胆道闭锁基质金属蛋白酶-1和转化生长因子β1与肝纤维化关系的研究

目的研究胆道闭锁肝组织MMP-1、TIMP-11和TGF-β_1的表达与肝纤维化的关系,探讨胆道闭锁肝纤维化机制。方法利用免疫组化法(S-P法)检测33例胆道闭锁肝组织中MMP-1、TIMP-1、TGF-β_1蛋白的表达,通过图像分析技术进行定量研究。结果胆道闭锁肝组织中MMP-1、TIMP-1、TGF-β_1蛋白均有不同程度表达,以肝细胞胞浆、胞膜表达最为明显。TGF-β_1、TIMP-1蛋白在肝组织中的阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强,有正的相关性;MMP-1蛋白在肝组织中的表达,随肝纤维化程度的加重无明显变化,无相关性;TGF-β_1蛋白表达与TIMP-1间有相关性,与MMP-1间无相关性。TGF-β_1、TIMP-1在胆道闭锁肝组织的表达强度明显高于对照组(P<0.01),MMP-1在两组间的表达差异无显著性意义(P>0.05)。结论MMP-1、TIMP-1、TGF-β_1与胆道闭锁肝纤维化的发生、发展有密切联系,TGF-β_1与TIMP-1有协同表达和调控作用,通过抑制肝组织TIMP-1、TGF-β_1蛋白表达,或促进MMP-1的表达,可成为抑制胆道闭锁肝纤维化的有效方法。     

热休克蛋白47的表达与胆道闭锁肝纤维化及预后的相关性研究

目的 研究热休克蛋白47的表达与胆道闭锁患儿肝脏纤维化程度及预后的相关性.方法 选择30例胆道闭锁、10例胆汁淤积症和10例胆总管囊肿患儿入组,分别取肝脏组织以及外周血,通过RT-PCR、Western-blot、ELISA以及病理切片来评估不同水平HSP47的表达情况及其与肝脏纤维化相关性.结果 三组HSP47在mRNA水平(0.915±0.730比0.066±0.037比0.314±0.150,P＜0.05)、蛋白水平(3.061 81±0.504 763比1.358 018±0.373 174比1.23649±0.350 173,P＜0.05)以及血清水平(63.38±17.11比57.87±14.83比45.78±11.23,P＜0.05)的表达胆道闭锁组均比胆汁淤积组以及胆总管囊肿组高,差异有统计学意义,且不同水平表达具有一致性(mRNA比蛋白水平:r=0.836,P＜0.05;蛋白水平比血清水平:r=0.989,P＜0.01;mRNA比血清水平:r=0.883,P＜0.05).胆道闭锁血清HSP47的表达与肝脏组织光镜下纤维化程度呈正相关关系(r=0.669,P＜0.01).结论 肝脏组织HSP47的表达与血清HSP47的表达水平具有一致性,能够评估肝脏纤维化程度;血清HSP47的高表达可能作为胆道闭锁预后不良的一个监测指标.     

胆道闭锁肝组织MMP-1、MMP-2、TIMP-1的表达与预后研究

目的探讨胆道闭锁患儿肝组织中MMP-1、MMP-2、TIMP-1的表达及与胆道闭锁预后的关系：方法收集19例胆道闭锁患儿的临床资料和肝脏组织标本,依据Ohkuma’s分级标准将肝组织纤维化程度分为Ⅰ～Ⅳ级：采用免疫组化方法检测肝脏组织MMP-1、MMP-2、TIMP-1的表达,通过图像分析技术进行定量分析。结果根据临床疗效将患儿分为预后良好组（7例）和预后不良组（12例）：预后良好组与预后不良组接受手术时的平均日龄分别为58．57±9．32d、122．25±54．67d,两者比较,差异有显著统计学意义（P〈0．01）：预后良好组肝纤维化程度较预后不良组轻（P〈0．05）。预后不良组MMP-2、TIMP-1的表达明显高于预后良好组（P〈0．01）,而MMP-1在两组中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）：结论胆道闭锁肝组织MMP-2、TIMP-1的表达与病人预后有关,其高表达预示患儿肝脏纤维化进展快,预后较差。     

