幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞表达分泌IL-8的研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)体外诱导胃上皮细胞表达分泌IL-8的状况.方法:逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测IL-8在Hp诱导的胃上皮细胞的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-8表达产物的量.结果:经Hp标准菌株CCUG17874刺激后,在胃上皮细胞株MKN 45、MKN 28、SGC 7901均检测到IL-8 mRNA;共同培养60 min 开始明显表达(P<0.05),120～180 min时表达最强(P<0.01).刺激24 h后, MKN 45分泌IL-8蛋白最高,为(1 480±360) pg/ml,SGC7901为(1 120±290) pg/ml, MKN 28最低,为(710±220) pg/ml,而未刺激对照组为(63±21 )、(52±16)和(30±18)pg/ml, 刺激组与各自未刺激对照组间有显著差异(P＜0.01),其相差倍数分别为23.5、 21.5、23.7倍,不同细胞株间的无统计学意义.结论:Hp能体外诱导胃上皮细胞株表达分泌IL-8,该作用可能与Hp感染后胃黏膜的炎症损伤机制有关.     

局部使用地塞米松治疗兔创伤性脑水肿的实验研究

目的研究脑皮层局部使用地塞米松对新西兰大白兔重度脑损伤后脑水含量、Na、K含量及IL-1 β、TNF-α含量的影响,探讨局部使用地塞米松对创伤性脑水肿的治疗作用.方法采用自由落体打击鼢模型致使新西兰大白兔重度脑创伤,分别于脑皮层局部给予地塞米松和生理盐水,24 h和72h后处死动物,行脑水含量、Na、K含量及IL-1 β、TNF-α含量的检查.结果脑皮层局部给予地塞米松的24 h及72 h治疗组脑水含量、Na均较脑皮层局部给予生理盐水的治疗组及模型对照组低(P＜0.05).结论新西兰大白兔重度脑创伤后局部使用地塞米松可明显减轻创伤灶脑水肿程度,且机制可能是通过抑制炎性因子IL-1 β、TNF-α表达而起作用.     

幽门螺杆菌对胃上皮细胞分泌IL-8的影响

目的：了解幽门螺杆菌对胃上皮细胞分泌ＩＬ－８的影响。方法：将Ｈｐ与胃上皮细胞共同孵育２４ｈ，ＥＬＩＳＡ法检测上清液中ＩＬ－８的浓度。结果：Ｈｐ可直接诱导胃上皮细胞分泌ＩＬ－８；热灭活，甲醛溶液固定后的菌株该作用明显减弱（Ｐ〈０．０１），食有细胞毒素相关基因Ａ（ｃａｇＡ）株的诱导作用大于不含ＣａｇＡ株，差异明显（Ｐ〈０．０５），结论：Ｈｐ能够刺激胃上皮细胞分泌ＩＬ－８；这可能与细菌是否含有ｃａｇＡ有     

Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究

目的：研究gemistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响，探索使用genitein防治后发性白内障。方法：兔晶体上皮细胞培养，应用Casnctllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化；同位素掺入法检测gemistein及bFGF作用后，兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化。结果：不同浓度genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降，genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高，genistein对PKC活性无明显抑制作用，但可抑制bF(求诱导的PKC活性升高。结论：gerristein在体外可通过抑制生长因子激活的蛋白激酶活性升高而抑制兔晶体上皮细胞增殖。     

