蛇葡萄根的形态组织鉴定

本文报道了作蛇葡萄根药用的蛇葡萄Ampelopsis sinica、光叶蛇葡萄A、sinica var.hancei、三裂叶蛇葡萄A.delavayana和异叶蛇葡萄A.humulifolia var.heterophylla以及牯岭蛇葡萄A.bre-vipedunculata var.kulingensis等五种蛇葡萄属植物根的生药性状和显微鉴别特征,为蛇葡萄根的系统生药鉴别和深入开发提供了参考资料。     

蛇葡萄根中鞣质的分析及测定

蛇葡萄很是葡萄科蛇葡萄属植物蛇葡萄[Am－Pelopsissinica（miq）·W．T．Wang]等多种植物的根，具有抗菌、消炎、治疗慢性骨髓炎的功效[1]。在研究中，我们发现蛇葡萄很中含有鞣质，鞣质具有抗炎、收敛的功效。本文以鞣酸、儿茶鞣质为对照，对蛇葡萄属几种植物根中读质的类型进行了分析，并进行了含量测定，结果报道如下。1材料与试剂蛇葡萄根等材料见表1，凭证标本经作者鉴定．留存于本院标本室。几条购于湖北省药材公司，经作者鉴定为棕地茶（Gambler）。读酸，分析纯，遵义市第二化工厂。其它试剂均为分析纯。ZB质的提取、纯化和鉴…     

三种蛇葡萄根抗D—GalN致急性肝损伤的实验研究

本实验用蛇葡萄属三种植物蛇葡萄、异叶蛇葡萄、三裂叶蛇葡萄的根对D-氨基半乳糖(D-GalN)所诱导的大鼠急性肝损伤进行治疗,并用联苯双酯作为阳性对照组进行比较,发现这三种植物的根都有一定程度促进肝细胞修复的作用。其中蛇葡萄根在一定剂量下具有显著的降酶保肝作用。     

蛇葡萄根的薄层色谱法鉴别

蛇葡萄根在湖北麻城地区长期以来用于治疗慢性骨髓炎 ,有着确切且显著的疗效〔1〕。经调查 ,该地区所用的蛇葡萄根实际为葡萄科蛇葡萄属Am pelopsis蛇葡萄、光叶蛇葡萄、三裂叶蛇葡萄和异叶蛇葡萄四种植物的根〔2〕。我们已对其形态组织进行了鉴定〔3〕,并从蛇葡萄的根中分离得到羽扇豆醇等几种成分〔4〕。为了深入研究和开发蛇葡萄根药源 ,本文以薄层色谱法对其来源植物所含的化学成分进行了初步的定性分析。1　实验材料、仪器和试药1 1　实验材料　蛇葡萄Ampelopsissinica (Miq )W T Wang、光叶蛇葡萄A sinicavar hancei(Planch)W T…     

不同产地及不同药用部位大叶蛇葡萄中蛇葡萄素和杨梅苷的含量测定

目的：建立RP-HPLC同时测定不同产地、不同药用部位大叶蛇葡萄中蛇葡萄素和杨梅苷含量的方法。方法：大叶蛇葡萄样品先用石油醚超声脱脂,再用甲醇超声提取;分析柱选用Angilent TC-C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液进行洗脱（20∶80,v/v）,柱温25 ℃,流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm。结果：蛇葡萄素在16.6~415.0 μg·mL-1与峰面积呈现良好的线性关系（r=0.999 8）,平均回收率为98.25%,RSD=1.14%（n=6）;杨梅苷在1.0~25.5 μg·mL-1与峰面积呈现良好的线性关系（r=0.999 5）,平均回收率为98.19%,RSD=1.16%（n=6）。结论：蛇葡萄素和杨梅苷成分因产地和药用部位不同,含量差异较大。该方法操作简便、可靠,可为大叶蛇葡萄的质量控制和开发利用提供实验依据。     