胆道闭锁患儿肝脏组织肥大细胞的表达及意义

目的 探讨胆道闭锁患儿肝脏组织肥大细胞表达及其与肝脏病变程度及预后的关系.方法 30例胆道闭锁患儿肝脏组织标本,肥大细胞采用甲苯胺兰染色和免疫组织化学染色.根据临床肝功能将患儿分为预后良好组与预后不良组,并取非消化系统疾病死亡的新生儿尸检肝脏标本作为对照组,比较各组肝组织肥大细胞表达情况.结果 胆道闭锁患儿肥大细胞数显著多于对照组(P<0.01),预后不良组肥大细胞数显著多于预后良好组(P<0.05).结论 肥大细胞参与胆道闭锁患儿肝脏损害、纤维化等病理过程,肥大细胞过度表达与胆道闭锁患儿肝脏的纤维化程度及预后密切相关.     

Toll样受体在胆道闭锁肝脏中的表达

目的 检测胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝脏组织中Toll样受体(TLRs)的表达情况,探讨其与胆道闭锁发生的关系.方法 应用RT-PCR和Westen blot方法检测13例BA患儿、7例胆总管扩张(CC)患儿和8例正常对照儿童(CO)肝脏组织中TLRs mRNA和蛋白的表达.结果 BA患儿肝脏组织TLR7表达明显高于CC组患儿和CO组患儿(P＜0.05);而TLR3的表达在BA组患儿和CC组患儿之间差异无统计学意义,略高于CO组患儿(P＞0.05).TLR4的表达在BA组患儿和CC组患儿之间差异无统计学意义(P＞0.05),但高于CO组患儿(P＜0.05).结论 胆道闭锁患儿肝组织中TLR3、TLR7、TLR4表达异常,可能在胆道闭锁胆管损伤中发挥作用.     

胆道闭锁与上皮间质转化机制的研究进展

胆道闭锁是危及婴幼儿生命的肝胆系统疾病,以肝内外胆管进行性炎症和纤维化为特征,导致胆汁淤积以及进行性肝纤维化和肝硬化,最终进展为肝功能衰竭,是婴幼儿时期肝移植的主要指征.Kasai手术的广泛开展,使胆道闭锁患儿获得更多的生存机会,但术后60％的患儿1年内需行肝移植,只有25％的患儿自体肝存活至10岁.证据表明上皮间质转化在胆管纤维化中扮演着非常重要的角色,并且TGF-β1表达增强与胆道闭锁发生具有一定的相关性;而肝细胞生长因子(HGF)可明显抑制纤维化促进因子TGF-β1的表达,从而抑制组织纤维化.本文就胆道闭锁可能的发病机制、上皮间质转化在组织纤维化中的作用、针对上皮间质转化的抗纤维化治疗以及胆道闭锁治疗方法的展望作一综述.     

小儿重型β地中海贫血肝活检63例临床分析

目的 分析小儿重型β地中海贫血(β-thalassemia,β地贫)的肝脏病理特点,探讨肝活检的方法与安全性.方法 对1998年10月-2006年10月住院的63例重型β地贫患儿行肝活检,观察肝脏病理改变,并结合临床资料进行分析.结果 共作66例次肝活检,均1次成功,成功率100%.肝活检显示肝组织内有不同程度铁沉积,中重度占42例(66.7%),铁沉积程度与血清铁蛋白(SF)水平呈明显正相关(r=0.70,P＜0.01).检出肝纤维化54例(85.7%),年龄(7.3±3.2)岁,SF在纤维化患儿中明显升高(P＜0.01),但纤维化分期与SF、肝脏铁沉积程度无相关性(r=0.12、0.21,P＞0.05).结论 我国小儿重型β地贫存在肝脏铁含量重、肝纤维化普遍且发生年龄早的特点,与不规范治疗有关.小儿地贫肝活检安全、可行,能为治疗提供重要指导.     

