日本脑炎病毒血球凝集和凝集抑制试验的条件

1　材料和方法1.1　材料　血凝板为 2 0孔 U型底塑料硬板 .0 .12 mol·L- 1 HCl浸泡过夜 ,自来水 ,单蒸馏水 (DW)冲洗干净 ,晾干备用 .血凝素制备是用出生 3～ 6 d昆明种乳鼠 ,脑内接种 JEVSA14株 0 .0 2 m L,3d后发病处死 ,取脑加入少许 p H9.0硼酸盐水 (BBS:0 .5 mol· L- 1硼酸 10 0 m L,1.5 m ol· L- 1 Na Cl80 m L ,1mol· L- 1 Na OH 2 4 m L ,DW至 10 0 0 m L ) ,研磨后配成 10 0 g· L- 1脑悬液 ,5 0 0 0 r· min- 1离心 2 0 min,吸取上清分装小塑料管 - 2 0℃保存 .其中少量上清经紫外灯照射 2h灭活后 - 2 0℃保存 .…     

病毒唑对鼠睾丸生殖细胞的影响

0　引言　病毒唑 (virazole)又名三氮唑核苷 (ribavirin) ,是一种强单磷酸次嘌呤核苷脱氢酶的抑制剂 ,阻止病毒核酸的合成 ,有比较广谱的抗病毒作用[1 ] ,已广泛地用于治疗各种病毒性感染 [2 ] .我们探讨病毒唑对雄性小鼠睾丸生殖功能的影响 .1　材料和方法1.1　材料　昆明种雄性小白鼠 ,17日龄 ,体质量 8～ 10 g,2 0只 ;2月龄 ,体质量 18～ 2 0 g,2 0只 ;长春生物制品研究所提供 .三氮唑核苷注射液 (病毒唑 ) :10 0 g· L- 1 ,西安京西制药厂生产 ,批号 98310 ;真彩色病理图像分析仪 (北京航空航天大学图像中心制 ) .1.2　方法　幼年鼠 2 …     

浓缩红细胞保存前过滤白细胞对细胞因子含量的影响

1　材料和方法1.1　材料　将 2 0 0 m L全血采集于含 CPD- 2保养液的血袋中 . 4℃ 5 0 0 0 r· min- 1 离心 12 min,移出大部分血浆 ,使红细胞压积约为 75 0 m L· L- 1 ,然后将每单位红细胞分作二份 ,即对照组和过滤组 ,置 4℃保存 ,取样待检 .1.2　方法　采用白细胞滤血器 (南京生物医学工程研究所生产 )过滤浓缩红细胞 ,按说明书进行操作 .细胞计数用 Sys-m ex F- 82 0型细胞分析仪进行分析 .细胞因子 IL - 1β,IL - 6 ,IL - 8,TNFα含量测定用 EL ISA方法 ,试剂盒由深圳晶美生物工程公司提供 (进口分装 ) .按说明书进行操作 .2…     

不同制备方法对冷沉淀质量的影响

1　材料和方法1.1　材料　选择 2 0～ 40岁无偿献血员 ,性别不限 ,各项体格检查指标合格 ,ACD(acid- citrate- dextrose)保养液抗凝袋及无菌空袋由上海血液中心提供 ,将含有 ACD保存液的 40 0m L全血离心分离血浆 ,并将血浆置于 - 2 0℃冰箱冷冻 ,制备冰冻血浆 .在制备冷沉淀时应用以下 4种方法进行融化 ,即A:将冰冻血浆置 4℃贮藏箱内慢速融化 ;B:置 0℃冰水浴中振摇融化 ;C:置 2 5℃水浴中振摇融化 ;D:冰冻血浆量 - 5℃～ - 10℃放置 10 h软化 ,再于 4℃融化 ,当用上述方法融化至少量冰渣存在时 ,30 0 0 r·min- 1 离心 10 m in,分离…     

