肾综合征出血热病毒血凝素纯化及免疫学性状分析

应用高压液相色谱法对粗制肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）血凝素分离纯化获得具有血凝活性的蛋白，效价１８０，分子量为５６６００。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蔗糖密度梯度超速离心分析显示具有均一的分子量和浮密度，多株位点特异性ＭｃＡｂ分析证实，该蛋白有血凝抗原和中和抗原决定簇，免疫小鼠可产生特异性抗－ＨＦＲＳＶ抗体，其中和效价４０，血凝抑制效价６４。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的研究进展

近年来,各种不同特性的抗HFRS病毒McAb不断产生。并得到广泛应用。在病原学方面,McAb不仅能区分HFRS病毒的型别,还可对其抗原性作进一步分析,并为深入研究HFRS病毒各种结构蛋白的抗原位点、特性及功能,病毒对机体的感染与免疫,以及疫苗(特别是亚单位疫苗)的研制等提供了有力的工具。在HFRS检验诊断和流行病学调查方面,采用McAb建立了一些新检测方法,敏感性和特异性得到提高。另外,通过McAb对HFRS病毒感染乳鼠保护作用的研究,为特异性治疗HFRS提供了实验依据。     

抗肾综合征出血热病毒单克隆抗体纯化制剂的免疫学活性鉴定

采用多种方法对两株经辛酸－硫酸按沉淀法纯化的抗ＨＦＥＳ病毒ＭｃＡｂ进行了免疫学鉴定．结果表明，纯化后的ＭｃＡｂ的免疫学活性（抗体效价）无明显改变，特别是仍保留了很高的中和活性、血凝抑制活性及对感染乳鼠的保护活性．纯化ＭｃＡｂ制剂置４℃保存，至少一年内抗体效价未见降低     

肾综合征出血热病毒结构蛋白的纯化及免疫学特性分析

应用从肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者血清中提取的ＩｇＧ与活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，制备亲和层析柱，用此亲和层析柱从ＨＦＲＳＶ感染的小白鼠乳鼠鼠脑中提取出２种分子量为６７０００和５５０００的病毒结构蛋白。经ＥＬＩＳＡ证明，此病毒结构蛋白能与ＨＦＲＳ患者血清ＩｇＧ及抗ＨＦＲＳ病毒的ＭｃＡｂ反应，效价为１６０。与６株抗ＨＦＲＳＶＭｃＡｈ试验表明，此病毒结构蛋白能与Ｈ７株反应。血凝试验证明，此病毒蛋白不能凝集鹅红细胞、鸽血球和人＂Ｏ＂型血红细胞。将纯化的病毒结构蛋白免疫家兔，证明其有较强的免疫原性，可刺激家兔产生特异性抗体；微量中和试验及乳鼠中和试验证明，中和效价为２５６，说明纯化的病毒结构蛋白具有中和抗原位点；免疫血清对感染乳鼠有一定保护作用。     

家鼠型肾综合征出血热病毒单克隆抗体的制备与鉴定

以家鼠型HFRS病毒R22株免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0-Ag14融合,获得了23株能稳定分泌HFRS病毒特异性McAb的杂交瘤细胞系。以18株不同型别的HFRS病毒株进行分析,结果表明上述McAb中有些为HFRS病毒组特异性的,有些为家鼠型特异性的。有2株McAb对家鼠型HFRS病毒株具有较高的中和活性,对HFRS病毒R22株感染乳鼠也有明显的保护作用。     

高效液相色谱纯化抗肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体及特性鉴定

本文报告从BALB/c小鼠免疫腹水及该腹水经40％饱和硫酸铵盐析沉淀的γ球蛋白用高效液相色谱层析技木(HPLC)纯化、制备抗肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体。HPLC一步法对IgG1的回收率为52％,纯度97.4％;HPLC二步法回收率为67％～73％,纯度98.1％;盐析法回收率为85％,纯度≥70％。间接免疫荧光法测定HPLC纯化样品(二步法)的比活性提高49～51倍,血凝抑制滴度为1:5120。     

肾综合征出血热病毒蛋白与抗人红细胞单克隆抗体偶联的方法

近年来,澳大利亚学者使用抗人红细胞mAb F(ab＇)2片段与人免疫缺陷病毒(HⅣ)的合成多肽抗原的化学交联物,以患者本身红细胞作为指示物,建立了称为自身血凝试验的检测方法(Autologous erythrocyte agglutination, AGEN)用于检测人外周血抗HIV抗体,其敏感性和特异性类似于ELISA;且整个试验过程仅需2min,是一种简易的快速免疫测定技术[1,2].     