原发性肾病综合征患儿肝细胞生长因子及其受体的表达特征

目的 观察原发性肾病综合征(PNS)患儿肾组织肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-Met的分布及表达,以及血清HGF水平,探讨其在PNS慢性进展中的作用.方法 处于PNS活动期的患儿45例.根据肾小管间质损伤程度分为无损伤组7例,轻度损伤组21例,中度损伤组12例,重度损伤组5例.20份正常血清和10例正常肾组织作为对照.应用免疫组织化学及图像分析法观察PNS患儿肾组织HGF、c-Met、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,同时应用双抗体夹心ELISA检测血清HGF水平.组间比较采用单因素方差分析.结果 重度损伤组PNS患儿肾组织HGF、c-Met蛋白表达水平明显低于轻度损伤组和中度损伤组(Pa＜0.05),与无损伤组比较差异无显著性意义(P＞0.05).PNS患儿肾组织HGF蛋白表达水平与c-Met蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.704 P＜0.01).HGF蛋白表达水平与TGF-β1、α-SMA蛋白表达水平在重度损伤组中均呈显著负相关(r=-0.945,-0.992 Pa＜0.01),在轻至中度损伤组中均呈显著正相关(r=0.521, 0.603 Pa＜0.01).血清HGF水平与肾组织HGF、c-Met蛋白表达水平均呈显著正相关(r=0.721,0.601 Pa＜0.01).结论 PNS患儿肾组织HGF及其受体c-Met蛋白在损伤肾小管上皮细胞中表达一致增高,提示PNS患儿肾小管上皮细胞是HGF的主要作用部位.PNS患儿肾小管间质病变过程有HGF 与TGF-β1的共同参与,二者相关性的变化可能影响肾小管间质病变的结局.     

P-Smad 3在胆道闭锁肝纤维化中的作用机制研究

目的研究转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、促纤维化通路中TGF-β1、P-Smad3等通路蛋白在胆道闭锁(Biliary atresia,BA)肝纤维化进程中的作用机制。方法选取2010年1月到2015年7月我们收治的胆管扩张症肝活检病例10例,为胆扩组;BA肝活检病例19例,为Kasai组;BA晚期肝移植患者自体肝活检病例11例,为移植组11例。进行苏木素/伊红(HE)、马松(Masson)染色观察肝标本纤维化评价其纤维化程度,免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)染色检测TGF-β1、Smad2-4、P-Smad2-3及人纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)在肝组织中的表达,结合BA肝纤维化病理分级标准探讨TGF-β1等通路蛋白在肝纤维化进程中的作用。结果 HE及Masson:胆扩组偶见纤维细胞增生,Kasai组胶原纤维增生、桥接纤维化现象显著,移植组假小叶显著。免疫组化:①定性分析:胆扩组肝内Smad 2、Smad 4、PAI-1为阳性表达,其余为弱阳性;Kasai组TGF-β1等蛋白均在肝细胞胞质阳性表达,P-Smad 2、P-Smad 3、Smad4在胞核亦呈阳性表达;移植组患儿肝内TGF-β1等蛋白皆为弱阳性表达。②半定量分析:三组中Kasai组TGF-β1、Smad 3、P-Smad 3及PAI-1含量表达明显高于其他两组(P0.05),随着TGF-β1、Smad3、P-Smad3及PAI-1逐渐升高肝纤维化逐渐加重;PSmad3与PAI-1含量大小及变化幅度密切相关,促肝纤维化作用显著;Smad2、P-Smad2、Smad4组间无差异,在通路中连接相关蛋白。移植组TGF-β1等通路蛋白含量均少于Kasai组,随着肝硬化加重而逐渐减少。结论 BA肝内TGF-β1促纤维化通路中TGF-β1、Smad3显著促进肝纤维化,P-Smad3与肝纤维化进程密切相关。     

