10～23脱氧核酶沉默Survivin基因表达诱导人肝癌细胞的凋亡

目的 研究脱氧核酶沉默Survivin表达对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的影响.方法 合成针对Survivin基因的"10～23"型脱氧核酶及其类似物;转染肝癌细胞;RT-PCR检测脱氧核酶细胞内Survivin mRNA的切割作用;荧光免疫法测定脱氧核酶对Survivin蛋白表达影响;流式细胞术检测脱氧核酶对肝癌细胞凋亡的影响.结果 "10～23"型脱氧核酶及其类似物成功转染入肝癌;非修饰脱氧核酶(DzT)和修饰的脱氧核酶(DzTi)能有效抑制肝癌细胞的生长(P<0.05);DzT和DzTi在胞内能有效地切割Survivin mRNA,DzTi比DzT的切割活性更显著;荧光免疫法测的DzT和DzTi能显著的下调Survivin蛋白水平(P<0.01);流式细胞术结果提示,DzT和DzTi细胞凋亡率明显升高出现凋亡峰(P<0.05);DzT和DzTi组细胞出现细胞周期阻滞,表现为G0/G1细胞所占比例上升,S期细胞所占比例下降.结论 脱氧核酶能有效沉默Survivin mRNA表达,抑制Survivin蛋白表达和促进肝癌细胞凋亡.     

siRNA阻抑Survivin基因表达对肝癌细胞周期的影响

应用RNA干扰技术(RNAi)对siRNA抑制肝癌细胞株内源Survivin基因的表达进行研究。笔者通过Western blot和半定量RT-PCR技术来检测Survivin蛋白的表达和mRNA转录水平的变化,观察小分子干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞细胞周期的影响,并对RNAi技术的作用机制及在肿瘤基因治疗方面的实验研究做一综述。     

Survivin与淋巴瘤的研究进展

Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一,在胚胎、分泌期子宫内膜、造血干细胞及大多数肿瘤组织中均有不同程度的表达。其所表达的蛋白具有抑制细胞凋亡、促进细胞增生的生物学特性,作者就Survivin与淋巴瘤的之间的联系做一综述。     

不同剂量分割模式照射Eca109细胞TNF和SODD的表达

目的:通过模拟不同剂量分割方式照射食管癌细胞Eca109,观察比较各组别凋亡相关基因肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)和死亡结构域沉默子(silencer of death domains,SODD)的各组别表达差异并分析原因及意义,尝试为临床实施的非常规放疗提供潜在基础理论依据。方法:设计具有相同BED的4种剂量分割模式,照射处于指数生长期的Eca109细胞后,RT-PCR检测各组TNF mRNA和SODD mRNA表达变化,Western Blot检测各组TNF蛋白和SODD蛋白表达变化。结果:各组TNF mRNA及蛋白的表达量均数差值比较,有显著性差异;各组SODD mRNA及蛋白的表达均数差值比较,有统计学意义。结论:模拟照射各组中超分割组TNF mRNA表达上调幅度最大,SODD mRNA上调幅度亦最大。提示在射线诱导肿瘤细胞以某种方式走向死亡过程中,存在着促凋亡基因和抗凋亡基因之间的博弈。模拟照射各组中TNF蛋白和SODD蛋白均大部分下调,提示除DNA是射线的主要损伤靶点外,射线对其他细胞器的损伤作用亦不容忽视,因为它们的功能状态可能影响到蛋白质的合成。     

Survivin与肿瘤靶向性治疗的研究

Survivin是凋亡抑制蛋白（IAP）家族的新成员，是一个既可以抑制凋亡，又可以调控细胞分裂的双功能蛋白质。大量研究表明，Survivin是一个肿瘤特异性凋亡抑制因子．很可能成为一个新的肿瘤标记物．是肿瘤基因治疗的新靶点。近年来对Survivin的分子生物学特征、组织分布特点、抗凋亡机制、与细胞周期关系及其与肿瘤的发生、发展、治疗的研究已经取得了一些新进展。     

Survivin基因和蛋白的分子生物学研究进展

Survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族新成员,是迄今发现的作用最强的凋亡抑制因子,其结构在IAP家族中是非常独特的,含有单一的杆状病毒IAP重复序列(BIR),而末端不含有环状结构。Survivin在人类多种肿瘤组织中过表达,而在分化成熟的组织中不表达。它通过干扰有丝分裂仿锤体的形成而调节周期G₂/M,通过抑制caspase-3和caspase-7的活性而抑制细胞凋亡。在肿瘤的形成中,Survivin表达与细胞凋亡呈负相关,而与细胞增殖和血管生成呈正相关。Survivin通过抑制细胞凋亡使癌症患者预后差且生存率降低。因而Survivin有望成为肿瘤诊断和治疗的新靶点。     

