六味地黄方含药血清对H_2O_2致HUVECs损伤的保护作用

目的研究六味地黄方(LWDHF)含药血清对过氧化氢(H2O2)损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的保护作用,并阐明其可能的机制。方法采用400μmol·L-1H2O2复制HUVECs损伤模型,LWDHF含药血清分为3个剂量干预组(体积分数为5%、10%、20%);MTT法测定细胞活力,Hoechst染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态,Annexin VFITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Bax、Caspase-3等基因mRNA表达,Western blot法检测Caspase-3、Bax等蛋白表达。结果 LWDHF含药血清能明显促进H2O2损伤后的HUVECs增殖;Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI双染法结果均显示LWDHF含药血清抑制血管内皮细胞凋亡;RT-PCR和Western blot结果提示LWDHF抑制H2O2所致的血管内皮细胞凋亡可能是通过降低Caspase-3、Bax mRNA和蛋白的表达,升高Bcl-2 mRNA和蛋白表达实现的。结论 LWDHF含药血清可以抑制H2O2诱导的细胞凋亡,对血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

杜鹃素对H_2O_2诱导的内皮细胞凋亡的保护作用研究

目的研究杜鹃素对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的保护作用。方法采用M TT法检测细胞活力,相差显微镜和荧光显微镜观察细胞形态变化。结果采用5、10、20μg/m L浓度的杜鹃素处理细胞后,内皮细胞活性呈浓度依赖性增加,细胞存活率提高;与H2O2组相比,细胞皱缩明显减少。杜鹃素20μg/m L可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。结论杜鹃素具有抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用。     

绿原酸对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨绿原酸对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,分为(A)正常对照组、(B)绿原酸组(30μmol.L-1)、(C)H2O2损伤组、(D)绿原酸+H2O2组。检测细胞线粒体膜电位;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测不同组内皮细胞Caspase-3和Bcl-2基因的表达。结果与正常对照组比较,过氧化氢(400μmol.L-1)能明显的造成内皮细胞的凋亡(P<0.05),绿原酸(30μmol.L-1)可降低过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少(P<0.05),线粒体膜电位增加,Bcl-2的表达增强,Caspase-3的表达减弱。结论绿原酸可抑制过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,其作用机制可能与保护线粒体膜电位,促进凋亡抑制基因Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达有关。     

丹酚酸A对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究丹酚酸A对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(H2O2)诱导的HUVECs氧化损伤模型,观察丹酚酸A(10,20和40μg·mL-1)对血管内皮细胞损伤的保护作用,MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO),比色法测定Caspase-3的活性。结果丹酚酸A可抑制H2O2诱导的血管内皮细胞的凋亡,同时增加SOD的活性,降低MDA的水平,减少LDH的漏出量,增加NO的释放,降低Caspase-3的活性。且丹酚酸A的上述作用均呈质量浓度依赖性。结论丹酚酸A可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤。     

NF-κB/IκB在二苯乙烯苷抑制过氧化氢诱导内皮细胞凋亡中的表达变化

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制因子(IκB)基因表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、H2O2组、TSG组,采用Ho-echst 33258染色观察细胞凋亡形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB与IκB mR-NA表达,Western blot检测NF-κB p65、IκB蛋白表达。结果与对照组比较,H2O2组凋亡细胞数增多,细胞凋亡率增加,细胞增殖降低;NF-κB mRNA和蛋白表达增加,IκB mRNA和蛋白表达降低,差异均有显著性(P<0.01)。经TSG预处理后,细胞的增殖率较H2O2组增加,细胞凋亡率减少;NF-κBmRNA和蛋白表达减少,IκB mRNA和蛋白表达增加(P<0.01)。结论二苯乙烯苷能抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调节NF-κB/IκB表达有关。     

红车轴草总黄酮对H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞ECV-304,采用H2O2诱导细胞损伤模型,观察红车轴草总黄酮对H2O2所致的血管内皮细胞损伤的保护作用。MTT法检测细胞存活率、试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及细胞中丙二醛(MDA)的含量、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量;荧光法检测Caspase-3的活性;Hoechst33342及PI荧光染色法观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导血管内皮细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测红车轴草总黄酮对H2O2损伤血管内皮细胞线粒体膜电位的影响,检测各组细胞内ROS的表达水平。结果与空白对照组相比,H2O2损伤组细胞存活率降低、细胞内LDH,漏出量增加(P<0.001);抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性降低、MDA含量升高(P<0.01);Caspase-3活性升高(P<0.001)、ROS含量升高、线粒体膜电位降低;与模型组相比,红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50mg.L-1)及槲皮素组(30 mg.L-1)细胞存活率明显增加(P<0.01,P<0.05),红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50 mg.L-1)及槲皮素组(30 mg.L-1)均能明显降低LDH漏出量(P<0.01,P<0.05)、明显增强SOD、CAT及GSH-Px活力(P<0.01,P<0.05)、降低MDA、ROS含量及Caspase-3活性(P<0.05,P<0.01)、升高线粒体膜电位(P<0.01)。结论红车轴草总黄酮对H2O2诱导的内皮细胞损伤有明显的保护作用,其初步作用机制可能与抗自由基,减轻脂质过氧化、降低Caspase-3活性及稳定线粒体膜电位有关。     