Notch配体、受体在小儿胆道畸形肝组织中的表达及意义

目的 探讨Notch信号通路在小儿胆道畸形发病机制中的作用.方法 收集23例胆道畸形患儿临床资料(胆道闭锁12例,胆总管扩张11例),术中取肝脏组织样本;9例正常肝脏组织样本作为正常对照.免疫组化方法和实时荧光定量PCR方法检测肝脏组织中的Notch配体、受体的表达分布和相对表达量.结果 Jag1在胆道闭锁增生胆管表达明显增强,Jag2在各组门管区表达为阴性;荧光定量PCR显示:胆道闭锁组及胆总管扩张组Jag1 mRNA的表达明显高于对照组(P＜0.01);Jag2 mRNA的表达在三组问差异无统计学意义(P＞0.05).Notch1、Notch 2在对照组及胆总管扩张组主要表达于肝细胞和成熟胆管细胞,胆道闭锁组胆管细胞无阳性表达.Notch 3在胆道闭锁汇管区新生血管、基质中有较为明显的表达.荧光定量PCR显示:Notch1、Notch 2mRNA的表达在三组间差异无统计学意义(P＞0.05),胆道闭锁组Notch 3 mRNA的表达高于对照组(0.013±0.003比0.009±0.003,P＜0.01).Notch 4表达为阴性.结论 胆道闭锁肝脏组织Notch配体、受体表达异常,增生胆管细胞Jag1的过表达及Notch受体表达缺陷可能参与了胆道闭锁的病理过程.     

胆道闭锁患儿肝组织细胞因子及相关基因表达的研究

目的 研究胆道闭锁(BA)患儿肝脏组织中上皮-间充质转化过程中特异性细胞因子的表达及胚胎期发育相关基因的表达激活.旨在探讨BA肝脏纤维化等系列改变的分子机制.方法 取经手术证实为BA患儿的8例肝活检组织(年龄2～3个月),以无消化道疾病尸检婴儿8例肝脏组织做正常对照(年龄0～2个月),RT-PCR半定量法检测胆管上皮细胞特异性因子CK19,纤维化早期指标Ⅰ型胶原蛋白COL1A1,发育相关基因Notch基因受体HES1,TGF-β及其阳性信号分子Smad3的表达水平变化.结果 BA患儿肝脏组织中CK-19,COL1A1、HES1、TGF-β及Smad3等基因表达水平均明显提高,实验组及对照组差异显著.结论 BA患儿肝脏组织胶原组织增生,同时有胆管上皮细胞增生,胚胎期肝脏组织发育相关基因Notch信号通路系统重新激活,TGF-β及其阳性信号分子Smad3在这一过程中发挥作用.     

天冬氨酸转氨酶和血小板比值对胆道闭锁肝纤维化预测价值的研究

目的 探讨天冬氨酸转氨酶与血小板比值(APRI)对胆道闭锁患儿肝纤维化程度的预测价值.方法 回顾性分析2007年12月至2011年12月收治的93例行肝门空肠吻合术(Kasai手术)治疗的胆道闭锁患儿的临床资料,提取相关实验室检查及病理检查等资料,按Scheuer方案进行肝纤维化程度分级.结果 无或轻微肝纤维化组($0.1组)33例,明显肝纤维化组(S2-4组)60例,两组间天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酶转氨酶(ALT)、AST/ALT、APRI差异均有统计学意义(P＜0.05),5个参数ROC曲线下面积分别为0.777、0.631、0.351、0.605和0.783;APRI最佳截断点为0.945,其灵敏度和特异性分别为0.817和0.67.进一步将APRI作为肝纤维化程度的预测指标与病理诊断做相关分析,两者中度相关,APRI升高程度与肝纤维化呈正相关(r=0.483,P＜0.01).按APRI最佳截断点分为APRI≤0.945组与APRI＞0.945组,与术后6个月内存活情况进行卡方检验,两组生存率分别为72.73％和38.33％,差异有统计学意义(P=0.002).结论 APRI与胆道闭锁患儿肝纤维化程度呈正相关,APRI有望成为一个快速、无创、简便获取的参数,在胆道闭锁患儿术前肝纤维化程度的评估中发挥重要作用.     