野葡萄根原植物的调查研究

调查采集了湖北省麻城地区治疗慢性骨髓炎的野葡萄根原植物,鉴定出是蛇葡萄Ampelop-sis sinca以及光叶蛇葡萄、异叶蛇葡萄和三裂叶蛇葡萄等四种植物的根。     

野葡萄根与其混淆品华东葡萄根的比较鉴别

在实地调查研究基础上，对杭州地区使用的野葡萄根，即葡萄科蛇葡萄属蛇葡萄Ampelopsis sinica(Miq.)W.T.Wang及混淆品同科葡萄属华东葡萄Vitis pseudoreiculata W.T.Wang的根进行了药材性状、显微特征及理化的比较鉴别，为二者的使用提供了鉴定依据。     

筛选大叶蛇葡萄体外抗肿瘤活性物质

目的研究大叶蛇葡萄提取物对He La细胞增殖的影响,筛选有效抗肿瘤活性物质。方法采用MTT法检测不同质量浓度的大叶蛇葡萄石油醚、乙酸乙酯及水层萃取物和蛇葡萄素、杨梅素、杨梅苷、槲皮素及槲皮苷分别作用于He La细胞24、48、72 h后对细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测蛇葡萄素对细胞周期的影响。结果乙酸乙酯萃取物、蛇葡萄素和杨梅素均有不同程度抑制He La细胞增殖的作用,且在一定剂量范围内,具有时效或量效关系;碘化丙啶单染法显示蛇葡萄素作用He La细胞12 h,G0/G1期细胞比率降低,S期细胞比率增加。结论乙酸乙酯提取物、蛇葡萄素和杨梅素对He La细胞增殖有明显抑制作用,且蛇葡萄素可能通过阻滞He La细胞于S期而诱导细胞凋亡。     

显齿蛇葡萄叶提取物对苯并芘染毒小鼠血清和肝脏抗氧化酶的影响

目的：探讨显齿蛇葡萄叶提取物对苯并芘染毒小鼠血清和肝脏抗氧化酶的影响。方法：用显齿蛇葡萄叶提取物给小鼠灌服2周后,一次性灌胃苯并芘染毒,取血和肝脏测定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）、过氧化氢酶（CAT）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）活性和丙二醛（MDA）含量。结果：显齿蛇葡萄叶提取物能明显提高小鼠血清和肝脏中SOD、GSH—PX、CAT的活性,降低γ-GT活性及MDA含量。结论：显齿蛇葡萄叶提取物具有抗氧化作用,可能是其抗致癌物作用机制之一。     

蛇葡萄素钠对肿瘤细胞及正常细胞毒性作用的比较

目的:研究蛇葡萄素钠对人肺腺癌SPC-A-1细胞、人正常胚肺MRC-5细胞的毒性作用。方法:应用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;透射电子显微镜(TEM)观察细胞超微结构的变化。结果:MTT法实验表明,蛇葡萄素钠、卡铂显著抑制SPC-A-1细胞的增殖,呈现浓度依赖性,IC50分别为57.18±9.42 ug/ml、33.56±11.2 ug/ml,但对MRC-5细胞增殖的抑制作用不明显,IC50分别大于5000 ug/ml及500ug/ml;流式细胞检测分析表明,25~100ug/ml的蛇葡萄素钠可使SPC-A-1细胞增殖阻滞于S期,G0/G1期细胞明显减少,且呈浓度依赖性,50、100 ug/ml的蛇葡萄素钠可使SPC-A-1细胞发生明显凋亡,而蛇葡萄素钠对MRC-5细胞周期及凋亡的影响不明显。蛇葡萄素钠浓度为50、100ug/ml时,透射电镜下可见SPC-A-1细胞表现出典型的凋亡特征,而MRC-5细胞变化不明显。结论:蛇葡萄素钠对肿瘤细胞具有较强的毒作用,对正常细胞毒性较小。     