腹水脯肽酶的鉴别诊断价值

1　材料和方法1.1　材料　选择住院腹水患者 5 4例 ,其中肝硬化 2 1例 ,原发性肝癌 15例 ,结核性腹膜炎 8例 ,恶性腹水 10例 (胃癌腹腔转移 6例 ,腹膜恶性间皮瘤 1例 ,来源不明腹腔恶性肿瘤 3例 ) .每例患者均于入院后未经化疗、抗痨等治疗前 ,常规方法抽取腹水 2 0 m L和血标本 ,腹水采集后离心 (2 5 0 0 r·min- 1 ,10 min)取上清液 - 2 0℃保存 ;血标本于清晨空腹安静状态下 ,抽取肘静脉血 10 m L,15 0 0 r· min- 1离心 5 min,-2 0℃保存备用 .肝硬化按 1990年全国肝硬化专题学术讨论会 (河北承德 )诊断标准确诊 ;原发性肝癌 (以下简称…     

显示小鼠肠肌间神经丛铺片的方法

1　材料和方法1.1　材料　健康成年雄性昆明小鼠 5只 ,体质量 2 0～ 30 g,ip肌松药后以颈椎脱臼法通过腹部正中切口暴露腹腔 ,暴露的消化道器官不断用温和的 0 .0 1mol· L- 1 PBS(p H7.0 )清洗保持湿度 .食管、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠取材后用含尼莫地平 (10 - 6mol· L- 1 )的 0 .0 1m ol· L- 1 PBS冲洗 ,以 40 g· L- 1 的多聚甲醛充盈到最大程度后将各肠段两端扎紧 ,立即用 40 g· L- 1多聚甲醛液灌注固定 ,再放置其中固定6～ 8h(4℃ ) ,再移入 30 0 g·L- 1蔗糖液中 4℃过夜 .1.2　方法　各肠段沿肠系膜纵行剪开以 0 …     

联苯苄唑液的制备及临床观察

0　引言　目前临床采用治疗浅部真菌病的药物 ,虽然品种不少 ,但效果均不理想 .我们选用新型广谱抗真菌药联苯苄唑为主药 ,以日用化工原料为赋形剂 ,制成香波型洗液 ,用于治疗各种癣病 .现将其制备工艺、质量控制和临床疗效报道如下 .1　材料和方法1.1　制备工艺　将联苯苄唑 1g加入甲醇中搅拌溶解 (为溶液 ) ;另将脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠与椰油酰胺氧化胺加入蒸馏水中 ,使总量约 95 m L,水浴加热溶解 (为溶液 ) ,在不断搅拌下将溶液 缓缓加入溶液 中 ,至 4 0℃左右 ,加入硬脂酸乙二醇酯 ,冷却后加入香精搅匀 .1.2　质量控制　 1性状 :…     

改良Warthin-Starry螺旋体染色在诊断神经系统梅毒中的应用

神经梅毒是晚期梅毒的一个重要部分 ,多数病例在感染后的最初两年内就侵犯脑膜 [1 ] ,特点是病变广泛 ,脑血管及脑脊髓实质等均可受到侵犯 ,并伴有严重器官损害和功能障碍 ,甚至导致死亡。其病原体是梅毒螺旋体 ,它是一群细长、柔韧、弯曲呈螺旋状的原核细胞微生物 ,它的特性介于细菌与原虫之间。由于梅毒螺旋体折光性低与透明液体相似 ,故用一般染料不易着色 ,须用镀银染色在高倍显微镜下才能查见 ,显色为棕黑色。1　材料与方法1.1　材料　收集本院存档病例 ,疑有螺旋体感染病例 2例 ,男女各 1例。年龄分别为 2 6岁、2 9岁 ,肿物分别位于左小脑、右额叶 ,取疑有病原菌的蜡块进行 4 μm连续切片。1.2　试剂配制　 (1)明胶原液 :明胶 5 g,蒸馏水 10 0 m L,加热溶解 ,冷却后使用。 (2 )显色剂 :明胶原液 8m L,2 %硝酸银溶液 5 m L,3%对苯二酚溶液 0 .5 (蒸馏水配制 ) ,明胶加热到6 0℃ ,分别将硝酸银溶液及对苯二酚溶液加入混合 ,临用时配制。1.3　染色步骤 [2 ]　 (1)切片脱蜡至水洗。 (2 )切片入 1%硝酸银水溶液置于 5 5～ 5 0℃温箱内 4 h...     

