PCR-SSCP检测急性髓系白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变

目的研究急性髓系白血病（AML）患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复（ITD）突变。方法采用多聚酶链反应（PCR）联合单链构象多态性（SSCP）方法检测43例不同免疫分型AML患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果43例AML患者经PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳FLT3基因检测全部阳性,未发现FLT3/ITD基因突变;SSCP电泳FLT3基因检测全部阳性,43例AML患者中有15例（35%）出现FLT3/ITD基因突变。结论PCR-SSCP适用于检测急性髓系白血病FLT3/ITD基因突变分析。     

急性早幼粒细胞白血病FLT3基因内部串联重复突变研究

目的 分析急性早幼粒细胞白血病（APL）患者骨髓细胞FLT3基因内部串联重复（ITD）突变情况。方法 采用PCR方法分析103例初发APL患者骨髓单个核细胞FLT3基因的ITD突变，分析ITD阳性患者的临床特征。结果 103例初发APL患者FLT3-ITD突变20例（19．4％）。FLT3-ITD阳性与PML-RARα融合基因短型和变异型异构体密切相关，FLT3-ITD阳性患者中PML—RARα融合基因短型16例，变异型2例，长型2例（P〈0．0001）。FLT3-ITD阳性患者外周血WBC高于FLT3-ITD阴性患者（P〈0．01），其中PML—RAR仅短型和（或）变异型伴FLT3-ITD阳性患者WBC明显高于FLT3-ITD阴性患者（P=0．015）。而PML-RARα长型伴FLT3-ITD阴性患者与阳性患者WBC比较，差异无统计学意义。FLT3-ITD阳性APL患者的诱导缓解率为90％，随访16例（2例失访），中位随访时间26（11～47）个月，均处于第1次完全缓解。结论 FLT3-ITD是APL患者常见的基因突变，其发生与PML—RARα短型和变异型相关。伴FLT3-ITD阳性PML—RARα短型和变异型与发病时WBC增高具有相关性，而对近期疗效无明显影响。     

白血病患者FLT3基因第二酪氨酸激酶结构域点突变分析

目的研究FLT3基因酪氨酸激酶结构域(TKD)点突变与急性白血病的关系及临床意义。方法采用PCR结合限制性内切酶酶切及序列测定,检测143例急性髓系白血病(AML)、25例急性淋巴细胞白血病(ALL)、2例急性杂合细胞白血病(AHL)、17例骨髓增生异常综合征(MDS)和7例慢性粒细胞白血病急变期(CMLBC)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因外显子20中的TKD点突变,分析其临床相关性。结果143例AML患者中9例(6.3%)存在FLT3TKD点突变(FLT3TKD+),阳性率显著低于FLT3基因内部串联重复(ITD)突变(25.9%,P<0.01)。FLT3TKD+存在于AMLM2(3/53)、M3(3/40)、M5(2/23)、M6(1/2)亚型中。2例FLT3-TKD+患者同时存在FLT3-ITD突变,M2、M3各1例。在25例ALL、2例AHL、17例MDS和7例CMLBC患者中未检测到FLT3TKD+。测序分析显示TKD点突变累及密码子D835,未改变FLT3的开放式阅读框架,为错义突变。D835的第1个核苷酸G被T替换,即D835Y。FLT3-TKD+组和FLT3-TKD组在性别、年龄组成、白细胞计数、骨髓原始细胞比例及化疗缓解率方面差异无统计学意义。结论AML患者中FLT3-TKD点突变的阳性率显著低于FLT3ITD。TKD点突变累及密码子D835,为错义突变。TKD点突变可单独存在,也可与ITD同时存在。与FLT3-ITD相比,TKD点突变与高白细胞无关。     

FLT3基因内部串联重复突变与急性白血病的关系及临床意义

目的　研究FLT3基因的内部串联重复 (internaltandemduplication ,ITD)突变与急性白血病的关系及临床意义。方法　采用PCR方法分析 14 3例急性髓系白血病 (AML)、2 5例急性淋巴细胞白血病 (ALL)、2例急性杂合性白血病 (AHL)、17例骨髓增生异常综合征 (MDS)和 7例慢性粒细胞白血病急变期 (CML BC)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因外显子 14和 15中ITD突变 ,分析FLT3 ITD阳性AML患者的临床特征及疗效。结果　 14 3例AML患者中 37例 (2 5 .9% )FLT3 ITD阳性 ,其中 5 3例M2 中 10例、4 0例M3 中 15例、2 0例M4中 4例、2 3例M5中 8例。在 2 5例ALL、2例AHL、17例MDS和 7例CML BC患者中未检测到FLT3 ITD突变。对其中 5例特征性突变测序结果显示 ,ITD位于外显子 14 ,长度为 2 1～ 6 0bp ,3例为单纯串联重复 ,2例同时出现插入序列 ,均未改变FLT3阅读框架。临床研究表明 ,FLT3 ITD突变在染色体核型正常患者中占有较高比例 (P <0 .0 5 ) ,FLT3 ITD阳性患者外周血白细胞数高 (P <0 .0 5 ) ,化疗后完全缓解率低 (P <0 .0 5 )。结论　FLT3 ITD突变多见于M3 、M5患者 ,为框内突变 (Inframemutation)。FLT3 ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高 ,化疗后完全缓解率低     

FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者ITD特征分析

本研究分析FLT3-ITD阳性初诊急性髓系白血病(AML)患者FLT3基因突变型与野生型等位基因比值(AR)、ITD数量、ITD长度和部分患者ITD插入位置,以及AR与临床疗效之间的关系。聚合酶链反应(PCR)扩增31例FLT3-ITD阳性AML患者FLT3基因外显子14-15,毛细管电泳法分析31例患者FLT3基因AR、ITD数量和长度,并对其中13例患者FLT3基因PCR产物直接测序。结果表明,31例FLT3-ITD阳性的AML患者中AR范围为0.01-2.8;28例(90.32%)患者ITD为1条,3例(9.68%)患者ITD多于1条;ITD长度3-144 bp不等。13例测序患者中4例ITD插入序列为FLT3野生型完全重复,2例为完全陌生碱基插入,7例为野生型部分重复。13例测序患者中ITD插入序列发生在p.E573位至p.P606位之间,多集中于p.F590-p.R595之间。AR≥0.5患者的CR率(16.67%)低于AR<0.5患者的CR率(43.75%)(p>0.05)。结论:FLT3-ITD阳性AML患者中ITD长度和AR范围变化较大。部分患者插入序列为陌生碱基,13例测序患者ITD插入位置较集中,均位于近膜区。AR≥0.5的患者CR率与AR<0.5的CR率相比无统计学差异。     

老年人急性髓系白血病FLT3/ITD基因突变的检测及临床意义

目的 :研究老年人急性髓系白血病 (AML)患者FLT3 /ITD基因突变情况及临床意义。方法 :采用聚合酶链反应检测 3 1例老年人AML患者FLT3基因表达及FLT3 /ITD基因突变。结果 :2 7例老年AML患者FLT3基因检测阳性 ,阳性率为 87 1% ;FLT3 /ITD突变阳性率为 19 4% ( 6/3 1) ,FAB各亚型FLT3 /ITD突变阳性率比较差异无显著意义 ;FLT3 /ITD基因突变阳性老年AML同突变阴性组比较常伴外周血高WBC计数及低完全缓解 (CR )率(P <0 0 5 ) ,即使获CR ,也易出现早期复发。结论 :FLT3 /ITD基因突变阳性老年人AML疗效差 ;老年人AML患者FLT3 /ITD基因突变检测可早期诊断难治复发、判断预后     

FLT3突变在急性髓系白血病中的研究进展

急性髓系白血病(AML)是起源于造血干细胞的一种具有异质性的血液系统肿瘤。FLT3是一种在细胞信号转导通路中重要的受体酪氨酸激酶,也是AML中常见的突变基因之一。AML患者伴FLT3-ITD突变提示预后差、易复发,因此早期识别FLT3基因突变,选择合适的治疗方案尤为重要。目前,小分子靶向药物的使用为FLT3-ITD突变的AML患者带来了新的治疗方法,但随之而来的耐药等问题亟待解决。本文对FLT3突变机制、FLT3突变对AML的临床意义、FLT3抑制剂及耐药机制作一综述。     

FLT3基因动态监测在急性髓系白血病治疗中的应用

微小残留病（Minute Residual Disease,MRD）是急性髓系白血病（Acute myeloid leukaemia,AML）复发和妨碍长期无病生存率的重要原因。本研究旨在探讨FLT3基因在AML发病中的作用及对微小残留病（MRD）检测的意义。应用PCR技术检测了125例AML患者在化疗与异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）治疗前后FLT3基因的表达,并对FLT3基因阳性者进行了随访观察。结果表明：PCR检测FLT3基因的灵敏度为10-4;AML初诊患者中FLT3基因的阳性表达率为69.6%;完全缓解（CR）患者FLT3表达基因阳性表达率44.90%,FLT3转为阴性者占48.98%;FLT3表达无改变者占6.12%;复发者FLT3基因表达转为阳性,而未缓解者FLT3持续阳性,治疗前FLT3阳性AML患者完全缓解率低于FLT3基因表达阴性患者,两者有显著性差异（p〈0.05）。获得CR的FLT3阳性AML患者的复发率显著高于FLT3阴性患者（p〈0.05）。结论：FLT3基因表达与白血病发生有关,PCR动态检测AML患者治疗前后FLT3表达水平,可作为判断AML白血病预后和监测微量残留病的一项指标。     

