小鼠巨细胞病毒感染对调节性T细胞扩增的影响及机制

目的 在体内外水平研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对调节性T细胞(Treg)扩增的影响及其可能的机制.方法 建立全身播散型MCMV慢性感染模型,分别采用Western blot法和流式细胞术动态检测小鼠脾细胞中Foxp3的蛋白表达强度和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率;模拟MCMV感染细胞的免疫环境,建立T淋巴细胞与MCMV感染的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)共培养细胞模型,在培养前和共培养3 d后检测T淋巴细胞中的Foxp3蛋白表达水平及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率,RT-PCR方法检测MEF中转化生长因子(TGF)-βmRNA表达水平,双抗体夹心ELISA方法检测共培养上清中TGF-B蛋白表达水平.结果 整体研究发现,MCMV在感染慢性期可显著增加T淋巴细胞中Foxp3的蛋白表达水平和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率.体外细胞模型发现,MCMV感染在体外同样可以上调T细胞中的Foxp3蛋白表达和Treg细胞比率.TGF-β在MEF中的基因表达和上清中的蛋白表达在MCMV感染后显著增加.结论 MCMV感染在体内外均可诱导Treg在数量上的扩增和功能上的活化;MCMV感染导致宿主细胞TGF-β表达水平升高,可能是其在外周诱导Treg种群扩增的重要机制之一.     

IL-10在巨细胞病毒感染中的免疫机制研究进展

巨细胞病毒是一种具有潜伏-复活特性的DNA病毒,主要在免疫力缺陷人群中发病.免疫力正常人体感染后可不引起任何症状.IL-10是人体重要的免疫调节细胞因子,可通过多重免疫抑制模式减弱、停止病毒反应:如影响促炎症细胞因子和趋化因子的表达、调节抗原提呈细胞、抑制效应细胞和NK细胞应答等.目前,很多研究报道IL-10与巨细胞病毒免疫机制存在着密切关系.该文就IL-10的生物学作用及其在巨细胞病毒感染中作用研究现状作一综述.     

Vδ2-γδT 细胞在巨细胞病毒感染中的免疫机制研究进展

近年来,在接受移植术者、新生儿、健康人体中,发现一种不常见的 T 细胞亚群(统称 Vδ2-γδT 细胞)具有抗巨细胞病毒免疫反应特征。在巨细胞病毒感染后,Vδ2-γδT 细胞以一种适应性方式急剧且稳定地扩增。与巨细胞病毒特异性 CD8＋αβT 细胞相似,Vδ2-γδT 细胞具有效应/记忆 RA 表型和细胞毒性效应功能。该文将对近年来巨细胞病毒诱导的 Vδ2-γδT 细胞研究报道进行综述,主要包括 Vδ2-γδT 细胞的分布、表型、活化,及探讨 Vδ2-γδT 细胞在 CMV 感染、急慢性免疫排斥、抗肿瘤中的免疫机制。     

急性ITP患儿外周血调节性T细胞及相关细胞因子的研究

目的检测急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞(regulationTcells,Tr细胞)及相关细胞因子的变化,探讨它们在AITP发病机制中的作用。方法流式细胞仪分别检测AITP患儿和正常健康儿童外周血Tr细胞的数量,ELISA法检测血清中相关细胞因子的含量,并进行相关性分析。结果AITP患儿外周血Tr细胞的数量明显低于正常对照组[(2.83±1.05)%vs(5.07±0.59)%,P<0.05];AITP患儿血清中IL-10、转化生长因子β1(TGF-β1)的含量均也低于正常对照组[IL-10:(29.48±13.69)pg/mlvs(43.10±14.95)pg/ml;TGF-β1(170.04±91.58)pg/mlvs(254.75±130.41)pg/ml,P<0.05],差异有显著性。AITP患儿外周血Tr细胞的比例与血清中IL-10、TGF-β1的含量都呈正相关(r1=0.54,r2=-0.66,P<0.05)。结论急性ITP患儿外周血中Tr细胞数量的减少及相关细胞因子含量的降低可能与急性ITP的细胞免疫失调有关。     