苏拉明对体外培养视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的　研究苏拉明 (suramin)对培养人视网膜色素上皮细胞 (retinal pigm ent epithelium,RPE)增殖的影响 .方法　将不同质量浓度的苏拉明 (1.5 ,15和 15 0 mg· L- 1 )加入RPE细胞培养液 ,采用四甲基偶氮唑盐 (tetrazolium,MTT)比色法 ,细胞分裂指数计数和核仁组成区嗜银染色(Ag NORs)检测苏拉明对 RPE增殖活力的影响 .结果　含有10 0 m L· L- 1小牛血清的培养液可以显著刺激 RPE的增殖(P<0 .0 1) ,无血清组 A值为 0 .19± 0 .0 1、含血清组 A值为0 .30± 0 .0 1;苏拉明抑制了 10 0 m L· L- 1血清条件下 RPE的增殖 ,呈剂量依赖性 ,最大抑制率达 5 1% ,3种浓度组 A值分别为 0 .2 9± 0 .0 1,0 .2 4± 0 .0 1和 0 .14± 0 .0 1,对细胞的形态无明显影响 .结论　苏拉明对血清刺激 RPE增殖有显著非毒性抑制作用     

丹参中丹参酮ⅡA受热含量降低的规律研究

目的研究丹参药材中的丹参酮ⅡA受热含量降低的变化规律.方法采用化学动力学法,并采用HPLC法测定丹参在70℃,80℃,90 ℃,100 ℃四个温度加热不同时间丹参酮ⅡA含量.结果丹参酮ⅡA的含量(lgC)与加热时间(t)呈直线关系,K7.℃=2.378 9×10-3h-1,K80℃=7.217 6×10-3h-1,K90℃=2.060 49×10-2h-1,K100℃=5.628 5×10-2h-1.结论丹参酮ⅡA的分解属一级反应,lgK=14.386 4-5 834.316 7/T,t25℃0.9=1.9年.     

活检小组织石蜡包埋的快速制片及染色方法

1　材料1.1　组织块大小 :直径小于 1cm组织。1.2　组织块脱水剂及医用固体石蜡。1.3　苏木素一伊红染色液及染色架 (半年内配制 )。1.4　医用纱布、固体石蜡、10 %甲醛液。2　方法与步骤2 .1　固体　将小标本用 2 5 cm× 2 5 cm医用纱布包裹 ,浸入10 %甲醛溶液中 2 0 m in。2 .2　脱水方法和时限　将组织块浸入 85 %乙醇 3 min,室温。然后分别放入 95 %乙醇 ,95 %乙醇 ;无水乙醇 ,无水乙醇 ;各 2 0 min,再分别放入二甲苯 ,二甲苯 ,各 5 min。温度控制在 80℃。注意 :更换每步骤前 ,必须控干液体 ;脱水时间及温度要严格控制 ;液体浓度…     

冷冻研钵在核酸或蛋白质提取中的应用

分子病理学实验中制备高纯度的核酸或蛋白质是进行研究的首要条件。 1年多来笔者利用简便易行的冷冻研钵提取新鲜组织的核酸和蛋白质取得较好效果 ,现介绍如下。1　方法与结果1.1　材料　超低温冰箱 (- 85℃ ,MDF380型 ,日本三洋株式会社 )。手术切除的新鲜标本 ,30 m in内取材 ,立刻置液氮冷冻 ,- 85℃保存。白瓷研钵若干个。1.2　方法1.2 .1　研钵经硫酸清洁液 [2 ] 按配方 2浸泡 2 4h,流水冲洗 ,180～ 2 0 0℃烘烤或装在器械盒中经 1.0 34× 10 5Pa高压 2 0min,自然冷却 ,取出 ,放入 - 80℃冰箱备用。若用于提取RNA则需经 0 .1%焦碳酸…     