急性白血病FLT3基因突变的检测及临床意义

为探讨FLT3基因及FLT3内部串联重复(internal tandemduplication ITD)突变与急性白血病的关系及临床意义,采用PCR结合DNA测序技术分析32例急性髓系白血病(AML),18例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因及FLT3/ITD突变,分析FLT3/ITD阳性患者的临床特征及疗效。结果表明:32例AML患者中5例FLT3/ITD(15.6%)阳性,其中7例M3中1例、10例M4中1例、10例M5中3例。而18例ALL患者中未检测到FLT3/ITD突变。对其中2例特征性突变测序结果显示,ITD位于外显子14,长度为27~63bp,为单纯串联重复,FLT3/ITD序列包括2个SH2-结合结构域(YEYV与YEY-DLK),其中一例出现氨基酸的替换,其ITD序列及氨基酸的替换均具有独特性,均未改变FLT3阅读框架。临床研究表明FLT3/ITD阳性AML患者外周血白细胞数高(P<0.01),骨髓原始细胞比例高(P<0.01),化疗后有低缓解率趋势。结论:FLT3/ITD突变多见于M5患者,为框内突变。FLT3/ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高,骨髓原始细胞...     

FLT3/ITD阳性急性髓系白血病及其治疗的新进展

FMS样酪氨酸激酶-3(FLT3)是一种酪氨酸激酶受体,为Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员,在造血干/祖细胞的增殖和分化方面起重要作用.在健康人骨髓中,FLT3的表达仅限于CD34+干/祖细胞,该受体与多种细胞质蛋白作用介导一系列细胞内信号传导,诱导细胞增殖和分化.许多大样本研究已经证实FLT3的激活突变在急性髓系白血病(AML)的发生及疾病的进展中具有十分重要的作用,其中FLT3基因的内部串联重复序列(FLT3/ITD)的突变与急性髓系白血病的发生、发展及不良预后有密切关系.笔者就FLT3/ITD阳性AML及其治疗的进展进行综述.     

急性髓系白血病患者 FLT3- ITD 和 NPM1基因突变表达及在判断预后中的意义

目的：探讨急性髓系白血病（AML）患者 Fms 样酪氨酸激酶-3基因（FLT3）和核仁酸蛋白基因（NPM1）基因突变情况及与预后的关系。方法回顾性分析2010年1月至2013年6月间收治的135例 AML 患者的资料,检测其 FLT3- ITD 和 NPM1基因,并进行标准方案诱导缓解及缓解后巩固强化化疗。随访6~34个月,观察预后情况,并进行统计学分析。结果 FLT3- ITD 阳性患者41例（30.4%）;NPM1阳性62例（45.9%）;NPM1和 FLT3- ITD 双阳性5例。与 FLT3- ITD 突变阴性患者相比较,单独 FLT3- ITD 突变阳性组完全缓解（CR）率和总体生存（OS）率明显降低,复发率明显升高（ P <0.05）,无复发生存（RFS）中位时间缩短,但组间差异无统计学意义。与 NPM1突变阴性组相比较,单独 NPM1阳性组的 CR 率和 OS 率显著升高,复发率显著降低（ P <0.05）,RFS 中位时间延长,但两组间差异无统计学意义。结论 FLT3- ITD 和 NPM1基因突变在急性髓系白血病患者中很常见,FLT3- ITD 突变阳性预后较差,而NPM1突变阳性预后良好。通过对 AML 患者 FLT3- ITD 及 NPM1突变,可以对预后进行判断,并对治疗具有指导作用。     

急性髓系白血病中FLT3基因突变的研究进展

急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)是一种常见的造血系统恶性肿瘤。AML患者中约有30%会发生FLT3基因突变,ITD突变是最常见的FLT3突变类型之一。携带FLT3-ITD突变的患者具有高白细胞的表现,并且预后不良。越来越多的证据表明FLT3突变状态在疾病整个过程中持续进展,因此早期对FLT3突变的诊断可更好地了解患者的病情,实现针对性治疗。同时,FLT3抑制剂对改善AML的治疗效果非常重要。     