呼吸道合胞病毒对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的 探讨RSV感染诱导哮喘发作的新的免疫机制.方法 选用40只清洁级Balb/c小鼠,随机分组.分别采用不同的方法制备哮喘组(OVA)、哮喘合并RSV感染组(OVA/RSV)、单纯RSV感染组(RSV)及对照组(NS)动物模型.所有小鼠于末次激发后24 h取右肺中叶标本作病理切片,观察炎症改变;部分通过mRNA原位杂交鉴定肺部RSV感染情况;同时收集外周抗凝血,通过流式细胞仪分析及酶联免疫吸附试验(ELISA)测定CD4 CD25 调节性T细胞占CD4 T细胞的百分比和血浆中IL-10和TGF-β1水平.结果 ①OVA、RSV组外周血CD4 CD25 调节性T细胞百分率明显降低(P＜0.01),OVA/RSV组降低更加明显.②与NS组相比.IL-10水平在OVA组明显降低(P＜0.005),RSV组无明显变化(P=0.65),OVA/RSV组则明显升高(P＜0.005).③TGF-β1水平在OVA组较对照组明显降低(P＜0.01),OVA/RSV组降低更加明显.④各组外周血CD4 CD25 调节性T细胞百分率与IL-IO、TGF-B.无相关性(P＞0.005).结论 ①哮喘小鼠体内CD4 CD25 调节性T细胞和IL-IO、TGF-B,数量和分泌水平降低,可能是导致哮喘发生的原因之一.②在哮喘基础上合并RSV感染可进一步减少CD4 CD25 调节性T细胞数量和TGFβ1分泌水平,可能是病毒感染诱发和加霞哮喘的原因之一.③外周血中CD4 CD25 调节性T细胞仅部分由IL-10、TGF-β诱导产生,其相互间的变化水平是综合因素影响的结果.     

人巨细胞病毒感染婴儿γδT、Treg细胞和相关细胞因子的表达及临床意义

目的 探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染婴儿外周血γδT细胞、调节性T细胞（Treg）的表达和相关细胞因子的含量及其临床意义。方法 以22例HCMV感染婴儿（HCMV感染组）和22例门诊健康体检婴儿（对照组）为研究对象,流式细胞术检测两组外周血γδT细胞和Treg细胞的表达,ELISA法检测两组血浆IL-17、TGF-β1水平。结果 HCMV感染组的γδT细胞表达和IL-17水平高于对照组（P < 0.01）;Treg细胞表达和TGF-β1水平低于对照组（P < 0.01）。HCMV组的γδT细胞表达与Treg细胞表达、TGF-β1水平呈负相关（P < 0.05）,而与IL-17水平呈正相关（P < 0.05）;Treg细胞表达与TGF-β1水平呈正相关而与IL-17水平呈负相关（P < 0.05）,IL-17水平与TGF-β1水平无相关性（P > 0.05）。结论 HCMV感染婴儿存在γδT细胞和Treg细胞表达的失衡,γδT细胞可能参与了IL-17的分泌。     

调节性T细胞和Th17细胞在紫癜性肾炎发病机制中的作用

紫癜性肾炎是儿科最常见的继发性肾小球疾病.紫癜性肾炎患儿体内调节性T细胞比例下降,不能有效抑制Th17细胞的分化,导致免疫抑制效应不足及Th17细胞过度表达,在紫癜性肾炎的发病机制和病情进展中可能起到重要的作用.进一步探讨紫癜性肾炎与Th17细胞和调节性T细胞在数量及功能失衡的相关性,可为临床紫癜性肾炎的防治提供更多的理论依据.     