抗家鼠型肾综合征出血热病毒单克隆抗体对感染乳鼠保护作用的初步研究

以家鼠型HFRS病毒R22株100LD_(50)感染2～4日龄乳鼠。于感染后0、48、96及120h分别经腹腔注射对该株病毒具有中和活性的单一McAb或混合McAb,同时设该病毒免疫血清、单注射该病毒和Sp2/0腹水3种对照,观察McAb对感染乳鼠的保护作用,观察时间为35d。结果在感染后96h内注射单一McAb、混合McAb及免疫鼠血清的保护率均可达100％,而Sp2/0腹水对照组与病毒对照组的乳鼠均在感染后第13～16d发病死亡。在死亡乳鼠的脑,肺组织中检出了HFRS病毒抗原,而在保护存活乳鼠的脑、肺组织中均未检出病毒抗原。McAb对感染乳鼠的保护率与其浓度相关。在感染后24h分别注射不稀释、10~(-1)、10~(-2)和10~(-3)稀释的混合McAb,其保护率依次为100％、88.7％、55.6％和16.7％。     

分泌肾综合征出血热病毒单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞系的初步建立

本文在己制备了HFRSV多克隆抗独特型抗体的基础上，又制备了HFRSV的单克隆抗独特型抗体，为HFR马的研究开辟了新的途径。     

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

目的制备发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)核衣壳蛋白(NP)的单克隆抗体,并探讨其在该病诊断中的作用。方法克隆NP基因,构建原核表达载体pComb3XSS-NP,并转化大肠杆菌Top10F′,经诱导表达,纯化获得6HIS-NP融合蛋白。以该融合蛋白免疫Balb/c小鼠,经杂交瘤技术制备NP的鼠源单克隆抗体。经鉴定后,选择1株1C8-C6进行大量制备、纯化,并偶联辣根过氧化物酶(HRP),用该酶标抗体对SFTSV感染人的急性期血清进行Western blot检测。结果成功表达、纯化SFTSV重组的NP。经小鼠免疫、细胞融合和ELISA筛选后,共获得4株鼠源单克隆抗体。具较高滴度的1C8-C6酶标抗体能与SFTSV感染人的急性期血清中的NP在Western blot水平上结合,而与汉坦病毒、登革热病毒感染人急性期血清及正常人血清不反应。结论 SFTSV NP的表达及其单抗的制备为该病的实验室诊断奠定了基础。     

肾综合征出血热病毒宫内感染的临床研究

目的 研究肾综合征出血热(HFRS)病毒宫内感染情况及其对婴儿的影响。方法 对妊娠期感染HFRS病毒者，于其分娩时留取母血和脐带血进行抗—HFRS IgG检测，同时对顺产新生儿采取静脉血进行抗—HFRS IgM检测，并应用血凝抑制试验(HI)对HFRS病毒进行分型，另外对顺产的新生儿进行全面查体和定期随访观察。结果 母血抗—HFRS IgG均阳性，死胎的27例脐带血抗—HFRS IgG阳性23例，孕妇痊愈后自然分娩的12例中脐带血和静脉血有2例抗—HFRS IgG阳性，而抗—HFRS IgM阴性。并发现14例顺产新生儿生长发育全部正常。结论 HFRS病毒存在宫内感染，并易致死胎，但对顺产婴儿未发现致畸作用。     

广西家鼠型肾综合征出血热病毒的发现和鉴定

目的 从广西各地捕获的鼠肺标本检测汉坦病毒并鉴定其型别.方法 结合广西鼠疫监测采集啮齿类宿主动物,用ELISA法检测鼠肺标本,对汉坦病毒抗原阳性标本通过RT-PCR法扩增部分M片段上的核苷酸序列并测序,将扩增片段的核苷酸序列与已知病毒序列进行比对并分型.结果 在306份鼠肺标本中检测到1株SEO型的出血热病毒,阳性标本为广西沿海地区钦州市捕获的褐家鼠.结论 在广西沿海地区检测到SEO型汉坦病毒,其流行病学意义有待进一步研究.     

上海地区肾综合征出血热尸检肾组织病毒检测

目的：研究上海地区肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）尸检病例肾脏组织中病毒ＲＮＡ及抗原的分布及定位，方法：用核酸原位分子杂交方法和细胞免疫组化方法，检测了１７例ＨＦＲＳ尸检肾组织中病毒，结果：１７例肾组织中１５例可检测到病毒ＲＮＡ及抗原，病毒ＲＮＡ主要位于肾组织血管壁，毛细血管内皮细胞脉冲有小球毛细血管内皮细胞，病毒抗原主要分布于肾间质管内皮细胞和血管壁中，部分位于肾曲管上皮细胞，以病毒包涵体样颗粒出现。     

Increased plasma levels of soluble CD23 in haemorrhagic fever with renal syndrome; relation to virus-specific IgE

In 15 consecutive patients hospitalized with nephropathia epidemica, a European form of haemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) caused by Puumala virus, plasma concentrations of soluble CD23 (sCD23) and Puumala virus-specific IgE were determined. In the acute phase of illness, 11/15 patients had increased sCD23 levels (> 91 U/ml), whereas in convalescence, values of 8/10 patients were normalized. Maximal sCD23 values were correlated to maximal concentrations of Puumala virus-specific serum IgE (r= 0.597; P= 0.025). The results are compatible with a known ability of sCD23 to augment IgE production.     