降糖复方含药血清对氧化损伤内皮细胞的保护作用

目的：研究降糖复方含药血清对H2O2诱导的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法：采用H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞（ECV304）氧化损伤模型,观察细胞形态学变化并测定细胞活力、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量,NO含量以及内皮素（ET-1）含量。结果：降糖复方含药血清可明显改善氧化损伤的ECV304细胞形态学变化,提高细胞存活率,降低MDA含量、提高SOD活力、增加NO释放、减少ET-1释放。结论：降糖复方含药血清能对抗H2O2对血管内皮细胞的氧化损伤,起到保护血管内皮细胞的作用。     

栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。     

二苯乙烯苷对H_2O_2诱导血管内皮细胞黏附分子表达的影响

目的研究二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导损伤的人脐静脉内皮细胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为空白对照组、H2O2组、辛伐他汀组、TSG组,运用逆转录聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验分别检测P-selectin、E-selectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1 mRNA与蛋白的表达。结果 200μmol·L-1的H2O2作用内皮细胞24 h后,P-selectin、E-selectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达水平均明显上调;经TSG预处理内皮细胞4 h后,再加200μmol·L-1的H2O2作用内皮细胞24 h,结果显示:TSG能抑制H2O2诱导的内皮细胞P-selnecti、E-se-lectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的mRNA和蛋白的表达。结论 TSG可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞黏附分子的表达。     

三氧化二砷对人脐静脉内皮细胞作用的研究

目的以人脐静脉内皮细胞作为血管新生内皮细胞的模拟物,通过研究As2O3对人脐静脉内皮细胞的影响,探讨As2O3的抗血管新生作用机制。方法分离和培养人脐静脉内皮细胞,以不同浓度和时间的As2O3和VEGF作用于脐静脉内皮细胞,应用流式细胞技术测定As2O3和VEGF对脐静脉内皮细胞增殖、细胞凋亡和癌基因bcl-2表达的影响。结果As2O3以时间和剂量依赖的方式抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制癌基因bcl-2表达,而VEGF可拮抗As2O3的部分作用。结论As2O3可以通过直接作用于内皮细胞而抑制血管新生。     

外源性硫化氢改善人脐静脉内皮细胞早熟性衰老与eNOS表达的关系

目的拟探讨硫化氢(H₂S)延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的关系,为延缓HUVECs衰老提供新的靶点。方法建立60μmol/L过氧化氢(H₂O₂)1 h诱导HUVECs衰老模型;通过检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SAβ-Gal)染色阳性率来研究评估外源性硫氢化钠(NaHS)预处理对衰老的作用。同时通过Western blot法和RT-PCR法检测内皮细胞中eNOS蛋白和eNOS mRNA的表达,通过硝酸盐还原酶法检测一氧化氮(NO)含量。结果与对照组相比,HUVECs经60μmol/L H₂O₂预处理后,能显著提高细胞SA β-Gal阳性率。而NaHS的预处理可以显著减少细胞SAβ-Gal阳性率,但可增加eNOS蛋白、eNOS mRNA的表达及增加NO含量。结论 NaHS可以通过上调内皮细胞中eNOS的活性和蛋白表达改善H₂O₂诱导的内皮细胞衰老。     

麝香及其代用品人工麝香对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞损伤保护作用比较研究

目的：研究麝香（TR）及其代用品人工麝香（RG）对H₂O₂诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤保护作用及机制。方法：将对数期生长的HUVECs细胞随机分为5组：空白对照、H₂O₂、H₂O₂+NAC、H₂O₂+TR和H₂O₂+RG。HUVECs细胞在H₂O₂作用2 h后,采用MTS法检测细胞增殖光密度值并计算存活率,利用试剂盒测定细胞外液LDH漏出量、细胞内MDA含量、SOD和GSH-Px活力。对HUVECs细胞进行伊红染色,然后用光学显微镜观察细胞形态变化。结果：与H₂O₂组相比较,麝香（50 μg·mL^-1）增加了细胞存活率（P<0.05）;使LDH漏出量和MDA含量显著降低（P<0.05,P<0.001）;使SOD和GSH-Px活力显著提高（P<0.01,P<0.05）;抑制了H₂O₂对HUVECs细胞形态的改变,减少了细胞内ROS水平。人工麝香（50 μg·mL^-1）对HUVECs细胞也有保护作用,但不具有统计学意义。结论：麝香对H₂O₂诱导的人脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,作用机制可能与有效改善细胞内抗氧化酶的活性,减轻氧化应激损伤有关。此外,麝香对人脐静脉内皮细胞的保护作用略强于人工麝香。     