细胞因子在气道上皮细胞iNOS表达中的作用研究

目的　探讨气道上皮细胞表达诱导型一氧化氮合成酶 (inducible nitric oxide synthase,i NOS)的能力及炎性细胞因子在气道上皮细胞一氧化氮 (NO)产生中的调节作用。方法　取原代培养的大鼠气道上皮细胞用 IL- 1β(10 ng/ ml)或 TNF- α(5 ng/ m l)处理 16小时 ,而后用特异性引物 RT- PCR研究 i NOS m RNA的表达 ,用特异性抗 i NOS单克隆抗体免疫细胞化学方法研究 i NOS蛋白的表达。NO的终末产物硝酸盐及亚硝酸盐水平的测定采用改良 Griess法。结果　 RT- PCR显示 ,经 IL- 1β及 TNF- α处理 16小时的大鼠气道上皮细胞表达 i NOS m R-NA。免疫组织化学提示 ,IL- 1β及 TNF- α可诱导大鼠气道上皮细胞 i NOS蛋白的表达并刺激 NO产生 ,其硝酸盐及亚硝酸盐水平较正常对照组增高 (P<0 .0 1)。结论　气道上皮细胞具有表达 i NOS的能力。细胞因子 IL- 1β及TNF- α可诱导大鼠气道上皮细胞 i NOS的表达及 NO产生     

胰蛋白酶诱导肺上皮细胞分泌白细胞介素-8的作用

目的:探讨胰蛋白酶对人上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响.方法:人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的胰蛋白酶和/或胰蛋白酶抑制剂进行刺激.刺激时间为2 h、8 h和16 h.用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平.结果:经过16 h的培养,胰蛋白酶可引起浓度相关性IL-8释放,胰蛋白酶在浓度1μg/L时就可引起IL-8的释放量增加,3 μg/L时诱导IL-8的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍,但随着胰蛋白酶浓度的增加,IL-8的释放量反而下降.胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导IL-8释放的作用.时间相关曲线表明,胰蛋白酶从2 h起即可引起IL-8释放,16 h达高峰.结论:胰蛋白酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,表明它能积极参与呼吸道的炎症过程.     

逐瘀汤对子宫内膜异位症大鼠白介素6、白介素8和肿瘤坏死因子α的影响

目的:探讨逐瘀汤对子宫内膜异位症大鼠炎症指标白细胞介素-6(IL-6)、 白细胞介素-8(IL-8)、 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法:采用自体子宫移植法建立子宫内膜异位症模型,将建模成功的大鼠采用随机数字表的方法,以及随机数余数分组法分为模型组、 米非司酮组及逐瘀汤组,另选取正常SD大鼠作为正常组,每组1...     

支气管哮喘患者血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6及白细胞介素-8水平变化研究

目的观察支气管哮喘患者血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）及白细胞介素-8（IL-8）水平的变化并探讨其在支气管发生发展中的作用。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测支气管哮喘急性发作组、缓解组和正常对照组的血清TNF-α、IL-6及IL-8水平,并对其差异、关联性进行分析。结果支气管哮喘患者血清肿瘤坏死因子TNF-α、IL-6及IL-8水平显著高于对照组（P〈0.05）,且3种细胞因子之间均存在明显的正相关关系（P〈0.05）。结论支气管哮喘患者血清TNF-α、IL-6及IL-8水平升高,受到疾病严重程度的影响,3种细胞因子均有可能参与了哮喘的炎性反应。     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的探讨蛋白酶激活受体1（PAR1）激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介索-8（IL-8）分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内，并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和／或凝血酶抑制剂水蛭索进行刺激，刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果经过16h的培养，SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加，增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍，RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放．凝血酶在浓度1kU／L时就可引起IL-8释放量增加，10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰，为基础分泌量的7．5倍。水蛭索可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明，PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加，16h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8，PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

阿尔茨海默病患者血清和脑脊液中肿瘤坏死因子-α及IL-6和IL-8水平研究

目的 观察炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)在阿尔茨海默病(AD)和轻度认知障碍(MCI)患者的血清和脑脊液中的表达.方法 采用放射免疫分析法检测AD患者(AD组)和MCI患者(MCI组)的血清及脑脊液中TNF-α、IL-6、IL-8水平,应用直线相关分析分析AD患者血清和脑脊液中TNF-α、IL-6、IL-8水平的关系,同时选取19例正常对照者(对照组)进行比较.结果 (1)TNF-α水平: AD组患者脑脊液中TNF-α水平[(149.4±12.5)ng/ml]明显高于MCI组[(118.6±19.4)ng/ml]及对照组[(109.3±27.1)ng/ml],差异有统计学意义 ( P＜0.05);血清TNF-α水平3组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2) IL-6水平:AD组、MCI组患者脑脊液及血清中IL-6水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01或0.05).(3)IL-8水平: AD组、MCI组患者脑脊液及血清中IL-8水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01或0.05).(4)AD组患者血清TNF-α水平与脑脊液中TNF-α水平呈正相关(r=0.72,P＜0.05).结论 TNF-α、IL-6和IL-8在AD患者脑脊液中异常增高,加剧免疫炎症反应,可能起到神经毒性作用,造成神经细胞损伤死亡及小胶质细胞增生,进一步促使认知障碍的形成.     