BCG干预对哮喘小鼠调节性T细胞生成的影响

目的：研究表明减毒活菌卡介疫苗(BCG)能上调机体的TH1反应,从而对以TH2反应为主的哮喘等过敏性疾病起抑制作用。该文观察BCG干预后哮喘小鼠调节性T细胞生成的变化,以探讨其可能的作用机制。方法：昆明小鼠以卵白蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘模型。于OVA致敏前及后5d分别以BCG皮内注射干预,在最后一次抗原激发后24h收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血。计数BALF中的细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)的个数。并采用流式细胞仪分析外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的百分比。开腹取脾,制备脾单细胞悬液并培养48h,收集上清液。ELISA法测定上清液中的IL-10的含量。结果：OVA致敏激发组小鼠BALF中的细胞总数为(27.27±5.36)×107/L;EOS为(6.59±1.32)×107/L较正常对照组(1.52±0.36)×107/L和0明显增高(P<0.01),而BCG干预组其BALF中的细胞总数为(13.71±3.17)×107/L及EOS的计数为(1.43±0.37)×107/L较OVA致敏激发组降低(P<0.01);哮喘组外周血CD4+CD25+Treg的百分比为(11.59±1.33)%与正常对照组(13.66±1.68)%比较明显下降(P<0.01)。而BCG干预组CD4+CD25+Treg的百分比为(14.40±2.70)%较哮喘组上升(P<0.05),同时,BCG干预组脾细胞培养上清液中IL-10的水平为7.79±1.34pg/mL,较哮喘组5.54±0.66pg/mL升高(P<0.01)。结论：BCG能明显抑制哮喘小鼠气道的炎症反应,其干预机制可能与促进调节性T细胞生成有关。     

滤泡辅助性T细胞和滤泡调节性T细胞在儿童过敏性紫癜发病中的作用

目的 探讨外周血滤泡辅助性T 细胞(Tfh 细胞)和滤泡调节性T 细胞(Tfr 细胞)表达的变化在儿童过敏性紫癜(HSP)发病中的意义。方法 采用流式细胞术检测40 例HSP 患儿及25 例对照组儿童外周血Tfh 和Tfr 细胞的表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血中相关调控因子Bcl-6、c-MAF、Blimp-1、PD-1 mRNA 的表达。结果 与对照组儿童相比,HSP 患儿外周血Tfh 细胞比例显著升高(PPP+ T 细胞Bcl-6、c-MAF mRNA 的表达水平显著升高(PP+CD25+ 调节性T 细胞PD-1 mRNA 表达水平显著升高(PP结论 Tfh及Tfr 细胞的异常表达可能参与了儿童HSP 的发病过程;Bcl-6、c-MAF 和PD-1 的过表达及Blimp-1 的抑制表达可能是导致Tfh 及Tfr 细胞异常表达的重要原因。     

辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞偏倚在川崎病发病机制中的作用

目的 探讨辅助性T淋巴细胞17(Th17)和Foxp3+CD4+调节性T淋巴细胞在儿童川崎病(KD)免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿40例,同龄健康对照儿童30例.KD患儿在静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前直接取血备检.流式细胞术检测其外周血Th17细胞及Foxp3+CD4+T淋巴细胞比例;荧光定量PCR检测其CD4+T淋巴细胞转录因子ROR-γt、Foxp3 mRNA表达;ELISA法检测其血浆中IL-17、IL-6、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-23水平.结果 急性期KD患儿外周血Th17细胞明显升高(P<0.01),而Foxp3+CD4+T淋巴细胞明显降低(P<0.01);急性期KD患儿Th17细胞转录因子ROR-γt转录水平明显高于健康对照组(P<0.01),Foxp3+CD4+T淋巴细胞转录因子Foxp3表达明显降低(P<0.01);血清IL-6、IL-23和IL-17水平明显升高(Pa<0.01),而TGF-β水平无明显变化(P>0.05).结论 Th17促炎性T淋巴细胞高表达和Foxp3+CD4+调节性T淋巴细胞数量减少导致免疫抑制效应不足是导致儿童KD免疫失衡的重要原因,体内相关细胞因子的变化是引起上述改变的原因.     