下调miR-106a-5p对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤及JAK1/STAT3通路的影响

目的 探讨下调miR-106a-5p对过氧化氢(H₂O₂)诱导的心肌细胞损伤及Janus激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的影响。方法 不同浓度梯度H₂O₂(0、50、100、200、400μmol/L)处理大鼠心肌细胞H9c2。H9c2细胞分为对照组、H₂O₂组(100μmol/L H₂O₂)、miR-106a-5p NC组(100μmol/L H₂O₂+转染miR-106a-5p NC)和miR-106a-5p siRNA组(100μmol/L H₂O₂+转染miR-106a-5p siRNA)。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测miR-106a-5p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及...     

人参蛋白协同H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤

目的:探讨人参蛋白(GP)协同H₂O₂诱导人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)氧化应激损伤的作用,并筛选二者的最佳联合浓度。方法:首先采用不同浓度H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤,然后采用不同浓度GP联合200 μmol·L^-1H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤;采用倒置荧光显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡。结果:SH-SY5Y细胞经GP-H₂O₂作用后,细胞数量减少,轴突缩短或消失,胞体变圆、缩小,大小不等;细胞存活率降低;Heochst 33342染色呈现高蓝光;GP 60 mg·L^-1+H₂O₂ 200 μmol·L^-1为联合诱导氧化应激损伤的最佳浓度。结论:GP有协同H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用,抑制细胞增殖、促进细胞凋亡是其可能的作用机制。     

Stimulation of active transepithelial sodium transport in isolated frog skin by hydrogen peroxide

The influence of reactive oxygen metabolites on ion transport across the plasma membrane was investigated by measuring the effect of hydrogen peroxide (H₂O₂) on short-circuit current (SCC) and transepithelial conductance (G_t) in isolated frog skin. This cellular system gives access to the apical (outer) and basolateral (inner) membranes of the polarized epithelial cells. Both apical and basolateral addition of H₂O₂ (10 μ to 100 m ) induced a dose-dependent stimulation of SCC. This stimulation could be blocked by amiloride in the apical solution, showing that the H₂O₂-induced stimulation of SCC was a result of increased active transepithelial sodium (Na) transport. The increase in Na transport was prevented by addition of catalase, consistent with a role for H₂O₂ in producing this effect. The mechanisms for H₂O₂-stimulated Na transport localized in the apical and basolateral membranes differ markedly. Basolateral H₂O₂-stimulated Na transport was inhibited by indomethacin, indicating that increased prostaglandin synthesis was responsible for this effect. Apical H₂O₂ stimulation of Na transport was not affected by indomethacin, nor did H₂O₂ interfere with the Na self-inhibition of the Na channels. It is concluded that apical H₂O₂ increases the Na permeability of the apical membrane, either through direct interaction with the apical Na channels or indirectly through products of lipid peroxidation.     

Effects of hydrogen peroxide on pig coronary artery endothelium

Peroxides and other reactive oxygen species damage arteries during ischemia-reperfusion. Here, we report on the effects of H₂O₂ on contractility of pig coronary artery. We either treated 3-mm coronary artery rings with 0 to 0.5 mM H₂O₂ in organ baths or we perfused the arteries with H₂O₂ and then cut them into rings. In each instance, we monitored the force of contraction of 3-mm rings in H₂O₂-free solution with 30 mM KCl and then we determined the A23187 induced endothelium dependent relaxation as a percent of this contraction. Treatment with H₂O₂ in the organ bath caused a decrease in the contraction but it did not affect the percent relaxation. Treating arteries with H₂O₂ by luminal perfusion did not affect the contraction but it decreased the percent relaxation. Perfusion alone decreased the amount of endothelium remaining in the arteries and perfusing with H₂O₂ decreased it further. The percent relaxation with A23187 correlated well with the endothelium remaining in the arteries. We propose that H₂O₂ and shear stress can cause a loss of endothelium and that endothelium can also protect the underlying smooth muscle against luminal H₂O₂.     