肝细胞黏附分子对膀胱移行癌细胞基因表达谱的影响

目的利用Affymetrix基因表达谱芯片探讨肝细胞黏附分子(hepaCAM)对膀胱移行癌细胞基因表达谱的影响及作用的分子机制。方法运用Affymetrix Human plus 2.0全基因组芯片检测膀胱移行癌细胞株EJ细胞腺病毒-绿色荧光蛋白-hepaCAM感染组与腺病毒-绿色荧光蛋白感染组的基因表达谱,用SAM法进行差异基因分析、DAVID软件进行基因本体论分析及wikiPathway分析,并用RT-PCR和Western blot验证芯片结果。结果 hepaCAM能引起EJ细胞系基因表达谱的广泛变化,表达差异超过2倍以上的基因共2469个,其中上调基因1602个、下调基因867个。这些差异表达的基因功能主要涉及细胞周期、细胞增殖调节等方面。用RT-PCR对差异基因DNA修复蛋白,肝脏激酶B1和细胞周期蛋白D1进行验证,结果与基因芯片相符;进一步在3细胞株中用Western blot佐证DNA修复蛋白、肝脏激酶B1变化与芯片结果一致。结论 hepaCAM能够诱导EJ细胞基因表达谱的广泛变化,在基因水平通过多条通路作用于膀胱癌细胞。     

外源性p27kip1基因表达对人肝癌细胞生长抑制作用

目的: 研究p27kip1基因对人肝癌细胞的生长抑制作用. 方法: 采用可诱导性真核表达载体pMD-kip1,脂质体转染法将p27kip1全长cDNA转入肝癌细胞系HCC-9204中,通过外加Zn离子诱导目的基因的表达. 免疫印迹分析及RT-PCR检测p27kip1基因在蛋白质和mRNA水平上的表达;细胞活力实验检测转染p27kip1基因对细胞增殖的作用;并将转染的肝癌细胞接种于裸鼠皮下,观察该肿瘤细胞的致瘤情况. 结果: 转染p27kip1的HCC-9204细胞在mRNA和蛋白质水平均显p27kip1高表达. 细胞活力检测显示在外加Zn离子48 h后,细胞生长被抑制35%;转染p27kip1的HCC-9204细胞在裸鼠体内的致瘤能力明显下降[(0.62±0.12) vs (1.31±0.17), P<0.01 )]. 结论: 外源性p27kip1基因表达能够抑制人肝癌细胞的恶性增殖和致瘤性.     

肝细胞癌组织中脆性组氨酸三联体和Survivin蛋白的表达

目的:探讨肝细胞癌(HCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)和Survivin蛋白的表达.方法:采用免疫组织化学SP法检测48例HCC组织、25例癌旁组织和15例正常肝组织中FHIT蛋白和Survivin蛋白的表达,并分析2者的表达与HCC临床病理特征的关系.结果:HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中FHIT的阳性表达率分别为45.8%、88.0%及93.3%,差异有统计学意义(P<0.05);FHIT蛋白的表达与肿瘤的分化程度有关(P<0.05),与肿瘤大小、有无包膜、是否有门静脉癌栓、甲胎蛋白的含量、是否感染乙肝无关(P>0.05).HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中Survivin的阳性表达率分别为72.9%,16.0%及20.0%,差异有统计学意义(P<0.05);Survivin阳性表达率与HCC患者的肿瘤大小有关(P<0.05),与其他临床病理特征无关(P>0.05).HCC组织中FHIT与Survivin的表达呈负相关(r=-0.341,P=0.018).结论:FHIT的表达缺失和Survivin的过表达可能共同参与了HCC的发生和发展.     