蛇葡萄素钠体外协同卡铂抗小鼠肺癌Lewis细胞的作用

目的:研究蛇葡萄素钠单用及与卡铂联合用药对小鼠肺癌Lewis细胞的体外抗肿瘤作用,初步探讨蛇葡萄素钠抑瘤作用机制。方法:应用MTT比色法测定蛇葡萄素钠单用及与卡铂联合用药对小鼠肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用;使用流式细胞仪检测蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用诱导细胞凋亡作用。结果:MTT实验结果表明,蛇葡萄素钠单用在12.5、25、50、100μg/ml浓度范围内对小鼠肺癌Lewis细胞的增殖具有浓度依赖性的抑制作用;6.25~50μg/ml的蛇葡萄素钠与卡铂3.12~25μg/ml联合用药对卡铂抑制Lewis细胞的增殖作用具有协同效应;流式细胞仪结果表明,蛇葡萄素钠25、50、100μg/ml与卡铂25μg/ml联合应用时,凋亡率显著增高。结论:蛇葡萄素钠单用在一定的浓度范围内对Lewis细胞增殖具有浓度依赖性抑制作用,蛇葡萄素钠与卡铂合用可以增强卡铂的活性,有协同抑制作用,蛇葡萄素钠可能是通过诱导凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

RP-HPLC法测定显齿蛇葡萄中杨梅素的含量

目的 测定显齿蛇葡萄中杨梅素的含量。方法 采用RP-HPLC法测定,色谱柱为Nova-PakC18不锈钢柱,检测波长为254nm,用甲醇-水=40：60为流动相。结果 方法的变异系数为2.763%,平均回收率为97.4%,最低检测量为15ng。湖南显齿蛇葡萄植物中不同部位的杨梅素含量为1.57%-2.17%。结论 方法简单、快速、精确,可作为显齿蛇葡萄植物质量检测方法之一。     

蛇葡萄素对免疫细胞的趋化作用

目的:观察蛇葡萄素在一定浓度下对中性粒细胞和单核细胞的趋化作用。方法:分别与趋化因子IL-8、MCP-1作对照,在琼脂糖中进行化学增活和化学趋化实验。结果:蛇葡萄素在25.6μg/m、l51.2μg/m l浓度下,具有显著诱导中性粒细胞和单核细胞产生趋化的作用。浓度为25.6μg/m l的蛇葡萄素与150 ng/m l IL-8或50 ng/m l的MCP-1的增活效应无显著差异(P>0.05)。浓度为12.8μg/m l的蛇葡萄素的趋化效应强于150 ng/m l的IL-8或100 ng/m l的MCP-1(P<0.05)。蛇葡萄素与IL-8及MCP-1对中性粒细胞和单核细胞的趋化作用均存在协同作用(P<0.05)。结论:蛇葡萄素对中性粒细胞和单核细胞均有化学增活和化学趋化效应,且在对免疫细胞的化学增活方面,蛇葡萄素与IL-8及MCP-1均存在协同作用。     

用均匀设计法优化蛇葡萄素的提取与纯化工艺

目的:优选蛇葡萄素的提取工艺。方法:采用均匀设计法安排实验,以蛇葡萄素得率及纯度为评价指标,考察乙醇浓度,回流次数及时间对蛇葡萄素提取率的影响,同时考察石油醚萃取次数,活性炭用量及重结晶次数对蛇葡萄素纯化程度的影响,优选出合理的提取工艺。结果:提取优化条件:乙醇浓度90%,回流4次,每次1.5h;纯化优化条件:石油醚萃取3次,每100 g原药材加活性炭1 g,重结晶3次。结论:本工艺稳定可行,提取率高,可作为提取蛇葡萄素生产工艺的参考。     