钙黏蛋白-11在胆道闭锁患儿肝组织中的表达及意义

目的分析钙黏蛋白-11(cadherin-11,CDH11)在胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝组织内的表达及意义。方法选取2014年11月至2016年12月就诊的BA和胆总管囊肿(CC)患儿作为研究对象。分析患儿肝脏CDH11与肝纤维化标志基因和血清肝功能指标的相关性。结果 BA组50例,女25例、男25例,中位年龄59.5(46.8～71.8)天;CC组8例,女5例、男3例,中位年龄70.0(49.0～125.3)天。BA组患儿肝脏中CDH11 mRNA表达水平显著高于CC组,差异有统计学意义(P<0.01)。BA肝内CDH11 mRNA表达水平与转化生长因子β1(TGFB1)、转化生长因子β2(TGFB2)、角蛋白19(KRT19)、肌动蛋白α2(ACTA2)、Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)和Ⅳ型胶原α1链(COL4A1) mRNA表达水平呈显著正相关(r=0.36～0.73,P均<0.01)。与轻度肝纤维化BA患儿相比,CDH11表达水平在重度肝纤维化BA患儿肝内显著升高(P<0.01)。BA肝内CDH11 mRNA表达水平与血清γ-谷氨酰...     

胆道闭锁肝脏CX3CR1^(+)T淋巴细胞的比例与肝纤维化及预后的相关性研究北大核心CSCD

目的探讨表达CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)的T淋巴细胞(即CX3CR1^(+)T淋巴细胞)在不同儿童肝脏疾病中的表达情况,以及胆道闭锁肝组织浸润的表达CX3CR1的T淋巴细胞亚群与胆道闭锁患儿临床指标以及预后之间的关系。方法回顾性分析2019年1月至2020年6月在广州市妇女儿童医疗中心接受手术的24例胆道闭锁患儿临床资料,同时选取同期进行手术的胆总管囊肿20例(接受胆总管囊肿根治手术)、胆汁淤积症4例(术中胆道造影排除BA)、门静脉高压9例(行门静脉高压治疗手术)作为对照组。对24例胆道闭锁患儿肝脏标本进行肝纤维化评分。利用流式细胞技术对所有患儿肝脏中浸润的T淋巴细胞亚群进行分析。比较T淋巴细胞亚群在不同疾病患儿肝脏中的表达差异。采用Spearman检验对BA患儿肝脏中CX3CR1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例与肝功能指标、BA肝纤维化评分分别进行相关性分析。对BA患儿随访2年,比较预后良好及预后不良患儿肝脏表达CX3CR1的T淋巴细胞比例。结果胆道闭锁组肝脏CD69-CX3CR1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例为(7.91±8.81)%,低于胆总管囊肿患儿(21.53±13.85)%以及门静脉高压患儿(13.82±7.75)%,差异具有统计学意义(P<0.001,P=0.016);胆道闭锁组肝脏CD69-CX3CR1^(+)CD4^(+)T淋巴细胞比例为(3.96±5.39)%,低于胆总管囊肿患儿(8.76±9.16)%以及门静脉高压患儿(7.68±5.98)%,差异具有统计学意义(P=0.020,P=0.003)。胆道闭锁肝脏CX3CR1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例与患儿γ-谷氨酰转肽酶水平及直接胆红素水平呈负相关,差异具有统计学意义(P=0.002和P=0.048)。胆道闭锁肝纤维化评分与肝脏中CX3CR1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例及CX3CR1^(+)Ki67^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例呈负相关(P=0.025,P=0.030)。预后良好患儿肝脏中CX3CR1^(+)T淋巴细胞的比例较预后不良患儿高(P<0.05)。结论CX3CR1^(+)CD4^(+)T淋巴细胞和CX3CR1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞可以反映肝脏的免疫状态,参与肝纤维化,可能是预测胆道闭锁患儿预后的重要指标。     

The expression of interleukin-33 in the serum and liver tissue of the patients with biliary atresia

目的 研究胆道闭锁(BA)血清及肝脏组织中白介素-33(IL-33)的表达及意义.方法 选取18例BA与12例无黄疸症状且肝功能正常的胆总管囊肿(CC)患儿血清和肝脏标本进行对比研究.应用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-33的表达水平.荧光定量RT-PCR技术和免疫印迹技术分别检测肝脏组织中IL-33 mRNA及蛋白表达水平.结果 BA组血清中IL-33的表达(791.0±22.22)pg/ml明显高于CC组的(607.1±20.68) pg/ml(P＜0.0001);并与γ-谷氨酰转移酶呈正相关(r=0.629,P=0.005).BA组肝组织中IL-33 mRNA表达0.0420±0.0061明显高于CC组的0.0220±0.0027(P=0.0181).BA组肝组织中IL-33蛋白表达0.4683±0.0188亦明显高于CC组的0.3433±0.0293(P=0.0137).结论 IL-33在BA组血清及肝组织中表达均明显升高,可能在BA炎症发生及发展过程中发挥重要作用,值得进一步研究.     