血浆游离DNA检测FLT3-ITD突变及ITD特征对急性髓细胞白血病诊断的意义

目的探讨在血浆游离DNA中检测Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复序列(ITD)突变及ITD特征,为急性髓细胞白血病(AML)无创性诊断、个体化的分子靶向治疗提供新的策略。方法提取88例初诊AML患者和40例对照者(体检健康者和血液系统良性疾病患者)的血浆游离DNA及骨髓细胞DNA并检测其浓度;PCR检测血浆及骨髓DNA中FLT3-ITD突变的表达水平;毛细管电泳法检测FLT3-ITD阳性患者血浆游离DNA和骨髓细胞DNA中的ITD数量,并进行统计学分析。结果初诊AML患者组血浆ccf DNA浓度为203.85(115.8,1 165.7)μg/L,而体检健康者和血液系统良性疾病患者分别为4.60(3.21,5.79)μg/L和9.26(5.23,16.77)μg/L,三组间差异有统计学意义(K-Wχ2=84.64,P0.05);初诊AML患者组血浆ccf DNA浓度显著高于血液系统良性病变患者组及体检健康组(Z分别为-7.10和-6.96,P均0.05),而体检健康者与血液系统良性疾病患者间、FAB分型不同的初诊AML患者间的血浆游离DNA浓度差异无统计学意义(Z=-1.56,P0.05;F=0.073,P0.05);FAB各型别中M2型FLT3-ITD突变率最高为30.77%(12/39),其次为M4型(20%,1/5),M5型(20%,2/10)和M3型(12%,3/25),其余型别未见突变;发生FLT3-ITD突变18例,与骨髓细胞DNA检测结果一致,13例患者在毛细管电泳中出现一条ITD条带峰,骨髓细胞结果与血浆结果一致;5例出现多条ITD条带峰,其骨髓细胞结果只有2例一致。结论监测血浆游离DNA中FLT3-ITD突变及ITD数量,可能会成为AML个体化诊断的新分子标志物。     

468例急性白血病患者FLT3基因突变及其预后价值分析

目的 了解以WHO分型诊断的上海地区急性白血病(AI)患者巾fms样酪氨酸激酶-3(FLT3)基凶突变的发生率,以及其对AL的完全缓解(CR)率、无病生存(DFS)时间和总体生存(OS)时间等预后的影响.方法采用PCR方法榆测468例AL患者仞诊时FLT3基因内部串联复制(ITD)突变和D835点突变;随访病例,用Kaplan-Meier和Log-rank等生存率分析方法分析AL患者的预后.结果 468例AL患者中急性髓系白血病(AML)374例(79.9%).其中FLT3-ITD突变59例(15.9%),FLT3-D835点突变15例(4.0%);急性淋巴细胞白血病(ALL)83例(17.7%),ALL中未检测到FLT3-ITD突变,检出FLT3-D835点突变2例(2.4%).FLT3-ITD突变对AML[去除急性早幼粒细胞白血病(APL)]患者的CR率、DFS和OS时间均有不良影响,FLT3-ITD突变阳性和阴性组CR率分别为52.3%和71.2%,中位生存时间分别为9个月和18个月.FLT3-ITD突变对APL的CR率无明显影响,但对DFS和OS时间有不良影响.FLT3-D835点突变对AML患者的预后无明显影响.结论 FLT3基因突变在AML中较常发生,其中FLTS-ITD突变对于AML的CR率及OS时间均有明显影响;而FLT3-D835点突变预后意义小大.     

FLT3基因表达水平及内部串联重复突变与急性髓系白血病的关系及临床意义

目的 研究FLT3基因表达水平及内部串联重复(internal tandem duplication,ITD)突变与急性髓系白血病(AML)的关系及临床意义.方法 采用实时定量RT-PCR技术检测129例AML患者治疗前后共152份骨髓标本单个核细胞FLT3 mRNA,应用RT-PCR技术检测其中75例初发未治AML患者的FLT3/ITD突变.结果 80例初发未治AML患者FLT3 mRNA表达水平为0.1041(0～33.8736),10名正常人骨髓FLT3 mRNA表达水平为0.0020(0.0006～0.0040),差异有统计学意义(P=0.001).75例初发未治AML患者检出FLT3/ITD突变者11例,突变率14.7%,FLT3/ITD突变组的FLT3 mRNA表达水平为0.2200(0.0297～33.8736),与FLT3/ITD阴性组[0.0975(0～26.2200)]比较,差异无统计学意义(P=0.093).在M,患者中,FLT3/ITD阳性者缓解率显著低于FLT3/ITD阴性者(P=0.015).FLT3/ITD阴性的非M3患者中FLT3 mRNA高表达组(表达水平>0.04)患者的化疗缓解率(37.5%)显著低于低表达组(缓解率100%).追踪观察20例患者,完全缓解组的FLT3 mRNA表达水平迅速或缓慢下降至少1个对数级,未缓解组的FLT3 mRNA表达水平无明显变化.结论 AML患者FLT3 mRNA的表达量及FLT3/ITD突变,可作为评价AML患者治疗效果、估计预后的指标,为微量残留病监测、观察AML患者病情变化提供有用工具.