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目的评价免疫调节T细胞和细胞因子在再生障碍性贫血(再障)细胞免疫功能紊乱中的作用。方法2004-02—2005-06中山大学第二附属医院采用流式细胞术检测27例特发性再障患儿骨髓及外周血淋巴细胞亚群和CD 4CD2 5T细胞水平,ELISA检测骨髓转化生长因子(TGFβ-1)和F lt-3L水平,并与正常儿童对照。结果与对照组比较,初诊再障患儿外周血和骨髓CD 8T细胞均显著增高(P<0.05),重型再障(SAA)组伴外周血CD3-CD 56NK细胞及骨髓B细胞显著下降(P<0.05)。初诊SAA组骨髓CD 4CD 25T细胞[(7.5±3.4)%]显著高于对照组[(4.3±0.9)%,P<0.05],初诊SAA组及轻型再障(MAA)组骨髓CD 4CD2 5/CD 4比值分别为(28.9±11.1)%和(28.2±9.4)%,均显著高于对照组[(17.4±0.9)%,P均<0.05],骨髓TGFβ-1分别为(2.2±1.7)μg/L和(2.0±0.6)μg/L,均较对照组[(4.4±0.9)μg/L]显著降低(分别为P<0.01、P<0.05),而F lt-3L水平分别为(1031.1±321.8)ng/L和(694.7±424.7)ng/L,均较对照组[(63.0±37.5)ng/L]显著增高(P均<0.01)。缓解期SAA儿童除外周血CD8 T细胞仍较对照组显著增高外,其余上述指标均接近正常水平。相关分析显示,骨髓CD4 CD 25T细胞与CD 3CD 4T细胞呈显著正相关(r分别为0.495、0.540,P<0.01);F lt-3L与骨髓CD 3、CD 4、CD 8T细胞及CD 4CD 25T细胞均呈显著正相关(r分别为0.732、0.542、0.688、0.405,P分别<0.01、0.01、0.01、0.05),而TGFβ-1与骨髓CD 8T细胞和F lt-3L水平呈显著负相关(r分别为-0.431、-0.482,P分别<0.05、<0.01)。结论儿童再障发病与CD 4CD 25T细胞数量缺乏无关,骨髓TGFβ-1水平显著降低和F lt-3L水平显著增高可能在再障儿童T淋巴细胞数量增多和功能紊乱中起重要作用。     

Th17细胞和调节性T细胞与白血病的研究进展

T辅助性17(T helper17,Th17)细胞和调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的分化过程与功能相互对抗,在白血病的发病、治疗及预后中发挥不同的作用.大多数白血病患者Th17细胞和Treg细胞的功能增强和(或)数量增加,Th17细胞主要功能是促进炎症反应,提高机体对白血病细胞的防御能力;Treg细胞主要介导免疫抑制和免疫耐受,抑制机体对白血病细胞的免疫反应,降低疗效.Th17细胞和Treg细胞与白血病的发病、治疗、预后等关系密切,人们有望通过干预初始T细胞的分化方向达到治疗白血病的作用.     

Association between interleukin-10 polymorphisms and CD4+CD25+FOXP3+ T cells in asthmatic children

ObjectiveThe aim of this study was to evaluate the association between possible functional interleukin-10 (IL-10) polymorphisms, IL-10 expression and regulatory T cells (Tregs) frequency, and/or asthma severity in a sample of children and adolescents.MethodsThis is a nested case-control genetic association study. The study sample consisted of children and adolescents aged 8–14 from public schools. Four polymorphisms of the IL-10 gene (rs1518111, rs3024490, rs3024496, rs3024491) were genotyped in asthmatic subjects and controls using real-time PCR. Tregs cells and IL-10 were analyzed in peripheral blood mononuclear cells by flow cytometry. The severity of asthma was defined according to the Global Initiative for Asthma (GINA) guideline.ResultsOne hundred twenty-three asthmatic subjects and fifty-eight controls participated in the study. The single nucleotide polymorphism (SNP) rs3024491 (T allele) showed association with asthma severity, presenting a higher frequency in patients in the moderate asthma group. The T allele of variant rs3024491 also showed an association with reduced IL-10 levels (p = 0.01) and with increased Tregs frequency (p = 0.01). The other variants did not present consistent associations.ConclusionsOur results suggest that moderate asthma is associated with a higher frequency of the T allele in the SNP rs3024491. In addition, the variant rs3024491 (TT) was associated with a reduction in IL-10 production and an increased percentage of Tregs cells, suggesting possible mechanisms that influence asthma severity.     