递增浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞分泌IL-8水平变化

目的观察不同浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞(A549细胞)存活率和分泌IL-8水平变化。方法A549细胞分为对照组和实验组,分别采用不同浓度TNF-α攻击,培养24h后测定各组细胞存活率、上清IL-8水平。结果不同浓度TNF-α攻击均能明显抑制A549细胞生长,其中5000u·ml-1浓度组细胞存活率降为(90.1±1.1)%。TNF-α攻击浓度由100u·ml-1升至1000u·ml-1时,A549细胞分泌IL-8量由9.1±3.5pg·ml-1升至203.7±12.4pg·ml-1,TNF-α攻击浓度超过5000u·ml-1后IL-8分泌量开始下降。结论以100u·ml-1~1000u·ml-1之间浓度的TNF-α进行攻击,A549细胞IL-8分泌量与TNF-α浓度存在剂量-效应关系,反映了急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征状态下肺泡上皮细胞分泌炎性介质情况。     

TNF-α、sTNFRⅠ对子宫内膜异位症在位内膜基质细胞的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)和可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFRⅠ)对体外培养的子宫内膜异位症患者(EMs)在位内膜基质细胞的影响,探索EMs生物治疗的靶标。方法:对10例EMs患者的在位子宫内膜组织进行分离纯化、体外培养、鉴定。将基质细胞接种于96孔板中,用不同浓度的TNF-α和sTNFRⅠ处理。用MTT法(溴化钾噻唑基四唑显色法)观察基质细胞的生长情况,并收集细胞上清液,利用ELISA法(双抗体夹心法)检测细胞培养上清液中白介素-8(IL-8)的水平。结果:TNF-α以剂量依赖方式促进EMs基质细胞的增殖,并促进基质细胞表达IL-8(P<0.05);sTNFRⅠ能阻断TNF-α的促增殖作用,但剂量必须很大。结论:TNF-α在EMs的病理生理过程中起了较大的作用,sTNFRⅠ可考虑作为EMs生物治疗的新方向。     

Inhibitory effect of matrine on tumor necrosis factor production and protein kinase C activity

ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｍａｔｒｉｎｅｏｎｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣａｃｔｉｖｉｔｙＺｈａｎｇＪｕｎｐｉｎｇ（张俊平）；ＨｕＺｈｅｎｌｉｎ（胡振林）；ＬｉｎＷｅｎ（林文）；...     

金雀异黄素对肾癌细胞系GRC-1细胞生物学行为的影响

目的：观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素（genistein)对GRC－1细胞的体外生物学行为的影响，探讨蛋白酪氨酸激酶（PTK）抑制效应用于肿瘤治疗的可能。方法：将细胞用金雀异黄素处理后，分别用MTT法、激光共聚焦显微镜、电子显微镜观察金雀异黄素对肿瘤细胞的体外生物学行为的影响。结果：金雀异黄素可显著抑制GRC－1细胞的增殖，使肿瘤细胞增殖停滞在G1期和G2期，并明显改变细胞的外在形态和细胞内波形蛋白的排列方式。结论：酪氨酸蛋白激酶抑制剂genisein可抑制肾肿瘤细胞的增殖（P＜0．01），并改变其细胞骨架的排布方式。酪氨酸激酶抑制剂有望开发成为有效的抗恶性肾肿瘤的药物。     