裸鼠移植性肝癌局部注射丝裂霉素与乙酸比较

1　材料和方法1.1　材料　人肝癌细胞 (HCC)由本校病理学教研室提供 ,实验动物 BAL B/ c nu/ nu裸鼠 12只 ,4～ 6 wk,体质量 (2 0± 2 )g,雌雄兼有 ,在 SPF条件下饲养 ,由本校实验动物中心提供 ,乙酸由西安精细化工厂提供 ,分析纯 ,丝裂霉素日本产 .HCC细胞在 37.0℃ ,5 0 m L· L- 1 CO2 的孵箱内培养 ,于含 10 0m L· L- 1 小牛血清的 RPMI16 40培养液中贴壁生长 .将含有HCC悬液 (密度为 1× 10 7· L- 1 ) 0 .1m L注入裸鼠右大腿背侧皮下 ,2 0 d后肿瘤平均为 1.6 3cm× 1.0 6 cm,形成皮下移植瘤模型 [1 ] .1.2　方法　将已接…     

S-100蛋白阳性树突状细胞在涎腺及涎腺良恶性肿瘤中的表达

目的　探讨S - 10 0蛋白阳性树突状细胞 (S - 10 0 +DC)在涎腺及涎腺良恶性肿瘤中的分布及意义。方法　将 2 0例正常涎腺组织、2 0例涎腺良性肿瘤、2 0例涎腺恶性肿瘤的蜡块制成 5 μm厚的连续切片 ,行HE和免疫组化染色。结果　①S - 10 0 +DC在正常涎腺及涎腺良、恶性肿瘤中 ,分布呈显著差异性 (P <0 .0 1) ;②在涎腺多形性腺瘤中黏液样及软骨样和导管样结构的外层肌上皮细胞高度表达S - 10 0蛋白 ;③腺样囊性癌癌实质内高度表达S - 10 0蛋白。结论　①DC在局部抗肿瘤免疫中发挥重要作用 ;②证实了涎腺多性肿瘤中黏液样及软骨样组织来源于肌上皮细胞 ;③通过S - 10 0蛋白在癌组织中的表达位置 ,为鉴别此实验中的 4种涎腺恶性肿瘤的组织分型提供了参考     

尺神经嵌压综合征的电生理及临床研究（附26例临床分析）

目的　提高尺神经嵌压综合征的早期诊断率 ,指导有效治疗。方法　报告 2 6例尺神经嵌压综合征的临床及电生理资料 ,并与 30例正常人进行了对照研究。结果　显示 2 6例尺神经嵌压综合征有 16例系肘管综合征 ,病侧肘上 肘下段尺神经运动传导速度 (MCV)为 2 0 .1± 13 .5m/s(P <0 .0 1) ,动作电位波型离散、波幅降低 ;尺神经指 -腕段感觉传导速度 (SCV)为 14 .5± 2 1.4m/s(P <0 .0 1) ;外展小指肌及第一骨间肌均呈神经源性损害。 10例系尺管综合征 ,病侧尺神经MCV正常 ;尺神经指 -腕段SCV 40 .1± 16 .8m/s(P <0 .0 5 ) ;第一骨间肌均呈神经源性损害。结论　电生理学检查是诊断尺神经嵌压综合征的可靠手段 ,可早期确诊、准确定位 ,指导临床治疗及评价预后 ,可提供鉴别诊断的可靠依据     

大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞钙通道亚型研究

目的　研究大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞钙离子通道的亚型。方法　利用全细胞膜片钳技术 ,在维持电压 - 70m V的条件下 ,给予细胞 4 0 ms,从 - 6 0 m V到 +6 0 m V的序列除级方波 ,阶跃 10 m V,引导出钙通道电流 (ICa) ,观察不同类型钙通道阻滞剂对 ICa的影响。结果　用 10 μmol/ L 硝苯地平 (NIF)、 1μm ol/ Lω- conotoxin GVIA和 10 0 nmol/Lω- agatoxin IVA灌洗细胞 10 m in,对 ICa有明显的抑制作用 ,抑制率分别为 (44 .6± 2 .0 ) %、 (31.3± 2 .0 ) %和 (2 0 .6± 2 .0 ) %。结论　在大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞中 ,L 型钙通道是主要的 ,同时也存在 N型和 P/ Q型钙通道     