缺氧诱导因子及其相关蛋白在肝母细胞瘤中的表达

目的 探讨缺氧诱导因子及其相关蛋白在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)中表达情况及其作用.方法 选择1998年至2009年入住我院并接受手术的肝母细胞瘤患儿及胆道闭锁患儿各30例,分为三组:肝母细胞瘤肿瘤组织、距肿瘤组织边缘5 cm以外的正常肝脏组织以及胆道闭锁活检肝组织,肿瘤组中以PRETEXT分期系统,将肿瘤组分为低分组(Ⅰ组+Ⅱ组,10例)和高分组(Ⅲ组+Ⅳ组,20例).采用免疫组织化学染色方法检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF、GLUT-1、TGF-α在上述标本中的表达情况,并且比较各组的表达情况差异.结果 5种蛋白的阳性表达均主要表现为细胞质内棕黄色颗粒.肿瘤组HIF-1α、HIF-2a、VEGF、GLUT-1、TGF-a表达明显高于其他两组(P<0.01).肿瘤高分组中HIF-1α及TGF-α的表达水平高于低分组(P<0.05),而HIF-2α、VEGF、GLUT-1的表达两者无显著差别.结论 缺氧诱导因子及其相关蛋白在肝母细胞瘤中的表达均有增加,提示HIF可能在肝母细胞瘤的发生发展中起着重要作用,其中HIF-1α还可能是潜在的预后判断指标之一.     

转化生长因子-β1/Smad3信号通路在肾间质纤维化大鼠肾脏组织中的表达和作用

目的 通过检测单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad3的表达,探讨TGF-β1/Smad3信号通路在肾间质纤维化(RIF)中的作用.方法 雄性6周龄Wistar大鼠48只随机分为假手术组和UUO组,每组24只.UUO组大鼠麻醉后,背侧切口行左侧输尿管结扎术,假手术组大鼠在同样条件下仅探及肾包膜.分别于造模第7、14、21、28天每组各处死6只大鼠,取其左侧肾脏.HE染色和Masson染色行肾脏病理学检查,并计算RIF指数,应用Western blot法和实时荧光定量-PCR检测肾脏组织Smad3蛋白及其mRNA表达;免疫组织化学法检测肾脏组织TGF-β1、Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达.结果 1.与假手术组大鼠比较,UUO组大鼠各时间点:(1)病理学检查显示,肾小管上皮细胞萎缩,胶原纤维化形成,弥散性单核细胞、淋巴细胞浸润,RIF指数显著增高(P<0.01),梗阻时间越长,RIF指数越高;(2)肾脏组织Smad3蛋白及其mRNA表达均增高(Pa<0.05),梗阻时间越长,表达水平越高;(3)肾脏组织TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的蛋白表达均增高(Pa<0.05),梗阻时间越长,表达水平越高.2.相关性分析:(1)UUO组大鼠肾脏组织Smad3、TGF-β1蛋白表达与RIF指数均呈显著正相关(r=0.520、0.727,Pa< 0.01);(2)Col-Ⅳ和FN的蛋白表达与RIF指数均呈显著正相关(r= 0.794、0.786,Pa<0.01);(3) Smad3的蛋白表达与TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的蛋白表达均呈显著正相关(r= 0.592、0.672、0.508,Pa<0.01).结论 UUO所致RIF大鼠肾脏组织TGF-β1及Smad3表达均显著升高,梗阻时间越长,表达水平越高,RIF程度越重.TGF-β1/Smad3信号通路可能参与了RIF的发生发展.     

EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞促进胆道闭锁肝纤维化的研究

目的 分析在胆道闭锁患儿肝组织中增生的EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞与肝纤维化形成的关系,从而探讨不成熟的胆道上皮细胞在胆道闭锁病程进展中的作用.方法 选取2012年1月至2015年6月于我院就治的患儿肝石蜡标本进行连续切片,其中胆道闭锁(biliary atresia,BA) 65例,胆总管囊肿(choledochal cyst,CC) 27例,门静脉海绵样病变(cavernous transformation of portal vein,CTPV) 15例,应用CK19、EpCAM免疫组织化学染色及饱和苦味酸天狼星红染色方法,分析肝组织中增生的胆道上皮细胞的成熟性、EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞与肝纤维化在位置上的关系,并应用Image-pro对400倍视野下肝组织切片中EpCAM阳性细胞进行计数,观察其增生数量与肝纤维化分级间的关系.结果 在CTPV组可见由CK19阳性的胆道上皮细胞组成的正常成熟的胆管,未见明显增生的胆道上皮细胞.在BA组及有纤维化的CC组可见胆道上皮细胞增生明显,邻近肝纤维化部位的胆道上皮细胞主要为EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞,与肝纤维化存在位置上的关联.在胆道闭锁肝组织中随着肝纤维化的程度越高,EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞的数量越多,且不同肝纤维化分期中EpCAM阳性细胞增生的数量存在显著差异(r=0.56,P＜0.001).结论 在小儿胆道闭锁疾病中,EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞在短时间内迅速增生,可能是胆道闭锁患儿肝纤维化进展迅速的主要原因.     

Notch信号通路活化协同巨噬细胞对胆道闭锁肝纤维化的作用研究

目的探究Notch信号通路活化及相关炎性反应分子机制在胆道闭锁患者肝纤维化进展中的作用。方法选取2019年1月至2020年11月于天津市儿童医院确诊的20例胆道畸形患者(15例胆道闭锁,5例胆总管扩张)作为研究对象,收集临床资料及术中留取的肝活检组织样本,使用免疫组化方法检测患者肝组织内Notch信号通路的效应分子HES-1,M2型巨噬细胞标志物CD163及细胞因子IL-6、PDGF-AA的表达并进行半定量分析。结果与胆总管扩张组相比,HES-1(0.044±0.017 vs.0.143±0.027)、CD163(0.089±0.020 vs.0.259±0.111)、IL-6(0.070±0.007 vs.0.216±0.028)、PDGF-AA(0.155±0.019 vs.0.220±0.044)在胆道闭锁患者肝组织中的表达明显增加,且差异有统计学意义(P<0.05);HES-1的表达与CD163的表达呈正相关(r_s=0.687,P<0.01);HES-1、CD163、IL-6、PDGF-AA与肝纤维化程度成明显正相关(r_s=0.791,r_s=0.912,r_s=0.920,r_s=0.887,P<0.001)。结论Notch信号通路参与了胆道闭锁肝纤维化进程,并与M2型巨噬细胞有协同作用。     

胆道闭锁术后胆管炎与肝胆道组织中CD4/CD8+T细胞的相关性研究

目的 了解胆道闭锁肝脏组织和残存胆道组织中T细胞的主要类型及其与Kasai术后胆管炎的关系.方法 应用免疫组织化学的方法对22例胆道闭锁患儿(早期胆管炎和非胆管炎各11例进行配对)肝组织标本和肝门纤维块标本与13例其他肝胆道疾病患儿肝组织标本进行对比研究.同时结合胆管炎的发生与否分析免疫组化结果与Kasai术后胆管炎相关性.结果 胆道闭锁患儿肝脏组织和肝门纤维块内有大量CD4+T细胞和CD8+T细胞浸润(与对照组相比均P=0.000).胆道闭锁组与对照组中CD57+的NK细胞均为阴性.颗粒酶B在胆道闭锁组与对照胆道闭锁组中均为阴性.早期胆管炎组CD8+T细胞数量明显低于非胆管炎组(P=0.002).CD8+T评分与早期胆管炎的发生呈负相关,相关系数R=-0.674(P=0.001).结论 在Kasai手术之前患儿的肝脏组织和残存的胆道组织中有大量CD4+T和CD8+T细胞浸润,而颗粒酶B的杀伤途径不参与胆道闭锁的免疫损伤.CD8+T细胞浸润程度与胆管炎的发生有明显负相关,其对胆道闭锁肝内的损伤性炎症反应可能具有保护性免疫调节作用.