三氧化二砷对人肝癌细胞周期相关基因表达的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞周期的阻滞作用及相关基因的表达.探讨As2O3抗肝癌作用的机理.方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化;通过免疫细胞化学检测cyclin D1、PCNA基因编码蛋白的表达.结果 As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G0/G1期.与对照组比较,经As2O3作用的人肝癌细胞cyclin D1、PCNA基因编码蛋白的表达减少.结论 As2O3 通过干扰细胞周期的进程,下调cyclinD1、PCNA基因编码蛋白的表达,抑制肿瘤的增殖和转移,从而具有抗肿瘤的作用.     

survivin启动子的真核表达载体构建

目的构建以survivin启动子驱动增强绿色荧光蛋白（EGFP）表达的真核表达载体pEGFP-C1/Surv。方法用PCR扩增survivin启动子,构建其真核表达载体并检测survivin启动子的活性。结果PCR成功扩增出survivin启动子,其真核表达载体构建成功。结论survivin启动子能驱动EGFP的表达,证明其具有活性。     

Survivin在胃癌组织中的表达及其与caspase-3、p53基因表达相关性的初步研究

目的　研究Survivin在胃癌组织中的表达及其与caspase 3、p5 3基因表达的相关性。方法　收集 32例胃癌组织标本及相应的癌旁组织 ,利用免疫组织化学法检测Survivin、caspase 3、p5 3基因的表达。结果　 6 2 5 % (2 0例 )的胃癌组织表达Survivin蛋白 ,而癌旁组织内无阳性表达。Survivin表达与胃癌组织的大小、分化程度、临床分期及淋巴结转移无明显相关关系。Caspase 3、p5 3蛋白与Survivin表达显著相关。结论　Survivin在胃癌组织中选择性表达 ,提示该基因在胃癌的发生发展中起重要作用。Caspase 3的失表达、p5 3的突变与Survivin基因的表达可能在胃癌发生中起协同作用。     

凋亡抑制因子Survivin mRNA在肝癌组织中的表达及其意义

目的：检测凋亡抑制因子Survivin mRNA在肝癌组织中的表达．探讨Survivin mRNA在肝癌诊断及治疗方面的应用。方法：采用逆转录多聚酶联反应（RT—PCR）技术检测46例肝癌组织、30例肝硬化组织及10例正常肝脏组织中Survivin mRNA的表达。结果：46例肝癌组织中Survivin mRNA阳性表达率为100％,而在30例肝硬化活检病理标本和10例正常肝脏组织中未表达。结论：Survivin mRNA有望成为新的肿瘤标志物,应用于临床以协助肝癌诊断和靶向性基因治疗。     

阿霉素对人肝癌细胞株HepG2中Survivin表达的影响

目的探讨阿霉素(ADM)对人肝癌细胞株HepG2中Survivin表达的影响。方法用不同浓度的ADM对人肝癌细胞株HepG2作用不同时间,然后以免疫细胞化学和RT-PCR方法检测HepG2细胞中Survivin蛋白和SurvivinmRNA表达的改变。结果未加药物干预之前,免疫化学中,HepG2细胞被Survivin抗体染成棕黄色,核内染色深于胞浆;琼脂糖凝胶电泳中,可见SurvivinmRNA明亮条带;各种浓度的ADM均可降低HepG2细胞Survivin免疫染色和Sur-vivinmRNA在凝胶电泳中的灰度;并且随干预浓度的增加或作用时相的延长,降低更明显。结论人肝癌HepG2细胞表达Survivin,且核内Survivin蛋白表达比胞浆表达强;ADM可降低HepG2细胞中Survivin表达,并呈浓度和时间依赖性;ADM可能通过下调Survivin表达而参与诱导癌细胞凋亡而发挥其抗癌作用。     

Survivin基因真核表达载体的构建及鉴定

  目地 构建pcDNA3.1-Survivin基因的真核表达载体并鉴定。方法 提取大鼠肝细胞总RNA,RT-PCR 法扩增Survivin cDNA 片段, 双酶切构建pcDNA3.1-Survivin, 重组载体。结果 重组真核表达载体经PCR、酶切鉴定及测序证实正确。结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-Survivin。     

siRNA抑制肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的研究

目的 研究siRNA对肝癌细胞株HepC2中Survivin基因表达的抑制作用。方法 设计、合成一对Survivin编码基因的反向重复序列，中间间隔9个核苷酸序列，通过定向克隆至载体Psilencer2．1，构建siRNA真核表达载体，经稳定转染HepG2细胞后应用RT-PCR及流式细胞术检测肝癌细胞中Survivin基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况。结果 测序证实siRNA真核表达载体构建成功。通过RT-PCR及流式细胞术检测，siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制Survivin基因表达分别达73％和75％。结论 构建的：Psilencer( )-Survivin重组质粒能有效抑制Survivin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。     