RP-HPLC 法测定不同药用部位不同采收期藤茶中蛇葡萄素的含量

目的:运用RP-HPLC法测定不同采收期藤茶根、茎和叶中蛇葡萄素的含量。方法:使用ODS色谱柱(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-水-磷酸(25:75:0.1),流速1.0ml/min,检测波长289 nm。结果:藤茶叶中蛇葡萄素含量最高,茎次之,根中最低;4月至5月间采集的藤茶中蛇葡萄素含量最高。     

蛇葡萄根膏治疗骨髓炎的实验研究

本文为研究蛇葡萄根膏对实验性慢性骨髓炎的疗效，成功地建立了一种改良的Ｚａｋ大鼠慢性情骨髓炎模型，模型具有造模简便、基本无损伤、适合外用给药的特点。在造模基础上，用蛇葡萄根膏外敷进行治疗，运用骨髓腔细菌数和Ｘ光片来分析实验结果，结果表明，蛇葡萄根膏能明显抑制骨髓内金葡萄，能减轻骨髓炎症程度，其疗效与西药利福平相近。本实验为蛇葡萄根膏临床用于治疗慢性骨髓为提供了药理依据。     

大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的高效液相色谱法测定

目的 建立高效液相色谱法测定大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的方法.方法 色谱条件:Angilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85,V/V),检测波长为290 nm.结果 蛇葡萄素的回归方程为Y=24 061X+40.07(r=0.999 9,n=6),线性范围为0.101～1.101 μg;平均回收率为99.65%,RSD为1.49%.结论 该方法简单、结果可靠,为大叶蛇葡萄药材的质量控制提供了快速准确的测定方法.     

玉葡萄根的生药学研究

目的：对葡萄科蛇葡萄属植物三裂蛇葡萄根进行部分生药学研究,为其开发利用提供生药学理论依据。方法：采用来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定及薄层色谱的方法作生药学初步研究。结果：其主要显微特征为根横切面皮层窄,有的细胞内含有草酸钙针晶束。韧皮部被射线分隔成束,由里向外逐渐变小。木质部导管大型,有纤维伴随,射线由里向外逐渐增多。叶横切面主脉维管束3～4个排列成不连续环,外韧型,束间有薄壁细胞,每一束外均有纤维群。黏液细胞中含草酸钙针晶束。粉末特征草酸钙针晶较多,淀粉粒单粒呈肾形、新月形、卵圆形或长卵形,有的可见层纹。木纤维散在或成柬,有明显的斜孔纹。薄层色谱中,不同产地的药材在相应色谱的位置上,显相同颜色的斑点,有较好的一致性。结论：该研究为玉葡萄的开发利用提供生药鉴定的理论依据。     

大叶蛇葡萄蛋白质组双向电泳分析

目的：利用双向电泳法研究大叶蛇葡萄活性成分蛋白表达。方法：采用Tris饱和酚提取和醋酸铵甲醇沉淀大叶蛇葡萄嫩叶中的蛋白质;运用双向电泳法分离蛋白质,并对扫描后的二维凝胶电泳图谱进行分析,得到蛋白质表征图谱。结果：根据各个样品间蛋白点灰度值的比值差异,选择了差异较大的7个蛋白点进行质谱鉴定,鉴定了其中两种蛋白,分别为Hypothetical Protein和Unnamed Protein Product。结论：双向电泳技术的应用为从分子水平研究大叶蛇葡萄活性成分蛋白表达奠定了良好的基础。     

大叶蛇葡萄胶囊中总黄酮含量测定的研究

目的 建立大叶蛇葡萄胶囊中总黄酮含量的测定方法.方法 采用紫外分光光度法进行测定,样品与AlC13反应,形成络合物,测定波长310 nm.结果 以蛇葡萄素为对照,建立的含量测定方法在0.004～0.012 mg·ml-1范围内,溶液吸收度值和蛇葡萄素浓度呈良好线性关系(r =0.999 6),平均加样回收率为98.05％,RSD为1.84％.结论 该方法准确、可靠,可用于大叶蛇葡萄胶囊的质量控制.