应用免疫金银直接染色法诊断肾综合征出血热

应用免疫金银直接染色法（Ｄ－ＩＧＳＳ）对肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）感染的Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞进行ＨＦＲＳＶ抗原检测，发现Ｅ６细胞的胞浆和细胞膜上能清楚地观察到黑色均匀的银颗粒，而用ＨＦＲＳＶ免疫兔血清ＩｇＧ作阻断试验，却未见银颗粒。在此基础上对３２例ＨＦＲＳ患者检测外周血白细胞中的ＨＦＲＳＶ抗原，并和间接免疫荧光法（Ｉ－ＩＦＡ）进行对照，结果病程１０天以内Ｄ－ＩＧＳＳ法阳性率达到１０００％，个别病例病程２３天仍能检出ＨＦＲＳＶ抗原，而ＩＦＡ法在病程１１天以后阳性率明显下降，病程１４天后未检出ＨＦＲＳＶ抗原。说明Ｄ－ＩＧＳＳ法敏感性明显高于ＩＦＡ法。为对比外周静脉血和手指末稍血白细胞中ＨＦＲＳＶ抗原检出率，对３２例患者进行同步采血，结果ＨＦＲＳＶ抗原检出率无显著性差异（Ｐ＜００５）。我们认为Ｄ－ＩＧＳＳ法检测ＨＦＲＳ患者末稍血中的ＨＦＲＳＶ抗原，是简而易行的方法，可用于ＨＦＲＳ早期诊断。     

Serum thrombospondin-1 is altered in patients with hemorrhagic fever with renal syndrome

Hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) is a severe acute viral disease with pathological changes of impaired capillary and small vessels and thrombocytopenia. In this study, serum thrombospondin (TSP)-1 concentration in patients with HFRS was determined to explore its possible role in the pathogenesis of HFRS. The concentration of TSP-1 was measured using a competitive enzyme-linked immunoabsorbent assay. Significantly decreased levels of serum TSP-1 were observed in HFRS patients at febrile and hypotensive phases compared with those in the controls. The serum levels of TSP-1 in HFRS patients with more severe clinical types was reduced more profoundly than those in patients with milder clinical types at febrile and hypotensive phases, although the differences in TSP-1 were not significant. It was indicated that insufficient production or increased consumption of TSP-1, or both of these, may contribute to the impairment of capillary and small vessels and the development of hypotension at the early stage of HFRS, and the decreased degree may be associated with disease severity.     

A Major Antigenic Domain of Hantaviruses is Located on the Aminoproximal Site of the Viral Nucleocapsid Protein

Hantavirus nucleocapsid protein has recently been shown to be an immunodominant antigen in hemorrhagic with renal syndrome (HFRS) inducing an early and long-lasting immune response. Recombinant proteins representing various regions of the nucleocapsid proteins as well as segments of the G1 and the G2 glycoproteins of hantavirus strains CG18-20 (Puumala serotype) and Hantaan 76-118 have been expressed in E. coli. The antigenicity of these proteins was tested in enzyme immunoassays and immunoblots. These studies revealed that human IgG immune response is primarily directed against epitopes located within the amino acid residues 1 to 119 of the amino terminus of viral nucleocapsid proteins. This fragment was recognized by all HFRS patient sera tested (n=128). The corresponding enzyme immunoassays proved to be more sensitive than the indirect immunofluorescence assays. Furthermore, the majority of bank vole monoclonal antibodies raised against Puumala virus reacted specifically with this site. A recombinant G1 protein (aa 59 to 401) derived from the CG 18-20 strain was recognized by 19 out of 20 sera from HFRS patients.     

免疫酶斑点法检测汉坦病毒抗原的研究

目的 建立一种新的诊断肾综合征出血热(HFRS)的实验手段。方法 采用R22株、陈株和湖北株3种汉坦病毒接种家兔，制备兔抗汉坦病毒多克隆抗体(抗HTV-IgG)。然后采用混合的3种抗体进行免疫酶斑点法实验(IEDA)，检测患者血清和尿液中的汉坦病毒抗原。同时采用间接免疫荧光法(IFA)检测患者血清中抗汉坦病毒-IgM作对照。结果 经用相关分析，IEDA与IFA检测的结果高度相关。血中汉坦病毒抗原检出率为73．68％，尿中为65．00％。发病5d内，血中检出率为94．34％，尿中检出率为83．33％。5病日内的早期诊断率前者明显高于后者。结论 IEDA与IFA相比，阳性率比后者有较大提高，特别是5病日内的早期阳性率的提高明显，值得用于临床HFRS的早期诊断。