食管鳞癌组织中存活蛋白表达的意义

目的　探讨凋亡抑制蛋白Survivin在食管鳞癌 (ESC)组织中的表达 ,及其与凋亡指数 (AI)、临床病理特征的关系。方法　采用免疫组织化学染色检测 4 2例胃镜标本的ESC组织中Survivin表达水平 ,采用原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞的凋亡 ,并结合临床病理特征进行相关性分析。结果　Survivin表达于细胞核。 2 7例(6 4 .3% )食管鳞癌组织表达Survivin ,其表达越强 ,组织分化程度越低 ;Survivin的表达率与年龄、性别、原发部位、肿瘤大小等无相关性。Survivin阳性组AI与Survivin阴性组比较明显下降 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　Survivin在食管鳞癌组织中表达上调 ,通过抑制凋亡参与食管鳞癌的发生、发展过程。ESC组织Survivin的表达水平与ESC组织分化程度有密切关系。检测ESC组织Survivin表达 ,对判断预后有重要意义     

Survivin蛋白和mRNA在胆管癌中的表达和意义

目的检测胆管癌和癌旁胆管组织中Survivin蛋白和mRNA的表达,探讨其在胆管癌发生发展中的作用。方法应用免疫组化SP法检测48例胆管癌和其中30例癌旁胆管组织中Survivin蛋白的表达,同时应用RT-PCR技术检测这些组织标本中Survivin mRNA的表达,并与临床病理资料进行相关性分析。结果48例胆管癌组织中,Survivin蛋白阳性表达率为79.2%(38/48),在癌旁胆管组织中Survivin蛋白阳性表达率6.7%(2/30),两者比较差异有显著性意义(P<0.05)。48例胆管癌组织中,有30例Survivin mRNA的表达高于配对正常组织,胆管癌组织中Survivin mR-NA的表达水平(2.18±1.21)明显高于正常对照组织(1.01±1.03)(P<0.05)。临床病理资料的相关性分析显示,胆管癌组织中Survivin蛋白和mRNA的表达分布与临床病理特征无相关性。结论Survivin基因转录和蛋白表达可能参与胆管癌的发生发展过程,检测Survivin表达可能有助于阐明胆管癌的发生机制。     

女性乳腺癌Survivin蛋白的表达

目的　探讨Survivin基因在女性乳腺癌的表达。方法　采用免疫组织化学方法对89例女性乳腺癌标本Survivin基因表达进行检测。结果　Survivin在正常乳腺组织中不表达,89例女性乳腺癌中Survivin表达阳性率74 .2 % ,16例乳腺囊性增生中Survivin表达阳性率为4 7. 8% ,女性乳腺癌Survivin基因蛋白阳性表达明显高于乳腺良性病变(P <0 . 0 5 )。女性乳腺癌Survivin基因蛋白阳性表达与病理类型差异无显著性意义(P >0 . 0 5 )。女性乳腺癌Survivin基因蛋白阳性表达与TNM分期差异有显著性意义(P <0 . 0 5 )。结论　Survivin基因对女性乳腺癌的发生、发展有重要意义。     

Survivin基因的表达在胃溃疡及胃癌的研究

目的:研究胃癌(gastric cancer,GC)及胃溃疡(gastric ulcer,GU)组织中生存素(Survivin)的表达规律,探讨胃溃疡在胃癌形成过程中的可能机制,为临床应用以生存素为靶点的胃癌防治措施提供理论依据。方法:采用免疫组织化学染色(SP法)检测不同胃黏膜组织中Survivin的表达。结果:从CSG→CAG→Dys→GC过程中,无论在非溃疡组,还是在溃疡组中,Survivin表达均呈递增趋势。在非溃疡各组中灰度值CSG57.64±4.44、CAG55.05±6.97、Dys48.59±4.16;在溃疡各组中灰度值CSG58.25±5.54、CAG53.95±3.48、Dys48.91±4.63;在胃癌中32.25±4.13。Survivin表达在非溃疡组和溃疡组所对应的胃黏膜比较差异无统计学意义(P>0.05)。而CSG、CAG、Dys、GC之间表达有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中Survivin的表达与年龄、性别、肿瘤大小、临床分期和组织分化程度无关。结论:①Survivin基因表达可作为在胃黏膜由浅表向萎缩、不典型增生和胃癌发展过程中的有用指标。②胃溃疡的癌变实质上是溃疡边缘背景病变萎缩、不典型增生的癌变。