Th17/Treg在新生儿坏死性小肠结肠炎中的研究进展

新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)是一种严重的新生儿胃肠道炎性疾病,由于目前预防和治疗的选择仍然有限,发病率和死亡率依然较高。围产期异常因素会导致患儿局部肠道炎症并发生不恰当的炎症级联反应,最后引发NEC的发生发展。近年来CD4 ＋T淋巴细胞在NEC发生发展中...     

哮喘患儿外周血调节性T细胞和 Th1/Th2 的变化及其与哮喘病情的关系

目的：通过测定哮喘患儿外周血 CD4+CD25+Foxp3+ 调节性T细胞（Treg）以及 Th1/Th2 比值变化,探讨其与哮喘病情的关系。方法：150 例哮喘患儿按临床表现分为急性期组 (94 例) 和缓解期组 (56 例), 其中急性期组按病情再分为轻度组 (54 例) 和重度组 (40 例)。应用流式细胞仪检测各组外周血 CD4+CD25+Foxp3+ Treg、CD4+IFN-γ+ Th1 和 CD4+IL-4+ Th2 水平,并与正常儿童（对照组,n=50）进行比较。结果：哮喘组 Treg 水平明显低于对照组 (P<0.01)：其中急性期组 Treg 水平明显低于缓解期组和对照组(P<0.01),重度组 Treg 水平则明显低于轻度组(P<0.01)。哮喘组 Th1/Th2 比值显著低于对照组 (P<0.01)。哮喘急性期组 Th1/Th2 比值显著低于缓解期组和对照组 (P<0.01)。哮喘患儿外周血 Treg 水平与哮喘的病情严重程度呈负相关 (r=-0.737, P<0.01),Th1/ Th2 比值与哮喘病情严重程度亦呈负相关 (r=-0.615, P<0.01),且Treg 的水平与 Th1/ Th2 比值呈正相关(r=0.856, P<0.01)。结论：哮喘患儿外周血Treg 水平明显降低,Th 亚群失衡,提示 Treg 和 Th 免疫在哮喘发病中具有重要作用。外周血Treg 水平与 Th1/Th2 比值可用来评估哮喘病情。     

外源性抗转化生长因子-β1抗体对新生大鼠高浓度氧致肺纤维化的影响

目的 观察不同剂量的外源性抗转化生长因子-β1（TGF-β1）抗体作用下，TGF -β1在新生SD大鼠高浓度氧（高氧，>95%O2）致肺纤维化中的表达，了解不同剂量的外源性抗TGF -β1抗体在高氧致肺纤维化中的作用。方法 将120只足月新生SD大鼠随机分为6组：空气对照组（Ⅰ组），高氧组（Ⅱ组），高氧+抗TGF -β1抗体 0.1 mg·kg-1组（Ⅲ组），高氧+抗TGF -β1抗体 0.2 mg·kg-1组（Ⅳ组），高氧+抗TGF -β1抗体 0.4 mg·kg-1组（Ⅴ组），高氧+抗TGF -β1抗体 0.8 mg·kg1组（Ⅵ组），每组20只。观察及检测高氧暴露3、7、14和28 d各组大鼠肺组织病理改变以及TGF -β1免疫组化染色。结果 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组3和7 d时表现为明显的急性炎症改变，肺组织水肿、渗出、出血和肺泡间隔轻度增厚，14 d时急性炎症减轻，而肺组织中TGF -β1表达呈强阳性；28 d时出现明显的胶原沉积，形成纤维化。Ⅴ、Ⅵ组3、7、14和28 d时相点TGF -β1的表达明显减弱，与Ⅰ组差异无统计学意义；病理改变示早期有轻度炎症反应， 14和28 d无明显成纤维细胞增生及胶原生成，未形成肺纤维化。结论 新生SD大鼠连续吸入高氧后可导致急、慢性肺损伤。高氧暴露可刺激肺部产生过量的TGF -β1，TGF -β1是与纤维化关系最密切的TGF-β亚型，可促进成纤维细胞分化、生长和增殖。高氧暴露时给予适当剂量外源性抗TGF -β1抗体可减轻新生SD大鼠急性肺损伤，从而减轻肺纤维化。应用外源性抗TGF -β1抗体干预对高氧致肺纤维化损伤有保护作用。