脂多糖对人肾小管上皮细胞株（HK-2）增殖和细胞因子表达的影响

目的:观察脂多糖(LPS)对人肾小管上皮细胞株(HK-2)增殖及炎症因子表达的影响.方法:体外培养的人肾小管上皮细胞分为两组:阴性对照组和LPS刺激组(1.0 ng/ml).应用MTT法检测LPS对HK-2增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学的变化;间接免疫荧光方法检测白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF)的表达;采用ELESA方法检测细胞培养上清中IL-1、IL-10、TNF的含量.结果:LPS组能促进HK-2细胞的增殖,促进细胞表达IL-1、IL-10、TNF.结论:LPS在体外促进HK-2增殖,可分泌促纤维化因子抗纤维化的因子.     

蛋白激酶C抑制剂抑制白细胞介素1对骨细胞的作用

用富含成骨细胞的小鼠头颅骨细胞测试白细胞介素１（ＩＬ－１）对骨细胞的作用以及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂Ｈ－７对ＩＬ－１作用的影响。结果表明ＩＬ－１（２５～１００Ｕ／ｍｌ）呈剂量依赖方式抑制骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性；而对耐酒石酸酸性磷酸酶活性有增强作用。Ｈ－７（５～２０μｍｏｌ／Ｌ）对ＩＬ－１上述作用具有剂量依赖抑制作用。提示ＩＬ－１对骨细胞的作用可能与ＰＫＣ有关。     

大鼠脑出血蛋白激酶C与细胞凋亡关系的实验研究

目的研究大鼠脑出血后血肿周围蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）及神经细胞凋亡的表达及其多粘菌素B（polymyxin B,PMB）对上述表达的影响。方法将100只SD大鼠随机分为四组：假手术组、脑出血组、小剂量多粘菌素B干预组[0.4mg/（kg.d）]、大剂量多粘菌素B干预组[0.8mg/（kg.d）],立体定位仪定位注射自体不凝血制造大鼠脑出血模型,分别为术后6、12、24、72、120h处死,免疫组织化学法检测血肿周围区PKC、TUNEL阳性细胞（凋亡细胞）数的表达、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）含量、NO（一氧化氮）含量以及大小剂量PMB对其干预后的影响。结果假手术组PKC少量表达,偶见凋亡细胞;脑出血组自6h起PKC、凋亡细胞及TNF-α、NO含量大量增加,72h达高峰,PKC在120h基本降至假手术组,但凋亡细胞TNF-α、NO含量仍处于较高水平,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;大小剂量多粘菌素B干预组均明显抑制PKC、凋亡细胞、TNF-α含量的表达,有统计学意义（P〈0.01）;但PMB剂量的大小差异无统计学意义（P〉0.05）。结论脑出血后血肿周围存在大量PKC表达上调、神经细胞凋亡、TNF-α、NO含量增加,PMB能够明显抑制PKC激活,TNF-α、NO释放,减少血肿周围细胞凋亡,起到神经元保护作用。     

幽门螺杆菌诱导MKN 45细胞分泌IL-8及其与p38信号转导途径的关系

目的：探讨p38信号转导途径在幽门螺杆菌(Hp)诱导胃上皮细胞株MKN45(来源于低分化腺癌)IL-8蛋白分泌中的作用。方法：以特异性p38有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)抑制剂SB203580与MKN45作用2h，Hp标准菌株CCUG17874与MKN45共同孵育24h，ELISA法检测IL-8表达产物的量。结果：Hp显著增加了IL-8在胃上皮细胞株MKN45的分泌，以细菌细胞数比为100时分泌量最高，作用24h时IL-8量达峰值；经终浓度为0．3、1、3、10μmol／L的SB203580作用后，Hp诱导的胃上皮细胞IL-8蛋白的分泌分别减少了28％、49％、60％、76％。结论：Hp诱导胃上皮细胞株MKN45分泌IL-8，MAPK抑制剂明显地抑制该分泌作用，提示该分泌作用可能依赖于p38信号转导途径。