一种快速鉴别白色念珠菌培养基的配制及应用

作者配制应用一种快速鉴别白色念珠菌的培养基 ,报告如下。1　材料和方法甲液 :葡萄糖 5 .0ｇ ,蛋白胨 1.2 ｇ,氯化钠 1.0 ｇ ,吐温 - 800 .4ｍｌ,氯霉素 5 0ｍｇ ,加蒸馏水至 2 0 0ｍｌ,加热溶解 ,ｐＨ用0 .1ｍｍｏｌ/Ｌ盐酸 ,调至 (6 .0± 0 .5 )。乙液 :氯化三苯四氮唑 0 .1ｇ ,琥珀酸钠 0 .2 ｇ ,氯化钠90ｍｇ ,加蒸馏水至 10ｍｌ,加热溶解分装成 1ｍｌ/支备用 ,将甲液 2 0 0ｍｌ,乙液 1.2ｍｌ,115℃高压灭菌 15ｍｉｎ后 ,加入无菌健康人混合血清 12ｍｌ,混匀分装于无菌试管内 ,4℃冰箱保存备用。2　结果标本接种于鉴别培养基中 ,35℃ 8…     

人脑脊液吲哚类物质的快速高效液相色谱检验法

0　引言　 5 -羟色胺 (5 - HT)是重要的中枢神经递质 ,与其前体色胺酸 (TRP)、5 -羟色胺酸 (5 - HTP)和代谢产物 5 -羟吲哚乙酸 (5 - HIAA)统称为吲哚类物质 ,是研究中枢 5 - HT代谢的重要指标 [1 ,2 ] .为了了解中枢 5 - HT的代谢状况 ,我们采用高效液相色谱法 [3,4] 测定妇女脑脊液中四种吲哚类物质获得满意效果1　材料和方法1.1　材料1.1.1　仪器　日本日立公司的高效液相色谱仪包括 6 38- 5 3型主机 ;6 5 0 - 10 L C荧光检测器 ;色谱柱 :YWG- C1 8H37,15 0mm× 4mm ;颗粒直径 5μm;预柱 :YWG- C1 8H37,5 0 mm× 4mm.1.1.2　…     

环氧树脂半薄切片的多色性染色方法

0　引言　现有的半薄切片多用甲苯胺蓝 [1 ] 及碱性复红染色 ,但在观察时往往组织结构、细胞核及细胞质分辨不够清楚 .此法是在半薄切片染色改良法 [2 ] 的基础上 ,经反复实验 ,进一步改进而成的 .本法操作简单 ,染色效果良好而且着色均匀 ,组织结构清晰 ,适用于电子显微镜超薄切片的准确定位 .1　材料和方法1.1　材料　 10 .2 m ol· L- 1 磷酸二氢钠缓冲液 10 0 m L ,用0 .1mol· L- 1 Na OH调 p H=7.2 . 2 10 g· L- 1 次甲基蓝溶液 :次甲基蓝 1g,加蒸馏水至 10 0 m L. 30 .5 g· L- 1 碱性复红溶液 :碱性复红 0 .0 5 g,硼砂 0 .2 5 …     

氧氟沙星原料质量对其葡萄糖注射液配制工艺的影响

1　材料　氧氟沙星 A(江苏昆山双鹤药业限责任公司 ,批准文号 (92 )卫药准字 X- 5 6 - 3号 ,批号 :990 5 11;0 0 0 5 2 3;0 110 0 6 ,原料检验报告单示合格 ) ;氧氟沙星 B(北京双鹤药业股份有限公司 ,批准文号 (94)卫药准字 X- 173- 4号 ,批号 :0 10 80 6 ,原料检验报告单示合格 )葡萄糖 (华北制药康欣有限公司 ) ;76 7型针用活性炭 (上海活性炭有限公司 ) ;微孔滤膜 (规格 :O30 0 X0 .6 5 ,O30 0 X0 .8浙江海宁市过滤设备厂 ) .处方 :氧氟沙星 2 g,葡萄糖 5 0 g,36 0 m L· L- 1醋酸适量 ,注射用水加至10 0 0 m L .2　方法　方法 1,取…