曲美他嗪对内皮祖细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的: 研究曲美他嗪(TMZ)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用。方法: 采用密度梯度离心法分离人脐带血单个核细胞,使用EBM-2完全培养基诱导单个核细胞向内皮祖细胞分化,经细胞形态学变化及流式细胞术测定内皮祖细胞特异性标记物CD133、CD34和VEGFR抗原来鉴定内皮祖细胞。体外建立内皮祖细胞过氧化氢(100 μmol·L^-1)损伤模型,加入不同浓度曲美他嗪(0.1,0.5,1,5 μmol·L^-1),观察曲美他嗪作用不同时间后(0.5,1,6,12 h)内皮祖细胞增殖、黏附、迁移、一氧化氮(NO)分泌能力的变化。结果: 曲美他嗪呈剂量及时间依赖性降低过氧化氢对内皮祖细胞的氧化应激损伤,保护内皮祖细胞增殖、黏附、迁移、分泌的生物学功能。结论: 曲美他嗪在氧化应激条件下对内皮祖细胞生物学功能的保护可能是其心血管保护作用的机制之一。     

Liquid chromatographic determination of residual hydrogen peroxide in pharmaceutical excipients using platinum and wired enzyme electrodes

Hydrogen peroxide (H₂O₂) is a chemically reactive reagent that can oxidize and degrade many pharmaceutical compounds under normal conditions. Unfortunately, H₂O₂ is often introduced into pharmaceutical excipients during manufacturing and it may significantly affect the chemical stability of drugs in formulations. Thus, a sensitive analytical method for determination of residual H₂O₂ in excipients is of importance in formulation development and product quality control. A liquid chromatographic system with a dual channel electrochemical detector (LCEC) was equipped with either a platinum electrode or a wired peroxidase electrode for determination of H₂O₂. The excipient (0.1 g) was dissolved in 10 ml of mobile phase and 5 μl of the dissolved solution was directly injected. The chromatographic run time for each sample was 1 min with a detection limit of 10 ng/ml (S/N=5) using the platinum electrode and 1 ng/ml (S/N=5) using the wired enzyme coated electrode, respectively. The peak purity was assured by comparing the peak ratios at different potentials for both the standard and the samples. The H₂O₂ levels in different batches of PVP, PEG, and other surfactants from different manufacturers were determined and the values ranged from 0 to 244 ppm. The LCEC method is exceptionally fast, accurate and convenient for quantitation of low levels of residual H₂O₂ in pharmaceutical formulation excipients.     

Tempol对高原缺氧致小鼠脑组织损伤的保护作用

目的：研究Tempol对高原缺氧小鼠脑组织的保护作用及其机制。方法：将60只小鼠随机分为正常对照组、缺氧模型组、乙酰唑胺组和Tempol组,单次腹腔注射给药后,在模拟海拔8 000 m环境停留12 h,检测脑组织中H₂O₂、MDA、ATP酶和抗氧化酶的活性变化,蛋白印迹法检测HIF-1α、VEGF、Nrf2和HO-1蛋白的表达情况。结果：与正常对照组相比,缺氧模型组中H₂O₂和MDA含量显著增加,ATP酶和抗氧化酶活性显著减低,HIF-1α、VEGF、Nrf2和HO-1x蛋白表达增强。经Tempol预处理后能够显著降低高原缺氧小鼠脑组织中H₂O₂和MDA含量,提高抗氧化酶和ATP酶活性,降低HIF-1α和VEGF蛋白表达,显著提高Nrf2和HO-1蛋白的表达。结论： Tempol能够减轻高原缺氧脑组织损伤,作用机制可能与其能清除自由基,激活Nrf2/HO-1信号途径,提高抗氧化酶活性,降低机体氧化应激,改善能量代谢有关。     

Hydrogen peroxide-induced cytotoxicity in cultured epithelial cells (WISH): A functional and morphological study

The effect of hydrogen peroxide on cultured epithelial cells (WISH) was investigated with particular emphasis on cell functions: cell morphology and cytoskeletal components were also studied. The presence of low concentrations of H₂O₂ (0.1–0.4 mM) in the culture medium markedly inhibited cell growth, although WISH contained catalase and glutathione-peroxidase activities. After 1 hr of incubation with H₂O₂ up to 5 mM, the majority of the cells were still alive, but reincubation in normal medium for 24 hr clearly reduced cell viability. Cell adhesion was dose-dependently reduced by H₂O₂ treatment (0.1–0.5 mM) for 4 hr. Incubation with 1.5 mM-H₂O₂ gave rise to a bleb appearance on the cell surface and to mitochondrial swelling, as shown, respectively, by scanning and transmission electron microscopy. Immunofluorescence studies revealed changes in microtubules and microfilaments, which are two of the main cytoskeletal components. The modification of microtubules was also confirmed by Western blot analysis of WISH protein homogenates submitted to SDS-PAGE. WISH treated with 1.5 mM-H₂O₂ showed decreased levels of GSH compared with control cells: glutathione transferase activity was reduced, whereas other enzymes of the glutathione cycle were unchanged.